| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 100mg |
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| 500mg |
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| 1g |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
LRRK2-mediated Rab10 and Rab12 phosphorylation
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| 体外研究 (In Vitro) |
在 MEF 和 A549 细胞中，L-亮氨酰-L-亮氨酸甲酯（1 mM；0.5-2 h）可增强 LRRK2 介导的 Rab10 和 Rab12 磷酸化[3]。 CD4 淋巴细胞将 L-亮氨酰-L-亮氨酸甲酯（10-250 μM；15 分钟）转化为不溶性 CCI3COOH 产物[2]。
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| 酶活实验 |
增强LRRK2蛋白激酶活性的突变会导致遗传性帕金森病。LRRK2磷酸化效应结合开关II基序内的一组Rab-GTPase蛋白，包括Rab10和Rab12。先前的研究表明，携带Rab29编码基因的PARK16基因座与帕金森氏症有关，并且Rab29与LRRK2在一个共同的途径中运作。Rab29和LRRK2的共表达通过将LRRK2募集到反式高尔基体网络的表面来刺激LRRK2活性。在此，我们报道，基于对野生型LRRK2、LRRK2[R1441C]或VPS35[D620N]敲除小鼠组织和原代细胞系（包括脑提取物和胚胎成纤维细胞）中Rab10和Rab12磷酸化的评估，敲除Rab29不会影响内源性LRRK2活动。我们发现，在脑提取物中，Rab12磷酸化受到LRRK2抑制剂和致病突变的影响比Rab10磷酸化更大。小鼠模型中Rab29的转基因过表达也不足以刺激基础LRRK2活性。我们观察到，LRRK2抑制剂抑制了由应激内溶酶体系统的药物（尼格菌素、莫能菌素、氯喹和LLOMe）诱导的Rab10和Rab12磷酸化的刺激，但在Rab29缺陷细胞中没有阻断。从所测试的制剂中，尼格瑞辛诱导Rab10和Rab12磷酸化的最大增加（5至9倍）。我们的研究结果表明，Rab29不控制基础的、致病的以及奈格菌素和莫能菌素刺激的LRRK2通路活性。需要进一步的工作来确定LRRK2活性是如何调节的，以及其他Rab蛋白是否可以通过靶向不同的膜来控制LRRK2[3]。
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| 细胞实验 |
L-亮氨酸甲酯（Leu-Leu-OMe）是由人类单核细胞（M phi）或多形核白细胞产生的L-亮氨酸甲酯的二肽缩合产物，可消除混合淋巴细胞群中的所有自然杀伤细胞（NK）功能。在本研究中，检测了Leu-Leu-OMe作用的特异性。研究发现，各种非淋巴细胞来源的组织培养细胞和肿瘤系对任何明显的Leu-Leu-OMe介导的毒性都具有完全抗性。此外，红白血病系K562、T细胞系Molt-4、B细胞系HS Sultan和Daudi以及EBV转化的B细胞系不受完全消除NK细胞的该化合物浓度的影响。类似地，绝大多数OKT4+淋巴细胞在暴露于Leu-Leu-OMe后没有表现出显著的毒性。此外，它们保留了对异基因细胞正常增殖的能力，以及为免疫球蛋白分泌细胞（ISC）的产生提供帮助的能力。然而，Leu-Leu-OMe导致混合淋巴细胞群体中OKT8+细胞的部分耗竭。在这样的暴露之后，剩余的OKT8+细胞仍然能够在混合淋巴细胞培养物中增殖，但这些细胞对ISC生成的抑制作用被消除。此外，在混合淋巴细胞培养物中产生的细胞毒性T淋巴细胞（CTL）的前体和活化效应物以及活化的NK样活性都通过暴露于低浓度的Leu-Leu-OMe而被消除。事实上，OKT4+和OKT8+CTL都被Leu-Leu-OMe消除。此外，外周血M phi和U937细胞（一种具有许多M phi样特征的人类细胞系）都对Leu-Leu-OMe介导的毒性敏感，尽管其浓度仅比完全消除NK细胞的浓度高出两到五倍。这些发现表明，Leu-Leu-OMe对NK细胞、CTL和M phi具有选择性毒性，对多种其他淋巴或非淋巴细胞类型没有不良影响[1]。
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| 参考文献 |
[1]. The immunosuppressive activity of L-leucyl-L-leucine methyl ester: selective ablation of cytotoxic lymphocytes and monocytes. J Immunol. 1986 Feb 1;136(3):1038-48.
