Meclofenamate Sodium inhibits cyclooxygenase (COX) enzymes, specifically COX-1 and COX-2 [1].
It also inhibits mitochondrial Complex I (C-I) and Complex III (C-III) [1]. At 100 µM, MS reduced C-I activity by ~70% [1]. At 10 µM or higher, MS significantly decreased C-III activity [1].
MS inhibits the 20S and 26S proteasome, reducing β5 (chymotrypsin-like) activity [1]. 500 µM MS inhibited β5 activity by ~80% in mouse heart lysates, and 100 µM MS decreased purified 20S proteasome β5 activity by >20% [1].
Meclofenamate Sodium targets cyclooxygenase (COX) enzymes, specifically COX-1 and COX-2. It is a dual COX-1/COX-2 inhibitor with IC50 values of 40 nM and 50 nM, respectively. By inhibiting COX enzymes, it blocks the conversion of arachidonic acid to prostaglandins, which are key mediators of inflammation, pain, and fever. It also inhibits 5-LO, another enzyme involved in the arachidonic acid cascade. This multi-target mechanism contributes to its anti-inflammatory, analgesic, and antipyretic effects.

甲氯芬那酸钠（Meclofenamate Sodium，MS）显著抑制心肌细胞中的蛋白酶体活性。在H9c2大鼠心肌细胞中，100 µM MS处理24小时后，β5 26S蛋白酶体的活性降低了30%以上[1]。10 µM MS长期处理（12天）也降低了β5蛋白酶体的活性[1]。在小鼠新生心肌细胞中，10 µM MS处理5天后，β5蛋白酶体的活性显著降低[1]。MS在浓度低至10 µM时即可增加H9c2细胞和新生心肌细胞中活性氧（ROS）的生成[1]。MS处理组的ROS生成速率高于萘普生处理组[1]。100 µM MS可显著降低H9c2细胞的线粒体膜电位（ΔΨm）约40%[1]。 MS处理（100 µM或200 µM）增加了26S蛋白酶体亚基（尤其是19S亚基）的氧化，并增加了20S蛋白酶体复合物的相对比例，同时降低了26S复合物的比例[1]。MS（500 µM）显著增加了H9c2细胞中多聚泛素化蛋白的水平，并降低了游离泛素的水平[1]。200或500 µM MS处理显著增加了Caspase 3的活性，但在30 µM MS处理下未观察到此现象[1]。MS（200或500 µM）增加了H9c2细胞中氧化蛋白的水平[1]。MS上调了H9c2细胞中血红素加氧酶1 (HO1)、谷胱甘肽S-转移酶ω (GSTO)和过氧化氢酶1 (CAT1)的mRNA表达，但未上调硫氧还蛋白还原酶 (TRXR1)的mRNA表达[1]。 MS在200 µM浓度下可抑制纯化绵羊COX-1活性约90%[1]。
在细胞活力测定中，MS降低了H9c2细胞的活力：50 µM处理24小时导致细胞活力降低30%以上；10 µM处理48小时导致细胞活力降低；10 µM和30 µM处理6天分别导致细胞活力降低约24%和37%；250 µM和500 µM导致更严重的细胞死亡[1]。用10 µM MS处理48小时的新生儿心肌细胞也显示出细胞活力下降[1]。抗氧化剂（抗坏血酸和Tempol）可预防MS诱导的细胞死亡并恢复蛋白酶体活性[1]。将纯化的 26S 或 20S 蛋白酶体转染至 MS 处理的 H9c2 细胞中，可显著提高细胞活力 [1]。
体外实验表明，甲氯芬那酸钠是 COX-1 和 COX-2 的强效抑制剂，IC50 值分别为 40 nM 和 50 nM。它是一种非选择性 COX 抑制剂，同时也能抑制 5-脂氧合酶 (5-LO)。它特异性地抑制趋化因子诱导的人类多形核白细胞功能，包括趋化性、脱颗粒和超氧阴离子自由基的生成。这些体外研究证实了其作为非甾体类抗炎药的作用机制及其对炎症细胞功能的影响。

在体内，甲氯芬那酸钠用于治疗关节和肌肉疼痛、关节炎和痛经。它具有抗炎、解热和镇痛作用。其减轻疼痛和炎症的疗效已在临床研究中得到证实。它是一种口服有效的化合物，易于从胃肠道吸收。它是治疗炎症性疾病的处方药。

