Adavosertib (AZD-1775; MK-1775)   中文名称: Wee1 抑制剂 adavosertib

Wee1 (IC50 = 5.2 nM)

体外活性：MK-1775 以 ATP 竞争性方式抑制 Wee1 激酶。与 Wee1 相比，MK-1775 对 Yes 的效力低 2 至 3 倍，IC50 为 14 nM，对其他 7 种激酶的效力低 10 倍，在 1 μM 时抑制 >80%，选择性比人类高 100 倍Myt 1，另一种通过替代位点 (Thr14) 磷酸化来抑制细胞周期蛋白依赖性激酶 1 (CDC2) 的激酶。通过阻断携带突变 p53 的 WiDr 细胞中的 Wee1 活性来消除 DNA 损伤检查点，MK-1775 治疗可抑制 CDC2 在 Tyr15 (CDC2Y15) 的基础磷酸化，EC50 为 49 nM，并抑制吉西他滨、卡铂或顺铂诱导的损伤CDC2 磷酸化和细胞周期停滞呈剂量依赖性，EC50 分别为 82 nM 和 81 nM、180 nM 和 163 nM、以及 159 nM 和 160 nM。 30-100 nM 的 MK-1775 单独处理对 WiDr 和 H1299 细胞没有显着的抗增殖作用，而 300 nM 的 MK-1775 足以抑制 Wee1 > 80%，在 WiDr 细胞中显示出中等但显着的抗增殖作用，抗增殖作用达 34.1% H1299 细胞中为 28.4%。激酶测定：使用重组人Wee1。使用 10 μM ATP、1.0 μCi 的 [γ-33P]ATP 和 2.5 μg 聚（Lys、Tyr）作为底物，在浓度递增的 MK-1775 存在下，在 30°C 下进行激酶反应 30 分钟。掺入基质中的放射性被捕获在 MultiScreen-PH 板上，并在液体闪烁计数器上进行计数。细胞测定：细胞（WiDr、NCI-H1299、TOV21G 和 HeLa）用或不用吉西他滨处理 24 小时，然后用 MK-1775 再处理 24 小时。使用 SpectraMax 通过 WST-8 试剂盒测定细胞活力。使用 Caspase-3/7 Glo 试剂盒测定细胞 caspase-3/7 活性。

MK-1775 单独治疗（约 20 mg/kg）对大鼠 WiDr 异种移植物显示出最小的抗肿瘤作用，第 3 天 T/C 为 69%。单独使用 MK-1775 对裸鼠 HeLa-luc 和 TOV21G-shp53 异种移植物的抗肿瘤功效款式也适中。

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Adavosertib (AZD-1775; MK-1775)增强H1299异种移植物肿瘤对分次放疗的反应[2]
基于Adavosertib (AZD-1775; MK-1775)在p53缺陷型NSCLC细胞系中的显著放射增敏作用（表1），我们确定了这种作用是否延伸到体内情况。我们进行了一系列实验，使用由p53缺陷型NSCLC系之一制成的裸鼠异种移植物肿瘤来检验这个问题，并用MK-1775和外束辐射的组合进行治疗，其中肿瘤生长延迟被用作分析的终点。本研究选择Calu-6细胞系是基于其在体外存活曲线分析中被MK-1775显著放射增敏（图1A和表1）。研究了各种治疗方案，包括测试不同的药物和辐射序列、不同剂量的药物和不同的辐射分级方案。其中许多方案表明，与单独使用辐射相比，药物/辐射组合显著增强了肿瘤生长延迟。当肿瘤每天用1 Gy照射两次，持续5天，并在照射的同一天每天两次给予60 mg/kg时，观察到最大的反应。该实验的结果如图4所示。该治疗方案的增强因子为3.2（p<0.01）。这些结果强调了及时对药物和放射治疗进行测序的重要性，并表明MK-1775的放射增敏作用延伸到体内环境。

