LX2343

BACE1 (β-site amyloid precursor protein cleaving enzyme 1): LX2343 inhibits BACE1 enzymatic activity with an IC₅₀ value of 11.43±0.36 μmol/L[1]
- PI3K (Phosphatidylinositol 3-kinase): LX2343 acts as a non-ATP competitive PI3K inhibitor; in vitro, with 10 μmol/L ATP, the IC₅₀ is 13.11±1.47 μmol/L; with 50 μmol/L ATP, the IC₅₀ is 13.86±1.12 μmol/L; with 100 μmol/L ATP, the IC₅₀ is 15.99±3.23 μmol/L[1]
- JNK (c-Jun N-terminal kinase): LX2343 suppresses JNK-mediated APP^{Thr668} phosphorylation [1]

LX2343 (5–20 μM) 促进 SH-SY5Y 细胞和原代星形胶质细胞中的 Aβ 清除，同时剂量依赖性地减少 HEK293-APPsw 和 CHO-APP 细胞中 Aβ 的积累。 LX2343 具有治疗 AD 的潜力，因为它通过促进清除和抑制 Aβ 生成来改善 APP/PS1 转基因小鼠的认知障碍。 HEK293-APPsw 细胞和 CHO-APP 细胞中的蛋白质印迹结果显示，LX2343 不影响 BACE1 蛋白水平。另一方面，体外BACE1酶活性实验表明，LX2343剂量依赖性地降低BACE1活性（使用TDC作为阳性对照），IC50为11.43±0.36 μM。我们研究了不同剂量的 ATP 对 LX2343 抑制作用的影响，以确定 ATP 和 LX2343 之间是否存在竞争。结果表明，ATP对LX2343对PI3K的抑制几乎没有影响。这一发现表明 LX2343 是一种非 ATP 竞争性 PI3K 抑制剂。根据参考文献 [1]，当暴露于 10 μM ATP 时，LX2343 的 IC50 为 13.11±1.47 μM，当暴露于 50 μM ATP 时，IC50 为 13.86±1.12 μM，当暴露于 100 μM ATP 时，IC50 为 15.99±3.23 μM。

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LX2343（5-20 μmol/L）可剂量依赖性降低链脲佐菌素（STZ）处理的HEK293-APPsw和CHO-APP细胞中β淀粉样蛋白（Aβ）的累积（包括Aβ₄₀和Aβ₄₂），经ELISA检测验证（单因素方差分析，Dunnett多重比较检验，n=3，P<0.05，P<0.01 vs STZ组）[1]
- Western blot分析显示，LX2343可降低HEK293-APPsw和CHO-APP细胞中JNK和APP^{Thr668}的磷酸化水平，减少sAPPβ蛋白表达量，且对BACE1蛋白表达量无影响（单因素方差分析，Dunnett多重比较检验，n=3，P<0.05，P<0.01 vs STZ组）；ELISA结果也证实该药物可降低上述细胞中sAPPβ的水平（单因素方差分析，Dunnett多重比较检验，n=3，P<0.05，P<0.01 vs STZ组）[1]
- LX2343对APP的非淀粉样生成途径无影响：在HEK293-APPsw和CHO-APP细胞中，该药物不影响ADAM10蛋白表达水平（Western blot检测，单因素方差分析，Dunnett多重比较检验，n=3），也不影响细胞内sAPPα的水平（ELISA检测，单因素方差分析，Dunnett多重比较检验，n=3）[1]
- ELISA结果表明，LX2343可促进STZ处理的SH-SY5Y细胞和原代星形胶质细胞中Aβ的清除（单因素方差分析，Dunnett多重比较检验，n=3，P<0.05，P<0.01 vs STZ组）[1]
- Western blot分析显示，LX2343可降低STZ处理的SH-SY5Y细胞和原代星形胶质细胞中PI3K、AKT、mTOR、P70S6、ULK1的磷酸化水平，减少p62蛋白表达量，并促进LC3的加工成熟（单因素方差分析，Dunnett多重比较检验，n=3，P<0.05，P<0.01 vs STZ组）；短期STZ刺激会增加SH-SY5Y细胞裂解物中AKT的磷酸化水平，而LX2343可逆转该效应（t检验，n=3，P<0.05 vs STZ组，#P<0.05，##P<0.01 vs DMSO组）[1]
- 对瞬时表达mRFP-GFP-LC3的SH-SY5Y细胞进行共聚焦激光扫描显微镜（CLSM）观察发现，LX2343可激活自噬（绿色和红色斑点分别代表GFP和mRFP，比例尺：5 μm，n=3）；基于氯喹（CQ）的ELISA实验显示，氯喹可升高Aβ水平，并部分逆转LX2343诱导的SH-SY5Y细胞中Aβ降低的效应（t检验，P<0.01 vs STZ组，##P<0.01 vs STZ+LX2343组，&&P<0.01 vs DMSO组）[1]
- LX2343可剂量依赖性抑制体外PI3K的活性（单因素方差分析，Dunnett多重比较检验，n=3，P<0.01 vs DMSO组）；MTT实验表明，LX2343对SH-SY5Y细胞的活力无影响（单因素方差分析，Dunnett多重比较检验，n=3）[1]

