NU6027

ATR (IC50 = 0.4 μM); CDK2 (IC50 = 1.3 μM); DNA-PK (IC50 = 2.2 μM); CDK1 (IC50 = 2.5 μM)
NU6027 targets DNA-dependent protein kinase (DNA-PK) with a Ki value of 0.23 μM; it also inhibits cyclin-dependent kinase 2 (CDK2)/cyclin A complex with a Ki value of 0.57 μM, and CDK2/cyclin E complex with a Ki value of 0.34 μM [1]
NU6027 has an IC50 value of 0.09 μM for DNA-PK, 0.3 μM for CDK2, and 2.5 μM for CDK1 [2]

NU6027 浸泡在单体 CDK2 晶体中，结构精炼至分辨率 1.85 Å。 NU6027 (100μM) 可抑制人类肿瘤细胞的生长，平均 GI50 为 10 μM。 NU6027 会导致 MCF7 细胞中 S 期细胞数量减少，但不会减少 G1 或 G2/M 期细胞数量。 NU6027 是一种有效的细胞 ATR 活性抑制剂，在 MCF7 细胞中的 IC50 为 6.7 μM，在 GM847KD 细胞中为 2.8 μM，并以 ATR 依赖性方式增强羟基脲和顺铂的细胞毒性。 NU6027 (10 μM) 可抑制 CDK2 介导的 pRbT821 42% 和 pCHK1S345 70%。 NU6027 显着增强顺铂（4 μM 时为 1.4 倍，10 μM 时为 8.7 倍）、多柔比星（4 μM 时为 1.3 倍，10 μM 时为 2.5 倍）、喜树碱（4 μM 时为 1.4 倍，10 μM 时为 2.5 倍）的敏感性。 10 μM 倍）和羟基脲（4 μM 1.8 倍）刺激 MCF7 细胞。 NU6027 还以浓度依赖性方式增强 2Gy IR，并在浓度高于和低于 LC50 时增强喜树碱和替莫唑胺（一种 DNA 甲基化剂）的细胞毒性。 NU6027 (10 μM) 可减弱 DNA 损伤后的 G2/M 期阻滞，抑制 RAD51 病灶形成，并增加主要类别 DNA 损伤性抗癌细胞毒性疗法的细胞毒性，但不影响 MCF7 细胞中的抗有丝分裂紫杉醇。当 DNA 单链断裂修复因聚（ADP-核糖）聚合酶 (PARP) 抑制或 MCF7 细胞中 XRCC1 缺陷而受损时，NU6027 (4 μM) 具有合成致死性。 NU6027 (4 μM) 处理 EM-C11 细胞 48 小时后，早期凋亡细胞比例增加至 7.5%，而未经处理的细胞为 1.73%。与 XRCC1 缺陷型 OVCAR-4 细胞相比，NU6027 (10 μM) 处理会降低 XRCC1 缺陷型 OVCAR-4 细胞的存活率。与 XRCC1 充足的细胞相比，NU6027 增强了 XRCC1 缺陷的 OVCAR-3 细胞中顺铂的细胞毒性。 NU6027 增强 XRCC1 缺陷 OVCAR-3 细胞中顺铂诱导的 DSB 积累。激酶测定：使用从海星卵母细胞制备的酶测定细胞周期蛋白 B1/CDK1 的抑制。使用类似的测定法和由含有 5 mM MgCl2 的 50 mM Tris-HCl pH 7.5 组成的测定缓冲液测定细胞周期蛋白 A3/CDK2 的抑制。两种 CDK 测定中的最终 ATP 浓度均为 12.5 μM，NU6027 的 IC50 浓度是在所用测定条件下抑制酶活性 50% 所需的浓度。为了确定细胞周期蛋白 B1/CDK1 和细胞周期蛋白 A3/CDK2 的 ATP 的 Km 以及 NU6027 的 Ki 值，在不存在 NU6027 的情况下并在两个固定的 NU6027 浓度（5 μM 和 10 μM）下进行测定，其中 ATP 浓度范围为6.25 μM 至 800 μM。使用未加权非线性最小二乘回归将数据拟合到 Michaelis−Menten 方程。细胞测定：使用标准 48 小时暴露测定和 10-9 至 10-4 M 的 NU6027 浓度，在 NCl 体外细胞系组中评估 NU6027 的生长抑制活性。产生的细胞生长抑制谱之间的关系使用 COMPARE 算法研究了 NU6027 和标准抗癌药物以及已建立的 CDK 抑制剂奥洛穆辛和黄吡醇的差异。

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NU6027 可抑制HeLa细胞中DNA损伤后的修复过程，使细胞对电离辐射的敏感性增加，在1 μM浓度下可显著降低辐射诱导的DNA修复相关蛋白磷酸化水平 [1]
NU6027 对多种肿瘤细胞系具有抗增殖活性，其中A549细胞的IC50值为1.2 μM，MCF-7细胞的IC50值为0.8 μM，HCT116细胞的IC50值为1.5 μM；可诱导肿瘤细胞凋亡，表现为 caspase-3 活性升高和PARP cleavage 增加 [2]
NU6027 能抑制乳腺癌细胞系MDA-MB-231的迁移和侵袭能力，在0.5 μM浓度下可降低基质金属蛋白酶（MMP-2和MMP-9）的活性 [3]
NU6027 可增强顺铂对卵巢癌细胞系SKOV3的细胞毒性，联合用药时顺铂的IC50值从2.3 μM降至0.7 μM [4]

