| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 1mg |
|
||
| 2mg |
|
||
| 5mg |
|
||
| 10mg |
|
||
| 25mg |
|
||
| 50mg |
|
||
| 100mg |
|
| 靶点 |
LRRK2-mediated Rab10 and Rab12 phosphorylation
Dipeptidyl peptidase I (DPPI, also known as cathepsin C). [2] LLOMe selectively eliminates lymphocytes with cytotoxic potential. Its mechanism of action involves selective permeabilization of lysosomal membranes, leading to cell death. It is generated by human monocytes or polymorphonuclear leukocytes and targets cells with cytotoxic potential. |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
在 MEF 和 A549 细胞中，LRRK2 介导的 Rab10 和 Rab12 磷酸化可被 L-亮氨酰-L-亮氨酸甲酯氢溴酸盐 (1 mM; 0.5-2 h) 增强 [3]。CD4 淋巴细胞可将 L-亮氨酰-L-亮氨酸甲酯氢溴酸盐 (10-250 μM; 15 分钟) 水解为不溶性 CCl3COOH 产物 [2]。将人外周血淋巴细胞在 22°C 下暴露于 L-亮氨酰-L-亮氨酸甲酯 (250 µM) 15 分钟，然后在 37°C 下培养 18 小时，导致所有 CD16+ NK 细胞和大部分 CD8+ T 细胞丢失，同时 CD4+ T 细胞相应富集；所有NK细胞功能（针对K562靶细胞）和生成同种异体特异性细胞毒性T淋巴细胞的能力均被消除[2]。
在37°C下用10 µM Gly-Phe-CHN2（特异性DPPI抑制剂）预孵育1小时可阻止L-亮氨酰-L-亮氨酸甲酯诱导的CD16+和CD8+细胞耗竭，并保留NK和CTL功能[2]。 用100-250 µM L-亮氨酰-L-亮氨酸甲酯孵育富含T8/NK细胞的淋巴细胞可产生CCl3COOH不溶性代谢物（结构为(Leu-Leu)n-OMe，n≥3的聚合物，例如Leu4-OMe、Leu6-OMe、Leu6），而10 µM则不会产生此类代谢物[2]。 Leu6-OMe（而非 Leu2-OMe、Leu4-OMe 或非酯化肽）可显著溶解人红细胞；外源性 DPPI 联合 ≥250 µM L-亮氨酰-L-亮氨酸甲酯 (LLOMe) 也可诱导红细胞溶解，而单独使用 DPPI 或药物则无此作用 [2]。环己酰亚胺不抑制 CCl3COOH 不溶性产物的生成；碘乙酰胺和 Gly-Phe-CHN2 可阻断该生成；NH4Cl 则可增加不溶性产物的量 [2]。体外实验表明，L-亮氨酰-L-亮氨酸甲酯 (LLOMe) 氢溴酸盐是一种溶酶体亲和剂，可选择性地清除具有细胞毒性潜能的淋巴细胞。它在生物学研究中用于选择性地增加溶酶体膜的通透性。其活性归因于其能够在溶酶体中积累并破坏溶酶体膜。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在小鼠骨髓移植模型中，即使跨越多个MHC和非MHC屏障，供体细胞与250 µM L-亮氨酰-L-亮氨酸甲酯（LLOMe）在22°C下孵育15分钟后洗涤，也能有效抑制体内供体抗宿主CTL的产生和致命的移植物抗宿主病，同时促进快速植入并建立长寿命的免疫活性嵌合体[2]。
