STAT3 (signal transducer and activator of transcription 3) [1]

JAK1 and JAK2 (upstream kinases of STAT3) [1]

石蒜碱对 PNT1A 细胞增殖的影响较小，但对上述四种前列腺癌细胞系的增殖具有周期性抑制作用，IC50 值范围为 5 μM 至 10 μM [1]。为了控制或保护内质网中的 SREBF，内质网至高尔基体转运蛋白 SCAP（SREBF 分子伴侣）通过与 INSIG1（胰岛素诱导基因）形成复合物而发生结构转变 [2]。石蒜碱（5-40 μM；16 小时）以剂量和时间依赖的方式显著降低 SREBF 活性（高达 -70%），且对细胞无明显影响。石蒜碱（10-20 μM；2-16 小时）可降低 HL-7702 细胞中成熟 SREBF1 和 SREBF2 蛋白的含量 [2]。 ABCG5 和 ABCG8 是 NR1H3 的两个靶基因，不受石蒜碱（20 μM；16 小时）或 NR1H3 转录激活的影响。NR1H3 的甾醇前向转运活性被激活 [1]。石蒜碱（0-25 μM；48 小时）处理显著且呈剂量依赖性地抑制了 C8161 细胞中血管内皮钙黏蛋白 (VE-cadherin) 的表达，并轻微降低了 Sema4D 的表达。用石蒜碱（0-25 μM）处理48小时后，C8161细胞中VE-钙黏蛋白的表达水平显著降低，这主要归因于其他6个基因的表达[3]。

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石蒜碱以剂量依赖的方式抑制激素难治性前列腺癌细胞系PC-3M、DU145、LNCaP和22RV1的增殖，处理48小时后IC50值在5 μM至10 μM之间，而对正常人前列腺上皮永生化细胞系PNT1A几乎没有影响。[1]

石蒜碱（0-10 μM）以剂量依赖的方式显著抑制PC-3M细胞的伤口愈合（12小时）、迁移（Transwell实验5-7小时）和侵袭（Matrigel包被Transwell实验12小时）。 [1]

石蒜碱 (5 μM) 显著抑制 PC-3M、DU145、LNCaP 和 22RV1 细胞的克隆形成（8 天）。[1]

活/死细胞染色显示，石蒜碱 (0–50 μM，48 小时) 增强了 PC-3M 细胞的死亡。[1]

石蒜碱 (0–50 μM，48 小时) 以剂量依赖的方式诱导 PC-3M 细胞凋亡，凋亡细胞比例从 10.04% 增加到 54.08%（流式细胞术 Annexin V/PI 双染）。在 DU145 和 LNCaP 细胞中也观察到了类似的凋亡效应。 [1]

蛋白质印迹分析显示，石蒜碱（0–25 μM，48 h）可诱导PC-3M细胞中PARP和caspase-3的裂解。[1]

石蒜碱（10 ng/mL EGF刺激；0、10、25 μM石蒜碱，48 h）可逆转EGF诱导的PC-3M细胞EMT：降低N-钙黏蛋白、波形蛋白、纤连蛋白和Twist（mRNA和蛋白）的表达，并增加E-钙黏蛋白的表达。此外，石蒜碱还抑制MMP2和MMP9的表达，并激活EGF刺激下的STAT3水平。 [1]

石蒜碱（10 μM，48 小时）降低了 DU145、PC-3M 和 LNCaP 细胞中内源性 STAT3 和 p-STAT3 的水平（其中 PC-3M 细胞的基线水平最高，且在迁移实验中对石蒜碱的反应最强）。[1]

siRNA 介导的 STAT3 敲低（转染 48 小时）消除了石蒜碱诱导的 PC-3M 细胞活力下降，表明其抗癌作用依赖于 STAT3 的表达。[1]

如蛋白质印迹法所示，石蒜碱（10 ng/mL EGF，10 μM 石蒜碱，24 小时）显著抑制了 STAT3（Tyr705）、JAK1（Tyr1022/1023）和 JAK2（Tyr1007/1008）的磷酸化。 [1]

