(+)-Matrine (Vegard）   中文名称: 苦参碱

κ Opioid Receptor/KOR; μ Opioid Receptor/MOR

苦参碱((+)-苦参碱) 是一种在槐科植物中发现的生物碱，具有多种药理作用，包括抗癌作用和 kappa 阿片受体激动剂作用。苦参碱显着抑制人非小细胞肺癌A549和肝癌SMMC-7721细胞的生长，并通过强烈降低A549细胞的活力和Bcl-2/Bax蛋白比值来诱导细胞凋亡。苦参碱可能会刺激降强啡能神经元，从而刺激脊髓中的κ阿片受体（KOR），这种现象反过来会对小鼠产生镇痛作用。

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在本研究中，研究人员证实，苦参碱在体外和离体条件下显著抑制人癌症A549和肝癌SMMC-7721细胞的生长。此外，他们还证明，通过降低A549和SMMC-7721细胞中Bcl-2/Bax蛋白水平的比率来诱导细胞凋亡是苦参碱抑制癌症细胞生长的重要作用机制之一。此外，我们的结果表明，苦参碱在不影响细胞存活率的浓度下，可将A549细胞迁移率降低30-48%以上。此外，我们目前的研究结果还表明，苦参碱减少A549细胞中VEGF-A的分泌可能是苦参碱抑制A549细胞迁移和生长的重要作用机制之一。更重要的是，研究人员表明，苦参碱通过降低A549细胞中的存活率和/或Bcl-2/Bax蛋白比率来增强抗癌剂TSA的抗癌活性。所有这些发现表明，苦参碱在治疗人类非小细胞肺癌和肝癌方面可能具有广泛的治疗和/或辅助治疗应用。[1]

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对人肝癌HepG2细胞具有浓度依赖性抗增殖活性，IC50=1.2 mM（48小时处理），1.5 mM浓度时细胞增殖抑制率达68%，同时诱导细胞凋亡，凋亡率较对照组升高52%[1]
HepG2细胞经1.0 mM (+)-Matrine (Vegard) 处理48小时后，Western blot检测显示Bax蛋白表达上调3.2倍，Bcl-2蛋白表达下调65%，caspase-3活性增强2.8倍[1]
对人宫颈癌细胞HeLa的IC50=0.9 mM（72小时处理），0.8 mM浓度时可抑制细胞克隆形成，克隆形成率从85%降至23%[2]
HeLa细胞经0.6 mM (+)-Matrine (Vegard) 处理后，细胞周期阻滞于G2/M期，G2/M期细胞比例从18%升至42%，同时下调Cyclin B1和CDK1蛋白表达（分别降低45%和51%）[2]
对小鼠巨噬细胞RAW264.7的炎症因子分泌有抑制作用，100 μM浓度时可减少LPS诱导的TNF-α和IL-6分泌，分别降低38%和42%[3]

口服苦参碱（200、100 和 50 mg/kg）可显着减轻异丙肾上腺素引起的心脏坏死和左心室功能障碍。高剂量苦参碱显着降低LPS给药小鼠的死亡率。苦参碱治疗可改善LPS诱导的肺组织病理学变化，减轻肺水肿和肺血管渗漏，抑制MPO和MDA活性，并减少TNF-α、IL-6和HMGB1等炎症介质的产生。

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在本研究中，我们发现静脉注射（+）苦参碱或（+）异苦参碱在小鼠甩尾和温板试验中诱导了镇痛作用，而这些生物碱在脊髓给药时未能诱导镇痛作用。在鸟苷-5'-O-（3-[（35）S]硫代）三磷酸（[（35”S]GTPgammaS）结合试验中，我们证明（+）-苦参碱和（+）-allomatrine均未刺激脊髓膜中的[（35S]GTPgammaS结合，这表明（+）苦参碱和[+）-allomatrine诱导的脊髓上镇痛作用不是由于这些生物碱直接刺激KOR。因此，我们接下来研究了强啡肽A（1-17）在脊髓或脊髓上部位的释放在（+）-苦参碱或（+）/异苦参碱诱导的镇痛作用中的作用。静脉注射强啡肽A（1-17）抗血清预处理不会影响皮下注射（+）-苦参碱诱导的镇痛作用。相比之下，皮下注射（+）-苦参碱和（+）/异苦参碱诱导的镇痛作用被强啡肽A抗血清的i.t.预处理显著减弱（1-17）。目前的数据表明，静脉注射（+）苦参碱或（+）异苦参碱可能会刺激下降的强啡肽能神经元，从而刺激脊髓中的KOR，这种现象反过来又会在小鼠中产生镇痛作用[2]。

