| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10mg |
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| 靶点 |
B-Raf (Kd = 2.4 nM); B-Raf (IC50 = 10 nM)
L-779450 targets the serine/threonine-protein kinase B-Raf (BRAF). It acts as an ATP-competitive inhibitor, meaning it binds to the ATP-binding pocket of the kinase, thereby preventing ATP from binding and blocking the phosphorylation of downstream substrates. The compound has a dissociation constant (Kd) of 2.4 nM and an IC50 of 10 nM. It displays good selectivity, showing >7-fold, >30-fold, and >70-fold selectivity over p38α, GSK3β, and Lck, respectively. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
L-779450 (L-779,450) 对 Raf 具有高度特异性。仅有另一种与 Raf 结构上共享激酶结构域的激酶 p38MAPK 被抑制。在 0.3 至 2 μM 的剂量范围内，L-779450 可抑制人肿瘤细胞系的非锚定依赖性生长[2]。本研究探讨了 L-779450 (L-779,450) 对 TRAIL 敏感性的影响，研究对象包括对 TRAIL 高度敏感的黑色素瘤细胞系（A-375 和 SK-Mel-147）、对 TRAIL 中等敏感的黑色素瘤细胞系（Mel-HO、SK-Mel-13 和 SK-Mel-28）以及对 TRAIL 具有永久耐药性的黑色素瘤细胞系（MeWo、Mel-2a 和 SK-Mel-103），以及经 TRAIL 筛选获得耐药性的黑色素瘤细胞系（A-375-TS 和 Mel-HO-TS）。 L-779450 对细胞凋亡的直接作用较弱，但它能显著增强对 TRAIL 敏感的黑色素瘤细胞中 TRAIL 诱导的细胞凋亡，并克服 Mel-2a、SK-Mel-103、A-375-TS 和 Mel-HO-TS 细胞的 TRAIL 耐药性。24 小时内，16-35% 的细胞被诱导凋亡[3]。体外实验表明，L-779450 是一种高效的 B-Raf 激酶活性抑制剂，IC50 为 10 nM，Kd 为 2.4 nM。它已被证实能够抑制 B-Raf 突变型和野生型黑色素瘤细胞系的增殖。此外，L-779450 还能增强这些细胞中肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (TRAIL) 介导的细胞凋亡。这些体外活性证实了其对 B-Raf 的强效选择性抑制作用，以及其抑制癌细胞生长和促进细胞死亡的能力。
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| 体内研究 (In Vivo) |
现有文献中关于L-779450的详细体内活性数据报道并不多。然而，其对B-Raf的强效体外活性以及对黑色素瘤细胞系的影响表明，该化合物在肿瘤模型中具有潜在的体内疗效。作为一种B-Raf抑制剂，L-779450有望应用于MAPK/ERK通路及其在癌症中的作用研究。需要开展进一步的体内研究来全面评估其治疗潜力。
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| 酶活实验 |
ERK1 和 ERK2 激活的蛋白质印迹分析[2]
将细胞在不含酚红的培养基（含 5% 活性炭处理的胎牛血清）中培养 24 小时，以去除 4-羟色胺 (4HT)，然后用 DMSO (0.13%)、L-779450 (10 μM) 或 U0126 (2.3 μM) 处理 1 小时。洗涤细胞并重悬于无血清 DMEM 培养基中。取 1 ml 细胞悬液（含 1.25 × 10⁶ 个细胞）加入微量离心管中。然后在 37°C 下用 DMSO、4HT 或阳性对照 20 nM PMA 脉冲处理细胞 0.5 小时。刺激后，将试管在微型离心机中离心 30 秒，去除上清液，将细胞沉淀重悬于 110 μl 冷裂解缓冲液（25 mM Tris-HCl，pH 7.4；50 mM NaCl；0.5% 脱氧胆酸钠；2% NP-40；0.2% SDS；1 mM 苯甲基磺酰氟；50 μg/ml 抑蛋白酶，50 μM 亮抑蛋白酶；0.5 mM Na3VO4）中，并置于冰上 15 分钟。