| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Human Thymidylate Synthase (Ki = 11 nM)
Nolatrexed targets human thymidylate synthase (TS) with a Ki of 11 nM. It binds to the folate cofactor binding site of the enzyme and displays non-competitive inhibition kinetics. By inhibiting TS, it blocks the de novo synthesis of thymidylate, leading to DNA damage, S-phase arrest, and caspase-dependent apoptosis. Its lipophilic nature allows for rapid influx and efflux from cells. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
3,4-二氢-2-氨基-6-甲基-4-氧代-5-(4-吡啶硫代)-喹唑啉二盐酸盐 (AG337) 是一种水溶性亲脂性胸苷酸合成酶 (TS) 抑制剂，其设计基于 X 射线晶体结构分析，旨在与该酶的叶酸辅因子结合位点相互作用。AG337 对纯化的重组人 TS 具有抑制作用，Ki 值为 11 nM，并表现出非竞争性抑制动力学特征。此外，AG337 还被证实能够抑制多种鼠源和人源细胞系的生长，其 IC50 值介于 0.39 μM 至 6.6 μM 之间。胸苷能够拮抗 AG337 对细胞生长的抑制作用，以及使用氚释放试验直接证实 AG337 对完整细胞中 TS 的抑制作用，提示 TS 是 AG337 的作用靶点。流式细胞术证实，AG337 处理的 L1210 细胞停滞在细胞周期的 S 期，这与 TS 阻滞一致。AG337 处理的细胞中核糖核苷酸和脱氧核糖核苷酸池的调节模式也与此一致，这些细胞中 TTP 水平显著降低。去除药物后，AG337 的作用迅速逆转，这表明，正如亲脂性药物的预期，药物在细胞内快速流入和流出，且没有发生细胞内代谢生成滞留性增强的衍生物。[1]
使用连续或间歇给药方式，检测了亲脂性胸苷酸合成酶 (TS) 抑制剂 AG337 对人头颈部鳞状细胞癌 (HNSCC) 细胞系以及获得性甲氨蝶呤 (MTX) 耐药的 CCRF-CEM 人白血病细胞和亚系的影响。在 120 小时的连续暴露下，HNSCC 细胞系 A253 和 FaDu 对 MTX 的敏感性相当（EC50 约为 15 nM）；AG337 的效力较低（EC50 约为 1 μM）。A253 对 24 小时间歇性 MTX 暴露具有固有耐药性（EC50 约为 17 μM；FaDu，EC50 约为 0.3 μM）；两种 HNSCC 细胞系均对 24 小时 AG337 暴露具有耐药性（EC50 > 100 μM）。CCRF-CEM 在连续暴露下对 MTX（EC50 = 14 nM）和 AG337（EC50 约为 0.6 μM）的敏感性与 HNSCC 相似；然而，AG337 在间歇暴露下仍对 CCRF-CEM 细胞保持活性（24 小时，EC50 约为 2 μM；6 小时，EC50 约为 48 μM）。浓度 ≥ 0.1 μM 的还原型叶酸亚叶酸钙 (LV) 可完全保护细胞免受持续 MTX 暴露引起的生长抑制，但浓度 ≤ 100 μM 的 LV 仅能轻微逆转 AG337 引起的生长抑制。胸苷可完全保护 A253 和 FaDu 细胞免受 AG337 引起的生长抑制，而次黄嘌呤单独使用则无此作用，表明该抑制作用具有 TS 特异性。由于 DHFR 过表达、MTX 转运缺陷或 MTX 多聚谷氨酰化缺陷而获得 MTX 耐药性的 CCRF-CEM 亚系在持续暴露下仍对 AG337 保持完全敏感性（所有 EC50 = 0.4 μM）。这些数据表明，AG337 可能对通过最常见机制获得 MTX 耐药性的肿瘤的治疗有效。[2] 诺拉曲塞以 11 nM 的 Ki 值抑制纯化的重组人 TS。它抑制一系列小鼠和人细胞系的细胞生长，IC50 值介于 0.39 μM 和 6.6 μM 之间。在头颈部鳞状细胞癌 (HNSCC) 细胞系中，持续暴露于 AG337 的 EC50 值约为 1 μM。它可诱导 DNA 损伤、S 期阻滞和细胞凋亡。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