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Adavosertib (AZD-1775; MK-1775)治疗导致Wee1激酶受到抑制，其底物Cdc2的抑制性磷酸化减少。与对照组和GEM治疗的肿瘤相比，MK-1775在服用GEM时消除了检查点阻滞以促进有丝分裂进入并促进了肿瘤细胞死亡。MK-1775单一疗法没有诱导肿瘤消退。然而，与p53缺陷型肿瘤的GEM治疗相比，GEM与MK-1775的组合产生了强大的抗肿瘤活性，并显著增强了肿瘤消退反应（4.01倍）。药物治疗期后绘制的肿瘤再生曲线表明，联合治疗的效果比GEM更持久。所有药物均未在p53野生型异种移植物中产生肿瘤消退。 结论：这些结果表明，Adavosertib (AZD-1775; MK-1775)选择性地与GEM协同作用，以实现肿瘤消退，在p53缺陷型胰腺癌症异种移植物中是选择性的[3]。

Wee1 是一种人类重组蛋白。使用 10 μM ATP、1.0 μCi 的 [γ-₃₃P]ATP 和 2.5 μg 聚（Lys、Tyr）作为底物进行激酶反应，所有这些都在增加 MK 的情况下进行-1775 浓度，30°C 30 分钟。混合到基质中的放射性被捕获在 MultiScreen-PH 板上，并使用液体闪烁计数器进行定量。

使用含有 0.4 mol/L NaCl、1 mM EDTA 和 50 mM HEPES (pH 7.9) 的裂解液从细胞沉淀中提取整个蛋白质。然后用蛋白酶抑制剂、1% NP-40 和 10 µL/mL 磷酸酶抑制剂混合物 1 和 2 强化蛋白质。Bio-Rad 蛋白质测定可得出裂解物的蛋白质浓度。在 Immobilon 膜上，使用 12% SDS-PAGE 分离等体积的蛋白质。含有 0.1% 吐温 (TBS-T) 和 5% 脱脂奶粉的缓冲盐水（150 mM，pH 7.4）会阻断膜上的非特异性结合位点。将膜浸泡在含有一抗的 5% 脱脂奶粉中，在 4°C 下过夜，即可鉴定蛋白质信号。随后在已过氧化物酶偶联的相应二抗中孵育 45 分钟。之后，使用 Typhoon 9400 扫描仪对膜进行显影，并使用 ECL 和蛋白质印迹检测试剂增强化学发光。

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细胞周期分析[2]
用200 nmol/LAdavosertib (AZD-1775; MK-1775)处理细胞1小时，以7.5 Gy照射，然后在0、4、8、12、16和24小时后收获。然后用PBS洗涤细胞，并在4°C下在PBS中的70%乙醇中固定过夜。将固定的细胞在缓冲液A（0.5%牛血清白蛋白（BSA）和2%FBS的PBS溶液）中洗涤，然后在冰上的裂解缓冲液（0.1%Triton X-100、0.5%BSA和2%FBS在PBS溶液中）中孵育5分钟。通过离心将细胞造粒，并在缓冲液B（2%BSA和10%FBS在PBS中）中温育。再次，通过离心使细胞造粒，然后在4°C下与缓冲液A中1:50稀释的p-HH3抗体一起孵育过夜。然后在室温下用缓冲液A洗涤细胞，并在缓冲液A中以1:100的稀释度在抗小鼠FITC二抗中孵育1小时。再次用缓冲液B洗涤细胞，通过离心造粒，并在2%BSA、2%吐温-20、5µg/mL碘化丙啶（PI）和2µg/mL RNAse A中在黑暗中孵育一小时，然后立即进行流式细胞术分析。使用Beckman Coulter EPICS-ALTRA和Hyperport系统进行流式细胞术，该系统配备有发射488nm的水冷氩激光器。使用EXPO32软件进行分析。使用525nm带通滤波器测量p-HH3。收集了至少10000个事件进行分析。闸门设置为排除细胞碎片，并测量闸门区域内事件的荧光强度。

