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PCI-29732

别名: PCI-29732; PCI29732; PCI 29732 4-氨基-1-环戊基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶;PCI 29732
目录号: V4779 纯度: ≥98%
COA 产品数据 产品说明书 SDS
PCI 29732 是一种新型、有效、选择性和不可逆的 Btk（Brutons 酪氨酸激酶）抑制剂，在基于 FRET 的生化酶学测定中，IC50 为 8.2 nM。
PCI-29732 CAS号: 330786-25-9
产品类别: Btk
产品仅用于科学研究，不针对患者销售
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产品说明书
产品描述
PCI 29732 是一种新型、有效、选择性和不可逆的 Btk（布鲁顿酪氨酸激酶）抑制剂，在基于 FRET 的生化酶学测定中，IC50 为 8.2 nM。 PCI-29732 通过阻断 CD20+ B 细胞中 B 细胞抗原受体 (BCR) 介导的基因表达发挥作用。
生物活性&实验参考方法
靶点
BTK (IC50 = 0.5 nM); BLK (IC50 = 0.5 nM); Bmx (IC50 = 0.8 nM); EGFR (IC50 = 5.6 nM); YES (IC50 = 6.5 nM)
Bruton tyrosine kinase (Btk) (reversible inhibitor, IC50 = 0.3 nM)[3]
体外研究 (In Vitro)
PCI-32765 可阻断人外周 B 细胞中的 BCR 信号传导，剂量对 T 细胞受体的信号传导没有影响。 PCI-32765 在 DOHH2 细胞中抑制 Btk（IC50，11 nM）、Btk 生理底物 PLCγ（IC50，29 nM）和 ERK（IC50，13 nM）（一种下游激酶）的磷酸化。 PCI-32765 对 B 细胞中抗原受体信号传导的抑制选择性比 T 细胞高 1,000 倍以上，并且在短期治疗后仅维持 B 细胞抑制[1]。
PCI-29732 是一种可逆的Btk抑制剂，在本研究中作为对照化合物，用于与不可逆抑制剂PCI-32765进行比较。
在通过B细胞受体（BCR）刺激的纯化人CD20+ B细胞中，在整个实验期间（6小时）持续暴露于 PCI-29732 （1 μM）能够阻断由抗IgM刺激诱导的一组B细胞激活基因（包括CD69, CD83, EGR1, EGR2, EGR3, FOS）的转录上调。
采用1小时脉冲暴露于 PCI-29732 （1 μM），随后在BCR刺激前洗去药物的方案，未能抑制基因上调，这证实了其可逆的作用机制。这与不可逆抑制剂PCI-32765形成鲜明对比，后者的脉冲暴露足以产生持续的抑制。[3]
PCI-29732 对Btk酶活的抑制IC50为0.3 nM。[3]
体内研究 (In Vivo)
口服 PCI-32765 可以降低循环中自身抗体的水平，并完全抑制胶原诱导性关节炎小鼠的疾病。此外，PCI-32765 还可防止 MRL-Fas(lpr) 狼疮模型产生自身抗体或发展为肾脏疾病。对于口服 PCI-32765 的小鼠，平均终末血浆半衰期在 1.7 至 3.1 小时之间 [1]。
在利用 ABCG2 过表达的 H460/MX20 细胞建立的裸鼠异种移植瘤模型中，口服给予 PCI-29732 (20 mg/kg，每3天一次，共5次) 联合腹腔注射拓扑替康 (3 mg/kg，相同方案)，与对照组或单药组相比，能显著降低肿瘤体积和重量。联合治疗的肿瘤生长抑制率 (IR) 为 52.53%，且未引起明显的体重下降或药物相关死亡 [2]
。
酶活实验
采用比色法 ATP 酶实验测定 PCI-29732 对 ABCG2 ATP 酶活性的影响。将表达 ABCG2 的昆虫细胞粗膜与不同浓度的 PCI-29732 在 ATP 酶测定缓冲液（含 KCl、叠氮化钠、EDTA、MgCl2、DTT）中孵育，反应体系包含或不包含原钒酸钠。加入 Mg-ATP 启动反应，孵育后加入 SDS 终止。加入含钼酸铵、乙酸锌和抗坏血酸的检测试剂后，通过比色法定量释放的无机磷含量。计算对钒酸钠敏感的 ATP 酶活性。PCI-29732 在低浓度下刺激 ABCG2 ATP 酶活性，在高浓度下抑制其活性 [2]。
采用光亲和标记实验研究 PCI-29732 与 ABCG2 的相互作用。将表达 ABCG2 的粗膜与 PCI-29732 孵育，然后加入 [¹²⁵I]-碘芳基叠氮哌唑嗪 (IAAP)。混合物经紫外光照射交联。免疫沉淀标记的 ABCG2，通过 SDS-PAGE 分离，并使用磷屏成像系统定量 ABCG2 条带中掺入的放射性。PCI-29732 以浓度依赖的方式竞争性抑制 [¹²⁵I]-IAAP 对 ABCG2 的光标记 [2]
细胞实验
通过阴性筛选从血沉棕黄层PBMCs中获取纯化的人外周血B细胞（CD20+）。
细胞用媒介物或 PCI-29732 （1 μM）处理1小时。
对于“洗脱”条件，在刺激前将含抑制剂的培养基更换为新鲜培养基。
随后用山羊抗人IgM F(ab')2 （10 μg/mL）刺激细胞6小时以激活BCR通路。
制备mRNA，并通过定量实时RT-PCR（TaqMan）测量B细胞活化标志物（CD69, CD83, EGR1, EGR2, EGR3, FOS）的基因表达水平。
表达水平以未刺激细胞为基准进行标准化。[3]
动物实验
关节炎DBA/1小鼠
每日3.125、12.5或50 mg/kg
口服
通过将H460/MX20细胞皮下植入无胸腺裸鼠右侧腹部，建立异种移植模型。当肿瘤达到可测量大小（接种后约7天）时，将小鼠随机分为四组：（1）生理盐水对照组（腹腔注射，每3天一次，共5次）；（2）单独使用拓扑替康组（3 mg/kg，腹腔注射，每3天一次，共5次）；（3）单独使用PCI-29732组（20 mg/kg，口服，每3天一次，共5次）； (4) PCI-29732（20 mg/kg，口服）联合拓扑替康（3 mg/kg，腹腔注射，于PCI-29732给药后1小时给药，每3天一次，共5次）。定期测量肿瘤大小和体重。在终点（第25天）切除肿瘤并称重[2]
参考文献