将细胞裂解液在Eppendorf微型离心机中以14000 rpm离心15分钟，取上清液98 μl，并与42 μl 3.3×上样缓冲液（200 mM Tris-HCl，pH 6.8；33%甘油；6.6% SDS；16.6% β-巯基乙醇；0.04%溴酚蓝）混合。将样品煮沸（5分钟）后冷冻。取15 μl制备好的样品进行10% SDS-PAGE凝胶电泳，并将蛋白质电转移至PVDF膜上。将膜在 4°C 下于封闭缓冲液（25 mM Tris-HCl，pH 8.0；125 mM NaCl；0.1% Tween-20；1% BSA；0.1% 叠氮化钠）中孵育过夜。将膜与稀释于封闭缓冲液中的一抗（抗活性ERK，1:20000 或抗p90Rsk，1:10000）孵育2小时。印迹用TBST缓冲液（25 mM Tris-HCl，pH 8.0；125 mM NaCl；0.025% Tween-20）洗涤两次，然后与碱性磷酸酶（AP）标记的羊抗兔IgG或羊抗鼠IgG（TBST稀释，1:10000）在室温下孵育1小时。印迹再次用TBST缓冲液洗涤两次，并用显色底物BCIP和NBT显色。由于该印迹系统不易进行“剥离和重新探针”，因此同时运行平行凝胶以检测总ERK2作为额外的上样对照。所示数据代表至少两次独立实验的结果。 信号的影响信号转导抑制剂对细胞增殖的影响[2] 将信号转导抑制剂或溶剂对照DMSO加入96孔板的上排，并用含5% FCS的培养基进行三倍系列稀释。使用的抑制剂包括：Raf抑制剂L-779450（可与ATP竞争结合Raf催化位点）、MEK抑制剂PD98059和U0126以及PI3K抑制剂LY294002。这些抑制剂的结构如图2所示。系列稀释后，向孔中加入恒定量的IL-3（2.5% WEHI-3B上清液）或4HT（125 nM）。将细胞因子依赖性、ΔRaf:ER或ΔMEK1:ER反应性细胞用PBS洗涤两次，然后以10,000个细胞/孔的密度接种于96孔板中。将细胞接种于96孔板中，孵育18小时。在最后4-6小时加入[3H]胸苷，然后收集细胞，使用Wallac 1450 Microbeta plus液体闪烁计数器测定[3H]胸苷的掺入量。抑制倍数通过将溶剂DMSO存在下[3H]胸苷的平均掺入量除以相同DMSO浓度下药物存在下[3H]胸苷的平均掺入量来确定。每个实验重复4-6次，每次使用来自每种细胞系的2-5个不同克隆。 L-779450的非细胞酶活性测定通常涉及使用纯化的重组B-Raf酶进行体外激酶活性测定。将该化合物与激酶、肽底物和不同浓度的ATP一起孵育。通过定量底物磷酸化来测定激酶活性，例如使用放射性检测等技术（例如，可通过³³P-ATP掺入法、荧光偏振法或基于ELISA的检测方法进行检测。酶抑制的IC50值由剂量反应曲线确定。对一系列激酶进行选择性分析以确认其特异性。 |
| 细胞实验 |
TRAIL (20 ng/mL)、泛 RAF 抑制剂 L-779450 (0.1–50 μM)、MEK 抑制剂 U0126 (20 μM) 和选择性 BRAF(V600E) 抑制剂 Vemurafenib/PLX4032 均用于诱导细胞凋亡。xCELLigence 系统用于持续监测细胞生长。所附细胞数量对应于相对细胞指数。进行细胞周期分析以量化细胞凋亡和细胞周期阻滞。使用碘化丙啶 (200 mg/mL) 对胰蛋白酶消化的细胞进行染色 1 小时，并使用流式细胞术定量亚 G1 期细胞，这些细胞代表含有 DNA 片段的细胞。
siRNA[3] 细胞转染：在接种 24 小时后（70% 汇合度），于 6 孔板中进行瞬时细胞转染。 24小时后，用L-779,450/TRAIL进行处理。每个孔使用20 pmol siRNA和4 μl TurboFect。使用的siRNA包括Smac（sc-36505）、Bax（sc-29212）、Bak（sc-29786）、Bim（sc-29802）以及对照siRNA（sc-37007）。 使用多种癌细胞系（包括B-Raf突变型和野生型黑色素瘤细胞系）进行L-779,450的细胞活性检测。将细胞用不同浓度的化合物处理特定时间。使用MTT或CellTiter-Glo等标准细胞活力检测方法评估细胞增殖。使用Annexin V/PI染色或检测caspase活性评估细胞凋亡。这些试验证实了该化合物在细胞环境中抑制细胞生长和诱导细胞死亡的能力。 |
| 动物实验 |
需要建立L-779450的体内动物模型来评估其治疗潜力。基于其作为B-Raf抑制剂对黑色素瘤细胞的活性机制，相关模型可包括在携带黑色素瘤细胞系的免疫缺陷小鼠中进行异种移植研究。该化合物将通过适当的途径以不同剂量给药。将持续监测肿瘤生长抑制情况。还将评估肿瘤组织中ERK磷酸化等药效学标志物。现有文献中尚未广泛报道详细的实验方案。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
