| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 5mg |
|
||
| 10mg |
|
||
| 25mg |
|
||
| 50mg |
|
||
| 100mg |
|
||
| 250mg |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
PRMT5-MEP50 complex (IC50 not specified; KD = 6 ± 2 nM by SPR)
G9a, GLP, SUV39H1, SUV39H2, SETDB1, SETD8, SUV420H1, SUV420H2, SETD7, MLL1 trimeric complex, MLL3 pentameric complex, EZH2 trimeric complex, PRMT1, PRMT3, PRMT4, PRMT6, PRMT7, PRMT8, PRMT9, PRDM9, SETD2, SMYD2, SMYD3, DOT1L, NSD1, NSD2, NSD3, ASH1L, DNMT3A/3L, DNMT3B/3L: no inhibition at 1 μM and 10 μM [1] LLY-284 targets protein arginine methyltransferase 5 (PRMT5), a type II arginine methyltransferase that catalyzes the symmetric dimethylation of arginine residues on histone and non-histone proteins. However, as a diastereomer of the active PRMT5 inhibitor LLY-283, it has much lower activity against PRMT5. |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
LLY-284（化合物 1）在 1 μM 和 10 μM 浓度下对一系列甲基转移酶（G9a、GLP、SUV39H1、SUV39H2、SETDB1、SETD8、SUV420H1、SUV420H2、SETD7、MLL1、MLL3、EZH2、PRMT1、PRMT3、PRMT4、PRMT6、PRMT7、PRMT8、PRMT9、PRDM9、SETD2、SMYD2、SMYD3、DOT1L、NSD1、NSD2、NSD3、ASH1L、DNMT3A/3L、DNMT3B/3L）均未表现出明显的抑制作用，其活性与对照组相比仍保持在 100%。 [1]
在用LLY-284处理MCF7细胞48小时的PRMT5细胞活性测定中，通过Western blot检测发现对称二甲基化的SmBB'（Rme2s）水平降低。[1] 在A375黑色素瘤细胞中，LLY-284被用于MDM4外显子5/6 PCR检测（剪接检测），以确定外显子跳跃倍数变化的EC50值，但文中未提供具体的EC50值；文中描述了检测方法。[1] 在用多种癌细胞系（未具体说明）进行的7天增殖实验中，LLY-284被用于测定IC50值，但文中未提供具体的IC50值。[1] LLY-284是PRMT5抑制剂LLY-283的阴性对照。 LLY-283 在体外和细胞内对 PRMT5 酶活性的抑制作用 IC50 值分别为 22 ± 3 nM 和 25 ± 1 nM，而 LLY-284 的活性则低得多。LLY-284 可作为工具化合物，用于证明 LLY-283 的作用是由于其对 PRMT5 的特异性抑制所致。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
由于 LLY-284 是一种无活性对照化合物，因此预计其不会产生体内活性。它不具有显著的生物活性，仅用作 LLY-283 实验中的阴性对照。任何使用 LLY-284 观察到的效应都表明 LLY-283 存在非特异性或脱靶效应。
|
| 酶活实验 |
