MZ1

别名: MZ1; MZ-1; MZ 1. BRD4靶向的PROTAC降解剂
目录号: V3580 纯度: ≥98%
MZ 1 (MZ1; MZ-1) 是一种新型、有效的基于 PROTAC 的 BRD4 蛋白降解剂,具有抗癌活性。
MZ1 CAS号: 1797406-69-9
产品类别: PROTAC | 蛋白降解靶向嵌合体
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
5mg
10mg
25mg
50mg
100mg
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Other Forms of MZ1:

  • cis-MZ 1 hydrate
  • cis-MZ 1
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纯度/质量控制文件

纯度: ≥98%

产品描述
MZ 1 (MZ1; MZ-1) 是一种新型、有效的基于 PROTAC 的 BRD4 蛋白降解剂,具有抗癌活性。诱导大分子与小分子相互作用以激活细胞信号传导是一个具有挑战性的目标。 PROTAC(蛋白水解靶向嵌合体)是双功能分子,可在 E3 泛素连接酶附近募集目标蛋白以触发蛋白降解。关键三元连接酶 PROTAC 目标物种的结构阐明及其对目标降解选择性的影响仍然难以捉摸。
生物活性&实验参考方法
靶点
MZ1 targets bromodomain and extra-terminal (BET) family protein BRD4 (bromodomain-containing protein 4, BD1 and BD2 domains) and von Hippel-Lindau (VHL) E3 ubiquitin ligase. Kd values: BRD4 BD1 (0.4 nM), BRD4 BD2 (0.8 nM). [1]

MZ1 binds to BRD4 BD1/BD2 and VHL, forming a ternary complex through cooperative recognition. [2]
体外研究 (In Vitro)
通过 3 单元 PEG 连接体,MZ 1 将 pan-BET 原型 JQ1 与 VH032(一种高度共振的 VHL 配体)结合 [2]。在 LS174t 细胞中,MZ 1(100 和 250 nM;24 小时)会导致 BRD4 降解。在不降低 BRD4 mRNA 表达的情况下,MZ 1 完全降解 BRD4 蛋白 [3]。
1. MZ1以浓度和时间依赖性方式选择性降解BRD4:MV4;11急性髓系白血病(AML)细胞用MZ1(0.1–100 nM)处理4小时后,Western blot检测显示BRD4降解(降解浓度50% DC50=1.8 nM,n=3次独立实验);10 nM MZ1处理4小时可实现BRD4最大程度降解,洗去药物后24小时内未观察到BRD4恢复。[1]

2. MZ1对BRD4具有高选择性(优于其他BET家族成员):MV4;11细胞中,10 nM MZ1处理4小时可降解>90%的BRD4,但对BRD2/3的影响极小(Western blot,n=3);溴结构域谱分析证实其不与非BET家族溴结构域显著结合。[1]

3. MZ1抑制MYC表达及下游信号通路:MV4;11细胞经10 nM MZ1处理4小时后,Western blot检测显示MYC蛋白水平降低~80%,qPCR检测(n=3次三重重复)显示MYC mRNA水平下调~70%;同时下调MYC靶基因(CCND2、CDK6、BCL2)的mRNA表达。[1]

4. MZ1抑制细胞增殖并诱导凋亡:MV4;11细胞经MZ1处理72小时后,CellTiter-Glo发光法检测显示抗增殖活性(半数抑制浓度IC50=3.2 nM,n=3次三重重复);10 nM MZ1处理24小时可激活caspase-3/7(较DMSO升高2.5倍,Caspase-Glo assay,n=3次三重重复),并诱导PARP切割(Western blot)。[1]

5. MZ1介导的BRD4降解依赖VHL和蛋白酶体:MV4;11细胞提前1小时用VHL抑制剂VH032(1 μM)或蛋白酶体抑制剂MG132(5 μM)预处理,可阻断10 nM MZ1(处理4小时)诱导的BRD4降解(Western blot,n=3);CRISPR/Cas9介导的VHL敲除可完全消除MZ1的BRD4降解活性。[1]

6. MZ1与BRD4、VHL形成稳定三元复合物:AlphaScreen实验显示MZ1促进BRD4-VHL相互作用(半数有效浓度EC50=0.3 nM,n=3次三重重复);等温滴定量热法(ITC)和表面等离子体共振(SPR)证实其与两个靶点均存在直接结合。[1]

7. 协同识别的结构基础:MZ1通过连接子区域桥接BRD4 BD2与VHL,诱导两种蛋白发生构象变化,从而增强结合亲和力;三元复合物结构揭示MZ1与BRD4/VHL之间存在关键疏水作用和氢键相互作用。[2]
体内研究 (In Vivo)
1. MZ1在肿瘤异种移植模型中诱导BRD4降解并抑制MYC:携带MV4;11异种移植瘤的雌性Nu/Nu小鼠单次皮下注射MZ1(10 mg/kg),6小时后收集肿瘤组织,Western blot检测显示BRD4降解>80%,MYC下调~70%(每组5只小鼠)。[1]

