LX2343

BACE1 (β-site amyloid precursor protein cleaving enzyme 1): LX2343 inhibits BACE1 enzymatic activity with an IC₅₀ value of 11.43±0.36 μmol/L[1]
- PI3K (Phosphatidylinositol 3-kinase): LX2343 acts as a non-ATP competitive PI3K inhibitor; in vitro, with 10 μmol/L ATP, the IC₅₀ is 13.11±1.47 μmol/L; with 50 μmol/L ATP, the IC₅₀ is 13.86±1.12 μmol/L; with 100 μmol/L ATP, the IC₅₀ is 15.99±3.23 μmol/L[1]
- JNK (c-Jun N-terminal kinase): LX2343 suppresses JNK-mediated APP^{Thr668} phosphorylation [1]

LX2343 (5–20 μM) 促进 SH-SY5Y 细胞和原代星形胶质细胞中的 Aβ 清除，同时剂量依赖性地减少 HEK293-APPsw 和 CHO-APP 细胞中 Aβ 的积累。 LX2343 具有治疗 AD 的潜力，因为它通过促进清除和抑制 Aβ 生成来改善 APP/PS1 转基因小鼠的认知障碍。 HEK293-APPsw 细胞和 CHO-APP 细胞中的蛋白质印迹结果显示，LX2343 不影响 BACE1 蛋白水平。另一方面，体外BACE1酶活性实验表明，LX2343剂量依赖性地降低BACE1活性（使用TDC作为阳性对照），IC50为11.43±0.36 μM。我们研究了不同剂量的 ATP 对 LX2343 抑制作用的影响，以确定 ATP 和 LX2343 之间是否存在竞争。结果表明，ATP对LX2343对PI3K的抑制几乎没有影响。这一发现表明 LX2343 是一种非 ATP 竞争性 PI3K 抑制剂。根据参考文献 [1]，当暴露于 10 μM ATP 时，LX2343 的 IC50 为 13.11±1.47 μM，当暴露于 50 μM ATP 时，IC50 为 13.86±1.12 μM，当暴露于 100 μM ATP 时，IC50 为 15.99±3.23 μM。

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LX2343（5-20 μmol/L）可剂量依赖性降低链脲佐菌素（STZ）处理的HEK293-APPsw和CHO-APP细胞中β淀粉样蛋白（Aβ）的累积（包括Aβ₄₀和Aβ₄₂），经ELISA检测验证（单因素方差分析，Dunnett多重比较检验，n=3，P<0.05，P<0.01 vs STZ组）[1]
- Western blot分析显示，LX2343可降低HEK293-APPsw和CHO-APP细胞中JNK和APP^{Thr668}的磷酸化水平，减少sAPPβ蛋白表达量，且对BACE1蛋白表达量无影响（单因素方差分析，Dunnett多重比较检验，n=3，P<0.05，P<0.01 vs STZ组）；ELISA结果也证实该药物可降低上述细胞中sAPPβ的水平（单因素方差分析，Dunnett多重比较检验，n=3，P<0.05，P<0.01 vs STZ组）[1]
- LX2343对APP的非淀粉样生成途径无影响：在HEK293-APPsw和CHO-APP细胞中，该药物不影响ADAM10蛋白表达水平（Western blot检测，单因素方差分析，Dunnett多重比较检验，n=3），也不影响细胞内sAPPα的水平（ELISA检测，单因素方差分析，Dunnett多重比较检验，n=3）[1]
- ELISA结果表明，LX2343可促进STZ处理的SH-SY5Y细胞和原代星形胶质细胞中Aβ的清除（单因素方差分析，Dunnett多重比较检验，n=3，P<0.05，P<0.01 vs STZ组）[1]
- Western blot分析显示，LX2343可降低STZ处理的SH-SY5Y细胞和原代星形胶质细胞中PI3K、AKT、mTOR、P70S6、ULK1的磷酸化水平，减少p62蛋白表达量，并促进LC3的加工成熟（单因素方差分析，Dunnett多重比较检验，n=3，P<0.05，P<0.01 vs STZ组）；短期STZ刺激会增加SH-SY5Y细胞裂解物中AKT的磷酸化水平，而LX2343可逆转该效应（t检验，n=3，P<0.05 vs STZ组，#P<0.05，##P<0.01 vs DMSO组）[1]
- 对瞬时表达mRFP-GFP-LC3的SH-SY5Y细胞进行共聚焦激光扫描显微镜（CLSM）观察发现，LX2343可激活自噬（绿色和红色斑点分别代表GFP和mRFP，比例尺：5 μm，n=3）；基于氯喹（CQ）的ELISA实验显示，氯喹可升高Aβ水平，并部分逆转LX2343诱导的SH-SY5Y细胞中Aβ降低的效应（t检验，P<0.01 vs STZ组，##P<0.01 vs STZ+LX2343组，&&P<0.01 vs DMSO组）[1]
- LX2343可剂量依赖性抑制体外PI3K的活性（单因素方差分析，Dunnett多重比较检验，n=3，P<0.01 vs DMSO组）；MTT实验表明，LX2343对SH-SY5Y细胞的活力无影响（单因素方差分析，Dunnett多重比较检验，n=3）[1]

