| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 100mg |
|
||
| 500mg |
|
||
| 1g |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
LRRK2-mediated Rab10 and Rab12 phosphorylation
Methyl leucylleucinate HCl targets lymphocytes with cytotoxic potential, selectively eliminating them. Its mechanism involves inducing lysosomal pathway stress. It enhances LRRK2-mediated Rab10 and Rab12 phosphorylation, which is involved in Parkinson's disease research. In MEFs and A549 cells, LRRK2-mediated Rab10 and Rab12 phosphorylation is enhanced by this compound. |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
在MEF和A549细胞中，L-亮氨酰-L-亮氨酸甲酯（1 mM；0.5-2 h）可增强LRRK2介导的Rab10和Rab12磷酸化[3]。CD4+淋巴细胞可将L-亮氨酰-L-亮氨酸甲酯（10-250 μM；15 min）转化为不溶性CCI3COOH产物[2]。
体外实验中，甲基亮氨酰亮氨酸盐酸盐（MLLH）可用于研究溶酶体途径及其对免疫细胞的影响。在1 mM浓度下，MLLH可增强MEF和A549细胞中LRRK2介导的Rab10和Rab12磷酸化。CD4+淋巴细胞可将MLLH转化为不溶性产物。其对细胞活力和免疫功能的影响可通过基于细胞的实验进行测定。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
甲基亮氨酰亮氨酸盐酸盐不用于体内治疗，而是作为一种研究溶酶体功能和免疫细胞生物学的工具。体外研究已证实其对具有细胞毒性潜能的淋巴细胞具有选择性。它能诱导溶酶体通路应激，这与帕金森病的研究相关。
|
| 酶活实验 |
增强LRRK2蛋白激酶活性的突变会导致遗传性帕金森病。LRRK2能够磷酸化一组Rab GTP酶蛋白，包括Rab10和Rab12，这些蛋白位于效应子结合开关II基序内。先前的研究表明，编码Rab29的基因所在的PARK16基因座与帕金森病相关，并且Rab29与LRRK2在同一通路中发挥作用。Rab29和LRRK2的共表达通过将LRRK2募集到反式高尔基网络表面来刺激LRRK2的活性。本文报道，基于对野生型LRRK2、LRRK2[R1441C]或VPS35[D620N]敲入小鼠组织和原代细胞系（包括脑提取物和胚胎成纤维细胞）中Rab10和Rab12磷酸化的评估，Rab29敲除并不影响内源性LRRK2活性。我们发现，在脑提取物中，LRRK2抑制剂和致病突变对Rab12磷酸化的影响比对Rab10磷酸化的影响更为显著。在小鼠模型中转基因过表达Rab29也不足以刺激基础LRRK2活性。我们观察到，内溶酶体系统应激剂（尼日利亚菌素、莫能菌素、氯喹和LLOMe）诱导的Rab10和Rab12磷酸化可被LRRK2抑制剂抑制，但在Rab29缺陷细胞中则不被阻断。在所测试的试剂中，尼日利亚菌素诱导的Rab10和Rab12磷酸化水平升高幅度最大（5至9倍）。我们的研究结果表明，基础状态、致病状态以及尼日利亚菌素和莫能菌素刺激的LRRK2通路活性均不受Rab29调控。需要进一步研究以确定LRRK2活性的调控机制，以及其他Rab蛋白是否可以通过将LRRK2靶向不同膜来调控LRRK2[3]。
甲基亮氨酰亮氨酸盐酸盐的体外活性可以通过基于细胞的检测方法进行评估。例如，可以通过在MEF和A549细胞中进行Western blot检测其增强LRRK2介导的Rab10和Rab12磷酸化的能力。CD4+淋巴细胞对其的转化可以通过不溶性产物的形成来检测。 |
| 细胞实验 |
L-亮氨酰-L-亮氨酸甲酯（Leu-Leu-OMe）是由人单核细胞（Mφ）或多形核白细胞产生的L-亮氨酸甲酯的二肽缩合产物，能够消除混合淋巴细胞群中所有自然杀伤细胞（NK细胞）的功能。本研究探讨了Leu-Leu-OMe作用的特异性。结果发现，多种非淋巴来源的组织培养细胞和肿瘤细胞系对任何可观察到的Leu-Leu-OMe介导的毒性均完全耐受。此外，红白血病细胞系K562、T细胞系Molt-4、B细胞系HS-Sultan和Daudi以及EBV转化的B细胞系均未受到完全消除NK细胞的Leu-Leu-OMe浓度的影响。同样，绝大多数OKT4+淋巴细胞在暴露于Leu-Leu-OMe后未表现出明显的毒性。此外，它们仍保留了对同种异体细胞正常增殖的能力，以及辅助免疫球蛋白分泌细胞（ISC）生成的能力。然而，Leu-Leu-OMe导致混合淋巴细胞群中OKT8+细胞部分耗竭。暴露于Leu-Leu-OMe后，剩余的OKT8+细胞仍能在混合淋巴细胞培养物中增殖，但这些细胞对ISC生成的抑制作用消失。此外，低浓度Leu-Leu-OMe暴露还能消除混合淋巴细胞培养物中产生的细胞毒性T淋巴细胞（CTL）的前体和活化效应细胞以及活化的NK样细胞活性。事实上，Leu-Leu-OMe能够消除OKT4+和OKT8+ CTL。此外，外周血巨噬细胞（Mφ）和具有许多Mφ样特征的人类细胞系U937细胞均对Leu-Leu-OMe介导的毒性敏感，但其有效浓度仅为完全清除NK细胞所需浓度的2至5倍。这些发现表明，Leu-Leu-OMe对NK细胞、CTL和Mφ具有选择性毒性，而对其他多种淋巴或非淋巴细胞类型无不良影响[1]。
甲基亮氨酰亮氨酸盐酸盐的体外细胞试验包括用该化合物处理免疫细胞（如淋巴细胞或单核细胞），并测量细胞活力、凋亡或溶酶体应激的诱导情况。其对LRRK2介导的磷酸化的影响在MEF和A549细胞中进行测量。 |
| 动物实验 |
甲基亮氨酰亮氨酸盐酸盐通常不作为单一化合物用于体内动物实验。然而，它可用于溶酶体贮积症或帕金森病的研究模型中，以研究溶酶体应激的影响。其对LRRK2介导的磷酸化作用的影响已在小鼠组织中进行了研究。
|
| 药代性质 (ADME/PK) |
由于甲基亮氨酰亮氨酸盐酸盐是一种研究工具而非治疗药物，因此其药代动力学数据有限。它通常以粉末形式在室温下储存。其在水和二甲基亚砜（DMSO）中的稳定性和溶解度是已知的。
|
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
盐酸亮氨酰亮氨酸甲酯是一种研究用化学品，应按照标准实验室防护措施进行操作。它可能对皮肤、眼睛和呼吸道有刺激性。本品仅供研究使用，不得用于人体。其毒性与其诱导细胞溶酶体应激的能力有关。
|
| 参考文献 |
[1]. The immunosuppressive activity of L-leucyl-L-leucine methyl ester: selective ablation of cytotoxic lymphocytes and monocytes. J Immunol. 1986 Feb 1;136(3):1038-48.
