| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
WEE1 (IC50 = 24 nM); Myt1 (IC50 = 72 nM); Chk1 (IC50 = 3.433 μM)
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| 体外研究 (In Vitro) |
在七分之七的癌细胞系中，PD0166285 (0.5 μM) 显着抑制辐射诱导的 Cdc2 Tyr-15 和 Thr-14 磷酸化[1]。在 p53 突变体 HT29 细胞和 E6 转染、p53 缺失的卵巢癌细胞系 PA-1 中，PD0166285 使辐射诱导的细胞杀伤变得敏感；然而，在 p53 野生型 PA-1 细胞中，这种效应不太明显。 PD0166285 可逆转放射诱导的 G2 期停滞，有丝分裂细胞群显着增加[1]。 PD0166285的敏感性增强比为1.23，作为放射增敏剂，使细胞对辐射引起的细胞死亡更加敏感[1]。
许多癌症细胞缺乏功能性p53提供了治疗靶点。预计缺乏p53的细胞不会表现出G（1）检查点，并且将依赖于G（2）检查点在经历有丝分裂之前允许DNA修复。我们假设G（2）检查点消除剂可以通过去除保护这些细胞免受DNA损伤过早有丝分裂的唯一检查点，优先杀死p53不活跃的癌症细胞。由于Wee1激酶通过其对Cdc2的抑制性磷酸化在维持G（2）阻滞中起着至关重要的作用，我们开发了一种高通量大规模筛选方法，并将其用于筛选Wee1抑制剂的化学文库。已鉴定出一类吡啶并嘧啶分子，PD0166285，在纳摩尔浓度下抑制Wee1。在细胞水平上，0.5μMPD0166285在所测试的七个癌症细胞系中的七个细胞系中，显著抑制照射诱导的Tyr-15和Thr-14的Cdc2磷酸化。如生化标志物和荧光激活细胞分选仪分析所示，PD0166285消除了辐射诱导的G（2）阻滞，并显著增加了有丝分裂细胞群。在生物学上，PD0166285充当放射增敏剂，使细胞对辐射诱导的细胞死亡敏感，如标准克隆形成试验所示，敏感性增强率为1.23。这种放射增敏活性是p53依赖性的，在p53失活细胞中具有更高的疗效。因此，G（2）检查点消除剂代表了一类新型抗癌药物，通过诱导过早有丝分裂来增强传统癌症治疗的细胞杀伤。[1] PD0166285在体外由P-糖蛋白转运，但不由BCRP转运[2] 研究PD0166285易位的CETA在体外显示了P-gp的转运活性，但没有BCRP的转运活性。在所有表达BCRP的细胞系中，均未观察到易位（图3）。与BCRP相反，发现表达Abcb1a和ABCB1的细胞系都能运输PD0166285，而亲本猪细胞系则不能。同样，在P-gp抑制剂zosuquidar存在的情况下，易位的丧失进一步证实了P-gp是观察到的PD0166285转运的原因。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
P-gp，而非BCRP，限制了体内PD0166285的脑渗透[2]
进行了与上述AZD1775类似的药代动力学实验，研究PD0166285的脑渗透。在这个实验中，Abcb1a/b−/−和Abcb1a/b的脑水平都增加了大约5倍；Abcg2-/-小鼠与野生型小鼠的比较（图4b）。因此，这种效应似乎完全是由P-gp引起的，因为当Abcg2-/-也不存在时，没有观察到PD0166285脑水平进一步升高。脑水平的这些差异也反映在脑血浆比率上，因为血浆水平在所有遗传背景下都是相似的。总之，这些结果表明，PD0166285在体内的脑渗透受P-gp的限制，但不受BCRP的限制。 |
| 酶活实验 |
浓度平衡迁移分析[2]
如前所述，使用500 nM的Wee1抑制剂进行浓度平衡转运分析（CETAs），并使用5μM的zosuquidar或elacridar阻断转运。为了制备CETA样品以供后续HPLC分析，将培养基样品与两倍体积的乙腈混合。离心后，将上清液用水稀释3倍，使用GraceSmart RP18 5μm柱（150×2mm）（Grace，Deerfield，IL）通过与紫外检测器连接的高效液相色谱法（HPLC）测量AZD1775或PD0166285的浓度。使用等度条件在340 nm处检测到AZD1775，其中45%乙腈在0.1%（v/v）甲酸水溶液中以0.2 mL/min的流速输送。PD0166285在360 nm处使用相同的柱检测到，该柱用甲醇和0.1%（v/v）甲酸水溶液梯度洗脱，流速为0.2 mL/min，范围为30%至70%。 |
| 细胞实验 |
蛋白质印迹分析[1]
细胞类型：人和小鼠癌细胞系（HCT116、HT29、DLD-1、HCT8、H460、HeLa、C 26）。 测试浓度：0.5 μM。 孵化持续时间：4小时。 实验结果：抑制Cdc2Y15和CdcT14磷酸化。 |
| 动物实验 |
动物/疾病模型：野生型、Abcg2-/-、Abcb1a/b-/-和Abcb1a/b;Abcg2-/- FVB小鼠[2]。
剂量：5 mg/kg。 给药途径：静脉注射。 实验结果：Cmax约为400 ng/mL。P-gp（而非BCRP）限制了PD0166285的脑渗透。 药代动力学研究[2] 我们使用了野生型、Abcg2-/-、Abcb1a/b-/-和Abcg2;Abcb1a/b-/- FVB小鼠。PD0166285（5 mg/kg）和AZD1775（20 mg/kg）均溶于DMSO中，静脉注射给药。注射后1小时，在异氟烷麻醉下通过心脏穿刺采集血液，随后采集脑组织。血浆通过离心（5分钟，5000 rpm，4℃）获得。称量脑组织，并使用FastPrep®-24匀浆器在1% (w/v) 牛血清白蛋白水溶液中匀浆。所有样品均储存于-20℃直至分析。AZD1775和PD0166285用乙醚萃取，AZD8055用作内标。分离有机相并真空干燥。样品用甲醇：水（20:80 v/v）复溶，并在由Ultimate 3000液相色谱系统和API 4000质谱仪组成的LC-MS/MS系统中进行分析。分离在ZORBAX Extend-C18色谱柱上进行。流动相 A（0.1% 甲酸水溶液）和 B（甲醇）采用 5 分钟梯度洗脱，B 的比例从 30% 升至 95%，保持 3 分钟，然后重新平衡至 30% B。多反应监测 (MRM) 离子迹线分别为 501.5 / 442.4 (AZD1775)、512.2 / 438.9 (PD0166285) 和 466.2 / 450.1 (AZD8055)。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
利用野生型和ABC转运基因敲除小鼠进行的药代动力学实验，在给药后1小时采集脑组织和血浆样本，结果清楚地表明，这些相同的转运蛋白是导致Wee1抑制剂在体内脑渗透率极低的原因（图4）。值得注意的是，在缺乏这些转运蛋白的情况下，两种药物的脑血浆浓度比值都显著升高（AZD1775约为25，PD0166285约为6），而在野生型小鼠中，AZD1775和PD0166285的脑血浆浓度比值分别仅为1.0和1.2。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
PD-0166285 是一种小分子药物，目前处于 I 期临床试验阶段。