2. MZ1具有剂量依赖性肿瘤生长抑制作用:MV4;11异种移植小鼠每日皮下注射MZ1(3 mg/kg、10 mg/kg)或溶媒,连续14天;10 mg/kg剂量组肿瘤生长抑制率达78%(平均肿瘤体积 vs 溶媒组,每组8只小鼠),且无显著体重下降。[1]
酶活实验
1. BRD4溴结构域结合实验(SPR):将重组BRD4 BD1或BD2结构域固定于传感器芯片,系列稀释的MZ1流经芯片,记录结合响应信号以计算Kd值;实验设三重重复,以DMSO为阴性对照。[1]

2. 三元复合物形成实验(AlphaScreen):将重组BRD4 BD2与VHL-HIF1α复合物与系列稀释的MZ1混合,通过AlphaScreen信号放大检测BRD4-MZ1-VHL三元复合物的形成,基于三重重复测量结果计算EC50值。[1]

3. 等温滴定量热法(ITC):将MZ1滴定至含重组BRD4 BD1/BD2或VHL-HIF1α复合物的溶液中,测量结合相关的热量变化,以确定结合亲和力(Kd)和热力学参数(ΔH、ΔS);实验在25°C下进行两次重复。[1]

4. 溴结构域选择性谱分析:将MZ1与一组重组溴结构域(42个家族成员)共同孵育,通过荧光乙酰化赖氨酸肽竞争实验检测结合情况,计算选择性评分以证实其对BRD4 BD1/BD2的优先结合能力。[1]
细胞实验
蛋白质印迹分析 [3]
细胞类型: LS174t 细胞
测试浓度: 0、100 和 250 nM
孵育时间:24小时
实验结果:BRD4蛋白完全降解,但BRD4 mRNA表达没有减少。
1. BRD4降解及MYC表达Western blot检测:MV4;11细胞用系列稀释的MZ1(0.1–100 nM)处理4小时(浓度依赖性)或10 nM MZ1处理0–24小时(时间依赖性),制备细胞裂解液后,通过Western blot检测BRD4、MYC及PARP切割情况,以GAPDH为内参。[1]

2. VHL/蛋白酶体依赖性验证实验:MV4;11细胞或VHL敲除MV4;11细胞提前1小时用VH032(1 μM)、MG132(5 μM)或溶媒预处理,再用10 nM MZ1处理4小时,通过Western blot检测BRD4水平,验证通路依赖性。[1]

3. 细胞增殖实验:MV4;11细胞以每孔5,000个细胞接种于96孔板,用系列稀释的MZ1(0.01–100 nM)处理72小时,采用CellTiter-Glo发光法检测细胞活力,基于三重重复孔数据计算IC50值(n=3次独立实验)。[1]

4. 凋亡实验:MV4;11细胞用10 nM MZ1或溶媒处理24小时,通过Caspase-Glo 3/7实验检测caspase-3/7活性,结果以相对于溶媒组的倍数变化表示(n=3次三重重复)。[1]

5. MYC靶基因qPCR分析:MV4;11细胞用10 nM MZ1或溶媒处理4小时,提取总RNA并逆转录为cDNA,采用特异性引物对MYC、CCND2、CDK6、BCL2进行qPCR定量(以GAPDH为内参,n=3次三重重复)。[1]
动物实验
1. MV4;11异种移植模型(Nu/Nu小鼠):将5×10⁶个MV4;11细胞皮下植入6-8周龄的雌性Nu/Nu小鼠体内。当肿瘤体积达到100-150 mm³时,将小鼠随机分为治疗组(每组n=5-8)。MZ1以3 mg/kg、10 mg/kg的剂量皮下注射,或以溶剂对照,每日一次,连续14天。每2天测量一次肿瘤体积和体重。为进行药效学分析,小鼠单次接受10 mg/kg剂量,并在给药后6小时收集肿瘤组织进行Western blot分析。[1]
药代性质 (ADME/PK)
1. MZ1 在小鼠体内表现出良好的血浆暴露量:在 Nu/Nu 小鼠中单次皮下注射 MZ1 (10 mg/kg) 后,给药后 1 小时血浆峰浓度 (Cmax) 达到 1.2 μM,半衰期 (t1/2) 为 4.8 小时(每个时间点 n=3 只小鼠)。[1]
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
1. MZ1 在小鼠中表现出良好的耐受性:每日皮下注射 MZ1(剂量高达 10 mg/kg),持续 14 天,不会引起明显的体重减轻(>5%)或明显的器官毒性(对肝脏、肾脏和脾脏进行组织病理学分析,每组 n=8 只小鼠)。[1]
参考文献

[1]. Selective Small Molecule Induced Degradation of the BET Bromodomain Protein BRD4. ACS Chem Biol. 2015 Aug 21;10(8):1770-7.

