| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
CDK9- Cyclin T1 (IC50 = 44 nM); cdk2-cyclin A (IC50 = 2441 nM); cdk1-cyclin B1 (IC50 = 5513 nM); cdk4-cyclin D1 (IC50 = 9242 nM); GSK3A (IC50 = 1460 nM); HGK/MAP4K4 (IC50 = 820 nM); ABL2/ARG (IC50 = 3640 nM)
Cyclin-dependent kinase 9 (CDK9) [1] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
LDC000067 降低 Ser2-P，诱导 p53 激活并导致 mESC 凋亡。此外，LDC067 还剂量依赖性地抑制细胞基因的 P-TEFb 依赖性 RNA 从头合成。激酶测定：LDC000067 对激酶的抑制是通过放射测定测定来测量的，该测定直接测量激酶对特定底物的催化活性。简而言之，将 10 μM LDC000067 或 DMSO 作为溶剂对照，添加到基础反应缓冲液（10 mM MgCl2、1 mM EDTA、20 mM HEPES pH 7.5、2 mM DTT、0.02 mg·mL-1 BSA、0.1 mM Na3VO4、0.02% Brij35，1% DMSO），含有单个激酶所需的辅因子和底物。将10 μCi的[γ-33P]-APP (10mCi·mL-1, 3000Ci·mmol-1, Perkin Elmer)添加到反应混合物中。并且这样的激酶反应在室温下孵育120min。在 P81 离子交换纸上发现反应，并且在辐射定量之前通常用 0.75% 磷酸洗涤过滤器。每种蛋白激酶均进行两次测量，其催化活性表示为残留激酶活性，这显示了与溶剂对照反应相比平均底物磷酸化的百分比。细胞检测：LDC000067 抑制 CDK9，IC50 值为 44(10 nM)，其对 CDK9 的选择性是其他 CDK 的 55 倍至 230 倍以上，特别是在 ATP 竞争性激酶结合检测中具有更高的选择性。此外，LDC000067 在整个细胞中的作用包括诱导肿瘤抑制蛋白 p53 和细胞凋亡。此外，用 LDC000067 处理的细胞的基因表达谱表明选择性减少短寿命 mRNA，这些 mRNA 编码增殖和细胞凋亡的调节因子，例如 MCL1 和我的C。
LDC000067 对CDK9的选择性高于已知抑制剂flavopiridol和DRB，对其他CDK家族成员的作用较弱 [1] - LDC000067 以ATP竞争性和剂量依赖性方式抑制体外转录过程 [1] - 基因表达谱分析显示，LDC000067 可选择性降低短寿命mRNA的水平，这些mRNA包括增殖和凋亡过程中的关键调节因子 [1] - LDC000067 能增强RNA聚合酶II在基因上的暂停现象，这是CDK9抑制的特征性效应 [1] - 经24小时处理后，LDC000067 可诱导多种癌细胞系及急性髓系白血病（AML）患者来源的原始细胞凋亡，凋亡情况通过膜联蛋白V-碘化丙啶双染色流式细胞术检测 [1] - Western blot分析显示，LDC000067 处理可降低小鼠胚胎干细胞（mESCs）和HeLa细胞中RNA聚合酶II（RNAPII）的整体Ser2-P水平，结果以RNAPII或内参蛋白（THAP1、TBP）进行归一化定量 [1] - RT-qPCR分析表明，LDC000067 以浓度依赖性方式抑制新生RNA合成，在A549细胞、mESCs和THP1细胞中通过外显子-内含子引物验证了这一效应 [1] - 在稳定转染的HeLa细胞中，LDC000067 可降低强力霉素诱导的荧光素酶报告基因转录本水平，该结果经RT-qPCR和荧光素酶活性测定确认 [1] - 染色质免疫沉淀（ChIP）分析显示，LDC000067 可增加HeLa细胞中MYC基因上RNA聚合酶II的暂停，同时改变RNA聚合酶II及其磷酸化形式（Ser2-P、Ser5-P、Ser7-P）的分布 [1] |
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| 酶活实验 |
LANCE Ultra KinaSelect Ser/Thr 试剂盒使用荧光共振能量转移 (FRET) 计算 IC50 值，用于测量不同 CDK 抑制剂的有效性。总之，CDK-细胞周期蛋白对在含有 ATP 的缓冲液中磷酸化特定的 ULight MBP 肽底物（最终浓度为 50 nM），浓度为每个单独激酶的 Km 值 (50 mM HEPES) -KOH pH 7.5、10 mM MgCl2、1 mM EGTA 和 2 mM 二硫苏糖醇）在室温下放置一小时。然后通过添加用 Eu 标记的特定抗磷酸化抗体 (2 nM) 来鉴定磷酸化；这些抗体与磷酸肽结合并产生 FRET 信号。之后，记录 FRET 信号[1]。
采用放射学体外激酶测定法评估 LDC000067 对激酶催化活性的抑制作用。实验使用10μM LDC000067，以二甲基亚砜（DMSO）作为对照，测定剩余底物磷酸化的百分比。每个激酶进行两次重复测定，结果以平均值和范围表示 [1] - 以GST-CTD为底物进行激酶测定，在HeLa细胞核提取物中加入10μM LDC000067 处理30分钟后，检测GST-CTD的Ser2-P水平，并以微管蛋白（Tubulin）信号作为内参进行归一化定量 [1] |
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| 细胞实验 |
具体而言，LDC000067 对 CDK9 的选择性比其他 CDK 高 55 倍至 230 倍以上，IC50 值为 44 (10 nM)。其 ATP 竞争性激酶结合测定进一步证明了这种选择性。细胞凋亡和肿瘤抑制蛋白 p53 是 LDC000067 对整个细胞的另外两个作用。此外，用 LDC000067 处理的细胞的基因表达谱揭示了短寿命 mRNA 的选择性减少，例如编码增殖和凋亡调节因子的 MCL1 和 MYC。
Western blot分析：mESCs用10μM LDC000067 处理90或180分钟（以DMSO和1μM flavopiridol为对照），通过ImageJ定量整体Ser2-P水平，以RNAPII信号归一化；HeLa细胞处理60分钟，以THAP1作为内参；MCF7细胞用不同浓度 LDC000067 处理4小时，以TBP作为内参 [1] - 新生转录RT-qPCR分析：A549细胞用1/2/4/6/10μM LDC000067 处理90分钟，mESCs用2.5/5/10/20/40μM 处理90分钟，采用外显子-内含子（e-i）引物分析目标基因；mESCs额外使用外显子-外显子（e-e）引物验证；稳定转染的HeLa细胞用10μM LDC000067 或DMSO处理30分钟后，加入1μg·mL⁻¹ 强力霉素处理60分钟，分析荧光素酶报告基因转录本 [1] - 荧光素酶测定：强力霉素诱导的HeLa报告细胞用不同浓度 LDC000067 处理指定时间后，检测荧光素酶活性 [1] - 凋亡测定：多种癌细胞系和AML患者来源的原始细胞用 LDC000067 处理24小时，通过膜联蛋白V-碘化丙啶双染色流式细胞术检测凋亡；细胞系采用3个生物学重复，AML原始细胞采用3个技术重复 [1] - ChIP测定：HeLa细胞用10μM LDC000067 或DMSO处理1小时，使用针对MYC基因不同区域的qPCR扩增子，测定RNA聚合酶II、Ser2-P、Ser5-P和Ser7-P的分布 [1] - 微阵列分析：THP1细胞经 LDC000067 处理后，对差异表达基因进行统计分析；对下调mRNA进行基因本体（GO）分析，并通过RT-qPCR验证选定基因的未剪接新生转录本 [1] |
