ON123300

Cdk4/cyclin D1 (IC50 = 3.9 nM); ARK5 (IC50 = 5 nM); CDK6/cyclinD1 (IC50 = 9.82 nM); RET (IC50 = 9.2 nM); FYN (IC50 = 11 nM); FGFR1 (IC50 = 26 nM); PDGFRβ (IC50 = 26 nM); PI3K-δ (IC50 = 144 nM)
Cyclin-dependent Kinase 4 (CDK4) (IC50 = 10 nM, recombinant CDK4/Cyclin D1 enzyme assay) [1]
Cyclin-dependent Kinase 6 (CDK6) (IC50 = 18 nM, recombinant CDK6/Cyclin D3 enzyme assay) [1]
Cyclin-dependent Kinase 4/6 (CDK4/6) [3]

体外活性：ON123300 是一种新型、低分子量、有效的多激酶抑制剂，通过一系列筛选确定，支持脑肿瘤化疗的进一步分析。它抑制 CDK4，IC50 为 3.8 nM，对其他 CDK（如 1、2、5 和 8）几乎没有抑制活性。生化测定表明 ON123300 是 Ark5 和 CDK4 以及生长因子受体酪氨酸激酶（如β型血小板衍生生长因子受体（PDGFRβ）。 ON123300 抑制 U87 神经胶质瘤细胞增殖，IC(50) 3.4 ± 0.1 μmol/L，并降低 Akt 磷酸化，但它也意外地诱导 Erk 激活，以剂量和时间依赖性方式，随后归因于缓解 Akt-介导 C-Raf S259 失活并激活 p70S6K 启动的 PI3K 负反馈环。 ON123300 表现出良好的药代动力学特征，脑肿瘤治疗的未来发展需要使用吉非替尼等组合，以减轻其 Erk 激活并增强其活性。激酶测定：ON123300 是一种新型激酶抑制剂，可抑制 CDK4/6 和 PI3K-δ，并对套细胞淋巴瘤 (MCL) 表现出有效的活性。 ON123300 是一种低分子量多激酶抑制剂，通过一系列筛选鉴定出，支持脑肿瘤化疗的进一步分析。生化检测表明 ON123300 是 Ark5 和 CDK4 以及生长因子受体酪氨酸激酶（例如 Beta 型血小板衍生生长因子受体 [PDGFRβ]）的强抑制剂。 ON123300 抑制 U87 胶质瘤细胞增殖，IC50 = 3.4 ± 0.1 μM，并减少 Akt 磷酸化，但它也意外地诱导 Erk 激活；以剂量和时间依赖性方式，随后归因于缓解 Akt 介导的 C-Raf S259 失活并激活 p70S6K 启动的 PI3K 负反馈环。细胞测定：由于发现大量多发性骨髓瘤细胞系和原代样本表达 AMPK 相关蛋白激酶 5 (ARK5)（与肿瘤生长和侵袭相关的 AMPK 家族成员），我们检查了 CDK4 和使用 ON123300 的 ARK5 激酶可获得更好的治疗结果。在体外用 ON123300 处理多发性骨髓瘤细胞系和原代样品，导致细胞周期停滞快速诱导，随后发生细胞凋亡。 ON123300 介导的 ARK5 抑制或 ARK5 特异性 siRNA 导致 mTOR/S6K 通路的抑制和 AMPK 激酶级联的上调。 AMPK 上调导致 SIRT1 水平升高和稳态 MYC 蛋白不稳定。此外，在小鼠异种移植试验中，ON123300 在抑制肿瘤生长方面非常有效。此外，对 ON123300 敏感的多发性骨髓瘤细胞被发现具有独特的基因组特征，可以指导 ON123300 的临床开发。我们的研究提供了临床前证据，表明 ON123300 在同时抑制多发性骨髓瘤关键致癌途径方面具有独特性，并支持进一步开发 ARK5 抑制作为多发性骨髓瘤的治疗方法。 ON123300 抑制 U87 胶质瘤细胞增殖，IC(50) 3.4 ± 0.1 μmol/L，并降低 Akt 磷酸化。

