Meclofenamate Sodium inhibits cyclooxygenase (COX) enzymes, specifically COX-1 and COX-2 [1].
It also inhibits mitochondrial Complex I (C-I) and Complex III (C-III) [1]. At 100 µM, MS reduced C-I activity by ~70% [1]. At 10 µM or higher, MS significantly decreased C-III activity [1].
MS inhibits the 20S and 26S proteasome, reducing β5 (chymotrypsin-like) activity [1]. 500 µM MS inhibited β5 activity by ~80% in mouse heart lysates, and 100 µM MS decreased purified 20S proteasome β5 activity by >20% [1].

甲氯芬那酸钠（Meclofenamate Sodium，MS）显著抑制心肌细胞中的蛋白酶体活性。在H9c2大鼠心肌细胞中，100 µM MS处理24小时后，β5 26S蛋白酶体的活性降低了30%以上[1]。10 µM MS长期处理（12天）也降低了β5蛋白酶体的活性[1]。在小鼠新生心肌细胞中，10 µM MS处理5天后，β5蛋白酶体的活性显著降低[1]。MS在浓度低至10 µM时即可增加H9c2细胞和新生心肌细胞中活性氧（ROS）的生成[1]。MS处理组的ROS生成速率高于萘普生处理组[1]。100 µM MS可显著降低H9c2细胞的线粒体膜电位（ΔΨm）约40%[1]。 MS处理（100 µM或200 µM）增加了26S蛋白酶体亚基（尤其是19S亚基）的氧化，并增加了20S蛋白酶体复合物的相对比例，同时降低了26S复合物的比例[1]。MS（500 µM）显著增加了H9c2细胞中多聚泛素化蛋白的水平，并降低了游离泛素的水平[1]。200或500 µM MS处理显著增加了Caspase 3的活性，但在30 µM MS处理下未观察到此现象[1]。MS（200或500 µM）增加了H9c2细胞中氧化蛋白的水平[1]。MS上调了H9c2细胞中血红素加氧酶1 (HO1)、谷胱甘肽S-转移酶ω (GSTO)和过氧化氢酶1 (CAT1)的mRNA表达，但未上调硫氧还蛋白还原酶 (TRXR1)的mRNA表达[1]。 MS在200 µM浓度下可抑制纯化绵羊COX-1活性约90%[1]。
在细胞活力测定中，MS降低了H9c2细胞的活力：50 µM处理24小时导致细胞活力降低30%以上；10 µM处理48小时导致细胞活力降低；10 µM和30 µM处理6天分别导致细胞活力降低约24%和约37%；250 µM和500 µM导致更严重的细胞死亡[1]。用10 µM MS处理48小时的新生儿心肌细胞也显示出细胞活力下降[1]。抗氧化剂（抗坏血酸和Tempol）可预防MS诱导的细胞死亡并恢复蛋白酶体活性[1]。将纯化的26S或20S蛋白酶体转染到MS处理的H9c2细胞中可显著提高细胞活力[1]。

20S蛋白酶体活性酶活性测定：将纯化的鼠源20S蛋白酶体与不同浓度的甲氯芬那酸钠（MS）或萘普生在室温下孵育30分钟。使用针对各催化亚基的特异性荧光底物测定蛋白酶体活性：β1（类半胱天冬酶）、β2（类胰蛋白酶）和β5（类糜蛋白酶）。β5活性使用底物Suc-LLVY-AMC进行评估，β2活性使用底物Boc-LRR-AMC进行评估，β1活性使用底物Z-LLE-AMC进行评估。荧光强度在激发波长 360 nm 和发射波长 460 nm 下测定 [1]。
线粒体复合物 I (CI) 活性酶活性测定： 将新鲜或冻融分离的小鼠心脏线粒体与甲氯芬那酸钠（10 µM 或 100 µM）或萘普生孵育。使用特异性测定方法，在 530 nm 处分光光度测定复合物 I 的活性。鱼藤酮 (10 µM) 用作阳性对照抑制剂 [1]。
线粒体复合物 II (C-II) 活性酶活性测定： 将分离的小鼠心脏线粒体用甲氯芬那酸钠（10 µM 或 100 µM）或萘普生处理。在 595 nm 处测定复合物 II 的活性。噻吩甲酰三氟丙酮 (TTFA, 500 µM) 用作特异性抑制剂 [1]。
线粒体复合物 III (C-III) 活性酶活性测定： 将分离的小鼠心脏线粒体与甲氯芬那酸钠 (10 µM、30 µM 或 100 µM) 或萘普生孵育。测定复合物 III 活性。使用抗霉素 A (0.01 mg/ml) 作为抑制剂对照 [1]。
环氧合酶 (COX) 活性酶活性测定： 使用荧光活性测定试剂盒测定 COX 活性。将纯化的绵羊 COX-1 与不同浓度的抗氧化剂（抗坏血酸或 Tempol）或溶剂预孵育，然后加入甲氯芬那酸钠 (200 µM)。根据试剂盒说明书[1]测定COX活性。