体内实验表明，AG337 对胸苷激酶缺陷型小鼠 L5178Y/TK 淋巴瘤具有高度活性，无论采用腹腔注射还是肌肉注射，AG337 均有效。需要 5 或 10 天的延长给药周期才能发挥活性，每日两次给药可提高疗效。腹腔注射 25 mg/kg，每日两次，持续 10 天；或每日一次，50 mg/kg，持续 10 天；或每日一次，100 mg/kg，持续 5 天，均可达到 100% 的治愈率。肌肉注射所需的剂量更高（100 mg/kg，每日两次，持续 5 或 10 天），但这表明 AG337 能够穿透实体组织屏障。口服给药需要 ≥ 150 mg/kg，每日两次，持续 5-10 天，才能达到 100% 的治愈率，无论采用肌肉注射还是腹腔注射。这些结果与在大鼠中测定的药代动力学参数一致，其中口服生物利用度为30-50%，消除半衰期相对较短，为2小时。目前正在进行AG337的临床研究[1]。
诺拉曲塞已在临床前模型和针对多种实体瘤（包括肝细胞癌）的临床试验中进行了评估。在L1210细胞中，AG337处理的细胞停滞在细胞周期的S期。停药后，AG337的作用迅速逆转，表明其具有快速的摄取和外排。目前已开展针对晚期肝细胞癌的II期临床试验。 |
| 酶活实验 |
酶动力学[1]
采用改进的氚释放法，利用纯化的重组人TS测定TS活性。通过稳态分析测定抑制常数，以辅因子(6R,6S)5,10-亚甲基四氢叶酸为对照，该辅因子是在[5-3H]dUMP基本饱和的条件下，由四氢叶酸与甲醛反应原位生成的。反应体系包含 50 mM Tris-Cl (pH 7.6)、10 mM 二硫苏糖醇、1 mM 乙二胺四乙酸、25 mM MgCl₂、15 mM 甲醛、1% DMSO、25 μM [5-³H]dUMP（比活度 2]¹⁰⁸ cpm/μmol）、四氢叶酸 (10-80 μM)、AG337 (0-100 nM)、TS (4 nM) 和 1-5 μg/ml 牛血清白蛋白（用于稳定酶）。反应在 25°C 下进行 6 分钟，加入活性炭终止反应，然后离心以去除未反应的 dUMP。通过液体闪烁计数法测定上清液中 dUMP 5 位释放的氚。在每个 5,10-亚甲基四氢叶酸浓度下，通过计算机辅助非线性最小二乘法将数据拟合到 Morrison 的紧密结合抑制方程 [1]，确定表观 K* (K*,11)。 全细胞 TS 活性测定[1] TS 活性通过氚释放测定法测定，其中细胞与 [5-3H]脱氧尿苷孵育，细胞摄取后 [5-3H]脱氧尿苷转化为 TS 底物 dUMP。酶活性通过 TS 催化反应过程中从 [5-3H]dUMP 释放的氚量来定量。每个反应混合物包含 30 μM dUdR、5 μCi/ml 5-3HdUdR 和 8×10⁵ 个细胞。反应在 37°C 和 5% CO₂ 条件下进行，分别在有或无 AG337 存在的情况下进行，并通过加入细胞启动反应。在不同孵育时间后，加入0.4 ml冰冷的1 M高氯酸终止反应，并按先前所述进行后续处理。 诺拉曲塞的体外酶活性测定旨在测量其对胸苷酸合成酶活性的抑制作用。将重组人胸苷酸合成酶与底物dUMP、辅因子亚甲基四氢叶酸以及不同浓度的诺拉曲塞进行孵育。定量分析dTMP的生成量以确定Ki值。通过改变底物和辅因子的浓度，可以验证非竞争性抑制动力学。 |
| 细胞实验 |
除L1210、CCRF-CEM和L1210/R6细胞外，所有细胞系均在含10%热灭活胎牛血清（Hyclone Laboratories，Logan，Utah）的RPMI-1640培养基中培养，且不添加抗生素。L1210、CCRF-CEM和L1210/R6细胞则在含5%血清的培养基中传代。R6细胞系在2 μM甲氨蝶呤存在下继续培养，但在用于实验前至少在不含甲氨蝶呤的培养基中传代两次。生长抑制实验采用Mosmann比色法[20]的改进方法，在96孔平底微孔板中连续暴露于AG337进行。活细胞数量的测定基于MTT（Sigma Chemical，St. Louis，MO）还原为甲臜，甲臜的生成是由于活细胞线粒体中脱氢酶的活性。甲臜溶解于DMSO后，通过在540 nm处测量吸光度进行定量。在每项试验中，均在四重复的微培养物中测试了测试剂八到九个两倍系列稀释液的效果。IC50 值代表使光密度降低至对照培养物中观察到的光密度 50% 的 AG337 浓度，该值由细胞生长（以对照的百分比表示）与 AG337 浓度的半对数图得出。为了研究AG337的细胞内活性位点，在实验中分别添加了浓度为10、35和0.5 μM的胸苷、次黄嘌呤和亚叶酸（Sigma Chemical，St. Louis，MO）。[1]核糖核苷酸和脱氧核糖核苷酸池水平[1]L1210细胞（密度为10⁶个细胞/ml，约5¹⁰⁷个细胞）在37°C下单独孵育2小时，或与10 μM AG337共同孵育。核糖核苷酸谱的测定采用阴离子交换高效液相色谱法（HPLC），以中和高氯酸提取物为底物，具体方法如前所述。简而言之，细胞经离心沉淀后，重悬于0.2 ml 0.7 N高氯酸中。离心去除酸沉淀后，上清液用固体碳酸氢钾中和。采用Garrett和Santi方法的改进版，从中和提取物中回收脱氧核苷酸。取175 μl提取物，加入5 mM脱氧鸟苷（10 μl）和0.5 M NaIO4（40 μl），数分钟后加入4 M pH 7.5的甲胺（25 μl），并在37°C下孵育30分钟。