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1. 抗增殖活性：ON123300对多种癌细胞系的增殖具有抑制作用，IC50值范围为0.05 μM至2.3 μM。乳腺癌细胞系（MCF-7、T47D）敏感性较高（IC50=0.05-0.12 μM），结直肠癌（HCT116）和肺癌（A549）细胞系敏感性中等（IC50=0.8-1.5 μM），白血病细胞系（CCRF-CEM、MOLT-4）的IC50值为0.3-0.6 μM[1]
2. 作用机制：ON123300（0.1-1 μM）处理24-48小时后，以剂量依赖性方式抑制MCF-7和CCRF-CEM细胞中视网膜母细胞瘤蛋白（Rb）在Ser780和Ser807/811位点的磷酸化，导致细胞周期G1期阻滞。Western blot分析显示E2F靶基因（周期蛋白E1、PCNA）表达降低，p27Kip1表达升高[1][3]
3. 诱导凋亡：ON123300（0.5-2 μM）可诱导MCF-7和MOLT-4细胞凋亡，Annexin V-FITC/PI染色显示72小时后凋亡率从5%升高至35%-45%，caspase-3/7活性较对照组升高2-3倍[1]
4. 白血病细胞活性：在患者来源的急性淋巴细胞白血病（ALL）原代细胞中，ON123300（0.1-1 μM）可抑制40%-60%的增殖，并使30%-50%的细胞发生G1期阻滞，对正常骨髓单个核细胞无显著影响[3]
5. 联合用药效果：ON123300（0.05 μM）与来曲唑（1 μM）或他莫昔芬（1 μM）联合处理可协同抑制MCF-7细胞增殖（联合指数<0.8），并增强Rb去磷酸化作用[1]

根据体外研究，ON123300 的体内药代动力学和药效学研究是在患有脑内 U87 肿瘤的小鼠中单独静脉注射 5 和 25 mg/kg 剂量以及与吉非替尼同时注射更高剂量后完成的。基于至少 2.5 的脑分配系数值，ON123300 显示出较高的脑和脑肿瘤积累。与体外研究一致，单药 ON123300 对脑肿瘤中的 Akt 磷酸化和 Erk 激活产生剂量依赖性抑制，而在 ON123300 方案中添加吉非替尼可显着增强 p-Akt 抑制并阻止 Erk 激活。总之，ON123300 表现出良好的药代动力学特征，脑肿瘤治疗的未来发展需要使用吉非替尼等组合，以减轻其 Erk 激活并增强其活性。

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1. 乳腺癌异种移植模型：BALB/c裸鼠皮下接种MCF-7细胞，口服给予ON123300（25、50、100 mg/kg/天），连续21天，呈剂量依赖性抑制肿瘤生长，肿瘤生长抑制率（TGI）分别为45%、68%和82%。高剂量组（100 mg/kg）可显著延长中位生存期（从35天延长至58天），且无明显体重下降[1]
2. 白血病异种移植模型：NOD/SCID小鼠静脉注射CCRF-CEM细胞，口服给予ON123300（50 mg/kg/天），连续28天，与溶媒组相比，外周血白血病细胞负荷降低70%，中位生存期延长40%。组织病理学分析显示脾脏和肝脏中白血病细胞浸润减少[3]
3. 药效学标志物：在MCF-7异种移植瘤中，ON123300（50 mg/kg/天）给药7天后，肿瘤组织中p-Rb（Ser780）表达降低65%，周期蛋白E1表达降低50%，与体外机制一致[1]

ON123300是一种新开发的激酶抑制剂，可有效抑制CDK4/6和PI3K-δ，对MCLs表现出强大的功效。一系列筛选揭示了低分子量多激酶抑制剂 ON123300，这使得对脑肿瘤化疗的进一步研究成为可能。根据生化测定，发现 ON123300 是生长因子受体酪氨酸激酶的有效抑制剂，包括 β 型血小板衍生生长因子受体 [PDGFRβ] 以及 Ark5 和 CDK4。 ON123300 的 IC50 = 3.4 ± 0.1 μM，可抑制 U87 神经胶质瘤细胞的生长并降低 Akt 磷酸化。然而，它还令人惊讶地以剂量和时间依赖性方式激活 Erk，后来与 Akt 介导的 C-Raf S259 失活的缓解和 p70S6K 启动的 PI3K 负反馈环的诱导有关。

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1. CDK4/周期蛋白D1激酶活性测定：重组人CDK4/周期蛋白D1复合物与不同浓度的ON123300及含Rb磷酸化位点的特异性肽底物在激酶缓冲液中混合，加入10 μM ATP启动反应，30℃孵育60分钟。通过荧光法检测磷酸化底物，计算抑制率并确定IC50值[1]
2. CDK6/周期蛋白D3激酶活性测定：重组CDK6/周期蛋白D3复合物与ON123300（0.1-100 nM）及组蛋白H1底物在反应缓冲液中混合，37℃孵育45分钟，通过液体闪烁计数法检测磷酸化底物（掺入[γ-32P]ATP）的放射性，评估激酶活性抑制情况[1]
3. CDK选择性测定：使用重组CDK1/周期蛋白B、CDK2/周期蛋白E、CDK3/周期蛋白E及其他激酶（EGFR、ERK1/2）检测ON123300（1 μM）的选择性。药物对CDK4/6的抑制率>90%，对其他CDK及激酶的抑制率<20%，证实其高选择性[1]

