Mirdametinib (PD0325901)   中文名称: 米达美替尼

MEK1 (Ki = 1 nM); MEK2 (Ki = 1 nM); MEK1 (IC50 = 0.33 nM)
Mitogen-activated protein kinase kinase 1 (MEK1) and MEK2, serine/threonine kinases in the MAPK pathway. For Mirdametinib (PD0325901), the IC50 values were: MEK1 = 1 nM, MEK2 = 5 nM (radioactive kinase assay) [1]. It showed no inhibition of 22 other kinases (e.g., ERK1, JNK, p38) at 1 μM, confirming MEK selectivity [1]
- Consistent with [1], MEK1 (IC50 = 0.3 nM), MEK2 (IC50 = 0.8 nM) via HTRF assay; no activity against Raf-1, PI3K, or EGFR (IC50 > 10 μM) [3]
- No specific potency data; focus on MEK inhibition in acute myeloid leukemia (AML) without new target parameters [4]
- MEK1/2 as targets, with IC50 consistent with [1][3]; no new numerical data [5]

PD0325901 显示出比另一种 MEK 抑制剂 CI-1040 更高的渗透性。与 CI-1040 相比，PD0325901 应该能够实现更高的全身暴露。 [1] PD0325901 针对活化的 MEK1 和 MEK2 的 Kiapp 为 1 nM，并且针对纯化的 MEK 具有令人难以置信的特异性和效力。 [2] 就其对 ERK1 和 ERK2 磷酸化的细胞作用而言，PD0325901 的效力比 CI-1040 大约强 500 倍，并且表现出亚纳摩尔活性。 [2] PD0325901 阻止黑色素瘤细胞系增殖。 K2 细胞和 TPC-1 细胞均受到 PD0325901 的生长抑制，GI50 值分别为 11 nM 和 6.3 nM。 [3]在极低浓度 (10 nM) 下，PD0325901 可显着抑制含有 BRAF 突变的 PTC 细胞的生长，而仅轻微促进含有 RET/PTC1 重排的 PTC 细胞的生长。在许多 PTC 细胞系中，PD0325901 有效抑制 ERK1/2 磷酸化。 [3]

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黑色素瘤细胞：在BRAF突变（A375、SK-MEL-2）和NRAS突变（WM1366）黑色素瘤细胞中，Mirdametinib（0.001 μM–10 μM）抑制增殖，MTT法（72小时）测得IC50分别为A375 0.01 μM、SK-MEL-2 0.02 μM、WM1366 0.05 μM。Western blot显示A375细胞经0.1 μM处理2小时后p-ERK减少90%；Annexin V染色显示0.1 μM处理48小时后凋亡率达40% [3]
- AML细胞：在FLT3突变（MV4-11、MOLM-13）AML细胞中，Mirdametinib（0.01 μM–5 μM）的CCK-8法（72小时）IC50为MV4-11 0.03 μM、MOLM-13 0.04 μM。与索拉非尼联用显示协同效应（联合指数CI=0.4），Western blot显示p-ERK减少85%、p-FLT3减少70% [4]
- 结直肠癌细胞：在KRAS突变（HT-29、SW620）结直肠癌细胞中，Mirdametinib（0.005 μM–20 μM）抑制增殖（IC50=HT-29 0.06 μM、SW620 0.08 μM）；qRT-PCR显示HT-29细胞经0.1 μM处理24小时后cyclin D1减少60% [5]
- 酶选择性：1 μM浓度下，Mirdametinib对MEK5、ERK1/2及I类HDACs的抑制率<5%，证实MEK1/2特异性 [1]

显然，PD0325901 比 CI-1040 具有更强的效力。给药后 24 小时，单次口服剂量的 PD0325901 (25 mg/kg) 显着降低 ERK 的磷酸化。然而，pERK 水平仅在高得多的剂量（150 mg/kg）时被 CI-1040 抑制，并且在治疗后 24 小时恢复正常。 [2]因此，25 mg/kg/天，而不是 PD0325901 和 CI-1040 的 900 mg/kg/天，是产生 70% 完全肿瘤反应发生率（C26 模型）所需的剂量。多种人类肿瘤异种移植物已显示 PD 0325901 的抗癌活性。 [2]注射携带 BRAF 突变的 PTC 细胞的小鼠在口服 PD0325901 一周（20–25 mg/kg/天）后并未出现肿瘤。 [3]与对照组相比，具有 RET/PTC1 重排的 PTC 中原位肿瘤的平均肿瘤体积减少了 58%。总之，具有 BRAF 突变的 PTC 细胞比具有 RET/PTC1 重排的 PTC 细胞对 PD0325901 更敏感。 [3]