[2]. Mechanism of L-leucyl-L-leucine methyl ester-mediated killing of cytotoxic lymphocytes: dependence on a lysosomal thiol protease, dipeptidyl peptidase I, that is enriched in these cells. Proc Natl Acad Sci U S A. 1990 Jan;87(1):83-7. [3]. Endogenous Rab29 does not impact basal or stimulated LRRK2 pathway activity. Biochem J. 2020 Nov 27;477(22):4397-4423. |
| 其他信息 |
小鼠或人淋巴细胞暴露于L-亮氨酰-L-亮氨酸甲酯（Leu-Leu-OMe）会导致细胞毒性淋巴细胞的选择性死亡，而辅助性T细胞和B细胞的功能则保持完整。在毒性浓度的Leu-Leu-OMe存在下孵育的细胞毒性淋巴细胞被发现含有结构为(Leu-Leu)n-OMe的膜溶解代谢物，其中n≥3。细胞毒性淋巴细胞对Leu-Leu-OMe的敏感性取决于溶酶体硫醇蛋白酶——二肽基肽酶I——产生的这些代谢物。二肽基肽酶I在细胞毒性淋巴细胞中的含量远高于不具有细胞溶解潜能或非骨髓来源的细胞。因此，这种颗粒酶是 Leu-Leu-OMe 发挥独特作用所必需的，并且可能为开发其他旨在消除细胞毒性淋巴细胞反应的免疫治疗药物提供靶点。[2]
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| 分子式 |
C13H27CLN2O3
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|---|---|
| 分子量 |
294.818083047867
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| 精确质量 |
294.171
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| 元素分析 |
C, 52.96; H, 9.23; Cl, 12.02; N, 9.50; O, 16.28
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| CAS号 |
6491-83-4
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| 相关CAS号 |
16689-14-8 (HBr)
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| PubChem CID |
15598024
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| 序列 |
H-Leu-Leu-OMe.HCl; L-leucyl-L-leucine methyl ester hydrochloride
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| 短序列 |
LL
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| 外观&性状 |
Typically exists as white to off-white solids at room temperature
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| 熔点 |
171-181 °C
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| LogP |
2.956
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| tPSA |
81.42
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| 氢键供体(HBD)数目 |
3
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| 氢键受体(HBA)数目 |
4
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| 可旋转键数目(RBC) |
8
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| 重原子数目 |
19
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| 分子复杂度/Complexity |
277
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| 定义原子立体中心数目 |
2
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| SMILES |
Cl.O=C([C@H](CC(C)C)N)N[C@H](C(=O)OC)CC(C)C
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| InChi Key |
RVXQFTNCULOWRV-ACMTZBLWSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C13H26N2O3.ClH/c1-8(2)6-10(14)12(16)15-11(7-9(3)4)13(17)18-5;/h8-11H,6-7,14H2,1-5H3,(H,15,16);1H/t10-,11-;/m0./s1
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| 化学名 |
methyl (2S)-2-[[(2S)-2-amino-4-methylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoate;hydrochloride
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| 别名 |
6491-83-4; H-LEU-LEU-OME HCL; Leu-Leu-ome HCl; H-Leu-leu-OMe hydrochloride; Leu-Leu-ome hydrochloride; Methyl leucylleucinate HCl; L-Leucyl-L-Leucine methyl ester (hydrochloride); 76R0TP2LNW; 76R0TP2LNW; Methyl leucylleucinate hydrochloride; UNII-76R0TP2LNW; L-Leucine, L-leucyl-, methyl ester, hydrochloride (1:1); ...; 6491-83-4;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~250 mg/mL (~847.98 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (7.06 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (7.06 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (7.06 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.3919 mL | 16.9595 mL | 33.9190 mL | |
| 5 mM | 0.6784 mL | 3.3919 mL | 6.7838 mL | |
| 10 mM | 0.3392 mL | 1.6960 mL | 3.3919 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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