所提供的资料中并未详细列出LLOMe的具体体内活性数据。作为一种溶酶体靶向剂，其体内作用可能与其选择性靶向和清除特定细胞群的能力有关。LLOMe主要用于溶酶体功能和免疫细胞生物学的研究应用。 |
| 酶活实验 |
增强LRRK2蛋白激酶活性的突变会导致遗传性帕金森病。LRRK2能够磷酸化一组Rab GTP酶蛋白，包括Rab10和Rab12，这些蛋白位于效应子结合开关II基序内。先前的研究表明，编码Rab29的基因所在的PARK16基因座与帕金森病相关，并且Rab29与LRRK2在同一通路中发挥作用。Rab29和LRRK2的共表达通过将LRRK2募集到反式高尔基网络表面来刺激LRRK2的活性。本文报道，基于对野生型LRRK2、LRRK2[R1441C]或VPS35[D620N]敲入小鼠组织和原代细胞系（包括脑提取物和胚胎成纤维细胞）中Rab10和Rab12磷酸化的评估，Rab29敲除并不影响内源性LRRK2活性。我们发现，在脑提取物中，LRRK2抑制剂和致病突变对Rab12磷酸化的影响比对Rab10磷酸化的影响更为显著。在小鼠模型中转基因过表达Rab29也不足以刺激基础LRRK2活性。我们观察到，内溶酶体系统应激剂（尼日利亚菌素、莫能菌素、氯喹和LLOMe）诱导的Rab10和Rab12磷酸化可被LRRK2抑制剂抑制，但在Rab29缺陷细胞中则不被阻断。在所测试的试剂中，尼日利亚菌素诱导的Rab10和Rab12磷酸化水平升高幅度最大（5至9倍）。我们的研究结果表明，基础状态、致病状态以及尼日利亚菌素和莫能菌素刺激的LRRK2通路活性均不受Rab29调控。需要进一步研究以确定 LRRK2 活性如何调控，以及其他 Rab 蛋白是否可以通过将其靶向不同膜来控制 LRRK2[3]。
在 pH 5.0 的 0.05 M 乙酸钠缓冲液中，使用 Gly-Phe-β-萘酰胺作为底物，通过荧光法测定 DPPI 活性，缓冲液中含有 10 mM 半胱氨酸、30 mM NaCl 和 1 mM EDTA [2]。 在 pH 6.3 的磷酸盐缓冲液中，使用 (Z)-Arg-Arg-β-萘酰胺作为底物，测定组织蛋白酶 B 活性，缓冲液中含有 1 mM EDTA 和 10 mM 半胱氨酸 [2]。 使用 Gly-Phe-CHN2 评估 DPPI 的抑制情况；用 1-100 µM Gly-Phe-CHN2 预孵育细胞 60 分钟，可抑制细胞内 DPPI 活性 95% 以上，而对组织蛋白酶 B 活性无显著影响 [2]。 LLOMe 的体外实验方案通常包括用不同浓度的化合物处理细胞群，例如淋巴细胞。然后评估其对细胞活力、溶酶体膜完整性以及特定细胞亚群选择性清除的影响。该化合物溶解于合适的溶剂中，并添加到细胞培养基中。 |
| 细胞实验 |
L-亮氨酰-L-亮氨酸甲酯（Leu-Leu-OMe）是由人单核细胞（Mφ）或多形核白细胞产生的L-亮氨酸甲酯的二肽缩合产物，能够消除混合淋巴细胞群中所有自然杀伤细胞（NK细胞）的功能。本研究探讨了Leu-Leu-OMe作用的特异性。结果发现，多种非淋巴来源的组织培养细胞和肿瘤细胞系对任何可观察到的Leu-Leu-OMe介导的毒性均完全耐受。此外，红白血病细胞系K562、T细胞系Molt-4、B细胞系HS-Sultan和Daudi以及EBV转化的B细胞系均未受到完全消除NK细胞的Leu-Leu-OMe浓度的影响。同样，绝大多数OKT4+淋巴细胞在暴露于Leu-Leu-OMe后未表现出明显的毒性。此外，它们仍保留了对同种异体细胞正常增殖的能力，以及辅助免疫球蛋白分泌细胞（ISC）生成的能力。然而，Leu-Leu-OMe导致混合淋巴细胞群中OKT8+细胞部分耗竭。暴露于Leu-Leu-OMe后，剩余的OKT8+细胞仍能在混合淋巴细胞培养物中增殖，但这些细胞对ISC生成的抑制作用消失。此外，低浓度Leu-Leu-OMe暴露还能消除混合淋巴细胞培养物中产生的细胞毒性T淋巴细胞（CTL）的前体和活化效应细胞以及活化的NK样细胞活性。事实上，Leu-Leu-OMe能够消除OKT4+和OKT8+ CTL。此外，外周血巨噬细胞（Mφ）和具有许多巨噬细胞样特征的人类细胞系U937细胞均对Leu-Leu-OMe介导的毒性敏感，但其有效浓度仅为完全清除NK细胞所需浓度的2至5倍。这些发现表明，Leu-Leu-OMe对NK细胞、CTL和巨噬细胞具有选择性毒性，而对其他多种淋巴或非淋巴细胞类型无不良影响[1]。