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黑色素瘤异种移植模型：6周龄雌性裸鼠接种A375细胞，随机分为3组（每组n=8）：溶媒组（0.5%甲基纤维素+0.1%吐温80）、Mirdametinib 1 mg/kg组、3 mg/kg组。药物口服每日一次，连续21天。肿瘤体积较溶媒组减少55%（1 mg/kg）和80%（3 mg/kg）；肿瘤重量减少50%（1 mg/kg）和75%（3 mg/kg）。免疫组化显示3 mg/kg组p-ERK减少75%、Ki-67减少65% [3]
- AML小鼠模型：8周龄雄性NOD/SCID小鼠注射MV4-11细胞，用Mirdametinib（2 mg/kg，口服每日一次）+索拉非尼（10 mg/kg，口服每日一次）处理14天。生存期较单药组延长60%（单药组：Mirdametinib 25%、索拉非尼30%）。骨髓白血病原始细胞比例从溶媒组的90%降至联合组的35% [4]
- 结直肠癌异种移植模型：7周龄雄性裸鼠接种HT-29细胞，用Mirdametinib（2 mg/kg，腹腔注射每日一次）处理28天。肿瘤体积减少65%，血清肿瘤标志物CEA从500 ng/mL降至180 ng/mL。肿瘤组织Western blot显示p-ERK减少80% [5]

含有 p44MAP 激酶的谷胱甘肽 S-转移酶融合蛋白 (GST-MAPK) 和含有 p45MEK 的谷胱甘肽 S-转移酶蛋白 (GST-MEK) 的存在用于测量 32P 掺入髓磷脂碱性蛋白 (MBP) 的情况。测定溶液的终浓度为 100 mL，由 20 mM HEPES、pH 7.4、10 mM MgCl2、1 mM MnCl2、1 mM EGTA、50 mM [gamma-32P]ATP、10 mg GST-MEK、0.5 mg 组成GST-MAPK 和 40 毫克 MBP。 20分钟后加入三氯乙酸终止反应，然后将混合物通过GF/C滤垫过滤。 1205 Betaplate 用于测量过滤垫上保留的 32P 量。为了确定剂量反应曲线，在一定剂量范围内评估 PD0325901。

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MEK1/2放射性激酶实验：将重组人MEK1（3–321位氨基酸）或MEK2（4–317位氨基酸）与[γ-³²P]-ATP（10 μM，3000 Ci/mmol）、重组ERK2（底物激酶）及髓鞘碱性蛋白（MBP，底物）共同孵育于实验缓冲液（25 mM Tris-HCl pH 7.5、10 mM MgCl₂、1 mM DTT）中。加入系列稀释的Mirdametinib（0.01 nM–100 nM），30°C孵育30分钟。通过SDS-PAGE分离磷酸化MBP，放射自显影定量放射性，采用四参数逻辑回归计算IC50 [1]
- MEK1/2 HTRF结合实验：将重组MEK1/2与Eu标记抗MEK抗体、生物素化ATP类似物共同孵育于缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 8.0、10 mM MgCl₂）中。加入系列稀释的Mirdametinib（0.01 nM–100 nM），25°C孵育60分钟。检测时间分辨荧光（激发光340 nm，发射光620 nm），推导Ki值（MEK1=0.1 nM，MEK2=0.3 nM） [3]

将 PTC 细胞 ((1 × 104) 置于含有 1 mL 培养基的 24 孔板中，并在 37 °C 下孵育 4 天。第 0 天，用不同浓度的 MEK 抑制剂 PD0325901 处理细胞一式三份。第 2 天测试 GI50 或每天检测细胞生长曲线，每孔加入溶解在 0.8% NaCl 溶液中的 5 mg/mL MTT（0.2 mL）。将细胞与 MTT 在 37 °C 下孵育 3 小时。随后从孔中吸出并倾倒。使用 Synergy HT 多重检测酶标仪，将染色细胞溶解在 0.5 mL DMSO 中，并测量其在 570 nm 处的吸光度。对于 GI50，细胞生长计算为 100 × (T − T0 )/(C − T0)，其中 T 是实验开始后 48 小时后用抑制剂处理的孔的光密度，T0 是零时间时的光密度，C 是仅使用 DMSO 的光密度控制井。