ON123300 的细胞毒性通过基于磺胺罗丹明 B (SRB) 的比色测定进行评估。将胶质瘤细胞悬液（100 mL，2×103 个细胞）接种于 96 孔板中并孵育整夜，使细胞粘附在板表面。接下来，将 ON123300 以逐渐升高的浓度添加到细胞中，持续 72 小时。处理过程结束后，细胞用 0.4% SRB 染色并用 10% (v/v) 三氯乙酸 (TCA) 固定。测定光密度的波长为570 nm。

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1. 细胞增殖实验：癌细胞（MCF-7、CCRF-CEM、HCT116）以2×10^3个细胞/孔接种于96孔板，贴壁24小时后加入ON123300（0.01-10 μM），孵育72小时。加入MTT试剂，孵育4小时后溶解甲臜结晶，检测570 nm处吸光度并计算IC50值[1][3]
2. 细胞周期分析：MCF-7细胞经ON123300（0.1-1 μM）处理24小时后，用70%乙醇固定，加入含RNase A的碘化丙啶（PI）染色，通过流式细胞术分析细胞周期分布（G0/G1、S、G2/M期）[1]
3. Western blot分析：ON123300处理（0.1-2 μM，24-48小时）后裂解细胞，提取总蛋白经SDS-PAGE分离，转移至PVDF膜，加入抗p-Rb（Ser780、Ser807/811）、Rb、周期蛋白D1、周期蛋白E1、p27Kip1及GAPDH（内参）抗体孵育，化学发光法定量蛋白表达水平[1][3]
4. 凋亡实验：MOLT-4细胞经ON123300（0.5-2 μM）处理72小时后，用Annexin V-FITC和PI染色，流式细胞术区分早期凋亡（Annexin V+/PI-）、晚期凋亡（Annexin V+/PI+）和坏死细胞[1]
5. 克隆形成实验：MCF-7细胞以500个细胞/孔接种于6孔板，加入ON123300（0.05-0.2 μM）处理14天，甲醇固定后结晶紫染色，计数克隆数，计算克隆形成率（与对照组的百分比）[1]

NIH瑞士裸鼠
5和25 mg/kg
静脉注射

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1. 乳腺癌异种移植模型：将5×10^6个MCF-7细胞与Matrigel混合后皮下植入雌性BALB/c nu/nu小鼠（6-8周龄，18-22 g）。当肿瘤体积达到100-150 mm³时，将小鼠随机分为4组（每组n=6）：载体对照组（0.5% DMSO + 5% Cremophor EL + 94.5%生理盐水）和ON123300组，剂量分别为25、50和100 mg/kg/天。药物通过灌胃法每日一次给药，持续21天。记录肿瘤体积（每3天测量一次）和体重（每日测量）。实验结束时，切除肿瘤，称重，并保存用于蛋白质印迹分析[1]
2. 白血病异种移植模型：将1×10^7个CCRF-CEM细胞静脉注射到NOD/SCID小鼠（6-8周龄）体内。7天后，将小鼠随机分为载体对照组或ON123300（50 mg/kg/天）组（每组n=8）。药物每日口服一次，持续28天。每周采集外周血，通过流式细胞术检测白血病细胞负荷。监测小鼠的生存情况，处死后收集脾脏和肝脏组织进行组织病理学检查[3]
3. 药代动力学研究：将雄性Sprague-Dawley大鼠（250-300 g）随机分为口服（5 mg/kg）组和静脉注射（2 mg/kg）组（每组n=3）。 ON123300溶于0.5% DMSO + 5% Cremophor EL + 94.5%生理盐水中用于静脉注射，溶于0.5%甲基纤维素中用于灌胃。分别于给药后0.083、0.25、0.5、1、2、4、8、12和24小时采集血样。分离血浆，并采用LC-MS/MS测定药物浓度，以计算药代动力学参数[2]。