[1]. Discovery of selective irreversible inhibitors for Bruton's tyrosine kinase. ChemMedChem. 2007 Jan;2(1):58-61.

[2]. PCI29732, a Bruton's Tyrosine Kinase Inhibitor, Enhanced the Efficacy of Conventional Chemotherapeutic Agents in ABCG2-Overexpressing Cancer Cells. Cell Physiol Biochem. 2018;48(6):2302-2317.

[3]. The Bruton tyrosine kinase inhibitor PCI-32765 blocks B-cell activation and is efficacious in models of autoimmune disease and B-cell malignancy. Proc Natl Acad Sci U S A. 2010;107(29):13075-13080.
其他信息
1-环戊基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺是一种芳香醚。
PCI-29732 是一种强效的、可逆的布鲁顿酪氨酸激酶 (Btk) 抑制剂。
在本研究中，它主要用作药理学对照，以证明其与不可逆 Btk 抑制剂 PCI-32765 相比，在作用机制（可逆结合与不可逆结合）和功能后果（需要持续暴露）方面存在差异。
其结构与 PCI-32765 相似，但缺少共价结合部分。[3]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C22H21N5O
分子量
371.4350
精确质量
371.175
元素分析
C, 71.14; H, 5.70; N, 18.85; O, 4.31
CAS号
330786-25-9
相关CAS号
2934.99.9001
PubChem CID
22347110
外观&性状
White to off-white solid powder
LogP
5.564
tPSA
78.85
氢键供体(HBD)数目
1
氢键受体(HBA)数目
5
可旋转键数目(RBC)
4
重原子数目
28
分子复杂度/Complexity
499
定义原子立体中心数目
0
SMILES
O(C1C([H])=C([H])C([H])=C([H])C=1[H])C1C([H])=C([H])C(=C([H])C=1[H])C1C2=C(N([H])[H])N=C([H])N=C2N(C2([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C2([H])[H])N=1
InChi Key
GMJUPMONHWAZCP-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C22H21N5O/c23-21-19-20(26-27(16-6-4-5-7-16)22(19)25-14-24-21)15-10-12-18(13-11-15)28-17-8-2-1-3-9-17/h1-3,8-14,16H,4-7H2,(H2,23,24,25)
化学名
1-cyclopentyl-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
别名
PCI-29732; PCI29732; PCI 29732
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO: ~74 mg/mL (~199.2 mM)
Ethanol: ~4 mg/mL (~10.8 mM)
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 1 mg/mL (2.69 mM) (饱和度未知) in 10% EtOH + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，将 100 μL 10.0 mg/mL 澄清乙醇储备液加入到 400 μL PEG300 中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。
配方 2 中的溶解度: ≥ 1 mg/mL (2.69 mM) (饱和度未知) in 10% EtOH + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 10.0 mg/mL 澄清乙醇储备液加入 900 μL 20% SBE-β-CD 生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。
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配方 3 中的溶解度: ≥ 1 mg/mL (2.69 mM) (饱和度未知) in 10% EtOH + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 10.0 mg/mL 澄清 EtOH 储备液添加到 900 μL 玉米油中并充分混合。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 2.6922 mL 13.4611 mL 26.9222 mL
5 mM 0.5384 mL 2.6922 mL 5.3844 mL
10 mM 0.2692 mL 1.3461 mL 2.6922 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;

4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。

计算器
计算 重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？
  • 在分子量（MW）框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。
计算 重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：
  • 在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
  • 在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中
g/mol
计算 重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：
  • 分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
  • 摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。
/
计算 重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器（澄清溶液）
第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）
第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。
+
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计算 重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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