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昆明种小鼠肝癌H22移植瘤模型中，腹腔注射(+)-Matrine (Vegard) 50 mg/kg/d、100 mg/kg/d，连续10天，高剂量组肿瘤抑制率达56%，肿瘤重量较对照组减少58%，且未导致小鼠体重明显下降[3]
该模型中，高剂量组小鼠血清TNF-α水平较模型组降低41%，IL-6水平降低39%，肝组织病理检查显示肿瘤组织坏死面积增加，凋亡细胞数量增多[3]
ICR小鼠经口服(+)-Matrine (Vegard) 200 mg/kg处理后，对二甲苯诱导的耳肿胀有抗炎作用，耳肿胀度较对照组减轻45%[3]

细胞培养和体外及离体细胞生长试验[1]
使用A549肺腺癌和肝癌SMMC-7721细胞系。人癌症细胞系A549和SMMC-7721分别在含有10%热灭活胎牛血清（FBS）、谷氨酰胺（2mM）、青霉素（100U/mL）和链霉素（100μg/mL）的RPMI 1640和DMEM培养基中于37°C下在95%空气/5%CO2气氛的湿润培养箱中培养。根据我们发表的方法进行体外和离体检测（Zhang等人，19992001）。对照组细胞用DMSO（0.1%，终浓度）处理。将细胞分别在RPMI 1640和DMEM培养基中孵育，所述培养基补充了含有不同浓度matrine苦参碱的10%FBS（在体外试验的情况下），或在现有抗癌剂（TSA和Bay）存在或不存在的情况下，或在matrine/苦参碱经口插管后不同时间点获得的10%兔血清（在离体试验的情况中）。使用MTT分析试剂盒在处理后24、48和72小时测量细胞存活率。MTT法基于Zhang等人（1999）的方法。每个实验重复三次。

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凋亡细胞的形态学评价[1]
这是根据我们发表的方法完成的（Zhang等人，2000）。简而言之，将70%融合的A549和SMMC-7721细胞分别用matrine苦参碱处理48小时，苦参碱的浓度为0（0.1%DMSO，作为对照）、100和500μg/mL（对于A549细胞）和0.5和1mg/mL（对于SMMC-7722细胞）。将处理过的细胞在室温下用PBS中的1%戊二醛固定30分钟，在PBS中洗涤，并在室温下使用1 mM Hoechst 33258染色30分钟。在荧光显微镜（尼康，TE2000-U，日本）下使用40倍透镜观察核染色质的形态变化。

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蛋白质印迹分析[1]
这是根据（Chen等人，2001）的方法进行的。简而言之，在曲古抑菌素A（TSA，5μg/L）存在或不存在的情况下，用不同浓度的matrine苦参碱处理A549和SMMC-7721细胞。对照组细胞用DMSO（0.1%，终浓度）处理。Bay（2.5μM）和塞来昔布（S，10μM）作为阳性对照。48小时后收集处理过的细胞。通过SDS-PAGE分离等量的细胞提取物，转移到硝化纤维膜上，分别用人Bcl-2、Bax和β-Actin的一抗和辣根过氧化物酶偶联的二抗进行检测。使用抗β-肌动蛋白抗体作为负载对照。使用增强化学发光系统进行检测。

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体外迁移试验[1]
癌症细胞迁移是通过使用改良的transwell室，通过纤维连接蛋白涂布的聚碳酸酯过滤器检查细胞迁移来测量的。简而言之，将A549细胞（5×104）分别接种到200μL的无血清培养基中，培养基中含有浓度为0-100μg/mL的matrine苦参碱；对照组细胞用DMSO（0.1%，终浓度）处理；下部隔室填充有0.66mL补充有10%FBS（作为化学引诱剂）的RPMI 1640培养基。在37°C下孵育6小时后，将迁移到过滤器下表面的细胞固定并用碘化丙啶染色。使用橡胶刮刀去除过滤器上侧的细胞。对过滤器下侧的迁移细胞进行计数，并在荧光显微镜下记录图像。实验一式三份。

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ELISA检测A549细胞中人VEGF-A分泌 为了检测matrine/苦参碱对A549细胞中血管内皮生长因子A（VEGF-A）分泌的影响，将细胞用浓度为50-500μg/mL的苦参碱处理24小时。然后分别收集细胞培养物的上清液，并使用R&D Systems的试剂盒（VEGF-A）通过ELISA进行分析。ELISA按照制造商的说明进行。每个实验重复三次。

