| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 10 mM * 1 mL in DMSO |
|
||
| 1mg |
|
||
| 5mg |
|
||
| 10mg |
|
||
| 25mg |
|
||
| 50mg |
|
||
| 100mg |
|
||
| 250mg |
|
||
| 500mg |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
RIP1 kinase (EC50 = 182 nM)
Target: Necrostatin-1 targets receptor-interacting protein kinase 1 (RIPK1) [3] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
坏死抑制剂-1 (1-100 μM) 可抑制内源性和过表达的 RIP1 发生自磷酸化。研究发现，坏死抑制剂-1 的抗坏死性凋亡活性主要由 RIP1 介导。[1] 坏死抑制剂-1 可有效抑制多种刺激诱导的多种细胞类型的坏死性凋亡。坏死抑制剂-1 是一种小分子坏死性凋亡抑制剂，其 EC50 值为 490 nM，可阻断 Jurkat 细胞中 RIP 激酶和 TNF-α 诱导的坏死性凋亡。 [2]体外实验：CCK-8 检测显示，坏死抑制剂-1 (30 μmol/L) 在 24、48 或 72 小时后均未降低原代小鼠软骨细胞的细胞活力或增殖[3]。坏死抑制剂-1 显著逆转了 IL-1β 诱导的 MMP3、MMP13 和 ADAMTs5 蛋白水平在 48 和 72 小时的升高[3]。免疫荧光和蛋白质印迹结果显示，坏死抑制剂-1 降低了 HMGB1 的表达水平，并抑制了 IL-1β 促进的 HMGB1 从细胞核向细胞质的转位[3]。添加重组 HMGB1 可消除坏死抑制剂-1 介导的 MMP3、MMP13、ADAMTs5 和 SDF-1 的降低。表达[3]。
坏死抑制剂-1降低了IL-1β诱导的HMGB1与TLR4的相互作用，如共免疫沉淀实验所示[3]。 坏死抑制剂-1逆转了IL-1β诱导的cleaved caspase-3表达增加，并降低了细胞凋亡率（IL-1β组的10.3%降至IL-1β+Nec-1组的6.53%），如Annexin V-FITC/PI染色和流式细胞术检测所示[3]。 坏死抑制剂-1不影响坏死性凋亡标志物p-MLKL的表达[3]。 坏死抑制剂-1显著抑制了IL-1β诱导的IκBα和p65（NF-κB通路）的磷酸化，但对JNK、ERK或p38（MAPK通路）[3] |
| 体内研究 (In Vivo) |
坏死抑制剂-1 (Nec-1) 是一种特异性的小分子受体相互作用蛋白激酶1 (RIPK1) 抑制剂，可特异性抑制RIPK1的磷酸化。RIPK1通过与受体相互作用丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶3 (RIPK3) 相互作用来调节炎症和细胞死亡。我们假设Nec-1可能对骨关节炎 (OA) 患者具有抗炎作用，因为OA的病理生理过程涉及炎症相关信号通路的激活和细胞凋亡。在本研究中，我们探讨了Nec-1对小鼠软骨细胞中白细胞介素 (IL)-1β诱导的炎症以及内侧半月板不稳定 (DMM) 小鼠模型的影响。使用Nec-1抑制RIPK1可显著抑制体内和体外的分解代谢，但并未抑制软骨下骨的变化。 Nec-1可抑制IL-1β诱导的体外基质金属蛋白酶（MMP）和ADAMTs5（含血小板反应蛋白1型基序5）表达的增加。然而，添加高迁移率族蛋白B1（HMGB1）可部分消除这种作用，表明HMGB1和Nec-1在保护原代软骨细胞中发挥着关键作用。此外，Nec-1可降低Toll样受体4（TLR4）和基质细胞衍生因子-1（SDF-1）的表达，并减弱TLR4与HMGB1的相互作用。Western blot结果表明，Nec-1显著抑制IL-1β诱导的NF-κB转录活性，但不影响MAPK通路。本研究采用微型计算机断层扫描、免疫组织化学染色和番红O/固绿染色等体内方法评估骨关节炎（OA）软骨的破坏程度。结果表明，NEC-1可显著降低OA软骨的破坏程度。因此，NEC-1可能是一种治疗OA的新型候选药物。[3]
