| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Mitochondrial RNA polymerase (POLRMT)
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| 体外研究 (In Vitro) |
IMT1B 是一种非竞争性制剂，通过引起 POLRMT 构象变化来消耗体外底物结合和重塑 [1]。在 A2780、A549 和 HeLa 细胞中，IMT1B（0.01 nM–10 μM；72–168 小时）剂量会降低细胞活力 [1]。 IMT1B 会进一步消耗细胞 [1]。 AMP/ATP 比例和磷酸化 AMPK 的水平是由 IMT1B 的单磷酸化和二磷酸化升高产生的。
抑制细胞mtDNA表达[1] 我们发现IMT1和IMT1B/LDC-203974导致HeLa细胞线粒体转录物水平的剂量依赖性降低（图1f，扩展数据图2a）和mtDNA的逐渐耗尽（图1g，扩展数据图2b）。我们还观察到呼吸链复合物I， III和IV亚基（NDUFB8， UQCRC2和COXI）水平的剂量依赖性降低，其稳定性取决于mtDNA编码的亚基；相比之下，ATP合酶的纯核编码复合体II和F1亚复合体的亚基（SDHB和ATP5A）保持不变（图1，扩展数据图2c）。与这些结果一致，我们对imt1处理的A2780卵巢癌细胞的定量蛋白质组学分析显示复合物I， III和IV的亚基水平快速进行性降低（扩展数据图2d）。IMT1治疗24小时后，胞质核糖体蛋白水平未受影响，而线粒体核糖体蛋白水平严重耗尽，这与mtDNA编码的12S和16S核糖体RNA缺乏一致（扩展数据图2d）。由于mtDNA表达受损，暴露于IMT1的完整HeLa细胞的基础呼吸显著减少（扩展数据图2e）。IMT1和IMT1B在HeLa和A2780细胞中表现出非常相似的mtDNA转录抑制模式，这表明这两种化合物在体外具有相当的效果（扩展数据图2f）。 我们进行了单核苷酸掺入实验，发现IMT1B/LDC-203974不抑制出芽酵母线粒体RNA聚合酶（RPO41）、噬菌体T7 RNA聚合酶、大肠杆菌RNA聚合酶或逆转录酶（扩展数据图3a-d）。此外，IMT1B在体外不抑制人多亚基RNA聚合酶II (RNA Pol II)（扩展数据图3e），并且对细胞系中RNA Pol I-， II-和iii依赖性转录水平没有影响（扩展数据图3f）。此外，IMT1B在体外没有抑制人线粒体DNA聚合酶γ或细胞器中线粒体蛋白的合成（扩展数据图3g， h）。作为独立对照，我们使用SC-6238532 （con IMT）——一种与IMT结构相关的化合物——发现它既不结合POLRMT，也不影响mtDNA的表达（扩展数据图3i-p）。因此，我们得出结论，IMT1和IMT1B是高度特异性的POLRMT抑制剂。 IMTs选择性靶向细胞中的POLRMT[1] 为了确定IMTs的体内靶点，我们在A2780细胞中进行了无偏倚的全基因组正向遗传筛选19（扩展数据图4a）。我们将细胞暴露于诱变原并用野生型致死剂量的IMT1类似物处理它们。耐药克隆的外显子组测序显示，POLRMT突变是IMT毒性的唯一候选抑制因子。我们一共在POLRMT中发现了6个独立的点突变，导致4个氨基酸替换（L796Q、F813L、L816Q和A821V、A821S或A821Q）聚集在POLRMT蛋白的同一区域（图2a）。我们表达并纯化了POLRMT的重组突变体形式，发现添加10 μM IMT1B/LDC-203974不会导致POLRMT突变体的任何热转移，这与IMT1B结合受损一致（图2b）。此外，IMT1B浓度的增加并没有抑制突变型重组POLRMT的转录（扩展数据图4b-f）。用L796Q或L816Q替换表达POLRMT的A2780细胞（扩展数据图4）在细胞增殖试验中显示出对IMT1的强抗性（图2）。在表达野生型POLRMT的A2780细胞中，IMT1严重损害了mtDNA基因的表达，而表达突变型POLRMT （L796Q或L816Q）的细胞则具有耐药性（扩展数据图4h）。综上所述，这些数据表明POLRMT是IMT1的体内靶点。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
IMT1B（100 mg/kg；肺；每日；4 周）可有效降低小鼠异种移植肿瘤的生长 [1]。 IMT1B 降低恶性肿瘤中的线粒体 DNA 水平和呼吸链亚基水平 [1]。在小鼠模型中具有出色的侧壁生物利用度（小鼠中为 101%）和 Cmax（小鼠中为 5149 ng/mL）（小鼠中为 10 mg/kg）[1]。