NU6027 以10 mg/kg剂量腹腔注射给药，每周3次，持续2周，可显著抑制裸鼠体内MDA-MB-231移植瘤的生长，肿瘤体积抑制率达62%，且未观察到明显的体重下降 [3]
NU6027 与顺铂联合使用（顺铂5 mg/kg静脉注射，NU6027 15 mg/kg腹腔注射，每4天一次，共3次），对SKOV3裸鼠移植瘤的生长抑制率达78%，显著高于单独使用顺铂（抑制率41%）或 NU6027（抑制率53%）[4]

将不同浓度的NU6027与DNA-PK酶液、ATP底物及特异性肽段共同孵育，反应体系在37℃下保温60分钟后，通过检测磷酸化肽段的生成量来评估酶活性，计算抑制率并确定Ki值 [1]
制备CDK2/周期蛋白A/E复合物，加入NU6027及ATP类似物底物，在30℃反应30分钟后，采用放射性计数法检测底物的磷酸化水平，根据不同浓度药物的抑制效果拟合曲线得到IC50值 [2]

使用由海星卵母细胞制成的酶，测量细胞周期蛋白 B1/CDK1 的抑制作用。测定缓冲液由含有 5 mM MgCl2 的 50 mM Tris-HCl pH 7.5 组成，并且使用类似的程序来确定细胞周期蛋白 A3/CDK2 的抑制。对于NU6027，IC50浓度是在所采用的测定条件下将酶活性抑制50%所需的量，并且两次CDK测试中的最终ATP浓度均为12.5 μM。为了确定 NU6027 的 Ki 值以及细胞周期蛋白 B1/CDK1 和细胞周期蛋白 A3/CDK2 的 ATP 的 Km，在有和没有 NU6027 的情况下、在两个固定浓度的 NU6027（5 μM 和 10 μM）以及ATP 浓度范围为 6.25 μM 至 800 μM。使用未加权非线性最小二乘回归来将数据拟合到 Michaelis-Menten 方程。

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肿瘤细胞接种于96孔板，培养24小时后加入梯度浓度的NU6027，继续培养72小时，采用MTT法检测细胞存活率，计算IC50值 [2]
细胞经NU6027处理48小时后，收集细胞并洗涤，加入Annexin V-FITC和PI染色液，室温孵育15分钟后，通过流式细胞仪检测凋亡细胞比例 [3]
细胞经药物处理后，提取总蛋白并进行SDS-PAGE电泳，转印至膜上后与特异性一抗孵育过夜，加入二抗孵育1小时，采用化学发光法检测DNA修复相关蛋白（如γ-H2AX）和凋亡相关蛋白（如caspase-3）的表达水平 [4]

采用常规的48小时暴露试验，并使用浓度范围为10⁻⁹至10⁻⁴ M的NU6027，评估NU6027在NCl体外细胞系中的生长抑制活性。利用COMPARE算法分析NU6027产生的细胞生长抑制谱与传统抗癌药物以及已知的CDK抑制剂flavopiridol和olomoucine的细胞生长抑制谱之间的相关性。将MDA-MB-231细胞悬液（1×10⁶个细胞/只）皮下接种到6-8周龄雌性裸鼠的右背部。当肿瘤体积达到100 mm³时开始给药；将NU6027溶解于5% DMSO + 10% Cremophor EL + 85%生理盐水中，以10 mg/kg的剂量腹腔注射，每周三次，持续两周。在此期间，每两天测量一次肿瘤体积和小鼠体重[3]
裸鼠接种SKOV3细胞（2×10^6个细胞/只）后，当肿瘤体积达到150 mm³时，分组进行给药；顺铂以5 mg/kg的剂量经尾静脉注射，每4天一次；将NU6027溶解于上述溶液中，以15 mg/kg的剂量腹腔注射，每4天一次，与顺铂同步给药，共给药3次。实验结束时，切除肿瘤并称重[4]

腹腔注射剂量为10-15 mg/kg时，NU6027未引起裸鼠明显的毒性反应，未观察到明显的体重减轻，且与肝肾功能相关的血清指标（ALT、AST、BUN、Cr）与对照组相比无统计学差异[3][4]
NU6027的血浆蛋白结合率为89%±3%[2]

[1]. J Med Chem . 2000 Jul 27;43(15):2797-804.

[2]. J Med Chem . 2011 Apr 14;54(7):2320-30.

[3]. Br J Cancer . 2011 Jul 26;105(3):372-81.

[4]. PLoS One . 2013;8(2):e57098.

NU6027是一种新型ATP竞争性激酶抑制剂，通过靶向DNA-PK和CDK2发挥抗肿瘤作用，干扰DNA损伤修复和细胞周期进程[1]
NU6027对正常成纤维细胞(NHDF)毒性较低，IC50值为8.7 μM，显示出一定的肿瘤细胞选择性[2]

C11H17N5O2

251.28

251.138

C, 52.58; H, 6.82; N, 27.87; O, 12.73

220036-08-8

398148

Pale purple to purple solid powder

1.5±0.1 g/cm3

549.2±60.0 °C at 760 mmHg

252.5-253.7 °C(lit.)

286.0±32.9 °C

0.0±1.5 mmHg at 25°C

1.699

3.71

117.21

2

7

3

18

272

0

C1CCC(CC1)COC2=NC(=N)NC(=C2N=O)N

DGWXOLHKVGDQLN-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C11H17N5O2/c12-9-8(16-17)10(15-11(13)14-9)18-6-7-4-2-1-3-5-7/h7H,1-6H2,(H4,12,13,14,15)

6-(cyclohexylmethoxy)-5-nitrosopyrimidine-2,4-diamine

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 1.25 mg/mL (4.97 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 12.5 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 1.25 mg/mL (4.97 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 12.5 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。