20S蛋白酶体活性酶活性测定：将纯化的鼠源20S蛋白酶体与不同浓度的甲氯芬那酸钠（MS）或萘普生在室温下孵育30分钟。使用针对各催化亚基的特异性荧光底物测定蛋白酶体活性：β1（类半胱天冬酶）、β2（类胰蛋白酶）和β5（类糜蛋白酶）。β5活性使用底物Suc-LLVY-AMC进行评估，β2活性使用底物Boc-LRR-AMC进行评估，β1活性使用底物Z-LLE-AMC进行评估。荧光强度在激发波长 360 nm 和发射波长 460 nm 下测定 [1]。
线粒体复合物 I (CI) 活性酶活性测定： 将新鲜或冻融分离的小鼠心脏线粒体与甲氯芬那酸钠（10 µM 或 100 µM）或萘普生孵育。使用特异性测定方法，在 530 nm 处分光光度测定复合物 I 的活性。鱼藤酮 (10 µM) 用作阳性对照抑制剂 [1]。
线粒体复合物 II (C-II) 活性酶活性测定： 将分离的小鼠心脏线粒体用甲氯芬那酸钠（10 µM 或 100 µM）或萘普生处理。在 595 nm 处测定复合物 II 的活性。噻吩甲酰三氟丙酮 (TTFA, 500 µM) 用作特异性抑制剂 [1]。
线粒体复合物 III (C-III) 活性酶活性测定： 将分离的小鼠心脏线粒体与甲氯芬那酸钠 (10 µM、30 µM 或 100 µM) 或萘普生孵育。测定复合物 III 活性。使用抗霉素 A (0.01 mg/ml) 作为抑制剂对照 [1]。
环氧合酶 (COX) 活性酶活性测定： 使用荧光活性测定试剂盒测定 COX 活性。将纯化的绵羊 COX-1 与不同浓度的抗氧化剂（抗坏血酸或 Tempol）或溶剂预孵育，然后加入甲氯芬那酸钠 (200 µM)。根据试剂盒说明书[1]测定COX活性。
非细胞酶活性测定通常涉及测定甲氯芬那酸钠对COX-1和COX-2活性的抑制作用。这些测定使用纯化的COX-1或COX-2酶以及分光光度法或放射性法底物（例如花生四烯酸），以测定不同浓度化合物存在下酶促反应的速率。通过测定半数抑制浓度（IC50）来评估化合物抑制COX的能力。此类测定对于表征其作为COX抑制剂的效力和选择性至关重要。

