LJH685

别名: LJH685; LJH685; LJH685; NVP LJH685; NVP-LJH685;NVPLJH685; NVP LJH 685; 2,6-difluoro-4-[4-[4-(4-methylpiperazin-1-yl)phenyl]pyridin-3-yl]phenol; 2,6-Difluoro-4-{4-[4-(4-Methylpiperazin-1-Yl)phenyl]pyridin-3-Yl}phenol; CHEMBL3604793; 27CZQ807C1; NVP-LJH-685
目录号: V24250 纯度: =100%
LJH685 是一种有效、选择性、ATP 竞争性 RSK 抑制剂,可抑制 RSK1/2/3 生物活性,IC50 分别为 6、5 和 4 nM。
LJH685 CAS号: 1627710-50-2
产品类别: RSK
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
10 mM * 1 mL in DMSO
1mg
5mg
10mg
25mg
50mg
100mg
250mg
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纯度/质量控制文件

纯度: =100%

产品描述
LJH685 是一种强效、选择性的 ATP 竞争性 RSK 抑制剂,能够抑制 RSK1/2/3 的生物活性,IC50 值分别为 6 nM、5 nM 和 4 nM。
LJH685 是一种强效、特异性且选择性的 p90 核糖体 S6 激酶 (RSK) 家族抑制剂,RSK 家族也称为 MAP 激酶激活蛋白激酶 (MAPKAPK)。它是一种 ATP 竞争性抑制剂,能够抑制 RSK1、RSK2 和 RSK3,IC50 值分别为 6 nM、5 nM 和 4 nM。该化合物的分子量为 381.42 g/mol,分子式为 C22H21F2N3O。LJH685 对 RSK 的选择性高于其他 96 种激酶。 LJH685通过强效且选择性地抑制细胞内的RSK来调节YB1的磷酸化。在MAPK通路依赖性癌细胞系中,LJH685表现出抗增殖作用,并能调控细胞周期和诱导细胞凋亡。
生物活性&实验参考方法
靶点
RSK1/Ribosomal S6 Kinase (IC50 = 6 nM); RSK1 (IC50 = 5 nM); RSK1 (IC50 = 4 nM)
LJH685 targets the p90 ribosomal S6 kinase (RSK) family, which includes RSK1, RSK2, and RSK3. These kinases are downstream effectors of the MAPK/ERK signaling pathway and are involved in regulating cell proliferation, survival, and protein synthesis. LJH685 acts as an ATP-competitive inhibitor, binding to the ATP-binding pocket of the kinases and preventing their phosphorylation activity. It inhibits RSK1, RSK2, and RSK3 with IC50 values of 6 nM, 5 nM, and 4 nM, respectively. The compound shows high selectivity for RSKs over a panel of 96 other kinases, making it a valuable tool for studying RSK-specific functions.
体外研究 (In Vitro)
LJH685(0.01-100 μM;72 小时)对软琼脂中 MDA-MB-231 和 H358 细胞的生长具有有效的 EC50 值,分别为 0.73 和 0.79 μM。
LJH685(0.1-10 μM;4 小时)在亚微摩尔浓度下即可有效抑制 YB1 的磷酸化,并在较高浓度下几乎完全抑制 YB1 的磷酸化[1]。
体外实验表明,LJH685 对 RSK1、RSK2 和 RSK3 的生化活性具有抑制作用,IC50 值分别为 6 nM、5 nM 和 4 nM。它对 RSK 具有选择性,优于其他 96 种激酶。在 MAPK 通路依赖性癌细胞系中,LJH685 表现出抗增殖作用,可调控细胞周期并诱导细胞凋亡。它通过强效且选择性地抑制细胞内的RSK来调节YB1的磷酸化。这些体外活性证实了其对RSK的强效和选择性抑制作用。