闪烁邻近分析法 (SPA) 用于甲基转移酶选择性测定：通过监测氚标记的甲基掺入肽底物，评估了 LLY-284 对 24 种酶（G9a、GLP、SUV39H1、SUV39H2、SETDB1、SETD8、SUV420H1、SUV420H2、SETD7、MLL1 三聚体复合物、MLL3 五聚体复合物、EZH2 三聚体复合物、PRMT1、PRMT3、PRMT4、PRMT5-MEP50 复合物、PRMT6、PRMT7、PRMT8、PRMT9、PRDM9、SETD2、SMYD2、SMYD3）甲基转移酶活性的影响。反应体系为 10 μl，含有 3H-SAM（比活度 12-18 Ci/mmol），底物浓度接近表观 Km 值。测试了两种浓度的化合物（1 μM 和 10 μM）。反应用 10 μl 7.5 M 盐酸胍终止，然后加入 180 μl 缓冲液（20 mM Tris-HCl，pH 8.0），转移至 FlashPlate 板，孵育 2 小时，并使用 TopCount NXT 测定 CPM 值。不添加化合物时的 CPM 值为 100% 活性；不添加酶时的 CPM 值为背景值 (0%)。 [1]
DOT1L、NSD1、NSD2、NSD3、ASH1L、DNMT3A/3L、DNMT3B/3L 的滤膜检测：将 10 μl 反应混合物在 23°C 下孵育 1 小时，然后加入 50 μl 10% 三氯乙酸 (TCA)，混合，转移到滤板中，以 2000 rpm 离心 2 分钟，用 10% TCA 洗涤两次，用乙醇洗涤一次，干燥，加入 30 μl MicroScint-O，离心，移除，加入 50 μl MicroScint-O，并使用 Topcount 酶标仪测量 CPM。 [1] PRMT5-MEP50 SPA 作用机制测定：反应混合物包含 20 mM Tris-HCl (pH 8.0)、0.01% Tween-20、5 mM TCEP、15 nM PRMT5-MEP50、0.07 μM 生物素化 H4(1-24) 肽 (SGRGKGKGKLGKGGAKRHRKVLDRD-Biotin) 和 0.6 μM 3H-SAM。为了评估与 SAM 的竞争，在饱和肽 (2 μM) 和不同 SAM 浓度 (0.5、1、4、8、12、16、20 和 25 倍表观 Km) 下测定了 LLY-284 的 IC50 值。为了评估与肽的竞争，SAM 浓度保持在饱和浓度 (3.5 μM)，并在不同的肽浓度 (0.5、1、4、8、12、16、20 和 25 倍表观 Km) 下测定 IC50 值。未观察到 IC50 的显著变化，表明对两种底物均存在非竞争性抑制。[1] 表面等离子共振 (SPR)：使用 Biacore T200 在 20°C 下进行 SPR 研究。将约 4400 个响应单位 (RU) 的生物素化 PRMT5 捕获到链霉亲和素偶联的 SA 芯片上。将LLY-284溶解于100% DMSO中（20 mM储备液），用DMSO进行3倍系列稀释至8 μM，然后用HBS-EP缓冲液（20 mM Hepes pH 7.4，150 mM NaCl，3 mM EDTA，0.05% Tween-20）以1:20的比例稀释，最终DMSO浓度为5%。动力学测定采用单循环动力学，结合时间为90秒，解离时间为300秒，流速为100 μl/min。KD值采用1:1结合模型计算。结果：KD = 6 ± 2 nM (n=3)，kon = 3.9 ± 0.4 × 10^5 M^-1 s^-1，koff = 2.2 ± 0.8 × 10^-3 s^-1。 [1] 用于检测 LLY-284 的无细胞 PRMT5 甲基转移酶活性的测定方法，采用纯化的重组 PRMT5 酶和组蛋白 H4 肽或其他底物。甲基化反应在 S-腺苷甲硫氨酸 (SAM) 存在下进行，并逐渐增加化合物的浓度。甲基化程度通过放射性或荧光检测进行定量。测定 IC50 值以确认活性缺失。 |
| 细胞实验 |
PRMT5细胞检测：MCF7细胞培养于含10% FBS、青霉素（100单位/ml）和链霉素（100 μg/ml）的DMEM培养基中。细胞汇合度达到40%时，用不同浓度的LLY-284或DMSO对照处理48小时。采用Western blot分析SmBB'及其对称甲基化修饰的SmBB'的水平。[1]
Western blot实验步骤：将细胞在室温下用裂解缓冲液（20 mM Tris-HCl pH 8、150 mM NaCl、1 mM EDTA、10 mM MgCl2、0.5% Triton X-100、12.5 U/mL苯甲酰酶、蛋白酶抑制剂混合物）裂解3分钟，然后加入SDS至终浓度为1%。将总裂解液在含 MOPS 缓冲液的 4-12% Bis-Tris 蛋白凝胶中进行电泳分离，然后在含有 20% MeOH 和 0.05% SDS 的 Tris-甘氨酸转印缓冲液中，以 80 V 电压转印至 PVDF 膜上 1.5 小时。