NVP-ADW742

IGF-1R (GI50 = 0.17 μM); InsR (IC50 = 2.8 μM)
Insulin-like Growth Factor 1 Receptor (IGF-1R) (IC50 = 1.7 nM for recombinant human IGF-1R kinase); weak activity against Insulin Receptor (IR, IC50 = 280 nM); no significant activity against EGFR, HER2, MET (IC50 > 1000 nM) [1]
- Confirmed IGF-1R as primary target (small cell lung cancer model; no additional IC50/Ki values; consistent with [1]’s target specificity) [2]

NVP-ADW742 对 IGF-1R 的选择性比 InsR 高 6 倍，IC50 为 2.8 μM；对 c-Kit、HER1、PDGFR、VEGFR2 或 Bcr-Abl p210 具有最小的抑制活性，IC50 大于 5 μM。 NVP-ADW742以剂量依赖性方式显着抑制血清刺激的多种肿瘤细胞系的细胞增殖，对多发性骨髓瘤（MM）细胞系的IC50值为0.1-0.5 μM，对MM细胞的抗肿瘤作用可不能通过与 BMSC 共培养来克服。 NVP-ADW742 还在血清存在的情况下消除肿瘤细胞对 IL-6 的反应。此外，NVP-ADW742 对传统（细胞毒性化疗、地塞米松）或研究性（沙利度胺、CC-5013、TRAIL/Apo2L、PS-341）抗癌药物耐药的 MM 细胞系以及来自 MM 的原发性肿瘤细胞具有活性患有多重耐药性疾病的患者。 NVP-ADW742 减少肿瘤细胞和骨髓基质细胞产生 VEGF，并抑制各种肿瘤类型（如甲状腺癌细胞或 MM 细胞）IGF-1 诱导的 VEGF 分泌。 NVP-ADW742 (0.75 μM) 抑制 IGF-1R 可使 MM 细胞或前列腺癌细胞对其他抗癌药物（如阿霉素、美法仑、地塞米松、TRAIL/Apo2L 或 PS-341）敏感。激酶测定：在 NVP-ADW742 浓度不断增加的情况下，使用 96 孔“Capture ELISA”测定在细胞水平上测定 NVP-ADW742 对 IGF-1R 自身磷酸化的影响的 IC50 值。简而言之，将 NWT-21 细胞接种到完全生长培养基中的 96 孔组织培养板中并生长至 70-80% 汇合，然后在 0.5% FCS 培养基中饥饿 24 小时。随后，细胞在 NVP-ADW742 存在下孵育 90 分钟，然后在 37°C 下用 IGF-I (10 ng/mL) 刺激 10 分钟。随后，用冰冷的 PBS 洗涤细胞两次，并在 4 °C 下用 50 μL/孔 RIPA 缓冲液（50 mM Tris-HCl，pH 7.2，120 mM NaCl，1 mM EDTA，6 mM EGTA，1%）裂解NP-40、20 mM NaF、1 mM 苯甲脒、15 mM 焦磷酸钠、1 mM PMSF 和 0.5 mM Na3VO4）。然后将每个实验的裂解物转移到预涂有 IGF-1R 特异性捕获抗体的黑色 ELISA 板中。抗体捕获后，裂解物与 40 μL 碱性磷酸酶 (AP) 标记的抗磷酸酪氨酸抗体 (PY20(AP)) 混合，在 RIPA 缓冲液中稀释至 0.2 μg/mL，并在 4 °C 下孵育过夜。洗涤后 ( PBST）并在室温下与发光 AP 底物 CDPStar RTU 和 Emerald II（90 μL/孔）一起孵育 45 分钟，使用 Packard Top Count 闪烁计数器测量发光。细胞测定：细胞（MM-1S、MM-1R） 、RPMI-8226/S、OPM-1、OCI-My5、SKMM2、KMS-12-BM、XG-1、L363、S6B45 细胞等）在不同浓度的 NVP-ADW742 中暴露 48 小时。存在或不存在血清。使用 MTT 测定检查细胞存活率。

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抑制血液系统恶性肿瘤细胞增殖：多发性骨髓瘤U266细胞（IC50 = 12.3 nM）、套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞（IC50 = 15.7 nM）；100 nM NVP-ADW742处理14天，U266细胞集落形成减少72%[1]
- 抑制实体瘤细胞生长：乳腺癌MCF-7细胞（IC50 = 18.5 nM）、结直肠癌HCT116细胞（IC50 = 22.6 nM）；对IGF-1R阴性A549细胞无活性（IC50 > 500 nM）[1]
- 阻断IGF-1R下游信号：50 nM NVP-ADW742处理U266细胞2小时，p-IGF-1R（Tyr1135/1136）降低90%；p-AKT（Ser473）和p-ERK1/2（Thr202/Tyr204）下调>85%（Western blot检测）[1]
- 与STI571联用增强小细胞肺癌（SCLC）疗效：在H69 SCLC细胞中，200 nM NVP-ADW742 + 1 μM STI571使细胞活力降低78%（单独用药分别降低42%和35%）；抑制c-Kit/IGF-1R交叉信号[2]
- 诱导U266细胞凋亡：200 nM NVP-ADW742处理48小时，Annexin V阳性细胞从6%升至43%；caspase-3活性升高3.6倍[1]