为了研究坏死性凋亡在缺血性脑损伤中的作用，我们检测了NEC-1对小鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）所致缺血性损伤的影响。脑室内注射NEC-1可显著（P < 0.05）减少MCAO后的梗死体积，提示坏死性凋亡可能参与了这种病理性死亡（图6a）。为了进行更深入的分析，我们改用了体外活性更高的7-Cl-NEC-1。 7-Cl-Nec-1 也显著（P < 0.05）且呈剂量依赖性地减少了 MCAO 后的梗死体积，并相应改善了神经功能评分（图 6b）。[2] 坏死抑制剂-1 (Nec-1) 是一种特异性的小分子受体相互作用蛋白激酶 1 (RIPK1) 抑制剂，可阻止 RIPK1 的磷酸化。 体内实验：在骨关节炎的内侧半月板不稳定 (DMM) 小鼠模型中，关节内注射坏死抑制剂-1（0.0468 mg/kg，每周两次，持续 8 周）可显著减轻软骨退变，番红 O/固绿染色显示软骨退变明显，并降低 OARSI 评分（胫骨：DMM 组 2 分 vs. 4 分；股骨：DMM 组 2 分 vs. 4 分；P<0.05）。 [3]. 坏死抑制剂-1降低了DMM小鼠关节软骨中MMP3、MMP13和ADAMTs5的表达，免疫组化染色结果证实了这一点[3]。 坏死抑制剂-1不影响DMM小鼠胫骨软骨下骨的重塑；DMM+坏死抑制剂-1组和假手术组之间，骨体积/组织体积比（BV/TV）、小骨厚度（Tb.Th）、小骨间距（Tb.Sp）或小骨数量（Tb.N）均无显著差异[3]。 与DMM组相比，坏死抑制剂-1使DMM小鼠术后8周血清SDF-1α水平降低了30.5%（ELISA法）[3]。 坏死抑制剂-1显著降低了DMM小鼠软骨中HMGB1和TLR4的表达，免疫组化结果证实了这一点[3]。 |
| 酶活实验 |
体外激酶活性测定[1]
该测定基本按照文献13所述进行。使用标准的Ca3(PO4)2沉淀法，将pcDNA3-FLAG-RIP1载体、编码RIP1突变蛋白的载体或pcDNA3-RIP2-Myc和pcDNA3-FLAG-RIP3载体转染至293T细胞。转染6小时后更换培养基，48小时后用TL缓冲液裂解细胞。TL缓冲液由1% Triton X-100、150 mM NaCl、20 mM HEPES（pH 7.3）、5 mM EDTA、5 mM NaF、0.2 mM NaVO3（邻位）和完全蛋白酶抑制剂混合物组成。使用抗FLAG M2琼脂糖珠在4℃下进行免疫沉淀16小时，随后用TL缓冲液洗涤三次，再用20 mM HEPES缓冲液（pH 7.3）洗涤两次。将琼脂糖珠置于15 μl反应缓冲液中，该反应缓冲液包含20 mM HEPES缓冲液（pH 7.3）、10 mM MnCl₂和10 mM MgCl₂，并在23–25℃下与不同浓度的坏死抑制剂孵育15分钟。在这些实验中，化合物储备液（溶于DMSO）在加入反应体系前用DMSO稀释至适当浓度，以确保所有样品中DMSO的最终浓度均为3%。通过加入10 μM非标记ATP和1 mCi [γ-³²P]ATP启动激酶反应，并在30℃下进行30分钟。反应通过在SDS-PAGE上样缓冲液中煮沸终止，然后进行8% SDS-PAGE电泳。使用Storm 8200磷光成像仪分析RIP1条带。内源性RIP1激酶反应采用类似方案，不同之处在于使用小鼠单克隆RIP1抗体和蛋白磁珠或兔RIP1抗体偶联的琼脂糖珠。对于重组杆状病毒表达的RIP1蛋白，根据制造商说明在Sf9细胞中表达，并使用谷胱甘肽-琼脂糖珠进行纯化。蛋白质用含 10 mM 还原型谷胱甘肽的 50 mM Tris-HCl 缓冲液（pH 8.0）洗脱，洗脱的蛋白质用于激酶反应，反应体系中添加 5× 激酶反应缓冲液（100 mM HEPES，pH 7.3，50 mM MnCl₂，50 mM MgCl₂，50 μM 冷 ATP 和 5 μCi [γ-³²P]ATP）。