ChIP 实验表明，石蒜碱（0–25 μM，48 小时）以浓度依赖的方式降低 STAT3 与靶基因 Bcl-xL、cyclin D1 和 Twist 的 DNA 结合活性，有效浓度约为 10 μM。[1]

石蒜碱有效抑制了 EGF 刺激下 STAT3 从细胞质向细胞核的转位（免疫荧光）。[1]

定量 PCR 分析证实，石蒜碱下调了 STAT3 靶基因（cyclin D1、Bcl-2、Bcl-xL、MMP2、Twist）的表达。[1]

石蒜碱（面部给药；15 mg/kg，30 mg/kg；每日一次）可减弱脂肪偶联和消耗疗法，并增强小鼠移植片、前体和成熟SREBF的脂肪分层和氧化[2]。

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皮下异种移植模型（裸鼠PC-3M细胞）：石蒜碱5 mg/kg/天或10 mg/kg/天（腹腔注射，每日一次，持续18天）可显著抑制肿瘤生长。对照组平均肿瘤体积为2154 ± 119 mm³，而石蒜碱治疗组分别为989 ± 32 mm³（5 mg/kg）和478 ± 47 mm³（10 mg/kg）。10 mg/kg剂量下肿瘤重量减少约80%，且无明显毒性。 [1]

原位异种移植模型（将PC-3M-luc细胞注射到前列腺背外侧）：每天腹腔注射5或10 mg/kg的石蒜碱（持续30天）可显著降低代表肿瘤生长的生物发光信号（光子通量）。归一化光子通量：对照组（82 ± 5.78）×10⁵ pc/sec/cm²/sr；5 mg/kg组（41 ± 2.34）×10⁵；10 mg/kg组（23 ± 4.01）×10⁵。石蒜碱还抑制了肿瘤向肝脏、肺、肾脏、脾脏、骨骼和淋巴结的转移，并提高了小鼠的存活率（第30天死亡数：对照组6/20，5 mg/kg组4/20，10 mg/kg组2/20）。 [1]

经石蒜碱（10 mg/kg）处理的小鼠肿瘤切片的免疫组织化学分析显示，与对照组相比，E-钙黏蛋白和切割型caspase-3的表达增加，而p-STAT3和Ki-67的表达降低。[1]

在所给剂量下，石蒜碱处理对小鼠体重影响甚微，且主要器官未见明显病理改变。[1]

染色质免疫沉淀 (ChIP) 实验用于评估 STAT3 DNA 结合活性：将 PC-3M 细胞用不同浓度的石蒜碱 (0、1、5、10 和 25 μM) 处理 48 小时，然后用 1% 甲醛固定并裂解。用抗 STAT3 抗体或正常兔 IgG 抗体对染色质样品进行免疫沉淀，并使用 SYBR Premix Ex Taq 试剂盒通过定量 PCR 检测其与靶基因启动子 (Bcl-xL、cyclin D1、Twist) 的结合情况。β-肌动蛋白作为内参。实验结果表明，石蒜碱以浓度依赖的方式降低 STAT3 DNA 结合活性。 [1]

激酶磷酸化Western blot分析：将PC-3M细胞用10 ng/mL EGF和10 μM石蒜碱处理24小时，然后裂解细胞，进行SDS-PAGE电泳和免疫印迹分析，使用针对EGFR、JAK1、JAK2、STAT3及其磷酸化形式（p-EGFR、p-JAK1 Tyr1022/1023、p-JAK2 Tyr1007/1008、p-STAT3 Tyr705）的特异性抗体。β-肌动蛋白作为上样对照。结果表明，石蒜碱抑制了EGF诱导的JAK1、JAK2和STAT3的磷酸化。[1]

细胞活力检测[2]
细胞类型： HL-7702/SRE-Luc 细胞
测试浓度： 16 小时
孵育时间： 5 μM；10 μM；20 μM；40 μM
实验结果： 对 HL-7702 细胞无细胞毒性。

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蛋白质印迹分析[2]
细胞类型： HL-7702/SRE-Luc 细胞
测试浓度： 2 小时、4 小时、8 小时、12 小时、16 小时
孵育时间： 10 μM； 20 μM
实验结果： p-SREBF1、m-SREBF1、p-SREBF2 和 p-SREBF1 蛋白表达降低。