L-779450 的分子量为 347.80 g/mol，分子式为 C₂₀H₁₄ClN₃O，CAS 编号为 303727-31-3。该化合物为结晶固体，纯度≥98%。可溶于 DMSO（70 mg/mL）。储存条件：-20°C。在推荐条件下以粉末形式储存，该化合物至少可稳定保存 4 年。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
现有文献中关于L-779450的详细毒理学数据报道不多。作为一种研究化合物，其安全性需要通过标准的临床前毒性评估来确定。该化合物仅供研究使用，不得用于人体。处理该化合物时应遵循标准的实验室安全操作规程。
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| 参考文献 |
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| 其他信息 |
2-氯-5-(2-苯基-5-吡啶-4-基-1H-咪唑-4-基)苯酚属于咪唑类化合物。Raf/MEK/ERK 和 PI3K/Akt 信号通路调控细胞增殖并抑制细胞凋亡。由于上游调控因子的高突变频率，这些通路的异常表达在人类癌症中普遍存在。本研究探讨了 Raf、MEK 和 PI3K 抑制剂对条件性转化造血细胞的影响，以确定它们在细胞因子和癌基因介导的增殖方面是否存在细胞毒性差异，以及同时抑制这两个通路是否是诱导细胞凋亡的更有效方法。在所用的造血模型系统中，细胞增殖是条件性的，仅在白细胞介素-3 (IL-3) 或雌激素受体拮抗剂4-羟基他莫昔芬 (4HT) 存在时才会发生，后者可激活条件性癌蛋白 (ΔRaf:ER)。因此，通过添加信号转导抑制剂以及IL-3或4HT，可以在细胞因子和癌蛋白介导的生长条件下，在同一细胞中测试这些药物的作用，从而避免遗传和分化阶段的异质性。在接近先前报道的Raf抑制剂L-779,450的IC50值的浓度下，该抑制剂可抑制DNA合成并诱导造血FDC-P1细胞凋亡。这些细胞转化后，对Raf-1或A-Raf表现出增殖反应（FD/ΔRaf-1:ER和FD/ΔA-Raf:ER）。然而，当细胞在IL-3中培养时，该抑制剂对DNA合成和细胞凋亡的影响较小。Raf抑制剂对B-Raf或MEK1反应性细胞的抑制活性较弱，表明其具有药物特异性。MEK抑制剂也能抑制Raf反应性细胞的DNA合成并诱导其凋亡，且对Raf反应性细胞的抑制作用比对细胞因子介导的增殖的抑制作用更为显著。PI3K抑制剂LY294002抑制Raf介导的增殖，表明Raf介导的一些长期增殖效应依赖于PI3K。同时抑制Raf/MEK/ERK和PI3K/Akt通路已被证明是抑制DNA合成和诱导细胞凋亡的更有效方法，且所需的药物浓度更低。 [1]
BRAF突变是黑色素瘤的关键癌基因，选择性抑制剂已被批准用于治疗黑色素瘤。然而，RAF抑制在黑色素瘤细胞中的分子机制尚不清楚。本研究探讨了泛RAF抑制剂L-779,450的作用，该抑制剂可抑制BRAF突变型和野生型黑色素瘤细胞系的增殖。此外，L-779,450与死亡配体肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）联合使用可增强黑色素瘤细胞的凋亡，并克服TRAIL耐药性。凋亡增强与线粒体途径的激活同时发生，表现为线粒体膜电位丧失以及细胞色素c、Smac（另一种线粒体来源的caspase激活剂）和凋亡诱导因子（AIF）的释放。随后，caspase-9 和 caspase-3 被激活。L-779,450/TRAIL 诱导的细胞凋亡可被 Bcl-2 过表达抑制，且该过程依赖于 Bax。因此，通过 Bax 的构象变化证实了 L-779,450 单独激活了 Bax，而 Bak 则未被激活。此外，在 L-779,450 的作用下，仅含 BH3 结构域的蛋白 Bim 表达上调。通过小干扰 RNA (siRNA) 介导的基因敲低实验证实了 Smac、Bax 和 Bim 在此过程中的重要作用。L-779,450 还导致了形态学变化，提示存在自噬，这通过自噬标志物轻链 3-II (LC3-II) 的表达得到证实。 L-779,450 的促凋亡作用可能解释 RAF 抑制剂的抗肿瘤作用，这在评估 RAF 抑制剂治疗黑色素瘤的疗效时可以考虑。[2] L-779450 又名 Raf 激酶抑制剂 IV。它是一种强效的 ATP 竞争性 B-Raf 抑制剂，IC50 为 10 nM，Kd 为 2.4 nM。它对 p38α、GSK3β 和 Lck 的选择性分别超过 7 倍、30 倍和 70 倍。该化合物可抑制黑色素瘤细胞系的增殖并增强 TRAIL 介导的细胞凋亡。它被用于癌症研究中，以研究 MAPK/ERK 通路。其 CAS 编号为 303727-31-3。 |
| 分子式 |
C20H14CLN3O