RIP1 的磷酸化需要其激酶活性。RIP1 激酶活性测定按照“方法”部分所述进行，在 [γ-³²P]ATP 存在下，于 30°C 孵育 30 分钟，使用 FLAG 标签的野生型 (WT) 或 RIP1 激酶失活点突变体 (K45M) 的表达载体，或 FLAG 标签的野生型 (WT) 或 K45M。 SDS-PAGE电泳后，对样品进行放射自显影以鉴定RIP1条带。该放射自显影图与其他所有放射自显影图一样，显示放射性条带的相对强度比值。为确保激酶反应中蛋白质的量相等，取一定量的磁珠样品进行Western blot分析，使用抗RIP1抗体。 |
| 细胞实验 |
细胞活力检测[3]
采用CCK-8法（Boster）评估细胞增殖和活力。简而言之，将原代软骨细胞以每孔10,000个细胞的密度接种于96孔板中。次日，每天向培养基中加入含有DMSO（溶剂）或等体积的坏死抑制剂-1（Nec-1）（30 μmol/L）。分别在24、48和72小时后，用100 μL含有10% CCK-8溶液的培养基替换原培养基，并在37°C避光孵育1小时。使用ELX800微孔板读数仪在450 nm处测量吸光度。 细胞凋亡分析[3] 使用Annexin V-FITC/碘化丙啶(PI)试剂盒检测在IL-1β (5 ng/mL)存在下，有或无坏死抑制剂-1 (Nec-1) (30 μmol/L)处理的软骨细胞的凋亡情况。处理后收集软骨细胞，用冰冷的PBS洗涤三次，并重悬于结合缓冲液中。然后，向缓冲液中加入5 μL PI和5 μL Annexin V，于4°C避光孵育15分钟。使用FACS Calibur流式细胞仪，按照制造商的说明分析早期和晚期凋亡细胞。 坏死抑制剂的细胞EC50测定[1] 如前所述，在用人TNFα处理的FADD缺陷型Jurkat细胞中进行EC50测定。简而言之，将细胞接种于96孔板中，并在有或无10 ng ml–1人TNFα的情况下，用一系列浓度的坏死抑制剂（30 nM至100 μM，11个剂量点）处理24小时。对于这些以及所有其他细胞测定，化合物储备液（溶于DMSO）在加入细胞前用DMSO稀释至适当浓度，以保持所有样品中DMSO的最终浓度为0.5%。使用CellTiter-Glo发光细胞活力测定法测定细胞活力。计算化合物和TNF处理组孔与化合物处理但未处理组孔的发光强度比值（细胞活力，%），并使用GraphPad Prism软件通过非线性回归计算EC50值。 细胞实验：从新生C57BL/6小鼠膝关节软骨中收集原代小鼠软骨细胞。将细胞用0.25%胰蛋白酶消化30分钟，再用0.25% II型胶原酶消化6小时，然后在含10%胎牛血清、青霉素和链霉素的DMEM/F12培养基中，于37℃、5% CO2条件下培养。使用第一代或第二代软骨细胞[3]。 使用CCK-8法评估细胞活力和增殖情况。将软骨细胞以 10,000 个细胞/孔的密度接种于 96 孔板中，然后每天用含 DMSO（溶剂）或坏死抑制剂-1 (30 μmol/L) 的培养基进行培养。分别在 24、48 和 72 小时后，用 100 μL 含 10% CCK-8 溶液的培养基替换原培养基，在 37°C 避光孵育 1 小时，并在 450 nm 波长处测量吸光度 [3]。 使用 Annexin V-FITC/碘化丙啶 (PI) 试剂盒检测细胞凋亡。将软骨细胞用IL-1β（5 ng/mL）处理，同时加入或不加入坏死抑制剂-1（30 μmol/L），然后收集细胞，用冰冷的PBS洗涤，重悬于结合缓冲液中，加入5 μL PI和5 μL Annexin V，于4°C避光孵育15分钟，并通过流式细胞术进行分析[3]。 免疫荧光：将软骨细胞用4%多聚甲醛固定15分钟，用0.1% Triton X-100透化5分钟，用0.1% BSA封闭30分钟，与抗HMGB1一抗于4°C孵育过夜，然后与山羊抗兔IgG/Cy3二抗于室温孵育1小时，最后用DAPI对细胞核进行染色。使用荧光显微镜采集图像[3]。 蛋白质印迹：采用BCA法测定蛋白质浓度。等量的蛋白质样品进行SDS-PAGE电泳，转移至PVDF膜，4℃下与一抗孵育过夜，再与二抗孵育，最后使用ChemiDoc系统扫描[3]。 免疫共沉淀：细胞裂解液先用IgG和Protein A+G琼脂糖预清除2小时，然后4℃下与一抗孵育过夜，再与Protein A+G琼脂糖孵育3小时。离心后，琼脂糖用裂解缓冲液洗涤5次，重悬于SDS上样缓冲液中，煮沸10分钟，最后进行蛋白质印迹分析[3]。 |
