Sunitinib metabolite; VEGFR; PDGFRβ; KIT

此外，舒尼替尼还能有效抑制FLT-3和Kit[1]。舒尼替尼是一种强效 ATP 竞争性抑制剂，PDGFRβ 的 Ki 值为 8 nM，VEGFR2 (Flk1) 的 Ki 值为 9 nM。与 FGFR-1、EGFR、Cdk2、Met 和 IGFR 相比，它对 VEGFR2 和 PDGFR 的选择性高出十倍。多于。 1.Src 和 Abl。在表达 VEGFR2 或 PDGFRβ 的血清饥饿 NIH-3T3 细胞中，Sunitinib 抑制 VEGF 依赖性 VEGFR2 磷酸化和 PDGF 依赖性 PDGFRβ 磷酸化，IC50 值分别为 10 nM 和 10 nM。舒尼替尼对 VEGF 的 IC50 为 40 nM，可防止血清饥饿的 HUVEC 增殖，对 PDGF 的 IC50 为 39 nM 和 69 nM，可防止过度表达 PDGFRβ 或 PDGFRβ 的 NIH-3T3 细胞增殖 [2]。对于野生型 FLT3、FLT3-ITD 和 FLT3-Asp835，舒尼替尼抑制磷酸化，IC50 值分别为 250 nM、50 nM 和 30 nM。 Sunitinib 以剂量依赖性方式引起 MV4;11 和 OC1-AML5 细胞凋亡，并抑制其生长，IC50 值分别为 8 nM 和 14 nM [3]。

跨多种肿瘤异种移植模型，例如 HT-29、A431、Colo205、H-460、SF763T、C6、A375 或 MB-435 的 MDA 依赖性抗肿瘤活性、舒尼替尼（20–80 mg/kg/天）表现出广泛而有效的剂量范围，与体内 VEGFR2 或 PDGFR 磷酸化和信号转导的显着且选择性抑制一致。在八只小鼠中，有六只连续 21 天服用舒尼替尼（80 毫克/公斤/天），导致肿瘤总体缩小；治疗结束后 110 天的观察期内没有发生肿瘤再生。对于第一轮治疗期间肿瘤未完全消退的情况，第二轮舒尼替尼仍然有效。舒尼替尼治疗大大降低了肿瘤 MVD，SF763T 神经胶质瘤肿瘤的 MVD 降低了 40%。尽管肿瘤大小没有减小，但 SU11248 疗法完全阻止了表达荧光素酶的 PC-3M 异种移植物中肿瘤的进一步生长 [2]。在 FLT3-ITD 骨髓移植范例中，舒尼替尼疗法（20 mg/kg/天）有效减少了皮下 MV4;11 (FLT3-ITD) 异种移植物的生长并延长了生存期 [3]。

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为了预测在小鼠异种移植模型中获得抗肿瘤活性所需的目标SU11248暴露，我们直接测量了SU11248治疗前后肿瘤异种移植的靶磷酸化水平，并将其与血浆抑制剂水平相关联。在体内靶标调节研究中，当血浆抑制剂浓度达到或超过50-100 ng/ml时，SU11248选择性抑制Flk-1/KDR （VEGF受体2）和PDGF受体β磷酸化（以时间和剂量依赖的方式）。在vegf诱导的血管通透性的体内功能测定中也获得了类似的结果。持续抑制VEGFR2和PDGF受体β磷酸化并不需要有效；在高效剂量下，抑制持续12小时（24小时给药间隔）。在这些临床前研究中，SU11248建立了药代动力学/药效学关系[2]。

