Nolatrexed 2HCl

别名: Nolatrexed HCl; Nolatrexed dihydrochloride; AG337; AG 337; AG-337; brand name: Thymitaq. 盐酸诺拉曲塞; 盐酸洛拉曲克; 2-氨基-6-甲基-5-(4-吡啶巯基)-4(1H)-喹唑啉酮二盐酸盐; Nolatrexed (AG-337) ; 诺拉曲特;盐酸诺拉曲噻;盐酸诺拉曲塞,Nolatrexed dihydrochloride;二盐酸诺拉曲塞;诺拉曲塞盐酸盐
目录号: V16389 纯度: ≥98%
Nolatrexed dHCl(AG-337 二盐酸盐;thymitaq),afolate 类似物,是一种新型有效的胸苷酸合成酶抑制剂,具有潜在的抗癌活性。
Nolatrexed 2HCl CAS号: 152946-68-4
产品类别: Thymidylate Synthase
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
10 mM * 1 mL in DMSO
1mg
5mg
10mg
25mg
50mg
100mg
250mg
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  • Nolatrexed
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纯度/质量控制文件

纯度: ≥98%

产品描述
Nolatrexed dHCl(AG-337 二盐酸盐;thymitaq)是一种叶酸类似物,是一种新型、有效的胸苷酸合成酶抑制剂,具有潜在的抗癌活性。晚期 HCC 的 II 期研究。
生物活性&实验参考方法
靶点
Human Thymidylate Synthase (Ki = 11 nM)
体外研究 (In Vitro)
3,4-二氢-2-氨基-6甲基-4-氧代-5-(4-吡啶硫基)-喹唑啉二盐酸盐(AG337)是一种水溶性、亲脂性的胸苷酸合成酶(TS)抑制剂,使用基于X射线结构的方法设计,在该酶的叶酸辅因子结合位点相互作用。AG337以11nM的Ki抑制纯化的重组人TS,并显示出非竞争性抑制动力学。在一组鼠源和人源的细胞系中进一步显示其抑制细胞生长,显示出0.39微M至6.6微M的IC50。通过胸苷拮抗细胞生长抑制的能力以及使用氚释放测定法在全细胞中直接证明TS抑制,TS被认为是AG337的作用位点。通过流式细胞术证明,AG337处理的L1210细胞被阻滞在细胞周期的S期,这也与TS的阻断相一致,在AG337治疗的细胞中,核糖核苷酸和脱氧核糖核苷酸库的调节模式也一致,显示TTP水平显著降低。AG337的作用在药物去除后迅速逆转,这表明,正如亲脂性试剂所预期的那样,细胞内有快速的流入和流出,而没有细胞内代谢为具有增强保留的衍生物。[1]
使用连续或间歇性药物暴露测定亲脂性胸苷酸合成酶(TS)抑制剂AG337对人头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)细胞系和具有获得性甲氨蝶呤(MTX)耐药性的CCRF-CEM人白血病细胞及其亚系的影响。在120-h连续暴露期间,HNSCC细胞系A253和FaDu对MTX同样敏感(EC50等于约15nM);AG337的效力较低(EC50大约等于1微M)。A253对24小时间歇性MTX暴露具有内在抗性(EC50约等于17微M;FaDu,EC50约为0.3微M);两种HNSCC细胞系都对24小时AG337暴露具有抗性(EC50>100微M)。CCRF-CEM在类似于HNSCC的连续暴露中显示MTX(EC50=14nM)和AG337(EC50等于约0.6微米)敏感性;然而,AG337在间歇暴露中保持对CCRF-CEM细胞的效力(24小时,EC50等于约2微M;6小时,EC50=约48微M)。>或等于0.1μM的还原叶酸亚叶酸(LV)可完全保护连续暴露于MTX的细胞不受生长抑制,但AG337的生长抑制仅在<或等于100μM的LV时轻微逆转。胸苷可完全保护A253和FaDu不受AG337生长抑制,而次黄嘌呤单独作用则无效,表明抑制是TS特异性的。具有由DHFR过表达、MTX转运缺陷或MTX多聚谷氨酰化缺陷引起的获得性MTX抗性的CCRF-CEM亚系在连续暴露中保持对AG337的完全敏感性(所有EC50=0.4μM)。这些数据表明,AG337可用于通过最常见的机制治疗对MTX具有获得性耐药性的肿瘤。[2]
体内研究 (In Vivo)
在体内,AG337对胸苷激酶缺陷的小鼠L5178Y/TK淋巴瘤具有高活性,该淋巴瘤在腹膜内或口服后腹膜内或腹膜内植入。活动需要延长5或10天的给药期,每天两次给药可提高疗效。剂量水平为25mg/kg,每天两次,持续10天,50mg/kg,每天一次,持续5天,引起对腹膜内肿瘤的100%治愈。抗腹膜内肿瘤活性所需的剂量更高(100mg/kg,每天两次,持续5天或10天),但证明了AG337穿透固体组织屏障的能力。口服给药需要剂量大于或等于150 mg/kg,每天两次,持续5-10天,以产生针对腹膜内和腹膜内植入肿瘤的100%治愈率。这些结果与大鼠体内确定的药代动力学参数一致,大鼠口服生物利用度为30-50%,消除半衰期相对较短,为2h。AG337的临床研究目前正在进行中[1]。
酶活实验
酶动力学[1]
TS活性通过改良的氚释放方法使用纯化的重组人TS进行测量。通过对辅因子(6R,6S)5,10-亚甲基四氢叶酸的稳态分析来确定抑制常数,该辅因子是通过四氢叶酸与甲醛在基本饱和[5-3H]dUMP的条件下反应原位产生的。测定含有50mM TRIS Cl pH 7.6、10mM二硫苏糖醇、1mM乙二胺四乙酸、25mM MgCl2、15mM甲醛、1%DMSO、25lM[5-3H]dUMP(比活性2]108cpm/lmol)、四氢叶酸(10-80lM)、AG337(0-100nM)、TS(4nM)和1-5lg/ml牛血清白蛋白以稳定酶。反应在25°C下进行6分钟,并通过添加木炭来猝灭,然后离心以除去未反应的dUMP。通过上清液的液体闪烁测定从dUMP的5个位置释放的氚。表观K*(K*,!11)是通过计算机辅助非线性最小二乘法将数据拟合到Morrison[1]的紧密结合抑制方程中,在每种浓度的5,10-亚甲基四氢叶酸下测定的

