Necrostatin-1 (Nec-1)

别名: Necrostatin-1; Necrostatin1; Necrostatin 1; Nec-1; Nec 1; Nec1 5-(1H-吲哚-3-基甲基)-3-甲基-2-硫酮-4-咪唑烷酮;Mth-DL-色氨酸;Necrostatin-1 ;5-[(1H-吲哚-3-基)甲基]-3-甲基-2-硫代咪唑啉-4-酮
目录号: V0037 纯度: ≥98%
Necrostatin-1 (Nec-1) 是一种新型、有效且特异性的 RIP1(受体相互作用蛋白 1)激酶抑制剂,可抑制 TNF-α 诱导的坏死性凋亡,在 293T 细胞中 EC50 为 490 nM。
Necrostatin-1 (Nec-1) CAS号: 4311-88-0
产品类别: TNFa
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
10 mM * 1 mL in DMSO
1mg
5mg
10mg
25mg
50mg
100mg
250mg
500mg
Other Sizes

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  • Necrostatin-1 (inactive control) (Nec-1 (inactive control))
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纯度: ≥98%

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产品描述
Necrostatin-1 (Nec-1) 在 293T 细胞中抑制 TNF-α 诱导的坏死性凋亡,EC50 为 490 nM。它是一种新型、有效、特异性的 RIP1 激酶抑制剂。当细胞凋亡执行受到抑制时,坏死性细胞死亡(坏死性细胞死亡的一种细胞机制)由细胞凋亡刺激触发,其形式是死亡结构域受体与其各自配体接合。死亡结构域受体相关接头激酶 RIP1 被 necrostatin-1(一种坏死性凋亡的小分子抑制剂)选择性抑制。
生物活性&实验参考方法
靶点
RIP1 kinase (EC50 = 182 nM)
体外研究 (In Vitro)
Necrostatin-1 (1-100 μM) 可防止内源性和过度表达的 RIP1 自身磷酸化。已发现 Necrostatin-1 的抗坏死活性主要由 RIP1 介导。 [1] Necrostatin-1 可有效防止多种刺激诱导的一系列细胞类型的坏死性细胞死亡。 necrostatin-1(之前被鉴定为小分子坏死性凋亡抑制剂)的 EC50 为 490 nM,可阻断 Jurkat 细胞中 RIP 激酶和 TNF-α 诱导的坏死性凋亡。 [2]
体内研究 (In Vivo)
Necrostatin-1 (Nec-1) 是受体相互作用蛋白激酶 1 (RIPK1) 的特异性小分子抑制剂,可阻止 RIPK1 的磷酸化。
酶活实验
RIP1 的磷酸化需要其激酶活性。 RIP1 激酶测定按照方法中的概述进行,在 [γ-32P]ATP 存在下在 30°C 下进行 30 分钟,使用 FLAG 标记的野生型 (WT) 或 RIP1 激酶失活点突变体 (K45M) 的表达构建体或带有 FLAG 标记的野生型 (WT) 或 K45M。 SDS-PAGE 后,对样品进行放射自显影以鉴定 RIP1 带。该放射自显影图以及所有其他放射自显影图显示了放射性谱带基于比率的相对强度。为了确保激酶反应中存在等量的蛋白质,使用抗 RIP1 抗体对珠子样本进行蛋白质印迹分析。
动物实验
Cells are seeded at a density of 5,000–10,000 cells per well for adherent cells or 20,000–50,000 cells per well for suspension cells in 96-well plates (white plates for luminescent assays, black plates for fluorescent assays, clear plates for MTT assay) in 100 l of the appropriate phenol red-free media. We used one of the following techniques to assess cell viability following incubation. We used luminescence-based commercial kits for the ATP assay and a Wallac Victor II plate reader to analyze luminescence. For the Sytox assay, cells were incubated with 1 M Sytox Green reagent for 30 min at 37°C before fluorescent reading was carried out. We then added 5 μl of a 20% Triton X-100 solution to each well in order to achieve the greatest amount of lysis. Cells were then incubated for 1 h at 37°C before the second reading was taken. We determined the ratio of values before and after Triton treatment and normalized it to the pertinent controls not exposed to cytotoxic stimuli, as shown in the figure legends. CellTiter 96 AQueous Non-Radioactive Cell Proliferation Assay kit was utilized for the MTT assay. We immediately analyzed samples using the FACSCalibur after adding 2 g/ml PI to the medium for PI exclusion assays. The ApoAlert Annexin V-EGFP Apoptosis Kit was utilized for the PI-annexin V assay. We stained cells with 40 nM DiOC6 for 30 min at 37 °C, then washed them once and ran a FACSCalibur analysis. For ROS analysis, we incubated cells with 5 μM dihydroethidium for 30 min at 37 ℃, washed once and analyzed in FACSCalibur. The Harvard Medical School EM facility is where EM analyses are carried out. An Axiovert 200 microscope was used to capture bright-field images of the cells.
参考文献

[1].Nat Chem Biol . 2008 May;4(5):313-21.

[2]. Nat Chem Biol . 2005 Jul;1(2):112-9.

[3]. Front Pharmacol . 2018 Nov 27;9:1378.

*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C13H13N3OS
分子量
259.33
精确质量
259.07793
元素分析
C, 60.21; H, 5.05; N, 16.20; O, 6.17; S, 12.36
CAS号
4311-88-0
外观&性状
Light yellow solid powder
SMILES
CN1C(=O)C(NC1=S)CC2=CNC3=CC=CC=C32
InChi Key
TXUWMXQFNYDOEZ-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C13H13N3OS/c1-16-12(17)11(15-13(16)18)6-8-7-14-10-5-3-2-4-9(8)10/h2-5,7,11,14H,6H2,1H3,(H,15,18)
化学名
5-(1H-indol-3-ylmethyl)-3-methyl-2-sulfanylideneimidazolidin-4-one
别名
Necrostatin-1; Necrostatin1; Necrostatin 1; Nec-1; Nec 1; Nec1
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外)
DMSO: ~51 mg/mL warming (~196.7 mM)
Water: <1 mg/mL (slightly soluble or insoluble)
Ethanol: <1 mg/mL (slightly soluble or insoluble)
溶解度 (体内)
5% DMSO+45% PEG 300+ddH2O: 10mg/mL 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 50% PEG300 → 5% Tween-80 → 35% ddH2O;假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄 清 DMSO 储备液加到 500 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入350 μL ddH2O定容至 1 mL);
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 3.8561 mL 19.2805 mL 38.5609 mL
5 mM 0.7712 mL 3.8561 mL 7.7122 mL
10 mM 0.3856 mL 1.9280 mL 3.8561 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
+
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

生物数据图片
  • Necrostatin-1

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