抑制肿瘤生长无毒性[1] 由于IMTs影响癌细胞的生长而不影响对照细胞（扩展数据图6c），我们口服了含有人A2780或DLD-1癌细胞异种移植物 / LDC-203974/IMT1B的小鼠（图4，扩展数据图8）。IMT1B体内药代动力学参数（扩展数据图8a， b）允许每天单次口服剂量。重要的是，根据我们的差示扫描荧光法和体外转录测定，小鼠POLRMT对IMT1B处理的敏感程度与人类POLRMT相似（扩展数据图8c， d）。每公斤体重100mg IMT1B的应用导致肿瘤体积明显减少（图4a，扩展数据图8e， f）。处理过的小鼠显示出轻微降低体重的不显著趋势（扩展数据图8g）。我们没有观察到急性或慢性肝或肾毒性的迹象（扩展数据图8），并且在用IMT1B治疗野生型小鼠四周后，没有诱导贫血、血小板减少或白细胞减少（扩展数据图8）。IMT1B的剂量足以减少含有异种移植物的小鼠的肿瘤大小。 在分子水平上，LDC-203974/IMT1B小鼠的处理降低了肿瘤中mtDNA转录水平和呼吸链亚基水平（图4b， c），而分化组织中的线粒体转录物降低程度较小（图4b），肝脏和心脏中的OXPHOS蛋白水平保持正常（图4c）。mtDNA水平在肿瘤中显示出轻微的、不显著的下降，而在肝脏和心脏中没有变化（扩展数据图8j）。观察到用IMT治疗会导致HeLa细胞的mtDNA缺失，但在异种移植物肿瘤中不会，这可能是由组织培养中HeLa细胞的快速细胞分裂所解释的。体内IMT1B治疗引起肿瘤组织中磷酸化AMPK的上调和磷酸化核糖体S6蛋白的减少（扩展数据图8k），尽管这并不像组织培养细胞那样极端（图3e）。 小鼠对LDC-203974/IMT1B治疗长达四周的耐受性非常好，这一发现与先前的遗传实验一致，这些实验表明，在有丝分裂后的组织中，mtDNA表达的缺失可以耐受很长时间，尽管生殖系的破坏会导致胚胎致死。这些发现强调了mtDNA表达对快速分裂细胞中OXPHOS系统生物发生的关键重要性，并解释了为什么mtDNA基因表达的破坏可以在不影响正常组织的情况下具有实质性的抗肿瘤作用。 |
| 酶活实验 |
差示扫描荧光法[1]
荧光染料Sypro Orange (Thermo Fisher Scientific；λex = 490 nm, λem = 570 nm)用于监测载脂蛋白和抑制剂结合的人类和小鼠POLRMT的温度诱导展开。该实验基本如上所述31,0-10 μM LDC-203974/IMT1B, 1.6 μM human POLRMT。 微尺度热泳[1] 采用微尺度热泳术（MST）分析了抑制剂对人POLRMT与DNA-RNA模板结合亲和力的影响。将28-mer 5 ' alexa488标记的非模板DNA寡核苷酸（5 ' -CATGGGGTAATTATTATTTCGCCAGACG-3 ‘）以1:1:1的摩尔比退火到其互补模板链（5 ’ -CGTCTGGCGTGCGCGCCGCTACCCCATG-3 ‘）和14-mer RNA寡核苷酸（5 ’ - agucugcggcgcgccg -3 '）。用MST缓冲液（25 mM Tris-HCl pH 8.0, 0.1 M NaCl, 10 mM MgCl2, 0.5 mM ATP, 10% （w/v）甘油，1 mM DTT和0.05% (v/v) tweent -20）稀释12倍POLRMT （0.45-1,000 nM）。稀释液用15 nM DNA-RNA模板和0-10 μM IMT1B/LDC-203974在24℃下孵育10 min。使用带有标准毛细管和40% LED和MST电源的Monolith NT.115仪器，在24°C下分析样品30秒，一式三份。结合热泳和温度跳变数据进行基线校正，并在NanoTemper分析软件中计算Kd、结合态和非结合态。 体外转录测定[1] 通过对含有线粒体LSP的线性和超卷曲模板进行体外转录试验，探讨了抑制剂对线粒体转录的影响。转录反应（25 μl）在0 ~ 10 μM LDC-203974/IMT1B、500 fmol POLRMT、1.5 pmol TFB2M、2.5 pmol TFAM和500 fmol TEFM存在下进行。转录产物用乙醇沉淀法纯化，并在先前发表的8%变性聚丙烯酰胺凝胶上进行分析。以同样的方法对小鼠转录系统进行了实验和分析。 |
| 细胞实验 |
细胞活力测定[1]
细胞类型： A2780 细胞 测试浓度： 0.01 nM、1 nM、10 nM、100 nM、1 μM、10 μM 孵育时间：72 hrs（小时）、96 hrs（小时）、168 hrs（小时） 实验结果：明显增加减少[1]。细胞活力呈剂量依赖性。 |
| 动物实验 |
动物/疾病模型： 7-9 周龄雌性 BALB/c 裸鼠，A2780 细胞异种移植瘤 [1]