全细胞TS测定[1]
TS活性通过氚释放测定来测量,其中细胞与[5-3H]脱氧尿苷孵育,脱氧尿苷在细胞摄取后转化为TS底物dUMP。酶活性定量为TS催化反应期间[5-3H]dUMP释放的氚。每个反应混合物包含30lM dUdR、5uCi/ml 5-3HdUdR和8]105个细胞。在AG337存在和不存在的情况下,在37°C和5%CO2下进行反应,并通过添加细胞引发反应。在不同的孵育时间后,通过加入0.4ml冰冷的1M高氯酸将它们停止,并如前所述进行处理。
细胞实验
细胞系在含有10%热灭活胎牛血清的RPMI-1640培养基(Hyclone Laboratories,Logan,Utah)中不含抗生素地维持,但L1210、CCRF-CEM和L1210/R6细胞除外,它们在5%血清中传代。R6系在2mM甲氨蝶呤存在下进一步保持,但在其不存在下传代至少两次,然后用于测定。生长抑制研究是通过在96孔平底微量滴定板中连续暴露于AG337进行的,使用Mosmann[20]的比色法的修改。活细胞数的测定基于MTT(Sigma Chemical,St.Louis,Mo)还原为甲赞,这是活细胞线粒体中脱氢酶活性的结果。在溶解于DMSO中之后,通过在540nm处的吸光度测量对甲zan产物进行定量。在每次测定中,在一式四份的微培养物中测试八份或九份连续两倍稀释的测试试剂的效果。IC50值表示将光密度降低到对照培养物中观察到的光密度的50%的AG337的浓度,其来源于细胞生长(以对照的百分比表示)与AG337浓度的半对数图。对于旨在解决AG337细胞内活性位点的保护性研究,胸苷、次黄嘌呤和亚叶酸(Sigma Chemical,St.Louis,Mo)分别以10、35和0.5μM的浓度存在于测定中。[1]

核糖核苷酸和脱氧核糖核苷酸库水平[1]
L1210细胞(约5]107个细胞,密度为106个细胞/ml)在37°C下单独或与10lM AG337一起孵育2小时。如前所述,通过中和的高氯酸提取物的阴离子交换HPLC测定核糖核苷酸谱。简言之,通过离心将细胞沉淀并重悬于0.2ml 0.7N高氯酸中。通过离心除去酸性沉淀物,并用固体KHCO3中和上清液。通过修改Garrett和Santi的程序,从中和的提取物中回收脱氧核糖核苷酸。用5 mM脱氧鸟苷(10 ul)和0.5 M NaIO4(40 ul)处理提取物的等分试样(175 ul),几分钟后用pH 7.5的4 M甲胺(25 ul)处理,并在37°C下孵育30分钟。通过在室温下用1 M鼠李糖(20 ul)孵育5分钟来减少过量的NaIO4。类似地处理含有ATP(2mM)和10mM dATP、dCTP、TTP和dGTP的标准品混合物以验证回收率。在Partisil-10 SAX柱上进行分离。用5mM NH4 H2 PO4(pH 2.5)至0.5M NH4 H2PO4(pH4.8)的线性梯度在40分钟内洗脱核糖核苷酸提取物(50ll),在254nm处进行检测。使用标准品在对照运行中验证了保留时间。使用5mM NH4 H2 PO4 pH 2.8∶0.5M NH4 H2PO4 pH 4.8(4:6)的流动相在同一柱上用等度洗脱分离脱氧核苷酸,并在284和270nm处进行检测。[1]