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|---|---|
| 分子量 |
347.8
|
| 精确质量 |
347.083
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| 元素分析 |
C, 69.07; H, 4.06; Cl, 10.19; N, 12.08; O, 4.60
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| CAS号 |
303727-31-3
|
| 相关CAS号 |
303727-31-3
|
| PubChem CID |
9950176
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
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| 密度 |
1.335g/cm3
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| 沸点 |
579.783ºC at 760 mmHg
|
| 闪点 |
304.442ºC
|
| 折射率 |
1.671
|
| LogP |
5.164
|
| tPSA |
61.8
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
3
|
| 可旋转键数目(RBC) |
3
|
| 重原子数目 |
25
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| 分子复杂度/Complexity |
425
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
OC1=CC(C2=C(C3=CC=NC=C3)N=C(C4=CC=CC=C4)N2)=CC=C1Cl
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| InChi Key |
WXJLXRNWMLWVFB-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C20H14ClN3O/c21-16-7-6-15(12-17(16)25)19-18(13-8-10-22-11-9-13)23-20(24-19)14-4-2-1-3-5-14/h1-12,25H,(H,23,24)
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| 化学名 |
2-chloro-5-(2-phenyl-5-pyridin-4-yl-1H-imidazol-4-yl)phenol
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| 别名 |
L779450; L 779450; L-779450; L 779,450; 2-chloro-5-(2-phenyl-5-(pyridin-4-yl)-1H-imidazol-4-yl)phenol; L-779,450; 2-chloro-5-(2-phenyl-5-pyridin-4-yl-1H-imidazol-4-yl)phenol; L779450; CHEMBL373011; Phenol, 2-chloro-5-[2-phenyl-4-(4-pyridinyl)-1H-imidazol-5-yl]-; L-779,450; L779,450
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: 70~100 mg/mL (201.3~287.5 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.19 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.19 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.19 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.8752 mL | 14.3761 mL | 28.7522 mL | |
| 5 mM | 0.5750 mL | 2.8752 mL | 5.7504 mL | |
| 10 mM | 0.2875 mL | 1.4376 mL | 2.8752 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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