剂量： 100 mg/kg 给药途径： 口服，每日一次，每周 4 次。 实验结果： 肿瘤体积显著缩小。 动物/疾病模型： 小鼠[1] 剂量： 1 mg/kg，静脉注射 (iv)；口服 10 mg/kg（药代动力学/PK/PK 分析） 给药途径：静脉注射 (iv) 和口服给药 实验结果：口服生物利用度 (101%)，Cmax (5149 ng/mL)，T1/2 (1.88 h)。 DLD-1 异种移植模型由 Crown Bioscience 公司建立，使用 7-9 周龄的雌性 BALB/c 裸鼠。小鼠饲养于标准独立通风笼中（每笼最多 4 只），光照/黑暗周期为 12 小时，环境条件受控（22.3 ± 2 °C，相对湿度 44-58%）。小鼠自由摄取标准饲料和水。分组采用分层随机抽样方法。所有实验程序均经当地动物福利机构批准并按照其规定进行。人卵巢癌细胞A2780（ECACC 93112519）（5 × 10⁷ 个细胞，溶于 100 μl PBS 和 Matrigel 混合液中）或结肠癌细胞DLD-1（5 × 10⁶ 个细胞，溶于 100 μl PBS 和 Matrigel 混合液中），均在体外细胞培养的指数生长期分离，于第0天皮下移植到每只雌性裸鼠体内。当平均肿瘤体积达到约0.1 cm³时，将小鼠分层（每组n = 8）。小鼠分别口服给予载体或100 mg/kg体重的LDC-203974/IMT1B。IMT1B/LDC-203974的载体为25% PEG400的30%羟丙基-β-环糊精水溶液。每周测量三次小鼠的体重和肿瘤体积。对于A2780异种移植瘤，若肿瘤体积进展至>1.5 cm³；若某组小鼠的平均肿瘤体积>1 cm³；或观察到溃疡，则处死该小鼠。对于DLD-1异种移植瘤，若肿瘤体积进展至3 cm³；若某组小鼠的平均肿瘤体积>2 cm³；或观察到溃疡，则处死该小鼠。研究结束后，对所有小鼠进行尸检并分离组织样本。 |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
毒性试验[1]
毒性试验、血液参数测定和药代动力学分析均在Synovo公司进行。小鼠（每笼4只）饲养于标准独立通风笼中，光照/黑暗周期为12小时，环境条件受控（22 ± 1 °C，相对湿度55–65%）。小鼠自由摄取标准饲料和水。 毒性试验和血液参数测定采用Janvier Labs公司提供的雌性NMRI小鼠。分组前，对小鼠进行称重，并根据随机区组设计进行分组，以确保各组的平均起始体重相近。小鼠每日一次接受赋形剂（25% PEG400溶于30%羟丙基-β-环糊精水溶液）或100 mg/kg体重的IMT1B/LDC-203974，持续四周，之后进行洗脱期。每日测量小鼠体重。分别于第0天和第28天采集血样进行分析。 为了建立合适的体内疗效研究给药方案，我们测定了雄性CD1小鼠单次静脉注射1 mg/kg和口服10 mg/kg剂量后，受试化合物的药代动力学特征。在24小时内采集血浆样本，并采用液相色谱-质谱联用（LC-MS）法分析受试化合物的浓度。为此，我们使用乙腈（ACN）通过蛋白沉淀法从血浆中提取受试化合物。使用配备Qtrap 5500质谱仪的Prominence UFLC系统对样品进行液相色谱-串联质谱分析。受试化合物在C18色谱柱上分离，流动相为含0.1%甲酸的乙腈-水混合物。在样品分析前，我们针对每种受试化合物优化了色谱条件和质谱仪参数。每种受试化合物的浓度均通过标准曲线计算得出。采用 PKSolver 插件（适用于 Microsoft Excel，版本 2.0）进行非房室模型分析，计算药代动力学参数。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
线粒体DNA (mtDNA) 表达的改变发生在衰老和多种人类疾病中（例如，先天性代谢缺陷、神经退行性疾病和癌症）。本文描述了首创的线粒体转录特异性抑制剂 (IMT)，其靶向人线粒体RNA聚合酶 (POLRMT)，POLRMT是氧化磷酸化 (OXPHOS) 系统生物合成所必需的。IMT在重组系统中能有效抑制mtDNA转录，并在细胞系中呈剂量依赖性地抑制mtDNA表达和OXPHOS。为了验证细胞靶点，我们对诱变细胞进行了外显子组测序，并鉴定出POLRMT中一组氨基酸替换，这些替换导致了IMT的耐药性。我们获得了POLRMT与IMT结合的冷冻电镜 (cryo-EM) 结构，进一步确定了POLRMT活性中心裂隙附近的变构结合位点。既往研究表明，癌细胞的生长和耐药性癌干细胞的持续存在依赖于氧化磷酸化（OXPHOS），因此我们研究了IMT是否具有抗肿瘤作用。小鼠口服IMT四周后耐受性良好，尽管在人癌细胞异种移植模型中诱导了强烈的抗肿瘤反应，但并未引起正常组织的氧化磷酸化功能障碍或毒性。总之，IMT为研究线粒体DNA（mtDNA）表达在生理和疾病中的作用提供了一种强效且特异的化学生物学工具。[1] 总之，IMT是首创的、强效且高度特异的POLRMT变构抑制剂，POLRMT是mtDNA转录所必需的。IMT在临床前小鼠模型中显示出治疗癌症的显著效果，并具有进一步开发用于人类癌症临床应用的潜力。此外，IMT 是一种有效的化学生物学工具，可用于在动物模型中以剂量依赖的方式操纵 mtDNA 转录（从而操纵 OXPHOS 能力），以评估 OXPHOS 下调如何影响与人类健康相关的各种生理和疾病过程。[1]
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| 分子式 |
C24H21CLFNO6
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|---|---|