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RT-PCR[3]
细胞类型：C8161 细胞
测试浓度： 0 μM、1.56 μM、3.13 μM、6.25 μM、12.5 μM、25 μM
孵育时间： 48 小时
实验结果： 呈剂量依赖性地显著抑制 VE-cadherin 的表达，并略微降低 C8161 细胞中 Sema4D 的表达。

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细胞活力检测 (MTS)：将 PCa 细胞和 PNT1A 细胞（5×10³ 个细胞/孔）用不同浓度的石蒜碱 (0、0.05、0.1、1、5、10、20、50、100 μM) 处理48 小时或指定时间（24–96 小时）。加入 Aqueous One 溶液，并在 490 nm 处测量吸光度。进行了三次独立实验，每次实验均设置三个重复。[1]

伤口愈合迁移实验：将肿瘤细胞培养至 6 孔板中完全融合，用无菌移液器吸头制造伤口。加入含 10% FBS 和不同浓度石蒜碱（0–10 μM）的新鲜培养基。在 37°C 下孵育 12 小时后，用 3.7% 多聚甲醛固定细胞并拍照。手动计数迁移的细胞。[1]

Transwell 迁移实验：将血清饥饿的 PCa 细胞（5×10⁴ 个细胞，100 μL 含 0.5% FBS 的培养基）用石蒜碱（0–10 μM）预处理 30 分钟，然后接种于上室（孔径 8 μm）。下室含有 600 μL 含 10% FBS 的培养基。孵育 5-7 小时后，去除未迁移的细胞，用 3.7% 冷多聚甲醛固定迁移的细胞，并用 0.1% 结晶紫染色。拍摄图像并在 4 个随机视野中计数迁移的细胞。重复三次独立实验，每次实验均设置三个复孔。[1]

侵袭实验：与迁移实验类似，但 Transwell 小室涂有 Matrigel。将细胞在 6 孔板中用石蒜碱 (0-10 μM) 预处理 12 小时，然后将 5×10⁴ 个细胞悬浮于无血清培养基中，加入上室。下室使用完全培养基。在 37°C 下侵袭 12 小时后，对侵袭的细胞进行染色和计数。[1]

克隆形成实验：将肿瘤细胞接种于 6 孔板中，培养 24 小时后，用不同浓度的石蒜碱 (0-10 μM) 处理。第 8 天，用 3.7% 多聚甲醛固定菌落，用 0.1% 结晶紫染色，并进行人工计数。[1]

活/死细胞染色：用石蒜碱 (0–50 μM) 处理细胞 48 小时，然后用钙黄绿素 AM（将活细胞染成绿色）和 EthD-II（将死细胞染成红色）染色。通过荧光显微镜观察。[1]

细胞周期分析：用石蒜碱处理 PCa 细胞 36 小时，用 PBS 洗涤，在 4°C 下用冰冷的 70% 乙醇固定至少 12 小时，然后在流式细胞术分析前加入 PI 工作液。 [1]

细胞凋亡检测（Annexin V/PI）：用石蒜碱（0–50 μM）处理前列腺癌细胞48小时后收集，洗涤，用Annexin V-FITC和PI染色15分钟，然后通过流式细胞术进行评估。[1]

Western blotting：用石蒜碱处理前列腺癌细胞指定时间和浓度后，用RIPA裂解缓冲液裂解。采用BCA法测定蛋白浓度。将样品进行8–12% SDS-PAGE凝胶电泳，转移至PVDF膜，与特异性抗体孵育过夜，使用Odyssey系统显色。 [1]

免疫荧光染色：将前列腺癌细胞接种于明胶包被的盖玻片上，用石蒜碱处理24小时，用3.7%多聚甲醛固定，用0.1% Triton X-100透化，用1% BSA封闭，与STAT3抗体孵育过夜，然后与二抗孵育1小时，最后用DAPI进行细胞核染色。使用共聚焦显微镜拍照。[1]