体内研究 (In Vivo)
RSK抑制剂LJH685通过干扰YB-1-KLF5轴抑制体内BLBC细胞的肿瘤发生。我们的数据表明,YB-1在多个层面正向调控KLF5,从而促进BLBC的进展。新型RSK2-YB-1-KLF5-KRT16/Ly6D轴为BLBC提供了潜在的诊断标志物和治疗靶点。[2]
为了验证这一假设,我们评估了LJH685在HCC1806原位异种移植小鼠模型中的抗肿瘤作用。正如预期的那样,尽管LJH685在水中的溶解度较低且在血液中的半衰期较短,但我们观察到给药后肿瘤生长显著受到抑制(图7H、I)。LJH685治疗组小鼠未出现明显的体重下降,表明其毒性可接受(补充图S8E)。此外,我们证实LJH685降低了异种移植瘤组织中YB-1 pS102、KLF5、KRT16、Ly6D和Cyclin D1的表达,但增加了cleaved-PARP1的表达(补充图S8F)。综上所述,LJH685在体内有效抑制HCC1806细胞的生长,因此是一种潜在的BLBC治疗药物。[2]
在体内,LJH685通过强效且选择性地抑制RSK来调节YB1的磷酸化。在MAPK通路依赖性癌细胞系中,它表现出抗增殖作用,调控细胞周期并诱导细胞凋亡。目前文献中关于动物模型体内疗效的详细数据报道较少。作为一种强效且选择性的RSK抑制剂,它有望在MAPK通路激活驱动的癌症治疗中发挥治疗潜力。
酶活实验
重组全长RSK蛋白用于测定RSK亚型1、2和3(PV4049、PV4051和PV3846)的酶活性。在ATP浓度等于各酶ATP Km值(RSK1为5 μmol/L;RSK2为20 μmol/L;RSK3为10 μmol/L)以及适当稀释度的RSK抑制剂存在下,允许RSK1(1 nmol/L)、RSK2(0.1 nmol/L)或RSK3(1 nmol/L)磷酸化200 nmol/L的肽底物(生物素-AGAGRSRHSSYPAGT-OH)。
LJH685的非细胞酶活性测定使用纯化的RSK1、RSK2和RSK3激酶。将该化合物与激酶、肽底物和不同浓度的ATP一起孵育。通过定量分析底物磷酸化来测定激酶活性,所用技术包括放射性检测(例如,[γ-33P]-ATP掺入法)、荧光偏振法或ELISA法。根据剂量反应曲线确定酶抑制的IC50值。进行针对其他激酶的选择性分析以确认其特异性。
细胞实验
将 1000 个细胞接种于经细胞生长培养基处理的 96 孔组织培养板的每个孔中,即可在贴壁条件下测量细胞生长。72 小时后,根据制造商的说明,通过添加 CellTiter Glo 试剂来评估细胞生长。将适当稀释的化合物添加到细胞上方的培养基中。
LJH685 的细胞分析采用 MAPK 通路依赖性癌细胞系。将细胞用不同浓度的化合物处理特定时间。使用标准活力检测方法(例如 MTT、CellTiter-Glo)评估细胞增殖。使用碘化丙啶染色后,通过流式细胞术进行细胞周期分析。使用 Annexin V/PI 染色或 caspase 活性检测评估细胞凋亡。使用磷酸化特异性抗体通过蛋白质印迹法检测 YB1 磷酸化。
动物实验
在肿瘤负荷小鼠中应用LJH685[2]
将HCC1806细胞(6 × 10⁵)皮下注射到12只雌性裸鼠(6-7周龄)左右乳腺脂肪垫中。7天后,测量小鼠的肿瘤体积和重量,并将小鼠随机分为两组。随后,小鼠每天腹腔注射LJH685或NC进行治疗。每隔一天测量肿瘤体积和小鼠体重。第21天处死小鼠,取出肿瘤并称重。LJH685的制备方法为:依次加入以下溶剂:10% DMSO、40% PEG300、5% Tween-80和45%生理盐水。为避免冻融导致药物沉淀,药物溶液均为新鲜配制。
LJH685 的体内动物模型包括携带 MAPK 通路依赖性癌细胞系的免疫缺陷小鼠的异种移植研究。该化合物将以不同剂量经口服或其他途径给药。将持续监测肿瘤生长抑制情况。还将评估肿瘤组织中 YB1 磷酸化和 RSK 靶基因表达等药效学标志物。现有文献中未广泛报道详细的实验方案。
药代性质 (ADME/PK)
LJH685的药代动力学性质包括分子量为381.42 g/mol,分子式为C22H21F2N3O。CAS号为1627710-50-2。纯度>98%。该化合物在DMSO中的溶解度为66 mg/mL (173.03 mM),在乙醇中的溶解度为17 mg/mL (44.57 mM),但不溶于水。储存条件:粉末在-20°C下可保存3年;溶液在-20°C下可保存6个月。详细的药代动力学参数尚未见广泛报道。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
现有文献中关于LJH685的详细毒理学数据报道并不多。作为一种研究化合物,其安全性需要通过标准的临床前毒性评估来确定。该化合物仅供研究使用。鉴于其RSK抑制机制,对正常组织细胞增殖和存活的潜在影响将是重要的安全考量因素。
参考文献