引言 Wee1 是一种重要的激酶，参与 G2 期细胞周期检查点，在胶质母细胞瘤 (GBM) 和弥漫性内生性脑桥胶质瘤 (DIPG) 等颅内肿瘤中经常高表达。目前有两种靶向 Wee1 的小分子药物：AZD1775 和 PD0166285，其中 AZD1775 的临床试验已经启动。由于 GBM 和 DIPG 是高度侵袭性的脑肿瘤，它们在一定程度上受到血脑屏障 (BBB) 及其 ATP 结合盒 (ABC) 外排转运蛋白的保护。方法：我们开展了一系列全面的体外和体内实验，旨在确定血脑屏障（BBB）中两种主要的外排转运蛋白P-gp（ABCB1）和BCRP（ABCG2）对AZD1775和PD0166285的亲和力及其对脑渗透的限制程度。结果：研究表明，AZD1775可被P-gp和BCRP有效转运，而PD0166285仅是P-gp的底物。然而，体内实验表明，这两种化合物的脑渗透均受到严重限制，野生型小鼠的脑血浆浓度比值分别比Abcb1a/b;Abcg2-/-小鼠低5倍（PD0166285）和25倍（AZD1775）。结论：这些Wee1抑制剂的脑渗透性受到ABC转运蛋白的严重限制，这可能会影响其对颅内肿瘤（如DIPG和GBM）的临床疗效。[2] 总之，靶向Wee1治疗颅内肿瘤具有前景，因为Wee1在多种胶质瘤中过表达，并且已经启动了多项临床试验。然而，由于胶质瘤具有高度侵袭性，因此在很大程度上受到血脑屏障的保护，使用具有足够脑渗透能力的Wee1抑制剂对于该治疗策略的成功至关重要。我们证实，目前可用的两种Wee1抑制剂AZD1775和PD0166285都是血脑屏障中ABC转运蛋白的有效底物，因此它们不太可能在患者中显示出疗效。[2] |
| 分子式 |
C26H27CL2N5O2
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|---|---|---|
| 分子量 |
512.4309
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| 精确质量 |
511.154
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| 元素分析 |
C, 60.94; H, 5.31; Cl, 13.84; N, 13.67; O, 6.24
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| CAS号 |
185039-89-8
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| 相关CAS号 |
PD0166285 dihydrochloride;212391-63-4; PD0166285;185039-89-8; 1933496-20-8 (HCl hydrate)
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| PubChem CID |
5311382
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
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| 密度 |
1.3±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
665.3±65.0 °C at 760 mmHg
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| 闪点 |
356.2±34.3 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±2.0 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.637
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| LogP |
5.09
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| tPSA |
70.6
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
6
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| 可旋转键数目(RBC) |
9
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| 重原子数目 |
35
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| 分子复杂度/Complexity |
719
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
ClC1C=CC=C(C=1C1=CC2=CN=C(NC3C=CC(=CC=3)OCCN(CC)CC)N=C2N(C)C1=O)Cl
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| InChi Key |
IFPPYSWJNWHOLQ-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C26H27Cl2N5O2/c1-4-33(5-2)13-14-35-19-11-9-18(10-12-19)30-26-29-16-17-15-20(25(34)32(3)24(17)31-26)23-21(27)7-6-8-22(23)28/h6-12,15-16H,4-5,13-14H2,1-3H3,(H,29,30,31)
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| 化学名 |
6-(2,6-dichlorophenyl)-2-((4-(2-(diethylamino)ethoxy)phenyl)amino)-8-methylpyrido[2,3-d]pyrimidin-7(8H)-one
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.88 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: 2.17 mg/mL (4.23 mM) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 21.7 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL玉米油中，混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.9515 mL | 9.7574 mL | 19.5149 mL | |
| 5 mM | 0.3903 mL | 1.9515 mL | 3.9030 mL | |
| 10 mM | 0.1951 mL | 0.9757 mL | 1.9515 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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HA-100 dihydrochloride
ROCK-IN-7
ROCK-IN-9
ROCK-IN-6
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COA
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