H9c2细胞蛋白酶体活性检测：大鼠心脏H9c2细胞用甲氯芬那酸钠（100 µM）或萘普生（500 µM）处理24小时。长期处理时，细胞用10 µM甲氯芬那酸钠处理12天，每48小时更换一次含NSAID的新鲜培养基。然后用PBS洗涤细胞，裂解细胞，并使用荧光底物（β5用Suc-LLVY-AMC，β2用Boc-LRR-AMC，β1用Z-LLE-AMC）测定26S蛋白酶体活性。荧光强度在激发波长 360 nm 和发射波长 460 nm 下测定 [1]。
新生心肌细胞蛋白酶体活性测定： 将小鼠新生心肌细胞用甲氯芬那酸钠 (10 µM) 或萘普生 (100 µM) 处理 5 天。然后裂解细胞，并按所述方法测定 β5 蛋白酶体活性 [1]。
细胞活力测定（Alamar Blue）： 将 H9c2 细胞或新生心肌细胞接种于 96 孔板中，并用不同浓度的甲氯芬那酸钠（例如，10、30、50、100、250、500 µM）处理不同时间（4、24、48 小时或 6 天）。加入 Alamar Blue 后，通过 550 nm 波长处的吸光度测定细胞活力。对于处理时间超过 48 小时的情况，每 48 小时更换一次含 NSAID 的新鲜培养基 [1]。
细胞活力检测 (CCK-8)： 将 H9c2 细胞接种于 96 孔板中，并用甲氯芬那酸钠处理不同时间。加入 CCK-8 试剂，并在 450 nm 波长处测定吸光度 [1]。
ROS 检测 (H2DCFDA)： 将 H9c2 细胞、新生儿心肌细胞、CV-1 细胞、CH3/10T1/2 细胞或马皮肤细胞用不同浓度的甲氯芬那酸钠 (10-100 µM) 或萘普生处理。使用细胞可渗透的荧光探针H2DCFDA（2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯）在处理后立即测量ROS生成。荧光强度在激发波长490 nm和发射波长520 nm处测量。荧光显微镜成像时，将细胞与H2DCFDA孵育后进行成像[1]。
线粒体膜电位测定（JC-1）： 将H9c2细胞用甲氯芬那酸钠（5 µM或10 µM）处理24小时。使用JC-1染料（5 µg/ml）评估线粒体膜电位（ΔΨm）。荧光强度在激发波长490 nm和发射波长590 nm处测量。鱼藤酮 (10 µM) 和 DNPH (200 µM) 用作膜去极化的阳性对照 [1]。
蛋白质印迹：用甲氯芬那酸钠 (100 或 500 µM) 处理 H9c2 细胞后裂解，并通过 SDS-PAGE 分离蛋白质。使用针对 PSMA6、β1、Rpt1、NAG-1、HSP60 和泛素 (VU-1) 的抗体。检测了多聚泛素化蛋白水平和游离泛素水平[1]。
MV151蛋白酶体活性位点标记：将大鼠心脏裂解液与不同浓度的美克洛芬那酸钠（100或500 µM）或MG-132（10 µM，阳性对照）孵育20分钟，然后与0.1 µM MV151（荧光可逆蛋白酶体抑制剂）孵育15分钟。将标记的蛋白酶体进行SDS-PAGE电泳并检测荧光[1]。
蛋白质氧化的OxyBlot分析：用美克洛芬那酸钠（100 µM，48 h）处理H9c2细胞后纯化的26S蛋白酶体用二硝基苯肼衍生化以标记羰基。使用抗DNP抗体通过Western印迹法检测氧化亚基[1]。
从MS处理的细胞中纯化26S蛋白酶体：用甲氯芬那酸钠（100 µM）处理H9c2细胞48小时。使用快速26S蛋白酶体纯化试剂盒（略作修改）纯化26S蛋白酶体。测定纯化的蛋白酶体的β5活性，并进行OxyBlot和非变性凝胶电泳[1]。
蛋白酶体复合物的非变性凝胶电泳和Western印迹：用甲氯芬那酸钠（100 µM）或萘普生处理的H9c2细胞裂解液在3.5%非变性丙烯酰胺凝胶上分离3小时，可检测>200 kDa的蛋白质。将凝胶转移至硝酸纤维素膜上，并用针对 PSMA6、β1 和 Rpt6 的抗体进行探针检测，以鉴定 20S 和 26S 蛋白酶体复合物 [1]。
Caspase 3 活性测定：用甲氯芬那酸钠（30、200 或 500 µM）处理 H9c2 细胞，裂解细胞，并在有或无 10 µM caspase-3 抑制剂 Ac-DEVD-CHO 的情况下，使用荧光底物测定 caspase 3 活性 [1]。
纯化蛋白酶体转染至 H9c2 细胞：用甲氯芬那酸钠（100 µM）或硼替佐米（2 nM）处理 H9c2 细胞。将纯化的 26S 或 20S 蛋白酶体（0.05 或 0.1 µg）用 Saint PhD 转染试剂在无血清培养基中于 37°C 转染 4 小时，然后在正常培养基中过夜培养。随后检测细胞活力和蛋白酶体活性 [1]。
转染蛋白酶体的免疫细胞化学： 将转染了纯化 26S 或 20S 蛋白酶体的 H9c2 细胞固定、透化，并用抗 β1 多克隆抗体进行探针检测，随后用 Dylight 549 标记的羊抗兔二抗进行检测。用 DAPI 对细胞核进行染色。测量荧光强度以定量蛋白酶体的摄取 [1]。
基因表达的 RT-PCR： 将 H9c2 细胞用甲氯芬那酸钠（100 µM）处理 24 小时。提取RNA并进行RT-PCR以检测PSMB5 (β5)、PSMB6 (β1)、PSMB8 (β5i)、HO1、GSTO、CAT1和TRXR1的mRNA水平。结果与对照组进行比较[1]。
体外细胞实验采用免疫细胞（例如多形核白细胞）进行甲氯芬那酸钠的作用，以评估其对趋化性、脱颗粒和超氧化物生成的影响。用该化合物处理细胞，并使用标准方法检测这些功能。此外，还可以评估其对各种细胞类型中前列腺素生成的影响。这些实验对于确认其在细胞水平上的作用机制至关重要。

甲氯芬那酸钠的体内动物研究通常在炎症或疼痛动物模型中进行，以评估其抗炎和镇痛疗效。该化合物通过口服或腹腔注射给药，并评估其对爪水肿、疼痛行为和炎症标志物的影响。这些研究对于验证其作为非甾体抗炎药的体内疗效至关重要。

在人体内，甲氯芬那酸钠的血浆峰值浓度范围为 10 至 22 µM [1]。据报道，在接受通常用于治疗肌肉骨骼疾病的剂量的马匹中，峰值浓度可超过 337 µM [1]。甲氯芬那酸钠的分子量为 318.13 g/mol。它是一种口服活性化合物。它能很好地被胃肠道吸收，并与血浆蛋白广泛结合。它在肝脏代谢，并经尿液排泄。其药代动力学特性已在临床环境中进行了研究。它是一种用于治疗炎症性疾病的处方药。

