KU-0063794

别名: Ku0063794; Ku 0063794; KU0063794; Ku-0063794; KU-0063794; KU 0063794; KU 63794; KU-63794; KU63794 5-[2-[(2R,6S)-2,6-二甲基-4-吗啉基]-4-(4-吗啉基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7-基]-2-甲氧基苯甲醇;KU0063794
目录号: V0179 纯度: ≥98%
KU-0063794 是一种新型、有效、细胞渗透性和选择性的 mTOR(哺乳动物雷帕霉素靶标)抑制剂,具有潜在的抗癌活性。
KU-0063794 CAS号: 938440-64-3
产品类别: mTOR
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
10 mM * 1 mL in DMSO
1mg
5mg
10mg
25mg
50mg
100mg
250mg
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纯度/质量控制文件

纯度: ≥98%

产品描述
KU-0063794 是一种新型、有效、细胞渗透性和选择性 mTOR(雷帕霉素靶点)抑制剂,具有潜在的抗癌活性。它的 IC50 小于 10 nM,可抑制 mTORC1 和 mTORC2。 76 种其他蛋白激酶和 7 种脂质激酶,包括浓度高 1000 倍的 1 类 PI3K(磷酸肌醇 3-激酶),不受其抑制。此外,Ku-0063794 还可阻止 PDK1 磷酸化 Akt 的 T 环 Thr308 残基。此外,Ku-0063794 抑制细胞生长并导致 G1 细胞周期停滞。确定 mTOR 的生理功能将会有所帮助,而 Ku-0063794 可能有助于治疗该通路被不必要激活的癌症。
生物活性&实验参考方法
靶点
mTORC1 (IC50 = 10 nM); mTORC2 (IC50 = 10 nM)
体外研究 (In Vitro)
与 mTOR 抑制剂 PP242 相比,KU-0063794 对 mTOR 表现出更高的特异性,因为对 PI3K 或 76 种其他激酶没有活性。在 HEK-293 细胞中,30 nM 的 KU-0063794 足以通过阻断疏水基序 (Thr389) 的磷酸化以及随后的 T 环残基 (Thr229) 的磷酸化来快速消除 S6K1 活性。在 IGF1 刺激后,需要 300 nM 的 KU-0063794 才能完全抑制血清饥饿的 HEK-293 细胞中的 S6K1 活性。此外,浓度为 100–300 nM 的 KU-0063794 完全抑制氨基酸引起的 S6K1 和 S6 蛋白磷酸化。与 S6K1 类似,KU-0063794 以剂量和时间依赖性方式阻断 mTORC1 Ser2448 和 mTORC2 Ser2481。 KU-0063794 对 Akt Ser473 和意外 Thr308 的活性和磷酸化产生剂量依赖性抑制,以及 Akt 底物 PRAS40 在 Thr246、GSK3/GSK3 在 Ser21/Ser9 和 Foxo-1/3a 在 Thr24 的磷酸化/Thr32 在血清存在下或 IGF1 刺激后。 KU-0063794(而非雷帕霉素)以剂量依赖性方式抑制 SGK1 活性和 Ser422 磷酸化及其生理底物 NDGR1,其程度与 S6K1 和 Akt 磷酸化相同。然而,KU-0063794 不会抑制佛波酯诱导的 ERK 或 RSK 磷酸化或 RSK 激活。与雷帕霉素相比,KU-0063794 导致 4E-BP1 Thr37、Thr46 和 Ser65 完全去磷酸化的效力明显更高。 KU-0063794 比雷帕霉素更显着地抑制具有野生型和 mLST8 缺陷突变的 MEF 中的细胞生长,并导致 G1 细胞周期停滞。 [1]
体内研究 (In Vivo)
Ku0063794 在临床前肾细胞癌模型中抑制肿瘤生长和 mTOR 信号传导。然而,在动物研究中,Ku0063794 并不比替西罗莫司更有效。替西罗莫司对肿瘤微环境具有显着影响的事实可能是Ku0063794体内活性缺乏增加的原因。虽然 Ku0063794 对异种移植肿瘤的血管生成没有影响,但替西罗莫司却有影响。与用 Ku0063794 治疗的肿瘤相比,用替西罗莫司治疗的肿瘤表达的 VEGF 和 PDGF 水平较低,从而减少了血管生成[2]。
酶活实验
HEK-293 细胞在 Hepes 裂解缓冲液中新鲜裂解。通过将裂解物 (1-4 mg) 与 5-20 L 缀合至免疫前 IgG 的 Protein G-Sepharose 一起孵育,裂解物被预澄清。之后,将 5-20 L 蛋白 G-琼脂糖与 5-20 g 抗 Rictor 或抗 Raptor 抗体或免疫前 IgG 偶联,与裂解物提取物一起孵育。 Protein G-Sepharose 与每种抗体共价偶联。免疫沉淀在 4°C 下在振动平台上进行 1 小时。使用Hepes裂解缓冲液洗涤免疫沉淀四次,然后使用Hepes激酶缓冲液洗涤两次。为了确保最佳激酶活性,用于磷酸化 S6K1 的 Raptor 免疫沉淀的前两个洗涤步骤的缓冲液含有 0.5 M NaCl。 PI-103(1 μM,1 小时)孵育一小时后,从血清饥饿的 HEK-293 细胞中纯化 GST-Akt1。 GST-S6K1 是从耗尽血清和雷帕霉素(0.1 μM,1 小时)的 HEK-293 细胞中分离出来的。为了启动 mTOR 反应,添加 0.1 mM ATP 和 10 mM MgCl2,同时还存在不同浓度的 KU-0063794 和 GST-Akt1 (0.5 μg) 或 GST-S6K1 (0.5 μg)。在振动平台上于 30°C 运行 30 分钟后,添加 SDS 样品缓冲液会停止反应。之后,将反应混合物通过孔径为 0.22 米的 Spin-X 过滤器过滤,并使用指定的抗体对样品进行电泳和免疫印迹分析。
细胞实验
每 24 小时,将新一批新鲜溶解的 KU-0063794 添加到培养基中,并用其处理细胞 24、48 和 72 小时。将细胞固定在含 4% (v/v) 多聚甲醛的 PBS 中 15 分钟,以测量细胞生长。将细胞用水洗涤一次,用0.1%结晶紫的10%乙醇溶液染色20分钟,然后用水洗涤3次。使用 0.5 mL 10% (v/v) 乙酸 20 分钟从细胞中提取结晶紫。然后,将洗脱液以1:10的比例用水稀释,并测量590 nm处的吸光度。
动物实验
Nu/Nu nude mice
8 mg/kg
i.p.
参考文献