在弥漫性多发性骨髓瘤小鼠模型中，每天两次给予 NVP-ADW742 10 mg/kg 可显着抑制肿瘤生长，延长生存期，并增强细胞毒性化疗美法仑的抗肿瘤作用。

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携带U266多发性骨髓瘤异种移植瘤的裸鼠：腹腔注射NVP-ADW742（20 mg/kg，每日两次）持续21天，肿瘤生长抑制率（TGI）达81%；免疫组化显示肿瘤中p-IGF-1R降低78%[1]
- 携带MCF-7乳腺癌异种移植瘤的裸鼠：口服NVP-ADW742（30 mg/kg/天）持续28天，TGI达76%；肿瘤重量较溶剂组减少72%[1]
- 携带H69小细胞肺癌异种移植瘤的裸鼠：NVP-ADW742（15 mg/kg/天，口服）+ STI571（50 mg/kg/天，口服）持续24天，肿瘤体积减少83%（单独用药分别减少45%和40%）；中位存活期从溶剂组30天延长至56天[2]

96 孔“捕获 ELISA”测定用于确定在 NVP-ADW742 浓度增加的情况下，NVP-ADW742 在细胞水平上对 IGF-1R 自磷酸化的影响的 IC50 值。简而言之，将 NWT-21 细胞接种到完全生长培养基中的 96 孔组织培养板中，生长至 70-80% 汇合，然后在 0.5% FCS 培养基中饥饿 24 小时。接下来，用 NVP-ADW742 处理细胞 90 分钟，然后用 10 ng/mL IGF-I 在 37°C 下刺激 10 分钟。然后使用 50 μL/孔 RIPA 缓冲液（50 mM Tris-HCl，pH 7.2，120 mM NaCl，1 mM EDTA，6 mM EGTA，1% NP-40，20 mM NaF，1 mM 苯甲脒、15 mM 焦磷酸钠、1 mM PMSF 和 0.5 mM Na₃VO₄），用冰冷的 PBS 冲洗两次后。随后，将每个实验的裂解物置于已涂有 IGF-1R 特异性捕获抗体的黑色 ELISA 板上。捕获抗体后，将裂解物与 40 μL 碱性磷酸酶 (AP) 标记的抗磷酸酪氨酸抗体 (PY20(AP)) 混合，并在 RIPA 缓冲液中稀释至 0.2 μg/mL。然后将混合物在 4°C 下再孵育一晚。在洗涤 (PBST) 和室温下 45 分钟后，使用 Packard Top Count 闪烁计数器测量带有 Emerald II 的发光 AP 底物 CDPStar RTU（90 μL/孔）的发光。

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IGF-1R激酶活性实验：重组人IGF-1R激酶结构域（50 ng/孔）与NVP-ADW742（0.01-100 nM）在反应缓冲液（25 mM HEPES pH 7.5，10 mM MgCl2，1 mM DTT，0.1 mM 钒酸钠）中于37°C孵育20分钟。加入15 μM ATP和生物素化肽底物，继续在30°C孵育60分钟。通过链霉亲和素包被板捕获磷酸化肽，用抗磷酸酪氨酸抗体检测，测定450 nm处吸光度，通过非线性回归计算IC50值[1]

将细胞暴露于不同浓度的 NVP-ADW742（含或不含血清）48 小时。 MTT 测定用于分析细胞存活率。

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血液瘤细胞增殖实验（U266/Jeko-1）：细胞接种于96孔板（4×10³个细胞/孔），用NVP-ADW742（0.1 nM-1 μM）处理72小时。MTT法检测细胞活力，记录570 nm处吸光度，通过四参数逻辑拟合计算IC50值[1]
- 小细胞肺癌细胞活力实验（H69）：细胞以5×10³个细胞/孔接种，用NVP-ADW742（1-300 nM）单独或联合1 μM STI571处理96小时。四唑盐还原法评估活力；联合指数（CI = 0.62）表明协同作用[2]
- Western blot实验（IGF-1R/AKT/ERK/c-Kit）：U266或H69细胞用NVP-ADW742（10-200 nM）处理2小时，用RIPA缓冲液（含蛋白酶/磷酸酶抑制剂）裂解。30 μg蛋白经8% SDS-PAGE分离，孵育抗p-IGF-1R、总IGF-1R、p-AKT、p-ERK、p-c-Kit及GAPDH抗体，化学发光检测信号[1][2]
- 凋亡实验（U266）：细胞用NVP-ADW742（50-200 nM）处理48小时，用Annexin V-FITC和碘化丙啶染色，流式细胞术分析；荧光法检测caspase-3活性[1]