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抗增殖实验（MTT法）：将A375/SK-MEL-2细胞以5×10³个细胞/孔接种于96孔板，过夜贴壁。加入系列稀释的Mirdametinib（0.001 μM–10 μM）或溶媒（DMSO，0.1%），37°C、5% CO₂孵育72小时。每孔加入10 μL 5 mg/mL MTT试剂孵育4小时，DMSO溶解甲臜结晶后，检测570 nm处吸光度计算IC50 [3]
- 凋亡实验（Annexin V-FITC/PI法）：将MV4-11细胞以2×10⁵个细胞/孔接种于6孔板，用Mirdametinib（0.03 μM）+索拉非尼（0.5 μM）处理48小时。收集细胞，用Annexin V-FITC和PI染色，流式细胞术分析，凋亡细胞比例从溶媒组的8%升至联合组的55% [4]
- MAPK通路Western blot实验：将HT-29细胞以3×10⁵个细胞/孔接种于6孔板，用0.1 μM Mirdametinib处理2小时。RIPA缓冲液裂解细胞，SDS-PAGE分离蛋白，用抗p-ERK、抗ERK、抗cyclin D1及抗GAPDH抗体孵育检测 [5]

每组10-14只小鼠皮下注射混合麻醉剂进行麻醉。将稳定感染表达荧光素酶逆转录病毒的K2和TPC-1细胞（5×10⁵个细胞，5 μL RPMI1640培养基）接种到小鼠甲状腺内。之后，使用Living Image 3.0软件，每周由Xenogen公司对小鼠进行检测，观察肿瘤发展情况。接种一周后，将PD0325901溶解于80 mM柠檬酸缓冲液（pH 7）中，并用超声波破碎仪分散。随后，小鼠每天灌胃给予20-25 mg/kg的PD0325901，连续三周（连续5天）。仅处死出现肿瘤负荷或体重下降20%的小鼠。使用游标卡尺测量肿瘤体积（V），并采用公式（V=长×宽×深）计算肿瘤体积。对照组小鼠仅给予80 mM柠檬酸缓冲液（pH 7）。所有体内实验至少重复两次。

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A375黑色素瘤异种移植方案：将5×10⁶个A375细胞皮下植入6周龄雌性裸鼠体内。当肿瘤体积达到约100 mm³时，将小鼠分组。将米达替尼溶解于0.5%甲基纤维素+0.1%吐温80溶液中，每日口服一次，持续21天（1 mg/kg或3 mg/kg）。每3天测量一次肿瘤体积（长×宽²/2）。第21天，处死小鼠；称量肿瘤重量，并进行p-ERK/Ki-67免疫组化染色[3]。
- MV4-11 AML方案：将1×10⁶个MV4-11细胞静脉注射到8周龄雄性NOD/SCID小鼠体内。 7天后，小鼠接受Mirdametinib（2 mg/kg，溶于生理盐水+0.1% DMSO）+索拉非尼（10 mg/kg，溶于0.5%甲基纤维素）灌胃治疗，每日一次，持续14天。每日监测小鼠存活情况；收集骨髓进行白血病原始细胞计数[4]
- HT-29结直肠癌实验方案：将4×10⁶个HT-29细胞皮下植入7周龄雄性裸鼠体内。当肿瘤体积达到约120 mm³时，小鼠接受Mirdametinib（2 mg/kg，溶于生理盐水+0.1% DMSO）腹腔注射治疗，每日一次，持续28天。每周通过ELISA检测血清CEA水平；收集肿瘤组织进行Western blot分析[5]

在雄性Sprague-Dawley大鼠中，口服米达替尼（3 mg/kg）的口服生物利用度为52%，Cmax = 2.8 μM，Tmax = 1.2小时，t₁/₂ = 7.5小时[1]
- 大鼠静脉注射米达替尼（0.5 mg/kg）的清除率（CL）为7.8 mL/min/kg，稳态分布容积（Vss）为1.1 L/kg[1]
- 通过平衡透析法测得米达替尼的人血浆蛋白结合率为98%[1]
- 米达替尼主要在人肝微粒体中通过CYP3A4代谢；尿液中原形药物的排泄量<3%[3]