将膜在含 0.1% Tween-20 的 PBS 中用 5% 脱脂奶粉封闭 1 小时，然后在 4°C 下与一抗（抗 smBB' 1:1000、抗 Rme2s 1:2000、抗 β-actin）孵育过夜，洗涤后，在室温下用 Odyssey 封闭缓冲液中的山羊抗兔 IR800 和驴抗鼠 IR680 二抗（1:5000）孵育 1 小时，洗涤后，在 Odyssey 扫描仪上于 800 nm 和 700 nm 波长处读取信号。 [1] MCF7 细胞基因敲低：MCF7 细胞培养于含 10% FBS、青霉素（100 单位/mL）和链霉素（100 μg/mL）的 DMEM 培养基中。待细胞汇合度达到 40% 时，使用 jetPRIME 转染试剂将 50 nM 的 siRNA（对照、PRMT6、PRMT5、PRMT1、PRMT4、PRMT3、PRMT7）转染至细胞中。转染 3 天后，通过 Western blot 分析蛋白表达水平。 [1] A375肿瘤细胞中MDM4外显子5/6 PCR检测：将A375细胞培养至70-90%汇合度，用胰蛋白酶消化，以5000个细胞/孔的密度接种于96孔板中，过夜培养，然后用LLY-284进行系列稀释（1:3，10个浓度点，DMSO终浓度0.2%）处理72小时。用冰冷的PBS洗涤细胞，用裂解工作试剂（来自TAQMAN基因表达细胞-CT试剂盒）裂解细胞，室温孵育5分钟，加入终止液，然后进行逆转录。分别进行MDM4外显子5和外显子6引物的qPCR检测。 CT 数据用于计算倍数变化 = 2^(-ΔCT)，其中 ΔCT = (Exon6 CT CPD - Exon6 CT DMSO) - (Exon5 CT CPD - Exon5 CT DMSO)。EC50 值使用 Genedata 软件中的四参数逻辑拟合计算（未提供具体的 EC50 值）。[1] 7 天增殖实验：将癌细胞系以适当密度接种于 96 孔板中，孵育 18-24 小时。将测试化合物 LLY-284 从 10 mM DMSO 储备液中用培养基进行 1:2 系列稀释（10 个浓度点），然后加入细胞中（最终 DMSO 浓度为 0.2%）。在 37°C/5% CO2 条件下孵育 7 天。移除培养基，每孔加入 25 μl Cell Titer-Glo 试剂，室温孵育 10-20 分钟，测量发光值。 IC50 值通过四参数曲线拟合计算（未提供具体的 IC50 值）。[1] 细胞（例如癌细胞系）在接受 LLY-283 处理的同时，也接受 LLY-284 作为阴性对照。通过蛋白质印迹法检测对称性二甲基精氨酸 (SDMA) 水平来评估 PRMT5 活性。进行细胞增殖和活力检测。任何观察到的 LLY-284 效应均表明存在非特异性效应。 |
| 动物实验 |
裸鼠A375异种移植瘤模型：将A375黑色素瘤细胞培养于含10%高浓度胎牛血清（FBS）的DMEM/高糖培养基中，收集细胞后，皮下注射至裸鼠后侧腹部（5 × 10^6个细胞/只，与Matrigel按1:1比例混合）。当肿瘤体积达到约200 mm^3（植入后约18-21天）时，将动物随机分为对照组和试验组。LLY-284配制于1% HEC/0.25% Tween-80/0.05%消泡剂中，并通过灌胃给药。每周用游标卡尺测量两次肿瘤体积，并报告肿瘤体积相对于载体对照组的抑制百分比（未提供数值疗效数据）。[1]
小鼠药代动力学研究：LLY-284以10 mg/kg的剂量口服给药。采集血样进行药代动力学分析。制剂：药代动力学分析中未明确描述，但可能与上述相同。[1] 由于LLY-284是一种非活性对照化合物，因此通常不进行体内动物研究。在对动物施用LLY-283的研究中，LLY-284可用作阴性对照，以证明抗肿瘤作用是由于PRMT5的特异性抑制所致。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
LLY-284在小鼠体内的ADME/PK特性（来自汇总表）：MW = 342；HTSA pH7.4溶解度 = 0.677 mg/ml；MDCK AB转运率 = 中等；CYP2D6、2C9、3A4抑制率分别为3%、5%、3%；人、犬、大鼠、小鼠代谢率分别为28%、13%、26%、4.5%；AUC (ng*hr/ml) = 7943；Cmax (ng/ml) = 3646；T1/2 (小时) = 3.41；游离Cmax (nM) = 5754；CL (ml/min/kg) = 12.6；Vd,ss (ml/kg) = 1819；游离分数（小鼠）= 0.54。生物利用度 (%F) = 50；clogP = 0.8；clogD = 0.3。[1]