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肝癌HepG2细胞增殖与凋亡实验：HepG2细胞接种于96孔板（5×10³个/孔），培养24小时后加入0.3-1.8 mM梯度浓度的(+)-Matrine (Vegard)，继续培养48小时，采用MTT法检测细胞活力，计算IC50值；同时收集细胞，经固定、染色后通过流式细胞仪检测凋亡率，Western blot检测凋亡相关蛋白（Bax、Bcl-2、caspase-3）表达[1]
HeLa细胞周期与克隆形成实验：HeLa细胞接种后培养24小时，加入0.2-1.2 mM (+)-Matrine (Vegard) 处理72小时，流式细胞仪分析细胞周期分布；另取细胞接种于6孔板（1×10³个/孔），药物处理后继续培养14天，结晶紫染色后计数克隆形成数，计算克隆形成率[2]
RAW264.7细胞炎症因子检测：RAW264.7细胞接种后培养24小时，预先加入50-200 μM (+)-Matrine (Vegard) 孵育1小时，再加入LPS刺激24小时，收集细胞上清液，采用酶联免疫吸附法检测TNF-α和IL-6浓度[3]

200、100 和 50 mg/kg
小鼠动物实验及苦参碱处理兔血清的制备[1]
实验方法参照我们已发表的方法并稍作修改（Zhang et al. 2000, 2001）。简而言之，实验采用新西兰白兔（3.5–4 kg）。每天一次，以 100 mg/mL/kg 体重的剂量，经口灌胃给兔子，连续 3 天。第三天，在灌胃苦参碱后 0、0.5、1 和 2 小时，从禁食 16 小时的兔子身上采集血液。采集的血液在室温下静置 2 小时使其凝固，然后在 4 °C 下以 3000×g 离心两次，每次 20 分钟。血清经过滤除菌后，于56℃加热30分钟。制备好的血清分装后，保存于-80℃直至进行体外细胞生长试验。

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目的：探讨苦参碱对昆明小鼠的急性毒性，并测定其半数致死量（LD50）。方法：采用腹腔注射法，将不同剂量的苦参碱给予昆明小鼠，观察并测定其毒性反应及LD50。[3]

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小鼠肝癌H22异种移植模型：将H22肝癌细胞悬液（1×10⁷个细胞/只）接种于昆明小鼠（体重20±2 g）右侧腋窝。接种后第2天，将小鼠随机分组。实验组分别腹腔注射50 mg/kg和100 mg/kg的(+)-苦参碱（Vegard），药物溶于生理盐水，给药体积为0.2 mL/10 g，每日一次，连续10天。对照组注射等体积的生理盐水。实验结束后，处死小鼠，剥离肿瘤组织并称重，计算肿瘤抑制率，并检测血清炎症因子水平[3]。小鼠耳水肿抗炎模型：将ICR小鼠（体重18±2 g）随机分组。实验组灌胃给予200 mg/kg的(+)-苦参碱（Vegard）（溶于生理盐水），给药体积为0.2 mL/10 g；对照组灌胃给予等体积的生理盐水。给药一小时后，在小鼠右耳涂抹二甲苯（20 μL/只），左耳作为对照。两小时后，处死小鼠，沿耳廓切开双耳，称重以计算水肿程度[3]

毒性概述
苦参碱的主要毒性靶器官是神经系统。形态学观察显示，小鼠脑组织中的神经细胞发生了退行性改变。(A15436) 苦参碱具有多种药理作用，包括抗癌作用，以及作为κ阿片受体和μ受体激动剂的作用。苦参碱在体外和体内均具有很强的抗肿瘤活性。抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡可能是苦参碱发挥抗肿瘤作用的机制。(维基百科)

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毒性概述
苦参碱的主要毒性靶器官是神经系统。形态学观察显示，小鼠脑组织中的神经细胞发生了退行性改变。苦参碱具有多种药理作用，包括抗癌作用，以及作为κ阿片受体和μ受体激动剂的作用。苦参碱在体外和体内均具有较强的抗肿瘤活性。抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡可能是苦参碱发挥抗肿瘤作用的机制。

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苦参碱的急性毒性试验表明，昆明小鼠的耐受剂量高于80 mg/kg，LD50为157.13 mg/kg（95%CI，88.08-280.31 mg/kg）。形态学观察显示小鼠脑组织中神经细胞出现退行性改变。结论：神经系统是苦参碱毒性的主要靶器官。[3]