妊娠期和哺乳期影响
◉ 哺乳期用药概述
由于目前尚无关于哺乳期使用甲氯芬那酸的信息，建议优先考虑其他药物，尤其是在哺乳新生儿或早产儿时。 ◉ 对母乳喂养婴儿的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。 ◉ 对泌乳和母乳的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。

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心肌细胞活力降低： 甲氯芬那酸钠 在浓度≥10 µM时，48小时或更长时间后，显著降低了H9c2心肌细胞和新生儿心肌细胞的活力，更高浓度（250-500 µM）会导致更严重的细胞死亡。抗氧化剂（抗坏血酸和Tempol）可阻止细胞死亡，提示存在ROS依赖性机制[1]。
蛋白酶体抑制： MS抑制心肌细胞裂解液和纯化蛋白酶体中的蛋白酶体活性，导致高浓度（500 µM）下多聚泛素化蛋白的积累，并降低游离泛素水平[1]。
线粒体功能障碍： MS在低浓度（5-10 µM）下损害线粒体复合物I和III的活性，并降低线粒体膜电位（ΔΨm），表明线粒体损伤[1]。
ROS和氧化应激增加： MS在200 µM浓度下诱导心肌细胞中ROS的显著生成，增加蛋白酶体亚基（尤其是19S亚基）的氧化，并增加氧化蛋白水平。与萘普生相比，MS处理的细胞中ROS生成率更高[1]。
低浓度下无细胞凋亡：在30 µM MS浓度下，未检测到caspase 3激活，表明药理浓度下的细胞死亡并非由细胞凋亡引起[1]。
抗氧化酶上调：MS（100 µM）上调了H9c2细胞中HO1、GSTO和CAT1的mRNA表达，表明存在细胞抗氧化反应[1]。
心血管疾病风险：使用MS与心血管疾病（CVD）风险增加相关，这与临床数据一致，表明MS会增加CVD风险，而萘普生不会[1]。
甲氯芬那酸钠的临床应用已证实其安全性。常见副作用包括胃肠道不适，例如恶心、呕吐和腹泻。它还可能引起头痛、头晕和皮疹。与所有非甾体抗炎药 (NSAIDs) 一样，它存在胃肠道出血和心血管事件的风险。其临床应用已提供了全面的毒理学数据。甲氯芬那酸钠是一种获批的非甾体抗炎药。

J Mol Cell Cardiol.2016May;94:131-44;

无水甲氯芬那酸钠是一种有机钠盐，含有甲氯芬那酸(1-)。它是一种非甾体抗炎药，具有解热和抗肉芽肿作用，并能抑制前列腺素的生物合成。另见：甲氯芬那酸钠（注：已移至此处）。甲氯芬那酸钠是一种非甾体抗炎药 (NSAID)，其抗炎和镇痛作用主要通过抑制环氧合酶 (COX) 酶（包括 COX-1 和 COX-2）来实现[1]。它已被用于治疗自身免疫性疾病，例如慢性骨关节炎、急性骨关节炎和类风湿性关节炎[1]。与具有某些心脏保护作用的萘普生不同，甲氯芬那酸钠会增加心血管疾病 (CVD) 和心力衰竭的风险[1]。 MS对心脏的不良影响是通过ROS依赖性机制介导的，该机制涉及线粒体功能障碍（复合物I和III抑制）和蛋白酶体损伤，导致细胞活力下降[1]。抗氧化剂（抗坏血酸、Tempol）可以预防MS诱导的细胞死亡，且不干扰其COX抑制活性，因为它们对COX-1的抑制作用较MS（约90%）强[1]。
甲氯芬那酸钠（CI 583）是一种COX-1/COX-2双重抑制剂，其IC50值分别为40 nM和50 nM。它是一种非甾体抗炎药（NSAID），具有抗炎、解热和镇痛作用。它用于治疗关节和肌肉疼痛、关节炎和痛经。甲氯芬那酸钠是一种已获批准的药物。

C14H11CL2NO2.NA

318.13

335.009

6385-02-0

Meclofenamic acid;644-62-2

4038

White to off-white solid powder

399.4ºC at 760 mmHg

287 °C

195.3ºC

3.481

52.16

1

3

3

20

332

0

QHJLLDJTVQAFAN-UHFFFAOYSA-M

InChI=1S/C14H11Cl2NO2.Na.H2O/c1-8-6-7-10(15)13(12(8)16)17-11-5-3-2-4-9(11)14(18)19;;/h2-7,17H,1H3,(H,18,19);;1H2/q;+1;/p-1

sodium 2-((2,6-dichloro-3-methylphenyl)amino)benzoate hydrate

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.54 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.54 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.54 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。