AD 痴呆症的流行动物模型是 APP/PS1 小鼠，它表达突变的人类早老素 1 蛋白以及嵌合的人类瑞典突变 APP。我们通过进行 MWM 测试来评估 LX2343 改善该模型中记忆障碍的能力。 APP/PS1转基因小鼠在8天的训练试验中的路径长度和逃避潜伏期明显长于非转基因小鼠，并且给予10 mg/kg LX2343明显抵消了较长的路径长度和逃避潜伏期。 7 和 8。与给予载体的转基因小鼠相比，给予 LX2343 的转基因小鼠在探针试验测定中更频繁地穿越平台的隐藏位置[1]。

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给APP/PS1转基因小鼠腹腔注射（ip）LX2343（10 mg·kg⁻¹·d⁻¹），连续给药100天，经莫里斯水迷宫（MWM）实验评估发现，该药物可显著改善小鼠的认知缺陷：重复测量的双因素方差分析显示，处理因素（P<0.0001）、时间因素（P<0.0001）及二者的交互作用均有统计学意义；平台实验中的逃避潜伏期缩短（n=10，P<0.05 vs TV组），探索实验中穿越平台的次数增加（t检验，n=10，P<0.01 vs TV组）[1]
- 对APP/PS1转基因小鼠脑组织切片进行硫黄素S染色发现，LX2343可显著减少脑内老年淀粉样斑块（比例尺：100 μm，t检验，n=4，P<0.05，P<0.01 vs TV组）[1]
- ELISA结果显示，LX2343可降低APP/PS1转基因小鼠大脑皮层和海马匀浆中Aβ的水平（t检验，n=10，P<0.05 vs TV组）[1]
- 对APP/PS1转基因小鼠大脑皮层匀浆进行Western blot分析发现，LX2343可降低PI3K、AKT、mTOR、P70S6、ULK1的磷酸化水平，减少p62蛋白表达量，促进LC3加工成熟（t检验，n=4，P<0.05，P<0.01 vs TV组）；同时可降低JNK和APP^{Thr668}的磷酸化水平，减少sAPPβ蛋白表达量（对BACE1蛋白表达量无影响）（t检验，n=4，P<0.05，P<0.01 vs TV组）；还可增加突触素（synaptophysin）、PSD95和VAMP2的蛋白表达量（t检验，n=4，P<0.05，P<0.01 vs TV组）[1]
- ELISA结果证实，LX2343可降低APP/PS1转基因小鼠大脑皮层和海马匀浆中sAPPβ的水平（t检验，n=10，P<0.05，P<0.01 vs TV组）[1]
- LX2343处理可延长野生型黑腹果蝇的寿命[1]

BACE1酶活性实验：构建包含BACE1酶和相应底物的反应体系，向体系中加入不同浓度的LX2343，在特定条件下孵育后检测BACE1的酶活性，根据量效曲线计算LX2343抑制BACE1的IC₅₀值；以2,2′,4′-三羟基查尔酮（TDC，一种非竞争性BACE1抑制剂）作为阳性对照（单因素方差分析，Dunnett多重比较检验，P<0.01 vs DMSO组；TDC组采用t检验，n=3）[1]
- PI3K酶活性实验：采用纯化的PI3K酶和对应底物进行体外PI3K活性检测，在无ATP或不同浓度ATP（10 μmol/L、50 μmol/L、100 μmol/L）存在的条件下，向反应体系中加入不同浓度的LX2343，在最优条件下孵育后检测PI3K的酶活性，计算不同ATP浓度下LX2343的IC₅₀值；以渥曼青霉素（wortmannin，一种PI3K抑制剂）作为阳性对照（单因素方差分析，Dunnett多重比较检验，P<0.01 vs DMSO组；渥曼青霉素组采用t检验，n=3）[1]

