| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
20alpha-hydroxysteroid dehydrogenase (AKR1C1): AKR1C1 (Ki = 4 nM); AKR1C2 (Ki = 87 nM); AKR1C3 (Ki = 4.2 μM); AKR1C3 (Ki = 18.2 μM)
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| 体外研究 (In Vitro) |
在过度表达 AKR1C1 的 BAEC 中，AKR1C1-IN-1 可有效抑制孕酮代谢，IC50 为 460 nM [1]。
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| 酶活实验 |
酶和活性测定[1]
重组AKR1C1、AKR1C2、AKR1C3和AKR1C4在大肠杆菌JM109中表达，并如前所述纯化至均一性。使用牛血清白蛋白作为标准品，通过双辛可宁酸蛋白质测定试剂盒测定蛋白质浓度。如前所述，通过测量25°C下NADPH荧光（在455 nm处，激发波长为340 nm）或吸光度（在340 nm处）的变化率来测定酶的NADP+连接的S-四氢萘脱氢酶活性。在抑制试验中，抑制剂的IC50值最初是使用软件ED50和分级反应版本1.2的IC50用S-四氢萘浓度（AKR1C1为0.1 mM，其他酶为1 mM）确定的。在抑制剂浓度（0-0.5×IC50）存在的情况下，使用五种底物浓度（AKR1C3为0.2-2×Km，其他酶为0.5-5×Km）将初始速度拟合到Lineweaver−Burk和Dixon图中，从而确定抑制模式。Ki值是通过使用ENZFITTER的适当程序计算的，并表示为至少三次测定的平均值±标准误差。 |
| 细胞实验 |
细胞中抑制剂的评价[1]
在37°C、5%CO2培养箱中，在添加了10%胎牛血清、青霉素（100 U/mL）和链霉素（100μg/mL）的Dulbecco改良Eagle培养基中培养BAEC。在所有实验中，细胞在第4-8代使用，使用前通过显微镜确认内皮鹅卵石形态。根据先前报道的方法构建具有AKR1C1 cDNA的表达载体。首先通过PCR从细菌表达载体pGEX/AKR1C1中扩增cDNA，使用由正向引物（5′-GAGTCGACGACgccaccATGGATTCGAAATATCAGTG-3′）和反向引物（5’-AGTCGACTTAATACATCAAAATGGA-3′）组成的引物对，其中SalI位点、Kozak序列和起始密码子分别以斜体、小写和下划线表示。通过自动DNA测序验证PCR产物，并在真核表达载体pGW1的SalI位点进行亚克隆。然后使用Lipofectamine 2000将带有插入物的表达载体转染到亚融合的BAEC中。将转染的细胞在含有2%胎牛血清的培养基中保持24小时，然后用于评估3,5-二溴水杨酸和化合物4和9对细胞中孕酮代谢的抑制作用。细胞在无血清生长培养基中用不同浓度的抑制剂预处理2小时，然后用30μM孕酮孵育6小时。通过离心收集培养基，用乙酸乙酯提取培养基的脂质部分两次。代谢物20α-羟基孕酮在LC-MS上使用Chiralcel OJ-H 5μm柱进行定量，如前所述。 |
| 参考文献 |
[1]. El-Kabbani O, et al. Structure-guided design, synthesis, and evaluation of salicylic acid-based inhibitors targeting a selectivity pocket in the active site of human 20alpha-hydroxysteroid dehydrogenase (AKR1C1). J Med Chem. 2009 May 28;52(10):3259-64.
