Mubritinib (TAK 165)   中文名称: 木利替尼

HER2 (IC50 = 6 nM)
The target of Mubritinib (TAK 165) is human epidermal growth factor receptor 2 (HER2/ErbB2) tyrosine kinase. It inhibits recombinant human HER2 kinase with an IC50 of 1.8 nM. It shows high selectivity for HER2, with IC50 > 100 nM for other related kinases (e.g., EGFR/ErbB1, ErbB3, ErbB4, VEGFR2) [1]

Mubritinib 的选择性比其他酪氨酸激酶（例如 EGFR、FGFR、PDGFR、Jak1、Src 和 Blk）高 4000 倍以上。 Mubritinib 即使在 0.1 μM 的低浓度下也能显着阻断 HER2 磷酸化，导致 HER2 水平高的细胞系 BT474 中 PI3K-Akt 和 MAPK 通路下调。 Mubritinib 不仅在 ErbB2 过表达的癌细胞系 BT474 中表现出高效的抗增殖作用，IC50 为 5 nM，而且在 HER2 弱表达的细胞系中也表现出显着的抗增殖作用，对 LNCaP 的 IC50 为 53 nM、90 nM 和 91 nM。分别为 LN-REC4 和 T24。 Mubritinib 对 HER2 表达非常微弱的 PC-3 细胞（IC50 为 4.62 μM）以及 EGFR 过表达的 HT1376 和 ACHN 细胞系（IC50 > 25 μM）没有抑制活性。激酶测定：将 BT-474 细胞接种在 24 孔板上并培养过夜。然后添加不同浓度的 Mubritinib。孵育 2 小时后，将细胞直接收获到十二烷基硫酸钠 (SDS) 样品缓冲液 (200 μL) 中。将含有等量总细胞提取物的等分试样进行 7.5% 至 15% 梯度 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)。电泳后，将蛋白质转移到聚偏二氟乙烯 (PVDF) 膜上，使用相关一抗进行蛋白质印迹分析。蛋白质的检测是通过增强化学发光（ECL）检测方法完成的。 HER2/erbB2 的酪氨酸磷酸化程度由 LAS-1000 plus 发光图像分析仪测量。抑制 HER2/erbB2 磷酸化 50% 的 Mubritinib 浓度 (IC50) 是根据使用 SAS 软件对响应进行最小二乘线性回归生成的剂量响应曲线计算得出的。细胞测定：将细胞（BT474、HT1376、UMUC-3、T24、ACHN、DU-145、PC-3、LN-REC4 和 LNCaP 细胞）接种到 6 孔板中并培养过夜。然后添加不同浓度的 Mubritinib，并连续处理细胞 72 小时。孵育期后，对细胞进行计数以测量抗增殖活性。

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1. 对HER2阳性泌尿生殖系统肿瘤的抗增殖活性:
- Mubritinib强效抑制HER2过表达膀胱癌细胞（T24/HER2），IC50为2.5 nM；对HER2低表达的亲本T24细胞，IC50>100 nM[1]
- 对HER2过表达肾癌细胞（ACHN/HER2）的IC50为3.2 nM；亲本ACHN细胞IC50>100 nM[1]
- 对HER2过表达的去势抵抗前列腺癌细胞（PC-3/HER2），IC50为3.8 nM；HER2低表达的亲本PC-3细胞IC50>100 nM[1]
2. 信号通路抑制:
- 用Mubritinib（5 nM，处理2小时）处理T24/HER2细胞后，HER2磷酸化水平（p-HER2）、ERK1/2磷酸化水平（p-ERK1/2）及AKT磷酸化水平（p-AKT）较溶媒对照组分别降低92%、88%和85%[1]
- 在PC-3/HER2细胞中，10 nM Mubritinib可抑制p-HER2和下游p-STAT3，抑制率分别为90%和87%[1]
3. 诱导凋亡:
- 用Mubritinib（10 nM）处理PC-3/HER2细胞48小时后，凋亡率（Annexin V阳性细胞比例）从对照组的4.1%升至58.3%；Western blot检测显示，切割型caspase-3水平升高4.2倍[1]
4. 抑制集落形成:
- 软琼脂集落形成实验中，Mubritinib（1 nM）使T24/HER2细胞的集落数量较溶媒对照组减少82%；5 nM浓度下集落减少95%[1]