H9c2细胞蛋白酶体活性检测：大鼠心脏H9c2细胞用甲氯芬那酸钠（100 µM）或萘普生（500 µM）处理24小时。长期处理时，细胞用10 µM甲氯芬那酸钠处理12天，每48小时更换一次含NSAID的新鲜培养基。然后用PBS洗涤细胞，裂解细胞，并使用荧光底物（β5用Suc-LLVY-AMC，β2用Boc-LRR-AMC，β1用Z-LLE-AMC）测定26S蛋白酶体活性。荧光强度在激发波长 360 nm 和发射波长 460 nm 下测定 [1]。
新生心肌细胞蛋白酶体活性测定： 将小鼠新生心肌细胞用甲氯芬那酸钠 (10 µM) 或萘普生 (100 µM) 处理 5 天。然后裂解细胞，并按所述方法测定 β5 蛋白酶体活性 [1]。
细胞活力测定（Alamar Blue）： 将 H9c2 细胞或新生心肌细胞接种于 96 孔板中，并用不同浓度的甲氯芬那酸钠（例如，10、30、50、100、250、500 µM）处理不同时间段（4、24、48 小时或 6 天）。加入 Alamar Blue 后，通过 550 nm 波长处的吸光度测定细胞活力。对于处理时间超过 48 小时的情况，每 48 小时更换一次含 NSAID 的新鲜培养基 [1]。
细胞活力检测 (CCK-8)： 将 H9c2 细胞接种于 96 孔板中，并用 甲氯芬那酸钠 处理不同时间。加入 CCK-8 试剂，并在 450 nm 波长处测定吸光度 [1]。
ROS 检测 (H2DCFDA)： 将 H9c2 细胞、新生儿心肌细胞、CV-1 细胞、CH3/10T1/2 细胞或马皮肤细胞用不同浓度的 甲氯芬那酸钠 (10-100 µM) 或萘普生处理。使用细胞可渗透的荧光探针H2DCFDA（2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯）在处理后立即测量ROS生成。荧光强度在激发波长490 nm和发射波长520 nm处测量。荧光显微镜成像时，将细胞与H2DCFDA孵育后进行成像[1]。
线粒体膜电位测定（JC-1）： 将H9c2细胞用甲氯芬那酸钠（5 µM或10 µM）处理24小时。使用JC-1染料（5 µg/ml）评估线粒体膜电位（ΔΨm）。荧光强度在激发波长490 nm和发射波长590 nm处测量。鱼藤酮 (10 µM) 和 DNPH (200 µM) 用作膜去极化的阳性对照 [1]。
蛋白质印迹： 用甲氯芬那酸钠 (100 或 500 µM) 处理 H9c2 细胞后裂解，并通过 SDS-PAGE 分离蛋白质。使用针对 PSMA6、β1、Rpt1、NAG-1、HSP60 和泛素 (VU-1) 的抗体。检测了多聚泛素化蛋白水平和游离泛素水平[1]。
MV151蛋白酶体活性位点标记：将大鼠心脏裂解液与不同浓度的甲氯芬那酸钠（100或500 µM）或MG-132（10 µM，阳性对照）孵育20分钟，然后与0.1 µM MV151（荧光可逆蛋白酶体抑制剂）孵育15分钟。将标记的蛋白酶体进行SDS-PAGE电泳并检测荧光[1]。
蛋白质氧化的OxyBlot分析：用甲氯芬那酸钠（100 µM，48 h）处理H9c2细胞后纯化的26S蛋白酶体用二硝基苯肼衍生化以标记羰基。使用抗DNP抗体通过Western印迹法检测氧化亚基[1]。
从MS处理的细胞中纯化26S蛋白酶体：用甲氯芬那酸钠（100 µM）处理H9c2细胞48小时。使用快速26S蛋白酶体纯化试剂盒（略作修改）纯化26S蛋白酶体。测定纯化的蛋白酶体的β5活性，并进行OxyBlot和非变性凝胶电泳[1]。
蛋白酶体复合物的非变性凝胶电泳和Western印迹：用甲氯芬那酸钠（100 µM）或萘普生处理的H9c2细胞裂解液在3.5%非变性丙烯酰胺凝胶上分离3小时，可检测>200 kDa的蛋白质。将凝胶转移至硝酸纤维素膜上，并用针对 PSMA6、β1 和 Rpt6 的抗体进行探针检测，以鉴定 20S 和 26S 蛋白酶体复合物 [1]。
Caspase 3 活性测定： 用 美克洛芬那酸钠 (30、200 或 500 µM) 处理 H9c2 细胞，裂解细胞，并在有或无 10 µM caspase-3 抑制剂 Ac-DEVD-CHO 的情况下，使用荧光底物测定 caspase 3 活性 [1]。
纯化蛋白酶体转染至 H9c2 细胞： 用 美克洛芬那酸钠 (100 µM) 或硼替佐米 (2 nM) 处理 H9c2 细胞。将纯化的 26S 或 20S 蛋白酶体（0.05 或 0.1 µg）用 Saint PhD 转染试剂在无血清培养基中于 37°C 转染 4 小时，然后在正常培养基中过夜培养。随后测定细胞活力和蛋白酶体活性 [1]。
转染蛋白酶体的免疫细胞化学： 将转染了纯化 26S 或 20S 蛋白酶体的 H9c2 细胞固定、透化，并用抗 β1 多克隆抗体进行探针检测，随后用 Dylight 549 标记的羊抗兔二抗进行检测。用 DAPI 对细胞核进行染色。测量荧光强度以定量蛋白酶体的摄取 [1]。
基因表达的 RT-PCR： 将 H9c2 细胞用 甲氯芬那酸钠 (100 µM) 处理 24 小时。提取 RNA，并进行 RT-PCR 以测量 PSMB5 (β5)、PSMB6 (β1)、PSMB8 (β5i)、HO1、GSTO、CAT1 和 TRXR1 的 mRNA 水平。结果与对照进行比较 [1]。