用1 M鼠李糖（20 μl）在室温下孵育5分钟以还原过量的NaIO4。使用含有ATP（2 mM）和10 mM dATP、dCTP、TTP和dGTP的标准混合物进行类似处理，以验证回收率。分离在Partisil-10 SAX色谱柱上进行。核糖核苷酸提取物（50 μL）用 5 mM NH4H2PO4（pH 2.5）至 0.5 M NH4H2PO4（pH 4.8）的线性梯度洗脱，洗脱时间为 40 分钟，检测波长为 254 nm。保留时间通过标准品对照实验进行验证。脱氧核苷酸在同一色谱柱上进行分离，采用等度洗脱，流动相为 5 mM NH4H2PO4 pH 2.8 和 0.5 M NH4H2PO4 pH 4.8 (4:6)，检测波长为 284 nm 和 270 nm。[1]
细胞周期动力学 [1] 细胞周期分布通过流式细胞术分析碘化丙啶染色细胞核的 DNA 直方图来确定。将处于指数生长期的L1210细胞培养物分别用0.7 μM或3.5 μM的AG337处理20小时，并与未处理的细胞培养物比较其细胞周期动力学。分析时，将细胞固定于预冷至-20°C的95%乙醇中，用含5%热灭活胎牛血清的磷酸盐缓冲液洗涤，并用含1 mg/ml RNase的20 μg/ml碘化丙啶处理。 诺拉曲塞的体外细胞活性测定包括用该化合物处理癌细胞系，并使用MTT或类似方法检测细胞活力。采用流式细胞术进行细胞周期分析，以检测S期阻滞。通过caspase活性或Annexin V染色检测细胞凋亡。胸苷拯救实验可以证实胸苷酸环化酶（TS）是其作用位点。 |
| 动物实验 |
抗肿瘤研究[1]
胸苷激酶缺陷型L5178Y/TK~肿瘤通过在DBA/2小鼠中传代维持。实验中，将1×10⁶个细胞（腹腔注射）或5×10⁶个细胞（肌肉注射）注射到B6D2F1杂交小鼠体内。肌肉注射实验中，将肿瘤植入腓肠肌。肿瘤接种当天记为第0天，治疗于第1、3或5天开始，持续5-10天。AG337溶于5%葡萄糖溶液，通过腹腔注射或口服给药。通过比较腹腔注射肿瘤小鼠与仅接受载体的对照组小鼠的生存期来评估抗肿瘤效果，对照组小鼠在肿瘤接种后的平均生存时间为26.3天。存活至第100天的小鼠被判定为治愈。对于植入的肿瘤，每日测量接种部位腿部的直径，并在固定终点直径达到 14 mm 时处死动物，该直径代表肿瘤大小约增加 2.5 倍。如果第 35 天的腿部直径小于或等于第 0 天的腿部直径，则认为动物已治愈。胸苷激酶充足的 L1210 和 P388 肿瘤以每只小鼠 1×10⁶ 个细胞的密度腹腔注射（第 0 天），并在第 3 天开始治疗。药代动力学[1]研究在雄性 Sprague-Dawley 大鼠中进行，这些大鼠的颈静脉已插管并外置。静脉或口服 AG337 后，从插管中抽取血样（200 μl），并通过离心分离血浆。取100 μL血浆样品，用1 mL乙腈提取2 min，2000 rpm离心5 min，取上清液，在氮气吹扫下于40℃蒸发。干燥后的样品用300 μL流动相复溶，采用高效液相色谱法(HPLC)定量分析AG337的含量。分离采用C18色谱柱(4.6 × 150 mm, 5 μm)，以0.05 M磷酸钠缓冲液(pH 4.0)和乙腈(80:20)为流动相进行等度洗脱，检测波长为230 nm。采用非线性回归分析，将血浆AG337浓度-时间数据拟合为多指数方程。根据 y 轴截距和速率常数的参数估计值计算以下药代动力学参数：吸收、分布和消除半衰期、分布容积和系统清除率 (Cl4)。绝对口服生物利用度计算公式为 [AUCCoral/AUCiv]100，其中 AUC 值与模型无关。 诺拉曲塞的体内动物模型包括肝细胞癌和其他实体瘤的异种移植模型。用该化合物治疗荷瘤小鼠，并测量肿瘤生长抑制情况。可通过测量治疗后肿瘤中的核糖核苷酸和脱氧核糖核苷酸水平来研究其对核苷酸池的影响。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
诺拉曲塞的药代动力学数据显示，它是一种亲脂性药物，具有快速的细胞内摄取和外排特性。它不会滞留在细胞内，也不会代谢生成滞留性增强的衍生物。其半衰期和生物利用度与肝细胞癌临床试验中的应用相符。在临床实践中，它采用静脉给药。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
诺拉曲塞的毒理学特征与其他TS抑制剂一致，包括骨髓抑制、胃肠道毒性和黏膜炎。其亲脂性可能影响其组织分布和毒性特征。在临床试验中，诺拉曲塞已被评估用于治疗晚期肝细胞癌，并在这些研究中证实了其安全性。
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| 参考文献 |
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| 其他信息 |
另见：诺拉曲塞（注：已移至此处）。