[2]. Mechanism of L-leucyl-L-leucine methyl ester-mediated killing of cytotoxic lymphocytes: dependence on a lysosomal thiol protease, dipeptidyl peptidase I, that is enriched in these cells. Proc Natl Acad Sci U S A. 1990 Jan;87(1):83-7. [3]. Endogenous Rab29 does not impact basal or stimulated LRRK2 pathway activity. Biochem J. 2020 Nov 27;477(22):4397-4423. |
| 其他信息 |
将小鼠或人淋巴细胞暴露于L-亮氨酰-L-亮氨酸甲酯（Leu-Leu-OMe）会导致细胞毒性淋巴细胞选择性死亡，而辅助性T细胞和B细胞仍保持功能。在毒性浓度的Leu-Leu-OMe中孵育的细胞毒性淋巴细胞被发现含有膜溶解代谢物，其结构为(Leu-Leu)n-OMe，其中n≥3。细胞毒性淋巴细胞对Leu-Leu-OMe的敏感性取决于溶酶体硫醇蛋白酶——二肽基肽酶I产生的这些代谢物。细胞毒性淋巴细胞中二肽基肽酶I的含量远高于不具有细胞溶解潜能的细胞或非髓系来源的细胞。因此，这种颗粒酶对于Leu-Leu-OMe的独特作用至关重要，并可能为开发旨在消除细胞毒性淋巴细胞反应的其他免疫疗法提供靶点。[2]
甲基亮氨酰亮氨酸盐酸盐（Methyl leucylleucinate HCl）的同义词包括H-LEU-LEU-OME HCl、Leu-Leu-ome HCl和L-亮氨酰-L-亮氨酸甲酯盐酸盐。它是一种用于研究溶酶体通路、免疫细胞功能和帕金森病的科研工具。它并非FDA批准的药物，仅用于研究目的。 |
| 分子式 |
C13H27CLN2O3
|
|---|---|
| 分子量 |
294.818083047867
|
| 精确质量 |
294.171
|
| 元素分析 |
C, 52.96; H, 9.23; Cl, 12.02; N, 9.50; O, 16.28
|
| CAS号 |
6491-83-4
|
| 相关CAS号 |
16689-14-8 (HBr)
|
| PubChem CID |
15598024
|
| 序列 |
H-Leu-Leu-OMe.HCl; L-leucyl-L-leucine methyl ester hydrochloride
|
| 短序列 |
LL
|
| 外观&性状 |
Typically exists as white to off-white solids at room temperature
|
| 熔点 |
171-181 °C
|
| LogP |
2.956
|
| tPSA |
81.42
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
3
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
4
|
| 可旋转键数目(RBC) |
8
|
| 重原子数目 |
19
|
| 分子复杂度/Complexity |
277
|
| 定义原子立体中心数目 |
2
|
| SMILES |
Cl.O=C([C@H](CC(C)C)N)N[C@H](C(=O)OC)CC(C)C
|
| InChi Key |
RVXQFTNCULOWRV-ACMTZBLWSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C13H26N2O3.ClH/c1-8(2)6-10(14)12(16)15-11(7-9(3)4)13(17)18-5;/h8-11H,6-7,14H2,1-5H3,(H,15,16);1H/t10-,11-;/m0./s1
|
| 化学名 |
methyl (2S)-2-[[(2S)-2-amino-4-methylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoate;hydrochloride
|
| 别名 |
6491-83-4; H-LEU-LEU-OME HCL; Leu-Leu-ome HCl; H-Leu-leu-OMe hydrochloride; Leu-Leu-ome hydrochloride; Methyl leucylleucinate HCl; L-Leucyl-L-Leucine methyl ester (hydrochloride); 76R0TP2LNW; 76R0TP2LNW; Methyl leucylleucinate hydrochloride; UNII-76R0TP2LNW; L-Leucine, L-leucyl-, methyl ester, hydrochloride (1:1); ...; 6491-83-4;
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~250 mg/mL (~847.98 mM)
|
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (7.06 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (7.06 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (7.06 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.3919 mL | 16.9595 mL | 33.9190 mL | |
| 5 mM | 0.6784 mL | 3.3919 mL | 6.7838 mL | |
| 10 mM | 0.3392 mL | 1.6960 mL | 3.3919 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
COA
粤公网安备 44011102003439号
463611831