AD 痴呆症的流行动物模型是 APP/PS1 小鼠，它表达突变的人类早老素 1 蛋白以及嵌合的人类瑞典突变 APP。我们通过进行 MWM 测试来评估 LX2343 改善该模型中记忆障碍的能力。 APP/PS1转基因小鼠在8天的训练试验中的路径长度和逃避潜伏期明显长于非转基因小鼠，并且给予10 mg/kg LX2343明显抵消了较长的路径长度和逃避潜伏期。 7 和 8。与给予载体的转基因小鼠相比，给予 LX2343 的转基因小鼠在探针试验测定中更频繁地穿越平台的隐藏位置[1]。

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给APP/PS1转基因小鼠腹腔注射（ip）LX2343（10 mg·kg⁻¹·d⁻¹），连续给药100天，经莫里斯水迷宫（MWM）实验评估发现，该药物可显著改善小鼠的认知缺陷：重复测量的双因素方差分析显示，处理因素（P<0.0001）、时间因素（P<0.0001）及二者的交互作用均有统计学意义；平台实验中的逃避潜伏期缩短（n=10，P<0.05 vs TV组），探索实验中穿越平台的次数增加（t检验，n=10，P<0.01 vs TV组）[1]
- 对APP/PS1转基因小鼠脑组织切片进行硫黄素S染色发现，LX2343可显著减少脑内老年淀粉样斑块（比例尺：100 μm，t检验，n=4，P<0.05，P<0.01 vs TV组）[1]
- ELISA结果显示，LX2343可降低APP/PS1转基因小鼠大脑皮层和海马匀浆中Aβ的水平（t检验，n=10，P<0.05 vs TV组）[1]
- 对APP/PS1转基因小鼠大脑皮层匀浆进行Western blot分析发现，LX2343可降低PI3K、AKT、mTOR、P70S6、ULK1的磷酸化水平，减少p62蛋白表达量，促进LC3加工成熟（t检验，n=4，P<0.05，P<0.01 vs TV组）；同时可降低JNK和APP^{Thr668}的磷酸化水平，减少sAPPβ蛋白表达量（对BACE1蛋白表达量无影响）（t检验，n=4，P<0.05，P<0.01 vs TV组）；还可增加突触素（synaptophysin）、PSD95和VAMP2的蛋白表达量（t检验，n=4，P<0.05，P<0.01 vs TV组）[1]
- ELISA结果证实，LX2343可降低APP/PS1转基因小鼠大脑皮层和海马匀浆中sAPPβ的水平（t检验，n=10，P<0.05，P<0.01 vs TV组）[1]
- LX2343处理可延长野生型黑腹果蝇的寿命[1]

BACE1酶活性实验：构建包含BACE1酶和相应底物的反应体系，向体系中加入不同浓度的LX2343，在特定条件下孵育后检测BACE1的酶活性，根据量效曲线计算LX2343抑制BACE1的IC₅₀值；以2,2′,4′-三羟基查尔酮（TDC，一种非竞争性BACE1抑制剂）作为阳性对照（单因素方差分析，Dunnett多重比较检验，P<0.01 vs DMSO组；TDC组采用t检验，n=3）[1]
- PI3K酶活性实验：采用纯化的PI3K酶和对应底物进行体外PI3K活性检测，在无ATP或不同浓度ATP（10 μmol/L、50 μmol/L、100 μmol/L）存在的条件下，向反应体系中加入不同浓度的LX2343，在最优条件下孵育后检测PI3K的酶活性，计算不同ATP浓度下LX2343的IC₅₀值；以渥曼青霉素（wortmannin，一种PI3K抑制剂）作为阳性对照（单因素方差分析，Dunnett多重比较检验，P<0.01 vs DMSO组；渥曼青霉素组采用t检验，n=3）[1]