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免疫荧光[2]
A549或H1299细胞在放置在35 mm培养皿中的盖玻片上培养，用0.2µg/mL的诺考达唑处理，用1 Gy照射，并用200 nmol/LAdavosertib (AZD-1775; MK-1775)处理，如所示。然后吸出培养基，在PBS中短暂冲洗细胞，然后用2%多聚甲醛固定15分钟。通过在-20°C下用100%甲醇孵育10分钟实现渗透性。在PBS中冲洗三次5分钟后，将细胞在室温下在封闭缓冲液（1X PBS、50µL/mL正常山羊血清和0.3%Triton X-100）中孵育1小时。接下来，在4°C下，将细胞在抗体稀释缓冲液（1X PBS，10 mg/mL牛血清白蛋白，0.3%Triton X-100）中的γ-H2AX一抗中孵育过夜，并轻轻摇晃。用PBS洗涤后，用1:500稀释的适当Alexa Fluor偶联的二抗（山羊抗兔FITC或山羊抗小鼠Alexa Fluor 594）孵育2小时后，观察到一抗。用1:500 4'6-二脒基-2-苯基吲哚二盐酸盐（DAPI）在PBS中复染细胞核，并用Vectashield将盖玻片安装在载玻片上。使用配备CCD相机的徕卡荧光显微镜检查载玻片，并将图像导入Advanced Spot Image分析软件。为了量化γ-H2AX病灶，对50个核进行了评估。通过DAPI染色鉴定微核细胞并定量（200个细胞/盖玻片）。

将 1×10⁶ 个 Calu-6 细胞接种于小鼠腿部，形成肿瘤异种移植瘤。直径为 8 mm 的肿瘤接受放射治疗和阿达沃塞替尼（AZD-1775；MK-1775）治疗 5 天。在小鼠未麻醉的情况下，使用小型动物照射器（由两个平行放置的 ¹³⁷Cs 放射源组成）对小鼠肿瘤所在的腿部进行局部 γ 射线照射，剂量率为 5 Gy/min。肿瘤每天接受两次放射治疗，间隔 6 小时。在首次每日放射治疗前1小时和后2小时，以0.1 mL的体积灌胃给予阿达沃塞替（MK-1775）。

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将1 × 10⁶个Calu-6细胞悬浮于10 µL中，肌肉注射到小鼠腿部，构建肿瘤异种移植模型。当肿瘤直径达到8 mm时，开始进行放射治疗和阿达沃塞替（AZD-1775；MK-1775）治疗，持续5天。使用由两个平行放置的¹³⁷Cs源组成的小型动物照射器，以5 Gy/min的剂量率，对未麻醉小鼠的肿瘤腿部进行局部γ射线照射。肿瘤每天照射两次，两次照射间隔6小时。在首次每日放射治疗前 1 小时和后 2 小时，通过灌胃给予小鼠 0.1 mL 的阿达沃塞替尼（AZD-1775；MK-1775）。[2] 使用游标卡尺每周测量 2-3 次三个相互正交的肿瘤直径，并计算平均值以绘制肿瘤生长延迟图。当肿瘤直径长至 15 mm 时，对小鼠实施安乐死。肿瘤再生以治疗组肿瘤从 8 mm 长至 12 mm 所需的时间（天）减去对照组肿瘤达到相同大小所需的时间（绝对生长延迟 [AGD]）来表示。对于同时接受阿达沃塞替尼（AZD-1775；MK-1775）和放射治疗的患者，标准化生长延迟（NGD）定义为联合治疗组肿瘤生长至12 mm所需时间减去单独药物治疗组肿瘤生长至12 mm所需时间。放射增强因子（EF）通过将MK-1775联合放射治疗组的NGD除以放射治疗联合载体组的AGD计算得出。EF的p值通过Student's t检验确定，该检验比较了阿达沃塞替尼（AZD-1775；MK-1775）联合放射治疗组的NGD与放射治疗联合载体组的AGD。[2] 9个胰腺癌异种移植瘤（6个p53缺陷型，3个p53野生型）分别移植到无胸腺小鼠两侧，使其生长。当肿瘤体积达到约 200 mm³ 时，对小鼠进行个体识别，并随机分配至各治疗组，每组 5-6 只小鼠（8-10 个可评估肿瘤）：1) 对照组；2) 阿达沃塞替尼（AZD-1775；MK-1775）（30 mg/kg，口服，每日一次，持续 4 周）；3) 吉西他滨（GEM）（100 mg/kg，腹腔注射，每周两次，分别于第 1 天和第 4 天给药），持续 4 周；4) 先给予吉西他滨，24 小时后给予上述剂量的阿达沃塞替尼（AZD-1775；MK-1775）。每周两次使用数字游标卡尺测量肿瘤的两个垂直直径，以评估肿瘤生长情况。单个肿瘤的体积计算公式为 V = a × b²/2，其中 a 为最大直径，b 为最小直径。第28天的相对肿瘤生长指数（TGI）采用以下公式计算：（药物治疗组平均肿瘤体积/对照组平均肿瘤体积）×100。记录每个异种移植瘤中缩小超过初始体积50%的肿瘤数量。除吉西他滨（GEM）组和联合治疗组各保留3只小鼠用于观察治疗后肿瘤复发情况外，其余小鼠在最后一次注射GEM或MK-1775后1小时处死，并收集肿瘤进行分析。用于肿瘤复发研究的小鼠在肿瘤体积达到该异种移植瘤对照组肿瘤大小时处死。[3]