RT-PCR和定量实时PCR：提取RNA，使用miScript II RT试剂盒进行逆转录，cDNA用于miScript引物分析的实时PCR。Bcl-2、Bax、cyclin D1、β-actin、E-cadherin和Twist的引物如前所述。 [1]

STAT3 siRNA 检测：将 PCa 细胞接种于 3.5 cm 培养皿中，使其贴壁 16 小时，然后在完全培养基中用 STAT3-siRNA 或非靶向对照 siRNA 瞬时转染 48 小时。洗涤细胞后，将其转移至完全培养基中继续培养 48 小时，然后收集细胞用于后续实验（MTS 法检测细胞活力，Western blotting 法检测细胞活力）。[1]

动物/疾病模型：喂食高脂饮食 (HFD) 的 C57BL/6J 小鼠 [2]
剂量： 15 mg/kg，30 mg/kg
给药途径： 口服；每日一次
实验结果： 改善小鼠高脂饮食诱导的高血压疾病、血脂异常、肝脂肪变性和胰岛素抵抗。

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皮下异种移植模型：将 PC-3M 细胞（每只小鼠 1×10⁶ 个，溶于 0.1 mL PBS）皮下接种于裸鼠右侧背部。当肿瘤体积达到约 100 mm³ 时，将小鼠分为 3 组（每组 n=10），并连续 18 天每天腹腔注射 DMSO（溶剂对照）或石蒜碱（5 mg/kg/天或 10 mg/kg/天）。每 2 天监测一次小鼠的体重和肿瘤大小。第 18 天，处死小鼠并解剖肿瘤异种移植瘤。[1]

原位移植异种移植模型：将 PC-3M-luc 细胞（每只小鼠 5×10⁵ 个细胞，溶于 0.02 mL PBS）原位移植到麻醉裸鼠的前列腺背极。7 天后，根据 IVIS 2000 Luminal Imager 检测到的光子通量，将荷瘤小鼠分为三组（每组 n=20）。每天腹腔注射石蒜碱（5 mg/kg/天或10 mg/kg/天）或二甲基亚砜（DMSO）。每5天记录一次管腔图像和光子通量。30天后，处死小鼠，切除前列腺肿瘤，并通过生物发光法评估肝脏、肺、肾脏、脾脏和骨骼的转移情况。[1]

代谢/代谢物
副加氧酶 (PON1) 是有机磷代谢中的关键酶。PON1 可通过水解作用使某些有机磷化合物失活。PON1 可水解多种有机磷农药和神经毒剂（例如梭曼、沙林和 VX）的活性代谢物。PON1 的多态性导致该酯酶的酶活性水平和催化效率存在差异，这反过来表明不同个体可能更容易受到有机磷暴露的毒性作用的影响。

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毒性概述
石蒜碱是一种胆碱酯酶抑制剂，也称为乙酰胆碱酯酶 (AChE) 抑制剂。胆碱酯酶抑制剂（或“抗胆碱酯酶”）可抑制乙酰胆碱酯酶的活性。由于乙酰胆碱酯酶在生理过程中发挥着至关重要的作用，因此干扰其活性的化学物质是强效神经毒素；即使是低剂量也会导致唾液分泌过多和流泪，随后出现肌肉痉挛，最终导致死亡。研究表明，神经毒素和许多农药中的物质通过与乙酰胆碱酯酶活性位点的丝氨酸残基结合而发挥作用，从而完全抑制该酶的活性。乙酰胆碱酯酶分解神经递质乙酰胆碱，乙酰胆碱在神经肌肉接头处释放，导致肌肉或器官松弛。乙酰胆碱酯酶抑制剂的作用机制是使乙酰胆碱得以积累并发挥其持续作用，从而确保神经冲动的持续传递，防止肌肉收缩停止。最常见的乙酰胆碱酯酶抑制剂是含磷化合物，其设计目的是与酶的活性位点结合。其结构要求包括一个带有两个亲脂基团的磷原子、一个离去基团（例如卤素或硫氰酸根基团）和一个末端氧原子。

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给予小鼠特定剂量（5 和 10 mg/kg/天，腹腔注射）的石蒜碱治疗对小鼠体重影响甚微，与对照组相比，主要器官（肝、肺、肾、脾、骨）未见明显病理变化。[1]

治疗剂量的石蒜碱对小鼠的毒性较低，这与先前发表的结果一致。[1]

[1]. Lycorine is a novel inhibitor of the growth and metastasis of hormone-refractory prostate cancer.Oncotarget. 2015 Jun 20;6(17):15348-61.