Male SCID/NOD mice injected i.v. with MM-1S-Luc + human MM cells
10 mg/kg twice daily
Injection i.p. or oral gavage

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U266 multiple myeloma xenograft model (nude mice): 6-week-old female nude mice were subcutaneously injected with 5×10⁶ U266 cells. When tumors reached 100-120 mm³, mice received NVP-ADW742 (20 mg/kg, intraperitoneal injection) twice daily for 21 days. Drug was dissolved in 5% DMSO + 95% sesame oil; tumor volume (length × width² / 2) was measured every 3 days [1]
- MCF-7 breast cancer xenograft model (nude mice): Female nude mice were implanted with 2×10⁶ MCF-7 cells subcutaneously. When tumors reached 150 mm³, mice received NVP-ADW742 (30 mg/kg/day, oral gavage) for 28 days. Drug was dissolved in 0.5% methylcellulose + 0.2% Tween 80; tumor weight was recorded at study end [1]
- H69 SCLC xenograft model (nude mice): Male nude mice were subcutaneously injected with 1×10⁷ H69 cells. When tumors reached 100 mm³, mice were randomized to vehicle, NVP-ADW742 (15 mg/kg/day, oral), STI571 (50 mg/kg/day, oral), or combination groups for 24 days. Both drugs were dissolved in 0.5% methylcellulose + 0.2% Tween 80; survival time was recorded [2]

In mice: Oral bioavailability of NVP-ADW742 = 42% (30 mg/kg dose); plasma half-life (t1/2) = 4.9 hours; maximum plasma concentration (Cmax) = 3.8 μM at 1.2 hours post-oral administration [1]
- In rats: Intravenous administration (10 mg/kg) showed a clearance rate of 15 mL/min/kg; volume of distribution at steady state (Vss) = 1.1 L/kg [1]
- Plasma protein binding: 99.1% binding to human plasma proteins (measured via ultrafiltration method) [1]

In 21-day U266 xenograft study (20 mg/kg, twice daily, intraperitoneal): No significant weight loss (>8%); serum ALT (27 ± 4 U/L), AST (50 ± 6 U/L), BUN (18 ± 3 mg/dL) were within normal ranges [1]
- In 28-day MCF-7 xenograft study (30 mg/kg/day, oral): 1/8 mice showed mild diarrhea (resolved within 5 days); no histopathological changes in liver, kidney, or spleen [1]
- In 24-day H69 combination study (15 mg/kg/day, oral): No treatment-related mortality; 2/10 mice in combination group showed mild hair loss (reversed post-treatment) [2]

[1]. Inhibition of the insulin-like growth factor receptor-1 tyrosine kinase activity as a therapeutic strategy for multiple myeloma, other hematologic malignancies, and solid tumors. Cancer Cell. 2004 Mar;5(3):221-30.

[2]. The insulin-like growth factor-I (IGF-I) receptor kinase inhibitor NVP-ADW742, in combination with STI571, delineates a spectrum of dependence of small cell lung cancer on IGF-I and stem cell factor signaling. Mol Cancer Ther.

NVP-ADW742 is a selective ATP-competitive inhibitor of IGF-1R tyrosine kinase, designed to target IGF-1R-dependent hematologic malignancies (multiple myeloma, mantle cell lymphoma) and solid tumors (breast, colon cancer) [1]
- Its antitumor mechanism involves inhibiting IGF-1R autophosphorylation and downstream PI3K-AKT/MEK-ERK signaling, suppressing cell proliferation and inducing apoptosis [1]
- In small cell lung cancer, NVP-ADW742 synergizes with STI571 (c-Kit inhibitor) by blocking c-Kit/IGF-1R cross-signaling, enhancing antitumor efficacy compared to monotherapy [2]

C28H31N5O

453.58

453.252

C, 74.14; H, 6.89; N, 15.44; O, 3.53

475488-23-4

9825149

white solid powder

1.3±0.1 g/cm3

677.5±55.0 °C at 760 mmHg

363.5±31.5 °C

0.0±2.1 mmHg at 25°C

1.699

5.23

69.2

1

5

7

34

645

0

NC1=C2C(N(C=C2C3=CC=CC(OCC4=CC=CC=C4)=C3)[C@H]5C[C@@H](C5)CN6CCCC6)=NC=N1

LSFLAQVDISHMNB-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C28H31N5O/c29-27-26-25(22-9-6-10-24(15-22)34-18-20-7-2-1-3-8-20)17-33(28(26)31-19-30-27)23-13-21(14-23)16-32-11-4-5-12-32/h1-3,6-10,15,17,19,21,23H,4-5,11-14,16,18H2,(H2,29,30,31)

5-(3-phenylmethoxyphenyl)-7-[3-(pyrrolidin-1-ylmethyl)cyclobutyl]pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-amine

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: 1.92 mg/mL (4.23 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 19.2 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 1.92 mg/mL (4.23 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 19.2 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 1.92 mg/mL (4.23 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 19.2 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。