图1显示了第1周期第1天和第5天250 mg和200 mg阿达沃塞替尼24小时内的几何平均血浆浓度曲线。阿达沃塞替尼在首次和第五次每日一次给药后，于5天内被稳定吸收。250 mg组和200 mg组的中位达峰时间（tmax）分别为首次给药后4.03小时和2.08小时，以及第五次给药后2.82小时和1.90小时（表3）。阿达沃塞替尼的消除缓慢，且在两个治疗组中总体相似；250 mg组和200 mg组的平均半衰期（t1/2λz）分别为首次给药后7.36小时和7.30小时，以及第五次给药后10.55小时和8.88小时。连续5天每日一次给药后，血浆中阿达沃塞替的蓄积量通常极低，250 mg组和200 mg组基于AUC0-24的平均蓄积比分别为1.63和1.73。[4]
阿达沃塞替的全身暴露量略高于剂量比例增加。剂量增加1.25倍（从200 mg到250 mg）导致首次给药后Cmax和AUC0-24的几何平均值分别增加1.70倍和1.65倍，第五次给药后Cmax和AUC0-24的几何平均值分别增加1.38倍和1.62倍。[4]

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引言：我们旨在评估阿达沃塞替单药治疗日本晚期实体瘤患者的安全性、药代动力学特征和抗肿瘤活性。材料与方法：这是一项单中心、开放标签的I期临床研究，包含两个连续的队列（250 mg组和200 mg组）。患者接受阿达沃塞替尼250 mg或200 mg，每日口服一次，连续用药5天，停药2天，在21天周期的第1周和第2周进行治疗。结果：250 mg组的6例患者中有2例出现剂量限制性毒性（3级发热性中性粒细胞减少症）。200 mg组的3例患者均未出现剂量限制性毒性。最常见的治疗期间出现的不良事件是恶心（250 mg组：83.3%；200 mg组：100.0%）。 250 mg 组和 200 mg 组首次给药后药物浓度达峰时间中位数分别为 4.03 小时和 2.08 小时，多次给药后分别为 2.82 小时和 1.90 小时；平均末端消除半衰期分别为 7.36 小时和 7.30 小时（首次给药）以及 10.55 小时和 8.88 小时（多次给药）。全身暴露量略高于剂量比例增加。未观察到 RECIST v1.1 疗效评价。250 mg 组和 200 mg 组的疾病控制率分别为 0% 和 33.3%。200 mg 组中有 1 例患者（33.3%）在 ≥ 8 周时达到最佳总体疗效，即疾病稳定；其余患者均出现疾病进展。结论：每日一次 200 mg Adavosertib 在本研究人群中耐受性良好，未发现安全性问题。暴露量以略高于剂量比例的方式增加，并且显示出有限的抗肿瘤活性。[4]