HEK293-APPsw和CHO-APP细胞中Aβ累积检测：用STZ处理HEK293-APPsw和CHO-APP细胞以诱导Aβ累积，同时加入不同浓度的LX2343（5-20 μmol/L），孵育特定时间后收集细胞培养上清或裂解液，通过ELISA检测Aβ₄₀和Aβ₄₂的水平，与仅STZ处理组对比，评估LX2343对Aβ累积的抑制作用（单因素方差分析，Dunnett多重比较检验，n=3，P<0.05，P<0.01 vs STZ组）[1]
- SH-SY5Y细胞和原代星形胶质细胞中Aβ清除检测：用STZ处理SH-SY5Y细胞和原代星形胶质细胞，随后加入不同浓度的LX2343，孵育后检测细胞或上清中Aβ的水平，评估LX2343对Aβ清除的促进作用（单因素方差分析，Dunnett多重比较检验，n=3，P<0.05，P<0.01 vs STZ组）[1]
- 信号蛋白Western blot分析：将HEK293-APPsw、CHO-APP、SH-SY5Y、原代星形胶质细胞经STZ和LX2343处理后裂解，提取总蛋白；将蛋白样品进行SDS-PAGE分离，转膜后与JNK、p-JNK、APP^{Thr668}、p-APP^{Thr668}、BACE1、sAPPβ、ADAM10、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR、P70S6、p-P70S6、ULK1、p-ULK1、p62、LC3、GAPDH（内参）等一抗孵育，再与二抗孵育后显影并定量分析条带，探究LX2343对相关信号通路的影响（单因素方差分析，Dunnett多重比较检验，n=3，P<0.05，P<0.01 vs STZ组）[1]
- sAPPα和sAPPβ的ELISA检测：收集经STZ和LX2343处理的HEK293-APPsw和CHO-APP细胞的培养上清或裂解液，采用特异性ELISA试剂盒检测sAPPα和sAPPβ的水平，并进行统计学分析（单因素方差分析，Dunnett多重比较检验，n=3）[1]
- CLSM检测自噬：将SH-SY5Y细胞瞬时转染mRFP-GFP-LC3质粒以表达融合蛋白，转染后用STZ和LX2343处理细胞，通过共聚焦激光扫描显微镜观察细胞，分析绿色（GFP）和红色（mRFP）斑点的数量及分布，评估自噬流（比例尺：5 μm，n=3）[1]
- 基于CQ的Aβ ELISA实验：用STZ、LX2343、氯喹（CQ，自噬抑制剂）单独或联合处理SH-SY5Y细胞，孵育后通过ELISA检测细胞中Aβ的水平，验证自噬在LX2343介导的Aβ清除中的作用（t检验，P<0.01 vs STZ组，##P<0.01 vs STZ+LX2343组，&&P<0.01 vs DMSO组）[1]
- MTT细胞活力实验：将SH-SY5Y细胞接种于96孔板，加入不同浓度的LX2343，孵育特定时间后加入MTT溶液，甲臜结晶溶解后在特定波长下检测吸光度，计算细胞活力以评估LX2343的细胞毒性（单因素方差分析，Dunnett多重比较检验，n=3）[1]

和 21 mg/kg；3% DMSO 和 5% Tween-80；静脉注射
雄性 Sprague Dawley (SD) 大鼠

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APP/PS1 转基因小鼠实验：将 APP/PS1 转基因小鼠随机分为几组（TV：注射载体的转基因小鼠；LX2343：注射 LX2343 的转基因小鼠；NV：注射载体的非转基因小鼠作为对照）。LX2343 以 10 mg·kg⁻¹·d⁻¹ 的剂量腹腔注射 (ip)，连续 100 天。给药结束后，使用 Morris 水迷宫 (MWM) 测试评估小鼠的认知能力，包括训练试验（记录逃避潜伏期）和探针试验（计数穿越平台的次数）。随后，处死小鼠，收集脑组织进行硫黄素S染色（检测老年斑）、ELISA（检测皮质和海马匀浆中Aβ和sAPPβ的水平）以及Western blot分析（检测皮质匀浆中的信号蛋白）（行为学和ELISA检测n=10，Western blot和硫黄素S染色n=4）[1]
- 野生型黑腹果蝇寿命实验：将野生型黑腹果蝇分为对照组和LX2343处理组。通过适当途径（未指定）以一定剂量（未指定）给予LX2343，并持续监测果蝇的存活状态，记录寿命并计算平均寿命[1]

[1]. Small molecule LX2343 ameliorates cognitive deficits in AD model mice by targeting both amyloid β production and clearance. Acta Pharmacol Sin. 2016 Sep;37(10):1281-1297.

LX2343是一种小分子，化学名称为N-(1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-2-[5-氯-2-甲氧基(苯磺酰基)苯胺基]乙酰胺[1]
- LX2343的抗淀粉样蛋白作用归因于两种机制：(1)通过抑制JNK介导的APP^{Thr668}磷酸化（从而减少APP裂解）和抑制BACE1酶活性来抑制Aβ的产生； (2) LX2343作为一种非ATP竞争性PI3K抑制剂，通过负调控AKT/mTOR信号通路来促进Aβ清除，从而刺激自噬[1]
- LX2343通过抑制Aβ生成和促进Aβ清除来改善APP/PS1转基因小鼠的认知功能障碍，凸显了其在阿尔茨海默病（AD）治疗中的潜力[1]
- LX2343通过增加大脑皮层中突触素、PSD95和VAMP2的蛋白水平来保护APP/PS1转基因小鼠的突触完整性[1]

C22H19CLN2O6S

474.07

474.065

333745-53-2

1000980

White to off-white solid powder

1.5±0.1 g/cm3

1.663

3.28

103

1

7

7

32

741

0

ZGYSGIYKAVUVOR-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C22H19ClN2O6S/c1-29-19-9-7-15(23)11-18(19)25(32(27,28)17-5-3-2-4-6-17)13-22(26)24-16-8-10-20-21(12-16)31-14-30-20/h2-12H,13-14H2,1H3,(H,24,26)

2-[N-(benzenesulfonyl)-5-chloro-2-methoxyanilino]-N-(1,3-benzodioxol-5-yl)acetamide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.26 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.26 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。