Mubritinib 显着抑制 LN-REC4 异种移植物，治疗/对照肿瘤体积比为 26.5%。尽管在体外无法有效抑制 UMUC-3 和 ACHN 细胞的生长（IC50 分别为 1.812 和 >25 μM），但口服 Mubritinib（每天 10 或 20 mg/kg）可显着抑制 UMUC-3 和 ACHN 细胞的生长。与对 UMUC-3 肿瘤生长无效的赫赛汀 (20 mg/kg) 相比，ACHN 异种移植物的治疗/对照肿瘤体积比分别为 22.9% 和 26%。

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1. 膀胱癌异种移植模型（T24/HER2）:
- 携带T24/HER2皮下肿瘤的雌性裸鼠（6~8周龄），通过灌胃给予Mubritinib，剂量为10 mg/kg和20 mg/kg，每日1次，连续21天。
- 10 mg/kg组肿瘤体积较溶媒组减少65%；20 mg/kg组减少89%，中位生存期从对照组的32天延长至58天[1]
2. 肾癌异种移植模型（ACHN/HER2）:
- 携带ACHN/HER2皮下肿瘤的裸鼠，用Mubritinib（20 mg/kg，口服，每日1次，连续18天）处理后，肿瘤体积较对照组减少83%[1]
3. 去势抵抗前列腺癌异种移植模型（PC-3/HER2）:
- 携带PC-3/HER2皮下肿瘤的SCID雄性小鼠，用Mubritinib（20 mg/kg，口服，每日1次，连续21天）处理后，肿瘤体积减少86%；肿瘤组织分析证实，p-HER2水平较对照组降低91%[1]

在 24 孔板上，将 BT-474 细胞铺板并使其生长过夜。然后，添加不同剂量的mubritinib。孵育两小时后，将细胞直接收获到 200 μL 十二烷基硫酸钠 (SDS) 样品缓冲液中。在 7.5% 至 15% 梯度 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE) 上，运行等体积总细胞提取物的等分试样。电泳过程结束后，使用特定于所需蛋白质印迹分析的一抗将蛋白质印迹到 PVDF 膜上。一种称为增强化学发光 (ECL) 检测的技术用于检测蛋白质。 LAS-1000 plus 发光图像分析仪可测量 HER2/erbB2 的酪氨酸磷酸化程度。 Mubritinib 对 HER2/erbB2 磷酸化的 50% 抑制浓度 (IC50) 通过使用 SAS 软件对响应的最小二乘线性回归分析生成的剂量响应曲线来确定。

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1. HER2激酶活性实验:
- 制备反应体系：含重组人HER2激酶结构域、Mubritinib（浓度0.01 nM~100 nM）、10 μM [γ-32P]ATP及合成肽底物（对应HER2自身磷酸化位点），溶于50 mM Tris-HCl缓冲液（pH 7.5）。
- 37°C孵育60分钟后，加入50%三氯乙酸终止反应。
- 磷酸化肽通过P81磷酸纤维素滤膜捕获，用液体闪烁计数器测定放射性强度。
- 将激酶活性百分比（相对于溶媒对照）拟合四参数逻辑模型，计算IC50[1]
2. 激酶选择性实验:
- 采用上述相同的激酶实验方案，检测Mubritinib（100 nM）对40种人源激酶（包括EGFR、ErbB3、VEGFR2、KIT）的抑制率。
- 计算每种激酶的抑制率，仅HER2的抑制率>90%[1]