安全性和耐受性[4]
总体而言，9 例患者中有 8 例 (88.9%) 报告了至少 1 例不良事件 (AE)，其中 250 mg 组 6 例患者中有 5 例 (83.3%)，200 mg 组 3 例患者全部 (100.0%)。在总体研究人群中，最常见的治疗期间出现的不良事件 (TEAE) 为恶心 (8/9；88.9%)，其次是食欲下降、便秘、腹泻、呕吐和血小板计数下降 (4/9；各占 44.4%)（表 2）。在 250 mg 组 (n = 6) 中，最常见的治疗期间出现的不良事件 (TEAE) 为恶心 (5/6 例患者，83.3%)，其次是呕吐和食欲下降 (4/6 例患者，各占 66.7%)。在 200 mg 剂量组中，最常报告的治疗期间出现的不良事件 (TEAE) 为恶心（3/3 例患者，100.0%），其次是腹泻和低白蛋白血症（均为 2/3 例患者，66.7%）。[4]
研究中未报告导致治疗中断或死亡的不良事件。总体而言，9 例患者中有 2 例 (22.2%) 报告了严重不良事件，均来自 250 mg 剂量组，包括 3 级发热性中性粒细胞减少症（2/9 例患者，22.2%）和 4 级血小板计数下降（1/9 例患者，11.1%）。研究者评估所有 3 例严重不良事件均可能与研究药物相关，且均已缓解。[4]
9 例患者中有 4 例 (44.4%) 报告了 CTCAE ≥ 3 级不良事件，研究者评估这些不良事件可能与研究药物相关。在 250 mg 剂量组中，6 例患者中有 3 例 (50%) 报告了 ≥ 3 级 CTCAE 不良事件，研究者评估认为这些事件可能与研究药物相关，其中包括 4 级事件（6 例患者中有 1 例出现中性粒细胞减少症、白细胞计数降低、血小板计数降低[严重不良事件]和中性粒细胞计数降低，各占 16.7%）和 3 级事件（6 例患者中有 2 例出现发热性中性粒细胞减少症和贫血[各占 33.3%]，1 例出现白细胞计数降低、淋巴细胞计数降低和食欲减退，各占 16.7%）。在 200 mg 剂量组中，3 例患者中有 1 例 (33.3%) 报告了 1 例 3 级低白蛋白血症事件，研究者评估认为该事件可能与研究药物相关，未报告 4 级事件。 [4]
250 mg 剂量组的 6 例患者中有 2 例报告了 3 级发热性中性粒细胞减少症剂量限制性毒性 (DLT)。200 mg 剂量组未报告 DLT。[4]
任何实验室参数、心电图参数或生命体征的平均值均未观察到具有临床意义的变化。

[1]. MK-1775, a small molecule Wee1 inhibitor, enhances anti-tumor efficacy of various DNA-damaging agents, including 5-FU. Cancer Biol Ther. 2010 Apr;9(7):514-22.

[2]. MK-1775, a novel Wee1 kinase inhibitor, radiosensitizes p53-defective human tumor cells. Clin Cancer Res. 2011 Sep 1;17(17):5638-48.

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[3]. MK-1775, a potent Wee1 inhibitor, synergizes with NSC 613327 to achieve tumor regressions, selectively in p53-deficient pancreatic cancer xenografts.Clin Cancer Res. 2011 May 1;17(9):2799-806.

[4]. Safety, tolerability, pharmacokinetics, and antitumor activity of adavosertib in Japanese patients with advanced solid tumors: A phase I, open-label study. Cancer Treat Res Commun . 2024:39:100809.

1-[6-(2-羟基丙-2-基)-2-吡啶基]-6-[4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯胺基]-2-丙-2-烯基-3-吡唑并[3,4-d]嘧啶酮属于哌嗪类化合物。
MK-1775 已用于淋巴瘤、肿瘤、卵巢癌、舌癌和成人胶质母细胞瘤等多种癌症的治疗试验。
Adavosertib 是一种小分子酪氨酸激酶 WEE1 抑制剂，具有潜在的抗肿瘤增敏活性。Adavosertib 选择性地靶向并抑制 WEE1，WEE1 是一种酪氨酸激酶，可磷酸化细胞周期蛋白依赖性激酶 1 (CDK1, CDC2) 以使 CDC2/细胞周期蛋白 B 复合物失活。抑制WEE1活性可阻止CDC2的磷酸化，并损害G2期DNA损伤检查点。这可能导致细胞在接受DNA损伤化疗药物治疗后发生凋亡。与正常细胞不同，大多数p53缺陷或突变的人类癌症缺乏G1期检查点，因为p53是G1期检查点的关键调控因子，这些细胞依赖G2期检查点进行DNA修复。因此，G2检查点的缺失可能使p53缺陷型肿瘤细胞更容易受到抗肿瘤药物的攻击，并增强其细胞毒性作用。