诺拉曲塞是一种新型、强效的非经典胸苷酸合成酶抑制剂，Ki值为11 nM。它是一种叶酸类似物，缺乏末端谷氨酸侧链，在生理pH值下不带电荷。该药物是根据X射线晶体衍射数据设计的。它能诱导DNA损伤、S期阻滞和细胞凋亡。目前已开展针对晚期肝细胞癌的II期临床试验。 |
| 分子式 |
C14H14CL2N4OS
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|---|---|
| 分子量 |
357.25
|
| 精确质量 |
356.026
|
| 元素分析 |
C, 47.07; H, 3.95; Cl, 19.85; N, 15.68; O, 4.48; S, 8.97
|
| CAS号 |
152946-68-4
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| 相关CAS号 |
152946-68-4 (HCl salt); 147149-76-6;
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| PubChem CID |
135409535
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
|
| 沸点 |
493.6ºCat 760 mmHg
|
| 熔点 |
301-302ºC
|
| 闪点 |
252.3ºC
|
| LogP |
4.545
|
| tPSA |
109.96
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
4
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
4
|
| 可旋转键数目(RBC) |
2
|
| 重原子数目 |
22
|
| 分子复杂度/Complexity |
408
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
CC1=C(SC2=CC=NC=C2)C3=C(NC(NC3=O)=N)C=C1.Cl.Cl
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| InChi Key |
PJKVJJYMWOCLIJ-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C14H12N4OS.2ClH/c1-8-2-3-10-11(13(19)18-14(15)17-10)12(8)20-9-4-6-16-7-5-9;;/h2-7H,1H3,(H3,15,17,18,19);2*1H
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| 化学名 |
2-amino-6-methyl-5-pyridin-4-ylsulfanyl-3H-quinazolin-4-one;dihydrochloride
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| 别名 |
Nolatrexed HCl; Nolatrexed dihydrochloride; AG337; AG 337; AG-337; brand name: Thymitaq.
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
H2O: ~50 mg/mL (~140.0 mM)
DMSO: ~41.7 mg/mL (~116.6 mM) |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.82 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.82 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.82 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 配方 4 中的溶解度: 25 mg/mL (69.98 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 通过加热和超声助溶。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.7992 mL | 13.9958 mL | 27.9916 mL | |
| 5 mM | 0.5598 mL | 2.7992 mL | 5.5983 mL | |
| 10 mM | 0.2799 mL | 1.3996 mL | 2.7992 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
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