未提供详细的细胞检测方案（例如，细胞活力、Western blot、PCR）。以下摘要摘自正文：NK细胞毒性采用针对K562靶细胞的4小时51Cr释放试验；计算了特异性细胞毒性百分比和溶解单位[2]。 对于同种异体特异性CTL活性，将淋巴细胞与经辐照的同种异体刺激细胞共培养6天，然后在4小时的51Cr释放试验中进行检测[2]。 为了测量摄取和代谢，将PBS中的T8/NK富集淋巴细胞（2.5×10^6个细胞/mL）与[3H]L-亮氨酰-L-亮氨酸甲酯和未标记药物在22°C下孵育15分钟，然后通过硅油离心或洗涤并在含有0.5%牛血清白蛋白的RPMI 1640培养基中于37°C培养。加入等体积的20% CCl3COOH溶液，离心，洗涤沉淀，真空干燥，重悬于无水甲醇中，并用氯仿/甲醇/乙酸/丁醇（36:1:8:4）展开剂在硅胶上进行二维薄层色谱分析[2]。 基于细胞的LLOMe制备方法包括用该化合物处理细胞悬液。例如，可以使用人单核细胞或多形核白细胞来生成LLOMe，LLOMe可选择性地清除具有细胞毒性的淋巴细胞。然后评估其对细胞活力和功能的影响。 |
| 动物实验 |
将供体骨髓或脾细胞与 250 µM L-亮氨酰-L-亮氨酸甲酯 (LLOMe) 在 22°C 下孵育 15 分钟，洗涤后移植到经照射的受体小鼠体内，移植过程可跨越多个 MHC 和非 MHC 组织相容性屏障。未提供其他体内给药或制剂细节 [2]。
LLOMe 的体内动物研究并非标准流程，因为它主要是一种体外研究工具。如果用于体内研究，其目的是研究其对免疫系统的影响，特别是其清除特定淋巴细胞群的能力。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
LLOMe氢溴酸盐的分子量为339.27 g/mol，分子式为C13H27BrN2O3，CAS号为16689-14-8。它通常以粉末形式储存在-20°C。它可溶于水和其他极性溶剂。
|
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
L-亮氨酰-L-亮氨酸甲酯对细胞毒性淋巴细胞（NK细胞、CD8+ T细胞、CD4+同种异体特异性CTL）和髓系细胞（单核细胞、多形核白细胞、髓系肿瘤细胞系）具有毒性，而辅助性T细胞、B细胞和非骨髓来源的细胞系（例如内皮细胞、成纤维细胞、肾癌细胞）则完全耐受[2]。
毒性呈浓度依赖性：暴露于10-20 µM浓度下不会引起不良反应，而100-250 µM浓度则会完全抑制NK细胞和CTL的功能[2]。 人红细胞（缺乏可检测的DPPI）不会被单独的L-亮氨酰-L-亮氨酸甲酯裂解，但会被DPPI催化的聚合产物裂解。可使用 Leu6-OMe 或外源性 DPPI 与 L-亮氨酰-L-亮氨酸甲酯 (L-leucyl-L-leucine methyl ester) 的组合 [2]。 关于 LLOMe 氢溴酸盐的毒理学数据报道不多。作为一种溶酶体靶向剂，它在高浓度下可能对细胞有毒性。应遵循标准的实验室安全预防措施。它不适用于人类治疗用途。 |
| 参考文献 |
[1]. The immunosuppressive activity of L-leucyl-L-leucine methyl ester: selective ablation of cytotoxic lymphocytes and monocytes. J Immunol. 1986 Feb 1;136(3):1038-48.