HEK293-APPsw和CHO-APP细胞中Aβ累积检测：用STZ处理HEK293-APPsw和CHO-APP细胞以诱导Aβ累积，同时加入不同浓度的LX2343（5-20 μmol/L），孵育特定时间后收集细胞培养上清或裂解液，通过ELISA检测Aβ₄₀和Aβ₄₂的水平，与仅STZ处理组对比，评估LX2343对Aβ累积的抑制作用（单因素方差分析，Dunnett多重比较检验，n=3，P<0.05，P<0.01 vs STZ组）[1]
- SH-SY5Y细胞和原代星形胶质细胞中Aβ清除检测：用STZ处理SH-SY5Y细胞和原代星形胶质细胞，随后加入不同浓度的LX2343，孵育后检测细胞或上清中Aβ的水平，评估LX2343对Aβ清除的促进作用（单因素方差分析，Dunnett多重比较检验，n=3，P<0.05，P<0.01 vs STZ组）[1]
- 信号蛋白Western blot分析：将HEK293-APPsw、CHO-APP、SH-SY5Y、原代星形胶质细胞经STZ和LX2343处理后裂解，提取总蛋白；将蛋白样品进行SDS-PAGE分离，转膜后与JNK、p-JNK、APP^{Thr668}、p-APP^{Thr668}、BACE1、sAPPβ、ADAM10、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR、P70S6、p-P70S6、ULK1、p-ULK1、p62、LC3、GAPDH（内参）等一抗孵育，再与二抗孵育后显影并定量分析条带，探究LX2343对相关信号通路的影响（单因素方差分析，Dunnett多重比较检验，n=3，P<0.05，P<0.01 vs STZ组）[1]
- sAPPα和sAPPβ的ELISA检测：收集经STZ和LX2343处理的HEK293-APPsw和CHO-APP细胞的培养上清或裂解液，采用特异性ELISA试剂盒检测sAPPα和sAPPβ的水平，并进行统计学分析（单因素方差分析，Dunnett多重比较检验，n=3）[1]
- CLSM检测自噬：将SH-SY5Y细胞瞬时转染mRFP-GFP-LC3质粒以表达融合蛋白，转染后用STZ和LX2343处理细胞，通过共聚焦激光扫描显微镜观察细胞，分析绿色（GFP）和红色（mRFP）斑点的数量及分布，评估自噬流（比例尺：5 μm，n=3）[1]
- 基于CQ的Aβ ELISA实验：用STZ、LX2343、氯喹（CQ，自噬抑制剂）单独或联合处理SH-SY5Y细胞，孵育后通过ELISA检测细胞中Aβ的水平，验证自噬在LX2343介导的Aβ清除中的作用（t检验，P<0.01 vs STZ组，##P<0.01 vs STZ+LX2343组，&&P<0.01 vs DMSO组）[1]
- MTT细胞活力实验：将SH-SY5Y细胞接种于96孔板，加入不同浓度的LX2343，孵育特定时间后加入MTT溶液，甲臜结晶溶解后在特定波长下检测吸光度，计算细胞活力以评估LX2343的细胞毒性（单因素方差分析，Dunnett多重比较检验，n=3）[1]

7 and 21 mg/kg; 3% DMSO and 5% Tween-80; IV injection
Male Sprague Dawley (SD) rats

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APP/PS1 transgenic mice experiment: APP/PS1 transgenic mice were randomly divided into groups (TV: transgenic mice administered vehicle; LX2343: transgenic mice administered LX2343; NV: non-transgenic mice administered vehicle as control). LX2343 was administered intraperitoneally (ip) at a dose of 10 mg·kg⁻¹·d⁻¹ for 100 consecutive days. After the administration period, the cognitive ability of the mice was evaluated using the Morris water maze (MWM) test, including training trials (recording escape latency) and probe trials (counting the number of platform crossings). Then, the mice were sacrificed, and brain tissues were collected for Thioflavine S staining (to detect senile plaques), ELISA (to measure Aβ and sAPPβ levels in cortical and hippocampal homogenates), and Western blot analysis (to detect signaling proteins in cortical homogenates) (n=10 for behavioral and ELISA tests, n=4 for Western blot and Thioflavine S staining)[1]
- Wild-type Drosophila melanogaster lifespan experiment: Wild-type Drosophila melanogaster were divided into control and LX2343-treated groups. LX2343 was administered via an appropriate route (not specified) at a certain dose (not specified), and the survival status of the flies was monitored continuously to record lifespan and calculate mean lifespan[1]

[1]. Small molecule LX2343 ameliorates cognitive deficits in AD model mice by targeting both amyloid β production and clearance. Acta Pharmacol Sin. 2016 Sep;37(10):1281-1297.

LX2343 is a small molecule with the chemical name N-(1,3-benzodioxol-5-yl)-2-[5-chloro-2-methoxy(phenylsulfonyl)anilino]acetamide[1]
- The anti-amyloid effects of LX2343 are attributed to two mechanisms: (1) inhibiting Aβ production by suppressing JNK-mediated APP^{Thr668} phosphorylation (thus reducing APP cleavage) and inhibiting BACE1 enzymatic activity; (2) promoting Aβ clearance by acting as a non-ATP competitive PI3K inhibitor to negatively regulate the AKT/mTOR signaling pathway, thereby stimulating autophagy[1]
- LX2343 ameliorates cognitive dysfunction in APP/PS1 transgenic mice by both inhibiting Aβ production and promoting Aβ clearance, highlighting its potential in the treatment of Alzheimer's disease (AD)[1]
- LX2343 protects synaptic integrity in APP/PS1 transgenic mice by increasing the protein levels of synaptophysin, PSD95, and VAMP2 in the cerebral cortex[1]

C22H19CLN2O6S

474.07

474.065

333745-53-2

1000980

White to off-white solid powder

1.5±0.1 g/cm3

1.663

3.28

103

1

7

7

32

741

0

ZGYSGIYKAVUVOR-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C22H19ClN2O6S/c1-29-19-9-7-15(23)11-18(19)25(32(27,28)17-5-3-2-4-6-17)13-22(26)24-16-8-10-20-21(12-16)31-14-30-20/h2-12H,13-14H2,1H3,(H,24,26)

2-[N-(benzenesulfonyl)-5-chloro-2-methoxyanilino]-N-(1,3-benzodioxol-5-yl)acetamide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.26 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.26 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。