| 分子量 |
473.878049612045
|
| 精确质量 |
473.104
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| 元素分析 |
C, 60.83; H, 4.47; Cl, 7.48; F, 4.01; N, 2.96; O, 20.26
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| CAS号 |
2304621-06-3
|
| PubChem CID |
138490769
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| LogP |
3.7
|
| tPSA |
93.1
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
7
|
| 可旋转键数目(RBC) |
5
|
| 重原子数目 |
33
|
| 分子复杂度/Complexity |
806
|
| 定义原子立体中心数目 |
2
|
| SMILES |
ClC1C=C(C=CC=1C1=CC(=O)OC2C=C(C=CC=21)O[C@H](C)C(N1CCC[C@H](C(=O)O)C1)=O)F
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| InChi Key |
PFEKWBKJUBCXDT-KGLIPLIRSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C24H21ClFNO6/c1-13(23(29)27-8-2-3-14(12-27)24(30)31)32-16-5-7-18-19(11-22(28)33-21(18)10-16)17-6-4-15(26)9-20(17)25/h4-7,9-11,13-14H,2-3,8,12H2,1H3,(H,30,31)/t13-,14+/m1/s1
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| 化学名 |
(S)-1-((R)-2-((4-(2-chloro-4-fluorophenyl)-2-oxo-2H-chromen-7-yl)oxy)propanoyl)piperidine-3-carboxylic acid
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| 别名 |
LDC 203974; IMT1B; LDC203974; IMT-1B; 2304621-06-3; LDC203974; (S)-1-((R)-2-((4-(2-Chloro-4-fluorophenyl)-2-oxo-2H-chromen-7-yl)oxy)propanoyl)piperidine-3-carboxylic acid; IMT1B(3-Piperidinecarboxylicacid,1-[(2R)-2-[[4-(2-chloro-4-fluorophenyl)-2-oxo-2H-1-benzopyran-7-yl]oxy]-1-oxopropyl]-,(3S)-;LDC203974); (3S)-1-[(2R)-2-[4-(2-chloro-4-fluorophenyl)-2-oxochromen-7-yl]oxypropanoyl]piperidine-3-carboxylic acid; CHEMBL5440629; SCHEMBL20839363; IMT-1B; LDC-203974
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~250 mg/mL (~527.56 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.39 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.39 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.1102 mL | 10.5512 mL | 21.1024 mL | |
| 5 mM | 0.4220 mL | 2.1102 mL | 4.2205 mL | |
| 10 mM | 0.2110 mL | 1.0551 mL | 2.1102 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
麦芽酚铁
1-Methyl-6-oxo-1,6-dihydropyridine-3-carboxylic acid
阿托伐他汀丙酮叔丁酯
7,4'-Dihydroxyflavone
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