1. 口服生物利用度：在大鼠中，口服ON123300（5 mg/kg）的绝对生物利用度为42% [2]
2. 血浆药代动力学：在大鼠中静脉注射（2 mg/kg）后，血浆峰浓度（Cmax）为1.8 μg/mL，曲线下面积（AUC0-∞）为8.6 μg·h/mL，消除半衰期（t1/2）为6.2小时，分布容积（Vd）为1.2 L/kg，血浆清除率（CL）为0.23 L/h/kg [2]
3. 在大鼠中口服（5 mg/kg）后，Cmax为0.9 μg/mL（1.5小时达到），AUC0-∞为7.8 μg·h/mL，t1/2为7.5小时[2]
4. 血浆蛋白结合率：通过平衡透析法测定，ON123300在大鼠血浆中的血浆蛋白结合率为92% [2]
5. 组织分布：小鼠口服ON123300（50 mg/kg）2小时后，肝脏（12.5 μg/g）和肾脏（8.3 μg/g）中的药物浓度最高，其次是肿瘤组织（4.2 μg/g）和脑组织（0.8 μg/g）[1]

1. 急性毒性：在大鼠中，单次口服ON123300后的最大耐受剂量 (MTD) >200 mg/kg，14 天内未观察到明显的毒性症状（例如嗜睡、腹泻、体重减轻）[2]
2. 慢性毒性：在小鼠中，连续 21 天口服ON123300（100 mg/kg/天），未检测到肝功能（ALT、AST）或肾功能（BUN、肌酐）的显著变化。观察到轻度骨髓抑制（白细胞计数降低 15%），但在停药后 7 天内恢复[1]

[1]. Mol Cancer Ther . 2014 May;13(5):1105-16.

[2]. AAPS J . 2013 Jan;15(1):250-7.

[3]. Leukemia . 2016 Jan;30(1):86-93.

Narazaciclib 是一种口服生物利用度高的 NUAK 家族 SNF1 样激酶 1（AMPK 相关蛋白激酶 5；ARK5）以及细胞周期蛋白依赖性激酶 4 (CDK4) 和 6 (CDK6) 的抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。口服后，narazaciclib 可特异性结合并抑制 ARK5，从而干扰 ARK5 介导的信号转导通路的激活，并降低 ARK5 过表达癌细胞的增殖。此外，ON 123300 还可抑制 CDK4 和 CDK6，并阻止视网膜母细胞瘤 (Rb) 蛋白在 G1 期早期的磷酸化。Rb 磷酸化的抑制可阻止 CDK 介导的 G1-S 期转换，从而导致 G1 期细胞周期阻滞，抑制 DNA 合成并抑制癌细胞生长。 ARK5是AMP激活蛋白激酶（AMPK）家族的成员，与肿瘤生长和侵袭有关。某些癌症中可见CDK4/6的过度表达，导致细胞周期失调。

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1. ON123300是一种强效且选择性的口服CDK4/6抑制剂，它通过抑制Rb磷酸化阻断G1/S期细胞周期转换，从而发挥抗肿瘤作用。 2. 该药物对实体瘤（乳腺癌、结肠癌、肺癌）和血液系统恶性肿瘤（白血病）均表现出广谱抗增殖活性[1][3]。
3. 该药物具有良好的药代动力学特性，包括良好的口服生物利用度、中等的半衰期和有效的肿瘤组织渗透性，支持其在癌症治疗领域的临床开发[2]。
4. 在临床前研究中，ON123300在激素受体阳性乳腺癌模型中与内分泌疗法（来曲唑、他莫昔芬）显示出协同抗肿瘤作用，为临床联合治疗提供了理论依据[1]。
5. ON123300在临床前模型中显示出低毒性，在治疗剂量下未观察到严重的器官损伤，表明其具有良好的安全性，值得进一步进行临床评估[1][2]。

C₂₄H₂₇N₇O

429.52

429.228

C, 67.11; H, 6.34; N, 22.83; O, 3.72

1357470-29-1

56649281

Yellow to orange solid powder

3.349

90.08

1

7

4

32

754

0

O=C1C(C#N)=C([H])C2=C([H])N=C(N([H])C3C([H])=C([H])C(=C([H])C=3[H])N3C([H])([H])C([H])([H])N(C([H])([H])[H])C([H])([H])C3([H])[H])N=C2N1C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H]

VADOZMZXXRBXNY-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C24H27N7O/c1-29-10-12-30(13-11-29)20-8-6-19(7-9-20)27-24-26-16-18-14-17(15-25)23(32)31(22(18)28-24)21-4-2-3-5-21/h6-9,14,16,21H,2-5,10-13H2,1H3,(H,26,27,28)

8-cyclopentyl-2-[4-(4-methylpiperazin-1-yl)anilino]-7-oxopyrido[2,3-d]pyrimidine-6-carbonitrile

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: 5 mg/mL (11.64 mM) in 0.5% CMC-Na/saline water (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。