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药物适应症
治疗恶性子宫内膜肿瘤，治疗胰腺癌

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阿达沃塞替尼（Adavosertib）属于吡唑并嘧啶类化合物，其结构为1,2-二氢-3H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮，在1、2和6位分别被6-(2-羟基丙-2-基)吡啶-2-基、丙-1-烯-3-基和[4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]氨基取代。它是一种强效且选择性的口服WEE1激酶抑制剂。它是一种抗肿瘤药物，也是一种 EC 2.7.11.1（非特异性丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶）抑制剂。它是一种吡唑并嘧啶类化合物，属于吡啶类化合物，同时也是一种叔醇、仲氨基化合物、N-芳基哌嗪和 N-甲基哌嗪。
MK-1775 已用于淋巴瘤、肿瘤、卵巢癌、舌癌和成人胶质母细胞瘤等多种癌症的治疗试验。
Adavosertib 是一种酪氨酸激酶 WEE1 的小分子抑制剂，具有潜在的抗肿瘤增敏活性。Adavosertib 选择性地靶向并抑制 WEE1，WEE1 是一种酪氨酸激酶，可磷酸化细胞周期蛋白依赖性激酶 1 (CDK1, CDC2) 以使 CDC2/细胞周期蛋白 B 复合物失活。抑制 WEE1 活性可阻止 CDC2 的磷酸化，并损害 G2 期 DNA 损伤检查点。这可能导致细胞在接受 DNA 损伤化疗药物治疗后发生凋亡。与正常细胞不同，大多数 p53 缺陷或突变的人类癌症缺乏 G1 期检查点，因为 p53 是 G1 期检查点的关键调节因子，这些细胞依赖 G2 期检查点进行 DNA 修复。因此，G2 期检查点的失效可能使 p53 缺陷的肿瘤细胞更容易受到抗肿瘤药物的影响，并增强其细胞毒性作用。
ADAVOSERTIB 是一种小分子药物，其临床试验阶段最高为 II 期（涵盖所有适应症），并有 29 个在研适应症。

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MK-1775 是一种强效且选择性的小分子 Wee1 抑制剂。我们此前已证实，MK-1775能够阻断吉西他滨、卡铂和顺铂诱导的DNA损伤检查点，并选择性地增强这些药物在p53缺陷型肿瘤细胞中的抗肿瘤疗效。目前，MK-1775正与这些抗癌药物联合进行I期临床试验。本研究旨在探讨MK-1775对5-氟尿嘧啶（5-FU）及其他作用机制不同的DNA损伤药物的影响。结果表明，MK-1775能够增强5-FU在p53缺陷型人结肠癌细胞中的细胞毒性作用。此外，MK-1775还能抑制细胞内CDC2 Y15的磷酸化，阻断5-FU诱导的DNA损伤检查点，并通过诱导组蛋白H3磷酸化促进细胞过早进入有丝分裂。 MK-1775 的增强作用特异性针对 p53 缺陷细胞，因为该化合物在体外不会使 p53 野生型人结肠癌细胞对 5-FU 敏感。在体内，MK-1775 在耐受剂量下增强了 5-FU 或其前药卡培他滨的抗肿瘤疗效。这些增强作用与肿瘤中 CDC2 磷酸化的抑制和组蛋白 H3 磷酸化的诱导密切相关。此外，MK-1775 在体外还增强了培美曲塞、阿霉素、喜树碱和丝裂霉素 C 的细胞毒性作用。这些研究支持在癌症患者中测试 MK-1775 与各种 DNA 损伤剂联合用药的合理性。[1]

