L-779450

别名: L779450; L 779450; L-779450; L 779,450; 2-chloro-5-(2-phenyl-5-(pyridin-4-yl)-1H-imidazol-4-yl)phenol; L-779,450; 2-chloro-5-(2-phenyl-5-pyridin-4-yl-1H-imidazol-4-yl)phenol; L779450; CHEMBL373011; Phenol, 2-chloro-5-[2-phenyl-4-(4-pyridinyl)-1H-imidazol-5-yl]-; L-779,450; L779,450 4-(4-氯-3-羟基苯基)-2-苯基-5-(吡啶-4-基)-1H-咪唑; 2-氯-5-(2-苯基-5-(吡啶-4-基)-1H-咪唑-4-基)苯酚;L-779450

目录号: V23607 纯度: ≥98%

COA 产品数据产品说明书 SDS

L-779450 是一种有效的、选择性的、ATP 竞争性的 Raf 激酶抑制剂 (IC50 = 10 nM)。

L-779450 CAS号: 303727-31-3
产品类别: Raf

产品仅用于科学研究，不针对患者销售

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Nature 2025, 643(8070):192-200.

Nature 2024 Dec 18.

Nature 2021, 597(7874):119-125.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

Science Adv 2022: 8, eabm9427.

Nat Neurosci 2024, 27:1468-1474.

Science Adv 2025, 11(33):eadr5199.

Nat Metab 2024, 6: 1108-1127.

Cell Stem Cell 2024, 31:106-126.e13.

Nature 597, 119–125 (2021)

Cell Stem Cell 2020,26(6):845-861.e12.

Science Trans Med 2023,15(701):eadd7872.

STTT 2023,8(1):91.

Cell Reports 2023,42(4):112313

Science Trans Med 2023, 15: eadd7872.

Cancer Cell 2021,39(4):529-547.e7.

Cancer Discov 2022,12(4):1106-1127.

Immunity 2023,56(3):620-634.e11.

Immunity 2024,57:2651-2668.e12.

J Am Chem Soc 2022,144:21831-21836.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

Science Adv 2022:8,eabm9427.

Nature 2021,597(7874):119-125.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

PNAS Nexus 2022,1(3):pgac063.

ACS Nano 2023,17(10):9110-9125.

Biomaterial 2023 Sep16:302:122333.

产品描述
生物活性&实验参考方法
化学信息
溶解度数据
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产品描述

L-779450 是一种有效的、选择性的、ATP 竞争性的 Raf 激酶抑制剂 (IC50 = 10 nM)。 L-779450 在响应 Raf-1 和 A-Raf 但不响应 B-Raf 的细胞中引起细胞凋亡并抑制 DNA 合成。