细胞周期动力学[1]
通过流式细胞术分析,从碘化丙啶染色的细胞核的DNA直方图中确定细胞周期分布。将L1210细胞的指数生长培养物用0.7μM或3.5μM AG337的浓度和与未处理培养物相比的细胞周期动力学处理20小时。为了进行分析,将细胞固定在预冷至-20°C的95%乙醇中,在含有5%热灭活胎牛血清的磷酸盐缓冲盐水中洗涤,并用含有1 mg/ml RNase的20 ug/ml碘化丙啶处理。
动物实验
抗肿瘤研究[1]
胸苷激酶缺陷型L5178Y/TK~肿瘤通过在DBA/2小鼠中传代维持。实验中,将1×10⁶个细胞(腹腔注射)或5×10⁶个细胞(肌肉注射)注射到B6D2F1杂交小鼠体内。肌肉注射实验中,将肿瘤植入腓肠肌。肿瘤接种当天记为第0天,治疗于第1、3或5天开始,持续5-10天。AG337溶于5%葡萄糖溶液,通过腹腔注射或口服给药。通过比较腹腔注射肿瘤小鼠与仅接受载体的对照组小鼠的生存期来评估抗肿瘤效果,对照组小鼠在肿瘤接种后的平均生存时间为26.3天。存活至第100天的小鼠被判定为治愈。对于植入的肿瘤,每日测量接种部位腿部的直径,并在固定终点直径达到 14 mm 时处死动物,该直径代表肿瘤大小大约增加 2.5 倍。如果第 35 天的腿部直径小于或等于第 0 天的腿部直径,则认为动物已治愈。胸苷激酶充足的 L1210 和 P388 肿瘤以每只小鼠 1×10⁶ 个细胞的密度腹腔注射(第 0 天),并在第 3 天开始治疗。

药代动力学[1]
研究在雄性 Sprague-Dawley 大鼠中进行,这些大鼠的颈静脉已插管并外置。静脉或口服 AG337 后,从插管中抽取血样(200 μl),并通过离心分离血浆。取100 μL血浆样品,用1 mL乙腈提取2 min,2000 rpm离心5 min,取上清液,在氮气吹扫下于40℃蒸发。干燥后的样品用300 μL流动相复溶,采用高效液相色谱法(HPLC)定量分析AG337的含量。分离采用C18色谱柱(4.6 × 150 mm, 5 μm),以0.05 M磷酸钠缓冲液(pH 4.0)和乙腈(80:20)为流动相进行等度洗脱,检测波长为230 nm。采用非线性回归分析,将血浆AG337浓度-时间数据拟合为多指数方程。根据 y 轴截距和速率常数的参数估计值计算以下药代动力学参数:吸收、分布和消除半衰期、分布容积和系统清除率 (Cl4)。绝对口服生物利用度使用与模型无关的 AUC 值计算为 [AUCoral/AUCiv]]100。
参考文献

[1]. AG337, a novel lipophilic thymidylate synthase inhibitor: in vitro and in vivo preclinical studies. Cancer Chemother Pharmacol. 1996;37(6):509-17.

[2]. Characterization of the effect of AG337, a novel lipophilic thymidylate synthase inhibitor, on human head and neck and human leukemia cell lines. Int J Oncol. 1999 Dec;15(6):1245-50.

其他信息
另请参阅:Nolatrexed(注释已移至)。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C14H14CL2N4OS
分子量
357.25
精确质量
356.026
元素分析
C, 47.07; H, 3.95; Cl, 19.85; N, 15.68; O, 4.48; S, 8.97
CAS号
152946-68-4
相关CAS号
152946-68-4 (HCl salt); 147149-76-6;
PubChem CID
135409535
外观&性状
Light yellow to yellow solid powder
沸点
493.6ºCat 760 mmHg
熔点
301-302ºC
闪点
252.3ºC
LogP
4.545
tPSA
109.96
氢键供体(HBD)数目
4
氢键受体(HBA)数目
4
可旋转键数目(RBC)
2
重原子数目
22
分子复杂度/Complexity
408
定义原子立体中心数目
0
SMILES
CC1=C(SC2=CC=NC=C2)C3=C(NC(NC3=O)=N)C=C1.Cl.Cl
InChi Key
PJKVJJYMWOCLIJ-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C14H12N4OS.2ClH/c1-8-2-3-10-11(13(19)18-14(15)17-10)12(8)20-9-4-6-16-7-5-9;;/h2-7H,1H3,(H3,15,17,18,19);2*1H
化学名
2-amino-6-methyl-5-pyridin-4-ylsulfanyl-3H-quinazolin-4-one;dihydrochloride
别名
Nolatrexed HCl; Nolatrexed dihydrochloride; AG337; AG 337; AG-337; brand name: Thymitaq.
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 请将本产品存放在密封且受保护的环境中,避免吸湿/受潮。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
H2O: ~50 mg/mL (~140.0 mM)
DMSO: ~41.7 mg/mL (~116.6 mM)
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.82 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中,混匀;然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.82 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中,混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备(4°C,1 周):将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中,得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.82 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。


配方 4 中的溶解度: 25 mg/mL (69.98 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液; 通过加热和超声助溶。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 2.7992 mL 13.9958 mL 27.9916 mL
5 mM 0.5598 mL 2.7992 mL 5.5983 mL
10 mM 0.2799 mL 1.3996 mL 2.7992 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
+
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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