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目的：放射疗法是治疗多种实体瘤的常用方法。然而，多种疾病部位的治疗比率亟待提高，这促使我们评估分子靶向疗法作为放射增敏剂的潜力。本研究旨在评估wee1激酶抑制剂MK-1775对人肿瘤细胞的放射增敏作用。实验设计：采用克隆形成存活实验，检测MK-1775对肺癌、乳腺癌和前列腺癌来源的人肿瘤细胞的放射增敏作用。实验包括p53野生型和p53缺陷型细胞系。利用流式细胞术和γ-H2AX灶的检测，确定MK-1775能否解除辐射诱导的G2期阻滞，从而使携带DNA损伤的细胞提前进入有丝分裂期。本研究采用裸鼠异种移植瘤模型，通过人肺癌细胞系的肿瘤生长延迟实验，评估了MK-1775联合放射治疗的体内疗效。结果：克隆形成存活分析表明，纳摩尔浓度的MK-1775可增强p53缺陷型人肺癌、乳腺癌和前列腺癌细胞的放射敏感性，但对具有野生型p53的类似细胞系则无此作用。与增强放射敏感性的作用一致，MK-1775可消除p53缺陷型细胞中放射诱导的G₂期阻滞，但对p53野生型细胞系则无此作用。肿瘤生长延迟实验表明，MK-1775还能显著增强放射治疗的体内抗肿瘤疗效，且该作用同样适用于p53缺陷型肿瘤。结论：这些结果表明，在体外和体内实验中，强效且选择性的wee1激酶抑制剂MK-1775均能显著增强p53缺陷型人肿瘤细胞的放射敏感性。综上所述，我们的研究结果有力地支持对 MK-1775 联合放射治疗进行临床评估。[2]

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目的：利用一组 p53 缺陷型和 p53 野生型人胰腺癌异种移植模型，研究强效 Wee1 抑制剂 MK-1775 单药治疗以及与吉西他滨 (GEM) 联合治疗的疗效和药效学作用。实验设计：从约翰·霍普金斯大学的 PancXenoBank 样本库中选取 9 个独立的患者来源胰腺癌异种移植模型（6 个 p53 缺陷型，3 个 p53 野生型），分别用 MK-1775、GEM 或 GEM 治疗 24 小时后再用 MK-1775 治疗，疗程为 4 周。在第28天计算肿瘤生长率/消退率。采用蛋白质印迹法和免疫组织化学法评估靶点调控。结果：MK-1775治疗抑制了Wee1激酶，并降低了其底物Cdc2的抑制性磷酸化水平。与对照组和吉西他滨（GEM）治疗组相比，MK-1775与GEM联合用药可解除细胞周期检查点阻滞，促进细胞进入有丝分裂，并促进肿瘤细胞死亡。MK-1775单药治疗未诱导肿瘤消退。然而，在p53缺陷型肿瘤中，MK-1775与GEM联合用药产生了显著的抗肿瘤活性，并显著增强了肿瘤消退反应（4.01倍），优于GEM单药治疗。药物治疗结束后绘制的肿瘤再生曲线表明，联合治疗的效果比GEM单药治疗更持久。所有药物均未使 p53 野生型异种移植瘤消退。结论：这些结果表明，MK-1775 与吉西他滨 (GEM) 具有选择性协同作用，可选择性地使 p53 缺陷型胰腺癌异种移植瘤消退。[3]

C27H32N8O2

500.6

500.264

C, 64.78; H, 6.44; N, 22.38; O, 6.39

955365-80-7

24856436

Yellow solid powder

1.3±0.1 g/cm3

723.8±70.0 °C at 760 mmHg

391.5±35.7 °C

0.0±2.5 mmHg at 25°C

1.655

0.5

104.34

2

9

7

37

795

0

O=C1N(CC=C)N(C2C=CC=C(C(C)(C)O)N=2)C2C1=CN=C(NC1C=CC(N3CCN(C)CC3)=CC=1)N=2

BKWJAKQVGHWELA-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C27H32N8O2/c1-5-13-34-25(36)21-18-28-26(29-19-9-11-20(12-10-19)33-16-14-32(4)15-17-33)31-24(21)35(34)23-8-6-7-22(30-23)27(2,3)37/h5-12,18,37H,1,13-17H2,2-4H3,(H,28,29,31)

1-[6-(2-hydroxypropan-2-yl)pyridin-2-yl]-6-[4-(4-methylpiperazin-1-yl)anilino]-2-prop-2-enylpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3-one

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.87 mg/mL (5.73 mM) (饱和度未知) in 5% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.16 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.16 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 4 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.16 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。

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配方 5 中的溶解度: 2% DMSO +30% PEG 300 +5% Tween+ddH2O: 5 mg/mL

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配方 6 中的溶解度: 5 mg/mL (9.99 mM) in 0.5% Methylcellulose/saline water (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。