生物活性&实验参考方法

靶点	B-Raf (Kd = 2.4 nM); B-Raf (IC50 = 10 nM)
体外研究 (In Vitro)	L-779450 (L-779,450) 对 Raf 显示出高度的特异性。只有另一种测试的激酶 p38MAPK 受到抑制，该激酶在结构上与 Raf 共享一个激酶结构域。在 0.3 至 2 μM 的剂量范围内，L-779450 抑制人类肿瘤系的贴壁依赖性生长 [2]。本文在具有高 TRAIL 敏感性（A-375 和 SK-Mel-147）、中等敏感性（Mel-HO、SK-Mel-13、和 SK-Mel-28），和永久耐药性（MeWo、Mel-2a 和 SK-Mel-103），以及 TRAIL 选择的具有获得性耐药性的细胞系（A-375-TS 和 Mel-HO-TS））。 L-779450 对细胞凋亡只有轻微的直接影响，但它显着增加对其敏感的黑色素瘤细胞中 TRAIL 诱导的细胞凋亡，并克服 Mel-2a、SK-Mel-103、A-375-TS 和 Mel 中的 TRAIL 耐药性-HO-TS。 16–35% 的细胞在 24 小时内诱导细胞凋亡[3]。
酶活实验	Western blot分析ERK1和ERK2活化[2] 细胞在含5%炭脱FCS的无酚红培养基中无4HT处理24 h，然后用DMSO（0.13%）、L-779450 (10 μ M)或U0126 （2.3 μ M）处理1 h。细胞洗涤后用无血清DMEM重悬。在微管中加入体积为1 ml的1.25 × 106个细胞。然后用DMSO、4HT或阳性对照20 nM PMA在37℃下脉冲半小时。刺激后，将试管在微离心机中离心30 s，去除上清，将细胞球重悬于110 μl冷裂解缓冲液(25 mM Tris-HCl, pH 7.4；50 mM NaCl；0.5%脱氧胆酸钠；NP-40 2%;0.2% SDS;1毫米苯甲基磺酰氟；抑肽素50 μg/ml，白细胞介素50 μM；0.5 mM Na3VO4)，放置在冰上15分钟。裂解液在Eppendorf微离心机中以14000 rpm离心15 min，去除上清（98 μl），与42 μl 3.3 ×样品缓冲液(200 mM Tris-HCl, pH 6.8；33%甘油;6.6% SDS;16.6%β巯基乙醇;0.04%溴酚蓝)。样品煮沸（5分钟）并冷冻。用10%的SDS-PAGE凝胶电泳15 μl制备的样品，将蛋白质电泳转移到PVDF膜上。在4°C的阻断缓冲液(25 mM Tris-HCl, pH 8.0；125 mM NaCl；Tween-20 0.1%;1% BSA;0.1%叠氮化钠)。然后用阻断缓冲液稀释一抗（抗活性ERK， 1:20 000或抗p90rsk(1:10 000)）孵育膜2小时。印迹在TBST (25 mM Tris-HCl, pH 8.0；125 mM NaCl；0.025% Tween-20)，与碱性磷酸酶（AP）偶联的山羊抗兔Ig或山羊抗小鼠Ig （1:10 000 TBST）在室温下孵育1小时。印迹在TBST中洗涤两次，用显色底物BCIP和NBT 进行显影。这种印迹系统不能轻易地“剥离和谴责”，这就是为什么平行凝胶被用来检测总ERK2作为额外的负载控制。所显示的数据代表了至少两个独立进行的实验。信号转导抑制剂对细胞增殖的影响[2] 将信号转导抑制剂或溶剂控制DMSO添加到96孔板的最上排，并用含有5% FCS的介质连续稀释三倍。使用了以下抑制剂：Raf抑制剂L-779450与ATP竞争结合到Raf催化位点，MEK抑制剂PD98059和U0126，以及PI3K抑制剂LY294002。这些抑制剂的结构如图2所示。连续稀释后，在孔中加入一定量的IL-3 （2.5% WEHI-3B上清）或4HT （125 nM）。细胞因子依赖性，ΔRaf:ER-或ΔMEK1:ER-应答细胞用PBS洗涤两次，然后以10000个/孔的速度接种于96孔板，孵育18小时。最后加入[3H]胸腺嘧啶4-6小时，然后收获板，在Wallac 1450 Microbeta加液体闪烁计数器上测定[3H]胸腺嘧啶的加入量。通过将与载体DMSO结合的[3H]胸腺嘧啶的平均量除以在相同浓度的DMSO存在的药物下并入的[3H]胸腺嘧啶的平均量来确定双重抑制作用。每个实验进行四到六次，从每种类型的细胞系中提取两到五个不同的克隆。