[2]. Structural basis of PROTAC cooperative recognition for selective protein degradation. Nat Chem Biol. 2017 May;13(5):514-521.

[3]. Targeting bromodomain-containing protein 4 (BRD4) inhibits MYC expression in colorectal cancer cells. Neoplasia. 2019 Nov;21(11):1110-1120.

其他信息
MZ1 是一种有机分子实体。
1. MZ1 是首个采用 PROTAC(蛋白水解靶向嵌合体)技术开发的选择性 BRD4 降解剂,由 BRD4 结合部分(JQ1 衍生物)、VHL 结合配体和聚乙二醇 (PEG) 连接子组成。[1]
2. MZ1、BRD4 和 VHL 之间的协同识别对其高选择性和效力至关重要:MZ1 诱导 VHL 发生“折叠”构象,从而为 BRD4 BD2 结构域创造互补的结合界面。[2]
3. MZ1 通过直接降解 BRD4 而非阻断其溴结构域,克服了 BRD4 抑制剂的局限性,从而实现更持久的 MYC 抑制和抗肿瘤活性。 [1]

4. BRD4 是转录延伸的关键调控因子,其过表达与血液系统恶性肿瘤(例如急性髓系白血病)和实体瘤相关,因此是一个已验证的治疗靶点。[1]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C49H60CLN9O8S2
分子量
1002.63920783997
精确质量
1001.369
元素分析
C, 58.70; H, 6.03; Cl, 3.54; N, 12.57; O, 12.77; S, 6.40
CAS号
1797406-69-9
相关CAS号
cis-MZ 1;1797406-72-4
PubChem CID
122201421
外观&性状
White to light yellow solid powder
LogP
5
tPSA
268
氢键供体(HBD)数目
4
氢键受体(HBA)数目
14
可旋转键数目(RBC)
21
重原子数目
69
分子复杂度/Complexity
1750
定义原子立体中心数目
4
SMILES
ClC1C=CC(=CC=1)C1C2C(C)=C(C)SC=2N2C(C)=NN=C2[C@H](CC(NCCOCCOCCOCC(N[C@H](C(N2C[C@@H](C[C@H]2C(NCC2C=CC(C3=C(C)N=CS3)=CC=2)=O)O)=O)C(C)(C)C)=O)=O)N=1
InChi Key
IHNPXDBPGMBPCY-BAVOTMDYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C49H60ClN9O7S2/c1-29-31(3)68-48-41(29)42(34-14-16-36(50)17-15-34)54-37(45-57-56-32(4)59(45)48)25-39(60)51-18-20-64-21-22-65-23-24-66-27-40(61)55-44(49(5,6)7)47(63)58-19-8-9-38(58)46(62)52-26-33-10-12-35(13-11-33)43-30(2)53-28-67-43/h10-17,28,37-38,44H,8-9,18-27H2,1-7H3,(H,51,60)(H,52,62)(H,55,61)/t37-,38-,44+/m0/s1
化学名
1-[2(S)-(2-{2-[2-(2-{2-[4-(4-Chloro-phenyl)-2,3,9-trimethyl-6H-1-thia-5,7,8,9a-tetraaza-cyclopenta[e]azulen-6(S)-yl]-acetylamino}-ethoxy)-ethoxy]-ethoxy}-acetylamino)-3,3-dimethyl-butyryl]-pyrrolidine-2(S)-carboxylic acid 4-(4-methyl-thiazol-5-yl)-benzylamide
别名
MZ1; MZ-1; MZ 1.
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 请将本产品存放在密封且受保护的环境中(例如氮气保护),避免吸湿/受潮。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO : ~100 mg/mL (~99.74 mM)
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (2.49 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中,混匀;然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (2.49 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中,混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备(4°C,1 周):将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中,得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (2.49 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。


请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 0.9974 mL 4.9868 mL 9.9737 mL
5 mM 0.1995 mL 0.9974 mL 1.9947 mL
10 mM 0.0997 mL 0.4987 mL 0.9974 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

生物数据图片
  • MZ1


    The crystal structure of the Brd4BD2:MZ1:VHL-ElonginC-ElonginB complex.2017 May;13(5):514-521.

  • MZ1


    Brd4BD2and VHL form a stable, cooperative complex in the presence of MZ1.

    MZ1

    Schematic model of selective PROTAC-induced target degradation.2017 May;13(5):514-521.

  • MZ1


    The molecular basis of MZ1-induced compact complex formation between Brd4BD2and VHL.

    MZ1

    Structure-guided design and characterization of Brd4-selective degrader AT1.2017 May;13(5):514-521.

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