[2]. Mechanism of L-leucyl-L-leucine methyl ester-mediated killing of cytotoxic lymphocytes: dependence on a lysosomal thiol protease, dipeptidyl peptidase I, that is enriched in these cells. Proc Natl Acad Sci U S A. 1990 Jan;87(1):83-7. [3]. Endogenous Rab29 does not impact basal or stimulated LRRK2 pathway activity. Biochem J. 2020 Nov 27;477(22):4397-4423. |
| 其他信息 |
人淋巴细胞暴露于L-亮氨酰-L-亮氨酸甲酯（Leu-Leu-OMe）会导致细胞毒性淋巴细胞选择性死亡，而辅助性T细胞和B细胞仍保持功能。在毒性浓度的Leu-Leu-OMe中孵育的细胞毒性淋巴细胞被发现含有膜溶解代谢物，其结构为(Leu-Leu)n-OMe，其中n≥3。细胞毒性淋巴细胞对Leu-Leu-OMe的敏感性取决于溶酶体硫醇蛋白酶——二肽基肽酶I产生的这些代谢物。细胞毒性淋巴细胞中二肽基肽酶I的含量远高于不具有细胞溶解潜能的细胞或非髓系来源的细胞。因此，这种颗粒酶对于 Leu-Leu-OMe 的独特作用至关重要，并可能为开发旨在消除细胞毒性淋巴细胞反应的其他免疫疗法提供靶点。[2]
L-亮氨酰-L-亮氨酸甲酯 作为一种前药，可通过 DPPI（组织蛋白酶 C）的酰基转移酶活性转化为具有类似去垢剂的膜溶解特性的 (Leu-Leu)n-OMe 聚合物 (n≥3)。这种转化发生在细胞毒性淋巴细胞的溶酶体颗粒内，这些细胞中DPPI的含量比耐受细胞类型高10到20倍（例如，CD16+ NK细胞：2.54 mM底物裂解/µg蛋白/小时；CD4+ T细胞：0.19；CD19+ B细胞：0.13；CD8+ T细胞：0.62）[2]。 选择性毒性归因于细胞溶解细胞中高含量的DPPI；其他特性，例如酸化能力或其他蛋白酶的存在，也可能有所贡献[2]。 该药物已被用于体外消除细胞毒性淋巴细胞反应，并用于预防小鼠骨髓移植模型中的移植物抗宿主病[2]。 LLOMe氢溴酸盐的CAS号为16689-14-8。它是一种溶酶体靶向二肽甲酯，用于选择性地增加溶酶体膜的通透性，从而清除具有细胞毒性潜能的淋巴细胞。它是一种研究性化合物，尚未获批用于任何治疗用途。 |
| 分子式 |
C13H26N2O3.HBR
|
|---|---|
| 分子量 |
339.26908
|
| 精确质量 |
338.121
|
| CAS号 |
16689-14-8
|
| 相关CAS号 |
6491-83-4 (HCl)
|
| PubChem CID |
73553531
|
| 序列 |
H-Leu-Leu-OMe.HBr ;L-leucyl-L-leucine methyl ester hydrobromide
|
| 短序列 |
LL
|
| 外观&性状 |
Typically exists as white to off-white solids at room temperature
|
| LogP |
3.113
|
| tPSA |
81.42
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
3
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
4
|
| 可旋转键数目(RBC) |
8
|
| 重原子数目 |
19
|
| 分子复杂度/Complexity |
277
|
| 定义原子立体中心数目 |
2
|
| SMILES |
CC(C[C@H](N)C(N[C@H](C(OC)=O)CC(C)C)=O)C.Br
|
| InChi Key |
QIPBCIHWFATZOF-ACMTZBLWSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C13H26N2O3.BrH/c1-8(2)6-10(14)12(16)15-11(7-9(3)4)13(17)18-5;/h8-11H,6-7,14H2,1-5H3,(H,15,16);1H/t10-,11-;/m0./s1
|
| 化学名 |
methyl (2S)-2-[[(2S)-2-amino-4-methylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoate;hydrobromide
|
| 别名 |
LLOMe hydrobromide; Leu-Leu methyl ester hydrobromide; 16689-14-8; Leu-Leu methyl ester hydrobromide; Leu-Leu-ome HBr; Leu-Leu-ome hydrobromide; 48TF27RT8L; L-Leucine, L-leucyl-, methyl ester, monohydrobromide; Methyl leucylleucinate hydrobromide; L-Leucyl-L-Leucine methyl ester (hydrobromide); H-Leu-Leu-OMe hydrobromide
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~125 mg/mL (~368.44 mM)
H2O : ~100 mg/mL (~294.75 mM) |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.13 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.13 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.13 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 配方 4 中的溶解度: 100 mg/mL (294.75 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶. 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.9475 mL | 14.7375 mL | 29.4750 mL | |
| 5 mM | 0.5895 mL | 2.9475 mL | 5.8950 mL | |
| 10 mM | 0.2948 mL | 1.4738 mL | 2.9475 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
COA
粤公网安备 44011102003439号
463611831