细胞实验	TRAIL (20 ng/mL)、泛 RAF 抑制剂 L-779450 (0.1–50 μM)、MEK 抑制剂 U0126 (20 M) 和选择性 BRAF (V600E) 抑制剂 Vemurafenib/PLX4032 均用于诱导细胞凋亡。 xCELLigence 系统用于持续的细胞生长监测。附加的细胞编号对应于相对细胞索引。进行细胞周期分析以量化细胞凋亡和细胞周期停滞。使用碘化丙啶 (200 mg/mL) 对胰蛋白酶处理的细胞染色 1 小时，并使用流式细胞术对亚 G1 级分进行定量，这些级分代表带有 DNA 片段的细胞。 siRNA转染细胞[3] 在播种后24小时（70%汇合）在6孔板上进行瞬时细胞转染。再用L-779,450/TRAIL治疗24小时。每孔siRNA用量为20 pmol， turboeffect用量为4 μl。使用Smac （sc-36505）、Bax （sc-29212）、Bak （sc-29786）、Bim （sc-29802）和加扰对照（sc-37007）的sirna。
参考文献	[1]. The identification of potent, selective and CNS penetrant furan-based inhibitors of B-Raf kinase. Bioorg Med Chem Lett. 2008 Aug 1;18(15):4373-6. [2]. Differential effects of kinase cascade inhibitors on neoplastic and cytokine-mediated cell proliferation. Leukemia. 2003 Sep;17(9):1765-82. [3]. RAF inhibition overcomes resistance to TRAIL-induced apoptosis in melanoma cells. J Invest Dermatol. 2014 Feb;134(2):430-440.
其他信息	2-氯-5-(2-苯基-5-吡啶-4-基-1H-咪唑-4-基)苯酚属于咪唑类化合物。 Raf/MEK/ERK 和 PI3K/Akt 信号通路调控细胞增殖并抑制细胞凋亡，由于上游调控因子的高突变频率，这些通路的表达异常在人类癌症中普遍存在。本研究检测了 Raf、MEK 和 PI3K 抑制剂对条件转化造血细胞的影响，以确定它们在细胞因子和癌基因介导的增殖中是否存在细胞毒性差异，以及同时抑制这两个通路是否是诱导细胞凋亡的更有效方法。在所采用的造血模型系统中，细胞增殖是条件性的，仅在提供白细胞介素-3 (IL-3) 或雌激素受体拮抗剂4-羟基他莫昔芬 (4HT) 时才会发生，后者可激活条件性癌蛋白 (DeltaRaf:ER)。因此，在添加信号转导抑制剂以及IL-3或4HT后，在细胞因子和癌蛋白介导的生长条件下，于同一细胞中检测了这些药物的作用，从而避免了遗传和分化阶段的异质性。在药物浓度接近已报道的Raf抑制剂L-779,450的IC50值时，该抑制剂可抑制造血FDC-P1细胞的DNA合成并诱导其凋亡。这些细胞经转化后可对Raf-1或A-Raf产生增殖反应（FD/ΔRaf-1:ER和FD/ΔA-Raf:ER）。然而，当细胞在IL-3中培养时，该抑制剂对DNA合成和凋亡的影响较小。该Raf抑制剂对B-Raf或MEK1反应性细胞的抑制作用较弱，表明该药物具有特异性。MEK抑制剂也能抑制Raf反应性细胞的DNA合成并诱导其凋亡，且其对Raf反应性细胞的抑制作用比对细胞因子介导的增殖作用更为显著。PI3K抑制剂LY294002可抑制Raf介导的增殖，表明Raf介导的部分长期增殖效应依赖于PI3K。同时抑制Raf/MEK/ERK和PI3K/Akt通路已被证明是一种更有效的抑制DNA合成和诱导细胞凋亡的方法，且所需药物浓度更低。[1] 突变型BRAF是黑色素瘤中的关键癌基因，选择性抑制剂已被批准用于黑色素瘤治疗。然而，RAF抑制在黑色素瘤细胞中的分子机制仍不甚明了。本研究探讨了泛RAF抑制剂L-779,450的作用，该抑制剂可抑制BRAF突变型和野生型黑色素瘤细胞系的增殖。此外，L-779,450与死亡配体肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）联用可增强细胞凋亡，并克服黑色素瘤细胞的TRAIL耐药性。细胞凋亡增强与线粒体通路激活同时发生，表现为线粒体膜电位丧失以及细胞色素c、Smac（第二种线粒体来源的caspase激活因子）和凋亡诱导因子（AIF）的释放。随后，caspase-9和caspase-3被激活。L-779,450/TRAIL诱导的细胞凋亡可被Bcl-2过表达所抑制，且依赖于Bax。因此，L-779,450单独激活Bax可通过Bax构象变化得到证实，而Bak则未被激活。此外，仅含BH3结构域的蛋白Bim在L-779,450的作用下表达上调。通过小干扰RNA（siRNA）介导的基因敲低实验证实了Smac、Bax和Bim在此过程中的重要作用。 L-779,450 还导致了形态学变化，表明发生了自噬，这已通过自噬标志物轻链 3-II (LC3-II) 得到证实。L-779,450 的促凋亡作用可能解释了 RAF 抑制剂的抗肿瘤作用，在评估 RAF 抑制剂用于黑色素瘤治疗时可以考虑这一点。[2]