舒尼替尼对VEGFR2 （Flk-1）和PDGFRβ的IC50值是用含有RTK完整细胞质结构域的谷胱甘肽s -转移酶融合蛋白来测定的。生化酪氨酸激酶测定定量VEGFR2 （Flk-1）和PDGFRβ的反式磷酸化活性在96孔微滴板上进行(20 μg/孔PBS；在4°C下孵育过夜)，肽底物poly-Glu，Tyr（4:1）。在PBS中加入1-5% （w/v）的BSA可以阻断多余的蛋白质结合位点。纯化的gst融合蛋白在杆状病毒感染的昆虫细胞中产生。然后将GST-VEGFR2和GST-PDGFRβ加入到2倍浓度的激酶稀释缓冲液中，该缓冲液由100 mM HEPES， 50 mM NaCl， 40 μM NaVO4和0.02% (w/v) BSA组成。GST-VEGFR2或GST-PDGFRβ的最终酶浓度为50 ng/mL。随后在每个反应孔中加入25 μL稀释的舒尼替尼，以产生适合每种酶的抑制剂浓度范围。在MnCl2溶液中加入不同浓度的ATP，使酶的最终ATP浓度跨越Km， MnCl2的最终浓度为10 mM，从而启动激酶反应。在室温下培养5-15分钟，然后加入EDTA停止反应。然后用TBST洗三次盘子。兔多克隆抗磷酸酪氨酸抗血清加入含有0.5% (w/v) BSA、0.025% （w/v）脱脂干乳和100 μM NaVO4的TBST中，按1:10万稀释至孔中，在37℃下孵育1小时。然后用TBST洗涤三次，然后加入山辣根过氧化物酶偶联的山羊抗兔抗血清（TBST中1:10 000稀释）。37℃孵育1小时，用TBST洗涤3次。在加入2,2′-氮基-二-[3-乙基苯并噻唑啉磺酸盐]作为底物后，定量测定每孔中磷酸酪氨酸的含量。[1]

在加入舒尼替尼和FL （50 ng/mL）之前，将细胞在含有0.1% FBS的培养基中饥饿过夜；FLT3-WT细胞)。培养48小时后，用Alamar蓝法或台盼蓝细胞活力法测定细胞增殖。加入舒尼替尼24小时后，通过Western blotting检测细胞凋亡，以检测聚（adp -核糖）聚合酶（PARP）的裂解或caspase-3的水平。[3]

为了预测在小鼠异种移植模型中达到抗肿瘤活性所需的SU11248靶暴露量，我们直接测量了SU11248治疗前后肿瘤异种移植模型中靶点的磷酸化水平，并将其与血浆抑制剂浓度相关联。在体内靶点调控研究中，当血浆抑制剂浓度达到或超过50-100 ng/ml时，SU11248选择性地抑制了Flk-1/KDR（VEGF受体2）和PDGF受体β的磷酸化（呈时间和剂量依赖性）。在体内VEGF诱导的血管通透性功能测定中也获得了类似的结果。持续抑制VEGFR2和PDGF受体β的磷酸化并非疗效所必需；在高效剂量下，抑制作用可在24小时给药间隔内持续12小时。这些临床前研究建立了SU11248的药代动力学/药效学关系[2]。

[1]. Discovery of 5-[5-fluoro-2-oxo-1,2- dihydroindol-(3Z)-ylidenemethyl]-2,4- dimethyl-1H-pyrrole-3-carboxylic acid (2-diethylaminoethyl)amide, a novel tyrosine kinase inhibitor targeting vascular endothelial and platelet-derived growth factor receptor tyrosine kinase. J Med Chem. 2003 Mar 27;46(7):1116-9.

[2]. In vivo antitumor activity of SU11248, a novel tyrosine kinase inhibitor targeting vascular endothelial growth factor and platelet-derived growth factor receptors: determination of a pharmacokinetic/pharmacodynamic relationship. Clin Cancer Res. 2003 Jan;9(1):327-37.

[3]. SU11248 is a novel FLT3 tyrosine kinase inhibitor with potent activity in vitro and in vivo. Blood. 2003 May 1;101(9):3597-605.

为了提高吲哚啉-2-酮的抗肿瘤活性并优化其药理性质，包括溶解度和蛋白结合率，我们设计并合成了一系列不同的碱性和弱碱性类似物。结果表明，5-[5-氟-2-氧代-1,2-二氢吲哚-(3Z)-亚甲基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸(2-二乙氨基乙基)酰胺（12b 或 SU11248）在生化和细胞水平上对 VEGF-R2 和 PDGF-Rβ 酪氨酸激酶的活性、溶解度、蛋白结合率和生物利用度方面均表现出最佳的综合性能。 12b 目前正处于治疗癌症的 I 期临床试验阶段。[1]