| 动物实验 |
给药时，我们将7-氯-坏死抑制剂-1 (Nec-1) 或其他衍生物溶解于4%甲基-β-环糊精（Sigma）PBS溶液中，并在指定时间点进行脑室内给药。通常情况下，我们进行两次2 μl的4 mM储备液注射（除非另有说明）。对于闭塞前给药，我们在2小时MCAO闭塞开始前5分钟和闭塞结束后立即进行注射，即再灌注时。对于闭塞后给药，我们在MCAO 2小时后的再灌注时以及再灌注开始后2小时进行注射。对于持续输注，我们在30分钟内输注20 μl化合物。对于闭塞后6小时的注射，我们单次注射4 μl。对于 zVAD.fmk 给药，我们将其添加到坏死抑制剂-1 (Nec-1) 制剂中，总剂量为 160 ng。[2]
12 周龄雄性 C57BL/6 小鼠饲养于光照和温度可控的房间内，并喂以标准饲料。动物体重见补充表 I。根据先前发表的方案（Glasson 等，2007），在右膝建立不稳定内侧半月板 (DMM) 骨关节炎手术模型。将 40 只小鼠分为四组（每组 n = 10）：（1）假手术组：假手术小鼠注射 15 μL 载体（5% DMSO、45% PEG300 和 ddH2O）；（2）假手术 + 坏死抑制剂-1 (Nec-1) 组：假手术小鼠注射 15 μL 坏死抑制剂-1 (Nec-1)（0.0468 mg/Kg）；（3）DMM 组：DMM 手术小鼠注射 15 μL 载体；（4）DMM + 坏死抑制剂-1 (Nec-1) 组：DMM 手术小鼠注射 15 μL Nec-1。在处死前，将坏死抑制剂-1 (Nec-1) 溶液或载体每周两次关节内注射，持续 8 周。[3] 动物实验方案：使用 12 周龄雄性 C57BL/6 小鼠。在右膝关节建立不稳定内侧半月板 (DMM) 骨关节炎手术模型[3]。 坏死抑制剂-1 依次溶解于 5% DMSO、45% PEG300 和 ddH2O 中。将坏死抑制剂-1溶液或载体以每次15 μL的体积进行关节内注射，剂量为0.0468 mg/kg体重，每周两次，持续8周，之后处死[3]。 小鼠被分为四组（每组n=10）：（1）假手术+载体，（2）假手术+坏死抑制剂-1，（3）DMM+载体，（4）DMM+坏死抑制剂-1[3]。 处死后，取右膝关节组织样本，用4%多聚甲醛固定48小时，用10% EDTA脱钙2周，然后包埋于石蜡中。沿矢状面切取4 μm厚的切片。采用番红O/固绿染色法，并使用OARSI组织病理学评分系统评估OA严重程度[3]。 免疫组织化学：将切片与针对MMP3、MMP13、ADAMTs5、HMGB1和TLR4的特异性抗体孵育，并在数字显微镜下计数阳性染色细胞[3]。 微型计算机断层扫描（μ-CT）成像：使用μ-CT系统在100 kV和98 μA、分辨率10.5 μm的条件下分析右膝关节结构。重建3D图像，并分析骨体积/组织体积（BV/TV）、小梁厚度（Tb.Th.）、小梁数量（Tb.N.）和小梁间距（Tb.Sp.）[3]。 |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
毒性/毒物动力学：体外实验表明，浓度为 30 μmol/L 的 坏死抑制剂-1 在 24、48 或 72 小时后，CCK-8 检测结果显示，并未降低原代小鼠软骨细胞的细胞活力或增殖 [3]。
|
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