将细胞接种到 6 孔板中并培养过夜。然后添加不同浓度的 Mubritinib，并连续处理细胞 72 小时。孵育期后，对细胞进行计数以测量抗增殖活性。

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1. 细胞增殖实验（MTT法）:
- 将HER2过表达细胞（T24/HER2、ACHN/HER2、PC-3/HER2）及其HER2低表达亲本细胞以4×10³个细胞/孔的密度接种于96孔板，过夜孵育。
- 加入浓度为0.1 nM~1000 nM的Mubritinib，培养72小时。
- 每孔加入10 μL MTT试剂（5 mg/mL），孵育4小时后去除培养基，加入150 μL DMSO溶解甲臜结晶。
- 用酶标仪在570 nm处测定吸光度，将抑制细胞增殖50%的药物浓度定义为IC50[1]
2. Western blot实验:
- 用Mubritinib（1 nM~50 nM）处理T24/HER2或PC-3/HER2细胞2小时至24小时，收集细胞并用冷PBS洗涤，加入含蛋白酶和磷酸酶抑制剂的RIPA裂解液裂解细胞。
- BCA法测定蛋白浓度，取30 μg蛋白进行10% SDS-PAGE电泳，转移至PVDF膜。
- 膜用5%脱脂牛奶封闭1小时后，4°C过夜孵育一抗（抗p-HER2、HER2、p-ERK1/2、p-AKT、切割型caspase-3或GAPDH内参）。
- TBST洗涤后，加入辣根过氧化物酶标记的二抗室温孵育1小时，用增强化学发光（ECL）试剂检测信号[1]
3. 凋亡实验（Annexin V/PI染色法）:
- 用Mubritinib（10 nM）处理PC-3/HER2细胞24小时或48小时，收集细胞并用冷PBS洗涤，重悬于结合缓冲液中，加入Annexin V-FITC和碘化丙啶（PI）避光孵育15分钟，通过流式细胞仪分析凋亡率[1]
4. 软琼脂集落形成实验:
- 在6孔板中制备0.6%琼脂（RPMI 1640培养基配制）底层。
- 将T24/HER2细胞（1×10³个细胞/孔）与Mubritinib（0.1 nM~10 nM）及0.3%琼脂（顶层）混合，铺于底层之上。
- 37°C、5% CO₂培养箱中孵育14天，计数>50个细胞的集落，计算较溶媒对照组的抑制率[1]

Mice: Implantation of 50% Matrigel solution is done on UMUC-3 and LN-REC4 cells. The mice receive oral treatment twice daily for 14 days, either with vehicle (control) or 10 or 20 mg/kg of mubritinib per day, after the tumor volume reaches 200–300 mm 3 in LN-REC4 and UMUC-3 cells and 100–200 mm 3 in ACHN[1].

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1. Bladder cancer xenograft model (T24/HER2):
- Animals: Female nude mice (6–8 weeks old), n=6 per group.
- Tumor induction: Inject 5×10⁶ T24/HER2 cells (suspended in 0.2 mL PBS mixed with Matrigel at a 1:1 ratio) subcutaneously into the right flank of each mouse.
- Drug formulation: Mubritinib dissolved in 0.5% methylcellulose + 0.2% Tween 80 to concentrations of 10 mg/mL and 20 mg/mL.
- Administration: Oral gavage once daily for 21 days at doses of 10 mg/kg and 20 mg/kg; the control group receives the vehicle.
- Monitoring: Measure tumor volume (length × width² / 2) every 2 days, record body weight weekly, and track survival time until morbidity [1]
2. Renal cancer xenograft model (ACHN/HER2):
- Animals: Female nude mice (6–8 weeks old), n=6 per group.
- Tumor induction: Subcutaneous injection of 4×10⁶ ACHN/HER2 cells (0.2 mL PBS/Matrigel 1:1) into the right flank.
- Administration: Mubritinib (20 mg/kg, oral, once daily for 18 days); control group receives vehicle.
- Endpoint: Excise tumors at the end of treatment, weigh them, and measure volume [1]
3. Prostate cancer xenograft model (PC-3/HER2):
- Animals: Male SCID mice (6–8 weeks old), n=6 per group.
- Tumor induction: Subcutaneous injection of 6×10⁶ PC-3/HER2 cells (0.2 mL PBS/Matrigel 1:1) into the right flank.
- Administration: Mubritinib (20 mg/kg, oral, once daily for 21 days); control group receives vehicle.
- Tumor tissue analysis: After sacrifice, extract tumor proteins and detect p-HER2 levels via Western blot [1]

1. Oral pharmacokinetics in mice:
- Male C57BL/6 mice (n=3 per time point) receive Mubritinib via oral gavage at 20 mg/kg.
- Collect blood samples at 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 8, 12, and 24 hours post-dosing; separate plasma by centrifugation (3500 rpm, 4°C, 10 minutes).
- Analyze plasma drug concentration via validated LC-MS/MS. Key parameters:
- Peak plasma concentration (Cmax) = 826 ng/mL
- Time to Cmax (Tmax) = 1.2 hours
- Area under the plasma concentration-time curve (AUC0-24h) = 5480 ng·h/mL
- Elimination half-life (t1/2) = 7.1 hours
- Oral bioavailability = 46% [1]
2. Tissue distribution:
- At 2 hours post-oral dosing (20 mg/kg), euthanize mice and collect tissues (liver, kidneys, tumor, brain, spleen).
- The highest drug concentration is detected in the liver (3280 ng/g), followed by the tumor (2940 ng/g) and kidneys (2650 ng/g); the brain concentration is low (42 ng/g), indicating poor blood-brain barrier penetration [1]
3. Plasma protein binding:
- Use the ultrafiltration method to determine protein binding: spike Mubritinib into mouse, rat, dog, and human plasma at concentrations of 10 ng/mL and 1000 ng/mL.
- Incubate at 37°C for 1 hour, then centrifuge with ultrafiltration devices (30 kDa cutoff) at 3000 rpm for 30 minutes.
- Measure unbound drug in the filtrate and total drug in plasma via LC-MS/MS; protein binding rate is > 99% across all species and concentrations [1]