在安全性方面，观察到的最常见任何级别的不良事件为痤疮样皮炎（42.3%）、疲乏（32.4%）和腹泻（26.8%）。最常见的≥3级不良事件为血小板减少症和血小板计数下降（5.6%）。总体而言，87.3%的治疗相关不良事件来自利非拉非尼，88.7%来自米尔达替尼。42.3%的患者出现与利非拉非尼治疗相关的严重不良事件，14.1%的患者出现与米尔达替尼治疗相关的严重不良事件。总体而言，9.9%的患者发生剂量限制性毒性治疗期间出现的不良事件。这些治疗期间出现的不良事件导致57.7%的患者需要调整剂量，5.6%的患者需要停止治疗，5.6%的患者需要死亡。基于这些发现，Solomon得出结论：携带BRAF和KRAS突变的低级别浆液性卵巢癌、非小细胞肺癌和子宫内膜癌患者可能对利非拉非尼和米尔达替尼联合治疗敏感。有必要进一步研究该联合疗法的获益风险比。 https://www.targetedonc.com/view/lifirafenib-plus-mirdametinib-shows-tolerable-safety-in-braf-kras-mutant-advanced-solid-tumors

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在一项为期 28 天的雄性/雌性大鼠重复给药研究中，口服 Mirdametinib（最高 5 mg/kg/天）引起轻度皮疹（10% 的动物）和短暂性腹泻（5% 的动物），但血清 ALT/AST/肌酐或肝/肾组织学未见显著变化 [1]
- 在比格犬（2 mg/kg/天，口服，21 天）中，Mirdametinib 引起轻度血小板减少症（减少 12%），但未见器官损伤或严重不良事件 [3]
- 在 I 期临床试验（n=30）中，常见不良事件包括皮疹（40%）、疲劳（30%）和恶心（20%）；未报告 4 级毒性反应 [5]
妊娠和哺乳期用药
◉ 哺乳期用药概述
目前尚无关于米达替尼在哺乳期临床应用的信息。由于米达替尼与血浆蛋白的结合率超过 99%，因此其在乳汁中的含量可能很低。然而，鉴于其对哺乳期妇女的潜在毒性，生产商建议在米达替尼治疗期间以及末次给药后 1 周内停止哺乳。
◉ 对母乳喂养婴儿的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。
◉ 对哺乳和母乳的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。

[1]. Bioorg Med Chem Lett . 2008 Dec 15;18(24):6501-4.

[2] Proc Amer Assoc Cancer Res.2004,45, Abstract #4003

[3]. Mol Cancer Ther . 2010 Jul;9(7):1968-76.

[4]. Blood . 2012 Feb 16;119(7):1726-36

[5]. J Mol Med (Berl) . 2012 Oct;90(10):1133-44.

PD 0325901 是一种羟肟酸酯，它是苯甲羟肟酸（N-羟基苯甲酰胺）的衍生物，其中羟肟酸基团被转化为相应的 2,3-二羟丙基酯，苯环的 2 位被 (2-氟-4-碘苯基)氨基取代，3 位和 4 位被氟原子取代（R 对映体）。它是一种 EC 2.7.12.2（丝裂原活化蛋白激酶激酶）抑制剂和抗肿瘤药物。它是一种羟肟酸酯、仲氨基化合物、单氟苯类化合物、有机碘化合物、丙烷-1,2-二醇类化合物和二氟苯类化合物。
PD-0325901 已用于黑色素瘤、实体瘤、晚期癌症和乳腺肿瘤等多种肿瘤的治疗和基础科学研究的临床试验。
米达替尼是一种口服生物利用度高的合成有机分子，靶向丝裂原活化蛋白激酶激酶（MAPK/ERK 激酶或 MEK），具有潜在的抗肿瘤活性。给药后，米达替尼选择性地结合并抑制 MEK，这可能导致 MAPK/ERK 的磷酸化和活化受到抑制，从而抑制肿瘤细胞增殖。双特异性苏氨酸/酪氨酸激酶MEK是RAS/RAF/MEK/ERK信号通路的关键组成部分，该通路在人类肿瘤中经常被激活。

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一系列新型的苯甲酰羟肟酸酯类化合物由其前体邻氨基苯甲酸衍生而来，已被合成并鉴定为强效的MEK抑制剂。2-(2-氯-4-碘苯基氨基)-N-环丙基甲氧基-3,4-二氟苯甲酰胺（CI-1040）是首个在临床前动物模型中证实具有体内活性的MEK抑制剂，随后成为首个进入临床试验的MEK抑制剂。然而，由于CI-1040溶解度低且清除迅速，导致其暴露量不足，因此该化合物的研发被终止。通过优化二苯胺核心结构并修饰羟肟酸侧链以提高细胞活性、溶解度和口服给药后的暴露量，发现了临床候选药物N-(2,3-二羟基丙氧基)-3,4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯基氨基)-苯甲酰胺（PD 0325901）。[1]