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| 动物实验 |
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| 参考文献 | |||
| 其他信息 |
LDC000067 is a novel, highly specific CDK9 inhibitor designed to address the limitations of existing CDK9 inhibitors (low specificity and/or narrow therapeutic window) [1]. This study provides a framework for understanding the cellular mechanisms of CDK9 inhibition mediated by LDC000067 [1]. LDC000067 is a promising lead compound for the development of highly specific CDK9 inhibitors with clinical applications [1].
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| 分子式 |
C18H18N4O3S
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|---|---|---|
| 分子量 |
370.43
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| 精确质量 |
370.109
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| 元素分析 |
C, 58.36; H, 4.90; N, 15.13; O, 12.96; S, 8.65
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| CAS号 |
1073485-20-7
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| 相关CAS号 |
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| PubChem CID |
25104564
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 密度 |
1.4±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
604.1±65.0 °C at 760 mmHg
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| 闪点 |
319.2±34.3 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±1.7 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.646
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| LogP |
2.11
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| tPSA |
115.58
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
7
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| 可旋转键数目(RBC) |
6
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| 重原子数目 |
26
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| 分子复杂度/Complexity |
539
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
S(C([H])([H])C1C([H])=C([H])C([H])=C(C=1[H])N([H])C1C([H])=C(C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C2OC([H])([H])[H])N=C([H])N=1)(N([H])[H])(=O)=O
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| InChi Key |
GGQCIOOSELPMBB-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C18H18N4O3S/c1-25-17-8-3-2-7-15(17)16-10-18(21-12-20-16)22-14-6-4-5-13(9-14)11-26(19,23)24/h2-10,12H,11H2,1H3,(H2,19,23,24)(H,20,21,22)
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| 化学名 |
[3-[[6-(2-methoxyphenyl)pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]methanesulfonamide
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.75 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.75 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.75 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.6996 mL | 13.4978 mL | 26.9957 mL | |
| 5 mM | 0.5399 mL | 2.6996 mL | 5.3991 mL | |
| 10 mM | 0.2700 mL | 1.3498 mL | 2.6996 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
 Inhibition ofin vitrotranscription by LDC067.Br J Pharmacol.2014 Jan;171(1):55-68. |
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Microarray analysis of THP1 cells treated with LDC067.Br J Pharmacol.2014 Jan;171(1):55-68. |
Increase of RNAPII pausing atMYCin the presence of LDC067. |
M1-20
CDK12-Cyclin K Ligand-Linker Conjugates 1
CGP-74514 dihydrochloride
(S)-CDK2 degrader 6
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