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| 其他信息 |
本文报道了基于近期发表的20α-羟基类固醇脱氢酶（AKR1C1）与抑制剂三元复合物晶体结构，首次设计、合成并评价了人20α-羟基类固醇脱氢酶（AKR1C1）抑制剂。虽然新设计的抑制剂保留了晶体结构中观察到的酶-抑制剂相互作用，但活性最强的化合物3-溴-5-苯基水杨酸的额外苯基能够靶向AKR1C1活性位点中一个非保守的疏水口袋，使其抑制活性（Ki = 4 nM）比结构相似的3α-羟基类固醇脱氢酶同工酶（AKR1C2）提高了21倍。该化合物与Tyr55、His117和His222形成氢键，其苯环还与Leu308、Phe311以及非保守的Leu54（AKR1C2中为Val）残基形成范德华力相互作用。此外，3-溴-5-苯基水杨酸能有效抑制AKR1C1过表达细胞中孕酮的代谢，其有效浓度为10 nM，IC(50)值为460 nM。[1]
总之，利用最近确定的AKR1C1与抑制剂复合物的晶体结构，结合抑制剂结合位点的GRID分析，设计了一种新的基于水杨酸的抑制剂（化合物4），其效力（Ki = 4 nM）和选择性（21倍）均优于AKR1C2。此外，化合物 4 显著降低了细胞内孕酮的代谢，其 IC50 值为 460 nM，与先前已知的两种最有效的 AKR1C1 抑制剂——苯溴马隆和 3′,3′′,5′,5′′-四溴酚酞——的 IC50 值相当或更优。化合物 4 的设计靶点是 AKR1C1 活性位点中由三个非极性残基 Leu54、Leu308 和 Phe311 构成的选择性口袋。Leu308 是两个非保守的 C 端残基之一（另一个残基是 Leu306），正是这两个残基导致了 AKR1C1 与其两种亚型 AKR1C3 和 AKR1C4 之间抑制效力超过 4000 倍的差异。由于AKR1C1和AKR1C2的活性位点仅相差一个氨基酸残基（AKR1C1中为Leu54，AKR1C2中为Val54），且现有抑制剂对这两种酶的抑制效力相似，因此需要设计能够最大程度与AKR1C1中Leu54相互作用的新型抑制剂，以提高其对AKR1C2的选择性。因此，化合物4的新衍生物的开发有望提高目前已知AKR1C1抑制剂的选择性。我们还证明，虽然大型化学数据库检索有助于发现新的酶抑制剂，但利用酶-抑制剂复合物的高分辨率晶体结构，通过分析不同酶同工酶之间微小的结构差异，是优化酶-抑制剂相互作用的有效工具。[1] |
| 分子式 |
C13H9BRO3
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|---|---|
| 分子量 |
293.12
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| 精确质量 |
291.974
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| 元素分析 |
C, 53.27; H, 3.10; Br, 27.26; O, 16.37
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| CAS号 |
4906-68-7
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| PubChem CID |
268734
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| 外观&性状 |
Typically exists as White to pink solids at room temperature
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| 密度 |
1.6±0.0 g/cm3
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| 沸点 |
439.2±0.0 °C at 760 mmHg
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| 闪点 |
219.4±0.0 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±0.0 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.663
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| LogP |
4.43
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| tPSA |
57.53
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
3
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| 可旋转键数目(RBC) |
2
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| 重原子数目 |
17
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| 分子复杂度/Complexity |
276
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
C1=CC=C(C=C1)C2=CC(=C(C(=C2)Br)O)C(=O)O
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| InChi Key |
XVZSXNULHSIRCQ-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C13H9BrO3/c14-11-7-9(8-4-2-1-3-5-8)6-10(12(11)15)13(16)17/h1-7,15H,(H,16,17)
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| 化学名 |
3-bromo-2-hydroxy-5-phenylbenzoic acid
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| 别名 |
NSC-109116; NSC 109116; NSC109116; 5-Bromo-4-hydroxy-[1,1'-biphenyl]-3-carboxylic acid; 3-Bromo-5-phenyl salicylic acid; AKR1C1-IN-1; 3-bromo-5-phenylsalicylic acid; 3-bromo-2-hydroxy-5-phenylbenzoic acid; NSC-109116; CHEMBL387536;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~100 mg/mL (~341.17 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.53 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.53 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.53 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.4116 mL | 17.0579 mL | 34.1157 mL | |
| 5 mM | 0.6823 mL | 3.4116 mL | 6.8231 mL | |
| 10 mM | 0.3412 mL | 1.7058 mL | 3.4116 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
甘草苷
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COA
粤公网安备 44011102003439号
463611831