[1]. Mol Cancer Res. 2014 May;12(5):803-12.

[2]. YB-1 is a positive regulator of KLF5 transcription factor in basal-like breast cancer. Cell Death & Differentiation volume 29, pages1283–1295 (2022)
其他信息
p90核糖体S6激酶(RSK)家族是一类在多种癌症中表达的丝氨酸/苏氨酸激酶,其底物磷酸化与细胞存活、增殖和极性的直接调控密切相关。本研究对目前已知的最具选择性和活性的RSK抑制剂LJH685和LJI308进行了表征和介绍。结构分析证实,LJH685与RSK2 N端激酶的ATP结合位点结合,并揭示该抑制剂具有独特的非平面构象,这解释了其对RSK家族激酶的优异选择性。LJH685和LJI308在体外和细胞内均能有效抑制RSK活性。此外,RSK细胞抑制及其对YB1 Ser102磷酸化的抑制与细胞生长抑制密切相关,但这种相关性仅在非锚定依赖性生长条件下以及部分受试细胞系中观察到。因此,RSK抑制揭示了抑制剂敏感细胞系之间动态的功能反应,突显了RSK依赖性抑制在癌症中的异质性。[1] Y-box结合蛋白1 (YB-1) 是一种众所周知的癌基因,在包括基底样乳腺癌 (BLBC) 在内的多种癌症中高表达。除了作为转录因子外,YB-1最近还被定义为一种涉及RNA 5-甲基胞嘧啶的表观遗传调控因子。然而,其具体靶点和致癌功能仍不清楚。本研究基于临床数据库,证实乳腺癌患者中Kruppel样因子5 (KLF5) 和YB-1的表达呈正相关,而与Dachshund同源物1 (DACH1) 的表达呈负相关。机制上,YB-1不仅通过转录激活增强KLF5的表达(该激活作用可被DACH1抑制),而且还以一种依赖于RNA 5-甲基胞嘧啶修饰的方式稳定KLF5 mRNA。此外,核糖体S6激酶2 (RSK2) 介导的YB-1 Ser102位点磷酸化促进YB-1/KLF5转录复合物的形成,该复合物共同调控BLBC特异性基因角蛋白16 (KRT16) 和淋巴细胞抗原6家族成员D (Ly6D) 的表达,从而促进癌细胞增殖。 RSK抑制剂LJH685通过干扰YB-1-KLF5轴,在体内抑制BLBC细胞的肿瘤发生。我们的数据表明,YB-1在多个层面上正向调控KLF5,从而促进BLBC的进展。新发现的RSK2-YB-1-KLF5-KRT16/Ly6D轴为BLBC提供了潜在的诊断生物标志物和治疗靶点。[2]
LJH685也称为LJH 685和LJH-685,其CAS号为1627710-50-2。它是一种高效、特异性和选择性的RSK抑制剂,对RSK1、RSK2和RSK3的IC50值分别为6 nM、5 nM和4 nM。与其他96种激酶相比,它对RSK具有选择性。它能调节细胞内YB1的磷酸化,并在MAPK通路依赖性癌细胞系中表现出抗增殖、细胞周期调控和诱导细胞凋亡的作用。纯度>98%。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C22H21F2N3O
分子量
381.42
精确质量
381.165
元素分析
C, 69.28; H, 5.55; F, 9.96; N, 11.02; O, 4.19
CAS号
1627710-50-2
相关CAS号
1627710-50-2
PubChem CID
73010393
外观&性状
White to off-white solid powder
密度
1.3±0.1 g/cm3
沸点
481.1±45.0 °C at 760 mmHg
闪点
244.7±28.7 °C
蒸汽压
0.0±1.3 mmHg at 25°C
折射率
1.601
LogP
3.31
tPSA
39.6Ų
氢键供体(HBD)数目
1
氢键受体(HBA)数目
6
可旋转键数目(RBC)
3
重原子数目
28
分子复杂度/Complexity
482
定义原子立体中心数目
0
SMILES
C1=C(C2C(C3C=CC(N4CCN(CC4)C)=CC=3)=CC=NC=2)C=C(C(O)=C1F)F
InChi Key
IKUFKDGKRLMXEX-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C22H21F2N3O/c1-26-8-10-27(11-9-26)17-4-2-15(3-5-17)18-6-7-25-14-19(18)16-12-20(23)22(28)21(24)13-16/h2-7,12-14,28H,8-11H2,1H3
化学名
2,6-difluoro-4-[4-[4-(4-methylpiperazin-1-yl)phenyl]pyridin-3-yl]phenol
别名
LJH685; LJH685; LJH685; NVP LJH685; NVP-LJH685;NVPLJH685; NVP LJH 685; 2,6-difluoro-4-[4-[4-(4-methylpiperazin-1-yl)phenyl]pyridin-3-yl]phenol; 2,6-Difluoro-4-{4-[4-(4-Methylpiperazin-1-Yl)phenyl]pyridin-3-Yl}phenol; CHEMBL3604793; 27CZQ807C1; NVP-LJH-685
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO: ~20 mg/mL (~52.4 mM)
Ethanol: ~10mg/mL (~26.2 mM)
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 1 mg/mL (2.62 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 10.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中,混匀;然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: ≥ 1 mg/mL (2.62 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 10.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中,混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备(4°C,1 周):将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中,得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 1 mg/mL (2.62 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 10.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中,混合均匀。


请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 2.6218 mL 13.1089 mL 26.2178 mL
5 mM 0.5244 mL 2.6218 mL 5.2436 mL
10 mM 0.2622 mL 1.3109 mL 2.6218 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
+
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

生物数据图片
  • LJH685 and LJI308 are potent and specific RSK inhibitors. Mol Cancer Res . 2014 May;12(5):803-12.
  • Crystal structure of LJH685 bound to RSK2 confirms binding to the ATP site with pyridine nitrogen as the hinge binder. Mol Cancer Res . 2014 May;12(5):803-12.
  • LJH685 modulates YB1 phosphorylation but affects phosphorylation of S6RP only in combination with mTOR inhibitors. Mol Cancer Res . 2014 May;12(5):803-12.
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