*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性

化学信息 & 存储运输条件

分子式	C20H14CLN3O
分子量	347.8
精确质量	347.083
元素分析	C, 69.07; H, 4.06; Cl, 10.19; N, 12.08; O, 4.60
CAS号	303727-31-3
相关CAS号	303727-31-3
PubChem CID	9950176
外观&性状	Light yellow to yellow solid powder
密度	1.335g/cm3
沸点	579.783ºC at 760 mmHg
闪点	304.442ºC
折射率	1.671
LogP	5.164
tPSA	61.8
氢键供体(HBD)数目	2
氢键受体(HBA)数目	3
可旋转键数目(RBC)	3
重原子数目	25
分子复杂度/Complexity	425
定义原子立体中心数目	0
SMILES	OC1=CC(C2=C(C3=CC=NC=C3)N=C(C4=CC=CC=C4)N2)=CC=C1Cl
InChi Key	WXJLXRNWMLWVFB-UHFFFAOYSA-N
InChi Code	InChI=1S/C20H14ClN3O/c21-16-7-6-15(12-17(16)25)19-18(13-8-10-22-11-9-13)23-20(24-19)14-4-2-1-3-5-14/h1-12,25H,(H,23,24)
化学名	2-chloro-5-(2-phenyl-5-pyridin-4-yl-1H-imidazol-4-yl)phenol
别名	L779450; L 779450; L-779450; L 779,450; 2-chloro-5-(2-phenyl-5-(pyridin-4-yl)-1H-imidazol-4-yl)phenol; L-779,450; 2-chloro-5-(2-phenyl-5-pyridin-4-yl-1H-imidazol-4-yl)phenol; L779450; CHEMBL373011; Phenol, 2-chloro-5-[2-phenyl-4-(4-pyridinyl)-1H-imidazol-5-yl]-; L-779,450; L779,450
HS Tariff Code	2934.99.9001
存储方式	Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month
运输条件	Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

溶解度数据

溶解度 (体外实验)	DMSO: 70~100 mg/mL (201.3~287.5 mM)
溶解度 (体内实验)	配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.19 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。配方 2 中的溶解度:* ≥ 2.5 mg/mL (7.19 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More* 配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.19 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。

溶解度 (体外实验)

DMSO: 70~100 mg/mL (201.3~287.5 mM)

溶解度 (体内实验)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.19 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.19 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.19 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。

制备储备液		1 mg	5 mg	10 mg
	1 mM	2.8752 mL	14.3761 mL	28.7522 mL
	5 mM	0.5750 mL	2.8752 mL	5.7504 mL
	10 mM	0.2875 mL	1.4376 mL	2.8752 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;

4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。

计算器

质量

浓度

体积

分子量*

计算重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度

参见示例

使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？

在分子量（MW）框中输入350.26
在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
单击“计算”按钮
答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。

浓度 (起始)

体积 (起始)

浓度 (终)

体积 (终)

计算重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：

在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
单击“计算”按钮
答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中

分子式

分子量

g/mol

计算重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4 c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：

要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。

分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：

分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。

配液体积

质量

配液浓度

计算重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
单击“计算”按钮
答案显示在体积框中

动物体内实验配方计算器（澄清溶液）

第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）

给药剂量 mg/kg

动物平均体重 g

每只动物给药体积 μL

动物数量

第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。

% DMSO

% Tween 80

% ddH₂O

计算重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH₂O，混匀澄清。

注意： (1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。