[2]. Discovery of a Potent SCAP Degrader That Ameliorates HFD-induced Obesity, Hyperlipidemia and Insulin Resistance via an Autophagy-Independent Lysosomal Pathway. Autophagy. 2020 May 20;1-22.

[3]. Lycorine hydrochloride inhibits metastatic melanoma cell-dominant vasculogenic mimicry. Pigment cell & melanoma research 25, 630-638, doi:10.1111/j.1755-148X.2012.01036.x (2012).

石蒜碱是一种吲哚利啶生物碱，其结构为3,12-二脱氢加兰坦，2位和9位被羟基取代，10位被亚甲二氧基取代。它从亚洲文殊兰（Crinum asiaticum）中分离得到，并已被证实具有抗疟活性。石蒜碱可作为蛋白质合成抑制剂、抗疟药、植物代谢产物和抗冠状病毒剂发挥作用。它是加兰坦氢化物的衍生物。据报道，石蒜碱存在于文殊兰（Crinum moorei）、君子兰（Clivia nobilis）以及其他一些具有相关数据的生物体中。石蒜碱是一种有毒的结晶生物碱，存在于多种石蒜科植物中，例如栽培灌木百合（君子兰，Clivia miniata）、石蒜和水仙。摄入一定剂量的石蒜碱可能导致剧毒甚至致命。石蒜碱中毒的症状包括呕吐、腹泻和抽搐。石蒜碱的定义可在mercksource.com网站上找到。尽管如此，它有时仍被用于药用，这也是一些团体采摘非常受欢迎的君子兰（Clivia miniata）的原因之一。
另见：盐酸石蒜碱（注：已移至此处）。

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这是首项研究石蒜碱在JAK/STAT3信号通路中对前列腺癌（PCa）肿瘤生长和转移的抗癌机制作用的研究。石蒜碱被认为是一种潜在的激素难治性前列腺癌治疗药物。[1]

石蒜碱通过STAT3介导的Twist蛋白减少逆转上皮间质转化（EMT），为抑制癌症转移提供了一种新的机制。[1]

石蒜碱促进PC-3M细胞的上皮细胞特性并抑制其间质特性。 [1]

石蒜碱的抗癌作用依赖于STAT3的表达。[1]

石蒜碱抑制STAT3的转录活性，降低其与靶基因（如Bcl-xL、cyclin D1和Twist）的DNA结合。[1]

石蒜碱有望成为药物重定位的候选药物，在毒性和药代动力学方面具有潜在优势（尽管本研究未直接测量，但根据文献进行了讨论）。[1]

C16H17NO4

287.3105

287.115

476-28-8

Lycorine hydrochloride monohydrate;6150-58-9;Lycorine hydrochloride;2188-68-3

72378

White to off-white solid powder

1.5±0.1 g/cm3

477.4±45.0 °C at 760 mmHg

253-255ºC (dec.)

242.5±28.7 °C

0.0±1.3 mmHg at 25°C

1.733

0.77

62.16

2

5

0

21

481

4

C1CN2CC3=CC4=C(C=C3[C@H]5[C@H]2C1=C[C@@H]([C@H]5O)O)OCO4

XGVJWXAYKUHDOO-DANNLKNASA-N

InChI=1S/C16H17NO4/c18-11-3-8-1-2-17-6-9-4-12-13(21-7-20-12)5-10(9)14(15(8)17)16(11)19/h3-5,11,14-16,18-19H,1-2,6-7H2/t11-,14-,15+,16+/m0/s1

(1S,17S,18S,19S)-5,7-dioxa-12-azapentacyclo[10.6.1.02,10.04,8.015,19]nonadeca-2,4(8),9,15-tetraene-17,18-diol

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~25 mg/mL (~87.01 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.70 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.70 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.70 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 25 mg/mL (87.01 mM) in 50% PEG300 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。