补充药代动力学描述：血浆清除率约为肝血流量 (Qh，小鼠 = 90 ml/min/kg) 的 0.25 倍，与代谢稳定性一致。分布容积小于 5 L/kg，与理化性质一致。口服生物利用度为 50%，表明吸收良好且无明显的首过代谢。腹腔注射和口服给药后的暴露量相似，表明吸收良好且无肠道代谢。腹腔注射和口服给药后，暴露量均随剂量呈比例增加。[1] 由于 LLY-284 是一种非活性对照化合物，因此其药代动力学性质尚未得到充分表征。作为一种小分子（分子量 342.36，分子式 C17H18N4O4），预计其理化性质与 LLY-283 相似。该化合物可溶于DMSO（68 mg/mL）。 |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
LLY-284 是一种阴性对照化合物，不用于治疗用途。由于它是研究中使用的非活性对照品，因此未报告其毒性数据。操作时需遵守标准的实验室安全预防措施。
|
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
LLY-284（化合物 1）是一种强效的 PRMT5-MEP50 抑制剂，对 SAM 和肽底物均表现出非竞争性作用机制。在不同浓度（最高达 25×Km）的底物下测定 IC50 值，结果表明 IC50 值未发生显著变化。通过对溴苯甲酸酯衍生物的单晶 X 射线衍射确定了其绝对构型。该化合物的分子式为 C17H18N4O4，分子量为 342.13。[1]
LLY-284（分子式 C17H18N4O4，分子量 342.36）是 LLY-283 的阴性对照和工具化合物。它是 LLY-283 的非对映异构体，但作为 PRMT5 抑制剂的活性远低于 LLY-283。 LLY-283 是一种首创的选择性 SAM 竞争性 PRMT5 抑制剂，具有抗肿瘤活性。LLY-284 仅供研究使用。 |
| 分子式 |
C17H18N4O4
|
|---|---|
| 分子量 |
342.36
|
| 精确质量 |
342.132
|
| CAS号 |
2226515-75-7
|
| 相关CAS号 |
LLY-283;2040291-27-6
|
| PubChem CID |
136213035
|
| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
|
| LogP |
0.2
|
| tPSA |
127
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
4
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
7
|
| 可旋转键数目(RBC) |
3
|
| 重原子数目 |
25
|
| 分子复杂度/Complexity |
464
|
| 定义原子立体中心数目 |
5
|
| SMILES |
C1=CC=C(C=C1)[C@@H]([C@@H]2[C@H]([C@H]([C@@H](O2)N3C=CC4=C(N=CN=C43)N)O)O)O
|
| InChi Key |
WWOOWAHTEXIWBO-CNUKPYSBSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C17H18N4O4/c18-15-10-6-7-21(16(10)20-8-19-15)17-13(24)12(23)14(25-17)11(22)9-4-2-1-3-5-9/h1-8,11-14,17,22-24H,(H2,18,19,20)/t11-,12-,13+,14+,17+/m0/s1
|
| 化学名 |
(2R,3R,4S,5R)-2-(4-aminopyrrolo[2,3-d]pyrimidin-7-yl)-5-[(S)-hydroxy(phenyl)methyl]oxolane-3,4-diol
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
|
|---|
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.9209 mL | 14.6045 mL | 29.2090 mL | |
| 5 mM | 0.5842 mL | 2.9209 mL | 5.8418 mL | |
| 10 mM | 0.2921 mL | 1.4605 mL | 2.9209 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
COA
粤公网安备 44011102003439号
463611831