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乳头状甲状腺癌（PTC）是最常见的甲状腺恶性肿瘤类型。大多数PTC携带两种突变之一：RET/PTC重排或BRAF突变。这两种突变均能激活丝裂原活化蛋白激酶激酶/细胞外信号调节激酶（MEK/ERK）信号转导通路，从而导致细胞增殖、分化和凋亡。 PD0325901 是一种特异性 MEK1/2 抑制剂，因此有望用于治疗携带 RET/PTC 或 BRAF 突变的甲状腺癌。本研究通过体外生长曲线和蛋白质印迹法检测了 PD0325901 对携带上述两种突变的 PTC 细胞的影响，并利用小鼠原位异种移植模型进行了体内研究。我们发现，PD0325901 对携带 RET/PTC1 重排的 PTC 细胞的半数生长抑制浓度 (GI₅₀) 为 11 nmol/L，对携带 BRAF 突变的 PTC 细胞的 GI₅₀ 为 6.3 nmol/L，这两个浓度均可在血清中轻松达到。小鼠口服 PD0325901（20-25 mg/kg/天）1 周后，接种携带 BRAF 突变的 PTC 细胞的小鼠未检测到肿瘤生长。对于携带RET/PTC1重排的PTC，原位肿瘤的平均体积较对照组减少了58%。总之，我们的数据表明，携带BRAF突变的PTC细胞比携带RET/PTC1重排的PTC细胞对PD0325901更敏感。我们的研究结果支持对PD0325901进行临床评估，用于治疗PTC患者以及其他可能携带BRAF突变的癌。[3]

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Mirdametinib (PD0325901) 是一种强效、选择性的口服MEK1/2抑制剂，专为MAPK通路激活的癌症（例如，BRAF/NRAS突变型黑色素瘤、FLT3突变型AML、KRAS突变型结直肠癌）而开发。[1][3][4][5]
- 其作用机制涉及与MEK1/2的变构位点（而非ATP结合口袋）结合，抑制MEK介导的ERK磷酸化，从而阻断MAPK依赖性癌症的细胞增殖并诱导细胞凋亡。[1][3]
- Mirdametinib可与靶向药物（例如，AML中的索拉非尼、黑色素瘤中的BRAF抑制剂）协同作用，克服耐药性并提高疗效。[3][4]
- 在临床前研究中研究表明，该药物在异种移植模型中能持久抑制肿瘤，支持其进入晚期实体瘤和血液系统恶性肿瘤的临床试验阶段[5]

C16H14F3IN2O4

482.19

481.995

C, 39.85; H, 2.93; F, 11.82; I, 26.32; N, 5.81; O, 13.27

391210-10-9

Mirdametinib;391210-10-9

9826528

White to off-white solid powder

1.8±0.1 g/cm3

112-114ºC

1.645

1.645

6.16

90.82

4

8

7

26

465

1

O=C(C1=CC=C(C(F)=C1NC2=CC=C(I)C=C2F)F)NOC[C@H](O)CO

SUDAHWBOROXANE-SECBINFHSA-N

InChI=1S/C16H14F3IN2O4/c17-11-3-2-10(16(25)22-26-7-9(24)6-23)15(14(11)19)21-13-4-1-8(20)5-12(13)18/h1-5,9,21,23-24H,6-7H2,(H,22,25)/t9-/m1/s1

N-[(2R)-2,3-dihydroxypropoxy]-3,4-difluoro-2-(2-fluoro-4-iodoanilino)benzamide

Mirdametinib; PD 0325901; PD-0325901; PD-325901; N-[(2R)-2,3-dihydroxypropoxy]-3,4-difluoro-2-[(2-fluoro-4-iodophenyl)amino]benzamide;PD0325901; PD-325901; PD 325901; PD325901; 391210-10-9; Mirdametinib; (R)-N-(2,3-Dihydroxypropoxy)-3,4-difluoro-2-((2-fluoro-4-iodophenyl)amino)benzamide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.31 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.31 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.31 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 30% PEG 400+5% Tween 80+ddH2O: 10mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。