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分子靶向疗法代表了一种治疗癌症的新兴且前景广阔的方法，其临床开发面临的一大挑战在于如何确定生物活性剂量而非最大耐受剂量。本研究旨在通过临床前模型确定可用于指导临床剂量选择的药代动力学/药效学关系。SU11248 是一种新型小分子受体酪氨酸激酶抑制剂，可通过靶向血管内皮生长因子 (VEGF)、血小板衍生生长因子 (PDGF)、KIT 和 FLT3 受体酪氨酸激酶发挥直接抗肿瘤和抗血管生成活性，本研究采用该药物作为研究对象。在小鼠异种移植模型中，SU11248 表现出广泛而强效的抗肿瘤活性，可导致多种已建立的、源自人或大鼠肿瘤细胞系的异种移植瘤消退、生长停滞或显著减少生长。为了预测在小鼠异种移植模型中达到抗肿瘤活性所需的 SU11248 靶标暴露量，我们直接测量了 SU11248 治疗前后肿瘤异种移植瘤中靶标的磷酸化水平，并将其与血浆抑制剂浓度相关联。在体内靶标调控研究中，当血浆抑制剂浓度达到或超过 50-100 ng/ml 时，SU11248 选择性地抑制 Flk-1/KDR（VEGF 受体 2）和 PDGF 受体 β 的磷酸化（呈时间和剂量依赖性）。在体内 VEGF 诱导的血管通透性功能测定中也获得了类似的结果。持续抑制 VEGFR2 和 PDGF 受体 β 的磷酸化并非发挥疗效的必要条件。在高效剂量下，抑制作用可持续24小时给药间隔中的12小时。这些临床前研究中建立的SU11248的药代动力学/药效学关系有助于设计、选择和评估正在人体试验中测试的给药方案。[2]

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FLT3（fms相关酪氨酸激酶/Flk2/Stk-2）是一种主要在造血细胞上表达的受体酪氨酸激酶（RTK）。在急性髓系白血病（AML）患者的原始细胞中，已鉴定出两类FLT3激活突变：近膜结构域的内部串联重复（ITD）突变（占25%-30%的患者）和激酶结构域激活环的点突变（占7%-8%的患者）。 FLT3-ITD突变是急性髓系白血病（AML）中最常见的分子缺陷，已被证实是预后不良的独立因素。因此，FLT3-ITD是一个极具吸引力的分子治疗靶点。SU11248是一种近期发现的选择性抑制剂，对分裂激酶结构域受体酪氨酸激酶（RTK）具有选择性，包括血小板衍生生长因子受体、血管内皮生长因子受体和KIT。我们发现，在磷酸化实验中，SU11248对野生型FLT3（FLT3-WT）、FLT3-ITD和FLT3激活环（FLT3-Asp835）突变体均具有强效活性。SU11248可抑制FLT3驱动的磷酸化，并在体外诱导细胞凋亡。此外，SU11248还能抑制FLT3诱导的VEGF生成。本研究在两种FLT3-ITD模型中考察了SU11248的体内疗效：皮下肿瘤异种移植模型和骨髓移植模型。结果表明，SU11248（20 mg/kg/d）可显著抑制皮下肿瘤异种移植模型中的FLT3-ITD肿瘤，并延长骨髓移植模型中的生存期。皮下肿瘤的药代动力学和药效学分析显示，单次给予有效剂量的药物即可强效抑制FLT3-ITD磷酸化，抑制作用可持续长达16小时。这些结果提示，有必要进一步研究SU11248在急性髓系白血病（AML）患者中的活性。[3]

C₂₀H₂₃FN₄O₂

370.42

370.181

356068-97-8

N-Desethyl Sunitinib-d5;1217247-62-5;N-Desethyl Sunitinib hydrochloride

10292573

Light yellow to orange solid powder

3.522

86.02

4

4

6

27

597

0

CCNCCNC(=O)C1=C(NC(=C1C)/C=C\2/C3=C(C=CC(=C3)F)NC2=O)C

LIZNIAKSBJKPQC-GDNBJRDFSA-N

InChI=1S/C20H23FN4O2/c1-4-22-7-8-23-20(27)18-11(2)17(24-12(18)3)10-15-14-9-13(21)5-6-16(14)25-19(15)26/h5-6,9-10,22,24H,4,7-8H2,1-3H3,(H,23,27)(H,25,26)/b15-10-

N-[2-(ethylamino)ethyl]-5-[(Z)-(5-fluoro-2-oxo-1H-indol-3-ylidene)methyl]-2,4-dimethyl-1H-pyrrole-3-carboxamide

SU-11662; SU11662; N-Desethyl Sunitinib; 356068-97-8; N-DesethylSunitinib; SU-12662; N-[2-(ethylamino)ethyl]-5-[(Z)-(5-fluoro-2-oxo-1H-indol-3-ylidene)methyl]-2,4-dimethyl-1H-pyrrole-3-carboxamide; CHEMBL3542344; 42LJ35612R; UNII-42LJ35612R; SU 11662

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~6.25 mg/mL (~16.87 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.75 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 0.62 mg/mL (1.67 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 6.2 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: 0.62 mg/mL (1.67 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 6.2 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。