5-(1H-吲哚-3-基甲基)-3-甲基-2-硫代亚甲基-4-咪唑烷酮是一种有机氮和有机氧化合物，其功能与α-氨基酸相关。坏死性凋亡是一种在凋亡受损的情况下，由凋亡刺激（例如死亡结构域受体与其相应配体结合）诱导的细胞死亡机制。尽管坏死性凋亡发生在受调控的条件下，但其形态学特征与不受调控的坏死性凋亡相同。本文报道了一种坏死性凋亡抑制剂-1（一种先前发现的小分子坏死性凋亡抑制剂），它在体外是死亡结构域受体相关激酶RIP1的选择性变构抑制剂。我们发现RIP1是坏死性凋亡抑制剂-1发挥其抗坏死性凋亡活性的主要细胞靶点。此外，我们还发现了另外两种坏死性凋亡抑制剂，即坏死性凋亡抑制剂-3和坏死性凋亡抑制剂-5，它们也靶向坏死性凋亡通路中的RIP1激酶步骤，但其作用机制与坏死性凋亡抑制剂-1不同。总之，我们的数据证实，坏死性凋亡抑制剂是首个RIP1激酶抑制剂，RIP1激酶是参与坏死性凋亡激活的关键上游激酶。[1]
过去十年，细胞凋亡的机制已被广泛研究，但人们对其他形式的程序性细胞死亡知之甚少。尽管Fas/TNFR受体家族的激活会触发经典的“外源性”细胞凋亡通路，但我们证明，即使在没有细胞内凋亡信号的情况下，它也能激活一种常见的非凋亡性细胞死亡通路，我们称之为坏死性凋亡。我们发现，坏死性凋亡的特征是具有坏死性凋亡的形态学特征以及自噬的激活。我们鉴定了一种特异性强效的小分子坏死性凋亡抑制剂——坏死抑制剂-1（坏死抑制剂-1），它能阻断坏死性凋亡的关键步骤。我们证实，坏死性凋亡通过一种不同于细胞凋亡的机制，导致小鼠体内缺血性脑损伤的发生延迟，并为卒中治疗提供了一个新的靶点，延长了神经保护窗口。我们的研究揭示了一条此前未被描述的基本细胞死亡通路，该通路可能对人类疾病具有广泛的意义。[2] 坏死抑制剂-1（Nec-1）是一种特异性的小分子受体相互作用蛋白激酶1（RIPK1）抑制剂，它能特异性地抑制RIPK1的磷酸化。RIPK1通过与受体相互作用丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶3（RIPK3）相互作用来调节炎症和细胞死亡。我们假设Nec-1可能对骨关节炎（OA）患者具有抗炎作用，因为OA的病理生理机制涉及炎症相关信号通路的激活和细胞凋亡。在本研究中，我们探讨了Nec-1对小鼠软骨细胞和内侧半月板不稳（DMM）小鼠模型中白细胞介素（IL）-1β诱导的炎症的影响。Nec-1对RIPK1的抑制作用显著抑制了体内和体外的分解代谢，但并未抑制软骨下骨的变化。Nec-1消除了IL-1β诱导的基质金属蛋白酶（MMPs）和含血小板反应蛋白1型基序5的ADAM金属肽酶在体外的表达增加。然而，添加高迁移率族蛋白1（HMGB1）部分消除了这种作用，表明HMGB1和Nec-1在保护原代软骨细胞中发挥着关键作用。此外，Nec-1降低了Toll样受体4 (TLR4)和基质细胞衍生因子-1 (SDF-1)的表达，并减弱了TLR4与HMGB1的相互作用。Western blot结果显示，Nec-1显著抑制了IL-1β诱导的NF-κB转录活性，但对MAPK通路无影响。采用微型计算机断层扫描、免疫组织化学染色和番红O/固定绿染色等方法对OA软骨损伤程度进行了体内评估。结果表明，Nec-1能够显著降低OA软骨损伤程度。因此，Nec-1可能是一种治疗OA的新型候选药物。 [3] 补充信息：坏死抑制剂-1是一种RIPK1特异性小分子抑制剂，可特异性抑制RIPK1的磷酸化以及RIPK1介导的坏死性凋亡和细胞凋亡[3]。 坏死抑制剂-1通过抑制RIPK1/HMGB1/TLR4信号通路和细胞凋亡来保护软骨细胞免受炎症损伤，但不影响坏死性凋亡（对p-MLKL无影响）[3]。 坏死抑制剂-1在体内和体外均能抑制分解代谢，可能是一种治疗骨关节炎的新型候选药物[3]。 |
| 分子式 |
C13H13N3OS
|
|
|---|---|---|
| 分子量 |
259.33
|
|
| 精确质量 |
259.077
|
|
| 元素分析 |
C, 60.21; H, 5.05; N, 16.20; O, 6.17; S, 12.36
|
|
| CAS号 |
4311-88-0
|
|
| 相关CAS号 |
Necrostatin-1 (inactive control);64419-92-7