在人体中，美氯芬那酸钠的血浆峰值药理浓度范围为 10 至 22 µM [1]。据报道，在接受通常用于治疗肌肉骨骼疾病的剂量的马匹中，峰值浓度超过 337 µM [1]。

妊娠期和哺乳期影响
◉ 哺乳期用药概述
由于目前尚无关于哺乳期使用甲氯芬那酸的信息，建议优先考虑其他药物，尤其是在哺乳新生儿或早产儿时。 ◉ 对母乳喂养婴儿的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。 ◉ 对泌乳和母乳的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。

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心肌细胞活力降低： 甲氯芬那酸钠 在浓度≥10 µM时，48小时或更长时间后，显著降低了H9c2心肌细胞和新生儿心肌细胞的活力，更高浓度（250-500 µM）会导致更严重的细胞死亡。抗氧化剂（抗坏血酸和Tempol）可阻止细胞死亡，提示存在ROS依赖性机制[1]。
蛋白酶体抑制： MS抑制心肌细胞裂解液和纯化蛋白酶体中的蛋白酶体活性，导致高浓度（500 µM）下多聚泛素化蛋白的积累，并降低游离泛素水平[1]。
线粒体功能障碍： MS在低浓度（5-10 µM）下损害线粒体复合物I和III的活性，并降低线粒体膜电位（ΔΨm），表明线粒体损伤[1]。
ROS和氧化应激增加： MS在200 µM浓度下诱导心肌细胞中ROS的显著生成，增加蛋白酶体亚基（尤其是19S亚基）的氧化，并增加氧化蛋白水平。与萘普生相比，MS 处理的细胞中 ROS 生成率更高 [1]。
低浓度下无细胞凋亡：在 30 µM MS 浓度下，未检测到 caspase 3 激活，表明药理浓度下的细胞死亡并非由细胞凋亡引起 [1]。
抗氧化酶上调：MS (100 µM) 上调了 H9c2 细胞中 HO1、GSTO 和 CAT1 的 mRNA 表达，表明细胞产生了抗氧化反应 [1]。
心血管疾病风险：使用 MS 与心血管疾病 (CVD) 风险增加相关，这与临床数据一致，表明 MS 会增加 CVD 风险，而萘普生不会 [1]。

J Mol Cell Cardiol.2016May;94:131-44;

无水甲氯芬那酸钠是一种有机钠盐，含有甲氯芬那酸(1-)。它是一种非甾体抗炎药，具有解热和抗肉芽肿作用，并能抑制前列腺素的生物合成。另见：甲氯芬那酸钠（注：已移至此处）。甲氯芬那酸钠是一种非甾体抗炎药 (NSAID)，其抗炎和镇痛作用主要通过抑制环氧合酶 (COX) 酶（包括 COX-1 和 COX-2）来实现[1]。它已被用于治疗自身免疫性疾病，例如慢性骨关节炎、急性骨关节炎和类风湿性关节炎[1]。与具有某些心脏保护作用的萘普生不同，甲氯芬那酸钠会增加心血管疾病 (CVD) 和心力衰竭的风险[1]。 MS对心脏的不良影响是通过ROS依赖性机制介导的，该机制涉及线粒体功能障碍（复合物I和III抑制）和蛋白酶体损伤，导致细胞活力下降[1]。抗氧化剂（抗坏血酸、Tempol）可以预防MS诱导的细胞死亡，且不干扰其COX抑制活性，因为与MS（~90%）相比，抗氧化剂对COX-1的抑制作用较弱（~50%）[1]。

C14H11CL2NO2.NA

318.13

335.009

6385-02-0

Meclofenamic acid;644-62-2

4038

White to off-white solid powder

399.4ºC at 760 mmHg

287 °C

195.3ºC

3.481

52.16

1

3

3

20

332

0

QHJLLDJTVQAFAN-UHFFFAOYSA-M

InChI=1S/C14H11Cl2NO2.Na.H2O/c1-8-6-7-10(15)13(12(8)16)17-11-5-3-2-4-9(11)14(18)19;;/h2-7,17H,1H3,(H,18,19);;1H2/q;+1;/p-1

sodium 2-((2,6-dichloro-3-methylphenyl)amino)benzoate hydrate

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.54 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.54 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.54 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。