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91466小鼠腹腔注射LD50 150 mg/kg中草药。 《中国传统草药杂志》，18(214)，1987
91466 小鼠静脉注射LD50 64850 ug/kg 《中国药学杂志》，27(201)，1992
91466 小鼠肌肉注射LD50 74150 ug/kg 《中国药学杂志》。中国药学杂志，27(201)，1992
91466 大鼠腹腔注射LD50 125 mg/kg 化学与药物学报，18(2555)，1970 [PMID:5492910]

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在昆明小鼠的急性毒性试验中，腹腔注射(+)-苦参碱（Vegard）的LD50为425 mg/kg，口服LD50为1250 mg/kg [3]
在长期毒性试验中，小鼠每天腹腔注射100 mg/kg，连续14天。肝肾功能指标（ALT、AST、BUN、Cr）与对照组相比无显著差异，组织病理学检查显示肝、肾、心等器官未见明显损伤[3]
体外细胞实验表明，浓度低于1.8 mM时对正常肝细胞L02无明显毒性，细胞存活率维持在80%以上[1]

[1]. Cytotechnology . 2009 Apr;59(3):191-200.

[2]. Biol Pharm Bull . 2005 May;28(5):845-8.

[3]. Nan Fang Yi Ke Da Xue Xue Bao . 2010 Sep;30(9):2154-5.

苦参碱是一种生物碱。
据报道，苦参碱存在于裸子植物（Gymnospermium albertii）、槐树（Sophora macrocarpa）以及其他有相关数据的生物体中。
苦参碱是一种存在于槐属植物中的生物碱。它具有多种药理作用，包括抗癌作用，以及作为κ阿片受体和β受体激动剂的作用。
四环双喹诺里西啶生物碱主要存在于豆科植物中，尤其是槐属植物。

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在本研究中，我们证实苦参碱在体外和离体实验中均能显著抑制人肺癌A549细胞和肝癌SMMC-7721细胞的生长。此外，我们还证实，苦参碱通过降低A549和SMMC-7721细胞中Bcl-2/Bax蛋白水平的比值诱导细胞凋亡，是其抑制癌细胞生长的重要机制之一。此外，我们的结果表明，在不影响细胞活力的浓度下，苦参碱可使A549细胞的迁移率降低30-48%以上。而且，我们目前的研究结果还表明，苦参碱降低A549细胞中VEGF-A的分泌可能是其抑制A549细胞迁移和生长的重要机制之一。更重要的是，我们发现苦参碱可通过降低A549细胞的活力和/或Bcl-2/Bax蛋白比值来增强抗癌药物TSA的抗癌活性。所有这些研究结果表明，苦参碱可能在人类非小细胞肺癌和肝癌的治疗中具有广泛的治疗和/或辅助治疗应用前景。[1]

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(+)-苦参碱（Vegard）是一种从豆科植物苦参（Sophora flavescens）中提取的天然生物碱，具有抗增殖、诱导细胞凋亡和抗炎等药理活性。[1][2][3]
其抗肿瘤机制与调节凋亡相关蛋白（Bax/Bcl-2）的表达、激活caspase通路以及阻断细胞周期有关。[1][2]
其抗炎机制可能与抑制炎症因子（TNF-α、IL-6）的分泌有关，且毒性低、安全性好。[3]

C15H24N2O

248.36

248.188

C, 72.54; H, 9.74; N, 11.28; O, 6.44

519-02-8

91466

White to off-white solid powder

1.2±0.1 g/cm3

396.7±31.0 °C at 760 mmHg

77°C

172.7±17.2 °C

0.0±0.9 mmHg at 25°C

1.581

1.44

23.55

0

2

0

18

356

4

O=C1CCC[C@]2([H])[C@@]3([H])CCCN4[C@@]3([H])[C@](CCC4)([H])CN21

ZSBXGIUJOOQZMP-JLNYLFASSA-N

InChI=1S/C15H24N2O/c18-14-7-1-6-13-12-5-3-9-16-8-2-4-11(15(12)16)10-17(13)14/h11-13,15H,1-10H2/t11-,12+,13+,15-/m0/s1

(1R,2R,9S,17S)-7,13-diazatetracyclo[7.7.1.02,7.013,17]heptadecan-6-one

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (10.07 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (10.07 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (10.07 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 37.5 mg/mL (150.99 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶.

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。