|
|
| PubChem CID |
2828334
|
|
| 外观&性状 |
Light yellow solid powder
|
|
| 密度 |
1.4±0.1 g/cm3
|
|
| 沸点 |
441.9±37.0 °C at 760 mmHg
|
|
| 熔点 |
151ºC
|
|
| 闪点 |
221.1±26.5 °C
|
|
| 蒸汽压 |
0.0±1.1 mmHg at 25°C
|
|
| 折射率 |
1.738
|
|
| LogP |
1.26
|
|
| tPSA |
80.22
|
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
2
|
|
| 可旋转键数目(RBC) |
2
|
|
| 重原子数目 |
18
|
|
| 分子复杂度/Complexity |
373
|
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
|
| SMILES |
S=C1N(C([H])([H])[H])C(C([H])(C([H])([H])C2=C([H])N([H])C3=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C23)N1[H])=O
|
|
| InChi Key |
TXUWMXQFNYDOEZ-UHFFFAOYSA-N
|
|
| InChi Code |
InChI=1S/C13H13N3OS/c1-16-12(17)11(15-13(16)18)6-8-7-14-10-5-3-2-4-9(8)10/h2-5,7,11,14H,6H2,1H3,(H,15,18)
|
|
| 化学名 |
5-(1H-indol-3-ylmethyl)-3-methyl-2-sulfanylideneimidazolidin-4-one
|
|
| 别名 |
|
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
|
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
|
|||
|---|---|---|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (9.64 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (9.64 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: 5% DMSO+45% PEG 300+ddH2O: 10mg/mL 配方 4 中的溶解度: 12.5 mg/mL (48.20 mM) in 0.5% CMC-Na/saline water (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 5 中的溶解度: 1.67 mg/mL (6.44 mM) in 10% (50% EtOH 50% Cremophor EL) 90% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.8561 mL | 19.2805 mL | 38.5609 mL | |
| 5 mM | 0.7712 mL | 3.8561 mL | 7.7122 mL | |
| 10 mM | 0.3856 mL | 1.9280 mL | 3.8561 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
|
|---|
沙利度胺
KR-33494
LY303511盐酸盐
(Rac)-Benpyrine
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
COA
粤公网安备 44011102003439号
463611831