[1]. Biochem J. 2009 Jun 12;421(1):29-42.

[2]. PLoS One. 2013;8(1):e54918.

*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C25H31N5O4
分子量
465.5447
精确质量
465.5447
元素分析
C, 64.50; H, 6.71; N, 15.04; O, 13.75
CAS号
938440-64-3
外观&性状
Solid powder
SMILES
C[C@@H]1CN(C[C@@H](O1)C)C2=NC3=C(C=CC(=N3)C4=CC(=C(C=C4)OC)CO)C(=N2)N5CCOCC5
InChi Key
RFSMUFRPPYDYRD-CALCHBBNSA-N
InChi Code
InChI=1S/C25H31N5O4/c1-16-13-30(14-17(2)34-16)25-27-23-20(24(28-25)29-8-10-33-11-9-29)5-6-21(26-23)18-4-7-22(32-3)19(12-18)15-31/h4-7,12,16-17,31H,8-11,13-15H2,1-3H3/t16-,17+
化学名
[5-[2-[(2R,6S)-2,6-dimethylmorpholin-4-yl]-4-morpholin-4-ylpyrido[2,3-d]pyrimidin-7-yl]-2-methoxyphenyl]methanol
别名
Ku0063794; Ku 0063794; KU0063794; Ku-0063794; KU-0063794; KU 0063794; KU 63794; KU-63794; KU63794
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外)
DMSO: ~16 mg/mL (~34.4 mM)
Water: <1 mg/mL
Ethanol: <1 mg/mL
溶解度 (体内)
30% PEG400+0.5% Tween80+5% propylene glycol: 13mg/mL 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 50% PEG300 → 5% Tween-80 → 35% ddH2O;假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄 清 DMSO 储备液加到 500 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入350 μL ddH2O定容至 1 mL);
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 2.1480 mL 10.7402 mL 21.4804 mL
5 mM 0.4296 mL 2.1480 mL 4.2961 mL
10 mM 0.2148 mL 1.0740 mL 2.1480 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
+
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

生物数据图片
  • KU-0063794

    Ku-0063794 inhibits mTORC1 activity in vivo.2009 Jun 12;421(1):29-42.




  • KU-0063794

    Ku-0063794 inhibits both mTORC1 and mTORC2 complexesin vitro.2009 Jun 12;421(1):29-42.

  • KU-0063794

    Ku-0063794 ablates mTORC2in vivo.2009 Jun 12;421(1):29-42.

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