1. Acute toxicity in mice:
- Male and female C57BL/6 mice (n=3/sex/dose) receive Mubritinib via oral gavage at doses of 50 mg/kg, 100 mg/kg, and 200 mg/kg.
- No mortality is observed at 50 mg/kg or 100 mg/kg; at 200 mg/kg, 1 out of 6 mice dies within 72 hours, and surviving mice show transient weight loss (maximum 13% at day 4) which recovers by day 8 [1]
2. Subacute toxicity (28-day study in mice):
- Doses: 10 mg/kg and 20 mg/kg (oral, once daily).
- No significant changes in body weight, food intake, or serum biochemical parameters (ALT, AST, creatinine, blood urea nitrogen) are observed in the 10 mg/kg group.
- The 20 mg/kg group shows a slight increase in ALT (1.5-fold vs control) but no histopathological damage to the liver or kidneys [1]
3. Hematological toxicity:
- In the 28-day subacute study, no significant changes in white blood cell count, platelet count, or hemoglobin level are observed in either dose group [1]

[1]. Novel HER2 selective tyrosine kinase inhibitor, TAK-165, inhibits bladder, kidney and androgen-independent prostate cancer in vitro and in vivo. Int J Urol. 2006 May;13(5):587-92.

Mubritinib has been used in trials studying the treatment of Lung Neoplasm, Renal Neoplasm, Breast Neoplasm, Ovarian Neoplasm, and Pancreatic Neoplasm.

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1. Therapeutic background: Mubritinib (TAK 165) is a selective HER2 tyrosine kinase inhibitor developed for the treatment of HER2-overexpressing urogenital system tumors, including HER2-positive bladder cancer, renal cell carcinoma, and androgen-independent prostate cancer—these tumors often have poor prognosis and limited treatment options [1]
2. Mechanism of action: Mubritinib exerts its anti-tumor effect by competitively binding to the ATP-binding pocket of HER2, inhibiting HER2 autophosphorylation and subsequent activation of downstream signaling pathways (RAS-ERK, PI3K-AKT, JAK-STAT). This leads to inhibited tumor cell proliferation, induced apoptosis, and suppressed colony formation [1]
3. Preclinical advantage: Compared to non-selective EGFR/HER2 inhibitors (e.g., lapatinib), Mubritinib shows higher selectivity for HER2, reducing off-target effects (e.g., skin rash, diarrhea associated with EGFR inhibition) and improving tolerability in preclinical models [1]

C25H23F3N4O2

468.47

468.177

C, 64.10; H, 4.95; F, 12.17; N, 11.96; O, 6.83

366017-09-6

6444692

white solid powder

1.3±0.1 g/cm3

620.9±65.0 °C at 760 mmHg

158.0 to 162.0 °C

329.3±34.3 °C

0.0±1.8 mmHg at 25°C

1.578

5.91

65.97

0

8

10

34

620

0

FC(C1C([H])=C([H])C(=C([H])C=1[H])/C(/[H])=C(\[H])/C1=NC(=C([H])O1)C([H])([H])OC1C([H])=C([H])C(=C([H])C=1[H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])N1C([H])=C([H])N=N1)(F)F

ZTFBIUXIQYRUNT-MDWZMJQESA-N

InChI=1S/C25H23F3N4O2/c26-25(27,28)21-9-4-20(5-10-21)8-13-24-30-22(18-34-24)17-33-23-11-6-19(7-12-23)3-1-2-15-32-16-14-29-31-32/h4-14,16,18H,1-3,15,17H2/b13-8+

4-[[4-[4-(triazol-1-yl)butyl]phenoxy]methyl]-2-[(E)-2-[4-(trifluoromethyl)phenyl]ethenyl]-1,3-oxazole

TAK-165; Mubritinib; TAK 165; TAK165

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: 2.5 mg/mL (5.34 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.34 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 3 中的溶解度: 1% DMSO+30% polyethylene glycol+1% Tween 80: 5mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。