BMS-1

PD1-PDL1 (IC50 = 6 nM)
Human PD-L1 (Programmed death-ligand 1). [4]

在三阴性乳腺癌 (TNBC) 中，PD-1/PD-L1 抑制剂 1 在较低浓度下可使细胞活力降低一半，激活 MDA-MB-231 和 MCF7 中的 ERK，显著增加 MDA-MB-231 和 HCC1806 中的 IL-8 表达，并有效下调 MDA-MB-231 中的 IL-8 表达至一半水平。[2]

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BMS-1001 可剂量依赖性地诱导与 PD-L1+ aAPC 共培养的 PD-1 效应细胞中的荧光素酶活性，表明其在细胞界面拮抗 PD-1/PD-L1 检查点，EC50 值在三位数纳摩尔范围内，并且与治疗性抗体相比，最大细胞活化较低。 [4]
BMS-1001呈剂量依赖性地消除了可溶性PD-L1 (sPD-L1)对抗CD3介导的Jurkat T细胞活化的抑制作用，在sPD-L1摩尔浓度为2倍和5倍时（终浓度为3 μM，BMS与sPD-L1的摩尔比为5:1），细胞活化完全恢复至单独使用抗CD3的水平。[4]
在流式细胞术中，用BMS-1001预孵育荧光标记的sPD-L1显著降低了PD-1表达细胞的染色强度，表明该化合物干扰了sPD-L1与细胞表面PD-1的相互作用。 [4]
BMS-1001可诱导溶液中PD-L1的二聚化，交联和尺寸排阻色谱法证实了这一点。[4]
BMS-1001与PD-L1复合物的晶体结构（PDB 5NIU）显示，该化合物结合于两个PD-L1单体界面处的隧道中，诱导Tyr56侧链旋转，并与Asp122、Lys124形成氢键，以及与Tyr123和Lys124发生水介导的相互作用。[4]

NP19（BMS-1类似物）在H22肝癌小鼠模型中的体内抗肿瘤活性[5]
鉴于NP19在黑色素瘤B16-F10肿瘤模型中表现出优异的体内抗肿瘤疗效，且PD-1/PD-L1抑制剂具有广谱抗肿瘤活性，我们进一步利用BALB/c小鼠H22肝癌肿瘤模型评估了化合物NP19的体内抗肿瘤疗效。每只小鼠右侧腹部皮下注射80万个H22细胞。待肿瘤体积达到约100 mm³后，将小鼠随机分组，并分别腹腔注射NP19或载体溶液，持续14天。如图 8 所示，NP19 在 25 mg/kg 剂量下表现出显著的体内抗肿瘤疗效，肿瘤生长抑制率 (TGI) 为 76.5%（图 8A、8B、8C）。此外，NP19 未引起明显的体重下降（图 8D），表明该化合物具有良好的耐受性。

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NP19（BMS-1 的类似物）在 B16-F10 小鼠黑色素瘤模型中的体内抗肿瘤活性[5]
为了确定新合成化合物的体外抗 PD-1/PD-L1 活性是否能转化为体内疗效，我们测试了化合物 NP19 在小鼠黑色素瘤 B16-F10 肿瘤模型中的抗肿瘤活性。由于NP19合成简便且细胞毒性较低（表9），因此被选用于体内疗效研究，相比之下，NP2或NP12的活性更高。我们用载体对照组和NP19（25 mg/kg、50 mg/kg、100 mg/kg）对携带黑色素瘤的BALB/c小鼠进行治疗，NP19通过灌胃法每日一次给药，持续15天。如图6所示，治疗15天后，NP19治疗显著抑制了黑色素瘤的生长。

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NP19的体内药代动力学特性[BMS-1类似物][5]
由于化合物NP19在体外显示出高活性，接下来通过静脉注射和口服给药，在雄性Sprague-Dawley大鼠中评估了其药代动力学(PK)特征。表8总结了口服和静脉给药的关键药代动力学参数。单次静脉注射1 mg/kg化合物NP19后，NP19的半衰期（t1/2）、清除率（CL）和表观分布容积（Vss）分别为1.5 ± 0.5 h、0.9 ± 0.2 L/h/kg和2.1 ± 0.5 L/kg。口服10 mg/kg NP19后，观察到口服吸收良好（Tmax = 0.6 ± 0.2 h）、半衰期较长（t1/2 = 10.9 ± 7.7 h）和口服生物利用度较高（F = 5%）。此外，在大鼠中未观察到明显的不良反应。与静脉注射半衰期（1.5 h）相比，NP19经灌胃给药后的半衰期（10.9 h）显著延长。这可能是由于NP19的高亲脂性（logP = 7.9）或较差的水溶性所致。因此，NP19表现出翻转药代动力学特征。这种翻转药代动力学特征有时会出现在水溶性差的化合物中，例如瑞巴派特，其t1/2(po)/t1/2(iv)比值为13.5，这是由于其水溶性差（7.6 μg/mL）。另一个例子是李建明等人报道的亲脂性化合物IAT（一种抗微管蛋白药物，水溶性为19 μg/mL），其t1/2(po)/t1/2(iv)比值约为5，与NP19[t1/2(po)/t1/2(iv) = 7.1]相似。由于化合物NP19的口服生物利用度较低，我们推测需要高剂量才能达到足够的药物浓度以发挥抗肿瘤疗效。因此，我们进一步研究了化合物NP19的体内活性。

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当PD-1/PD-L1抑制剂1与解毒三元汤（JSD）联合使用时，PI3K/AKT信号通路可显著抑制和逆转上皮-间质转化（EMT）。[3]

体外PD-1/PD-L1结合试验[5]
\n采用PD-1/PD-L1均相时间分辨荧光（HTRF）结合试验研究化合物抑制PD-1/PD-L1相互作用的能力。PD-1/PD-L1结合试验试剂盒购自Cisbio公司。实验按照说明书进行，说明书可从https://www.cisbio.com/usa/drug-discovery/human-pd1pd-l1-biochemical-interaction-assay下载。\n

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\n\n\n百时美施贵宝（BMS）近期公布了首个针对PD-1/PD-L1通路的非肽类小分子抑制剂，该抑制剂在均相时间分辨荧光（HTRF）结合试验中显示出活性；然而，并未提供进一步的数据来支持其活性。

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\n\n核磁共振测量[4]
\n通过在以¹⁵NH₄Cl为唯一氮源的M9最小培养基中表达蛋白质，获得均匀的¹⁵N标记。进行核磁共振测量时，通过凝胶过滤将缓冲液替换为pH 7.4的PBS缓冲液（PD-L1）或pH 6.4的含100 mM NaCl的25 mM磷酸钠缓冲液（PD-1）。向样品中加入10% (v/v)的D₂O以提供锁定信号。所有谱图均使用Bruker Avance III 600 MHz核磁共振波谱仪在300 K下记录。通过监测化合物滴定过程中¹H-¹⁵N二维HMQC谱中核磁共振化学位移的扰动，评估化合物与PD-L1的相互作用。使用拮抗剂诱导解离试验评估受试化合物解离 PD-L1/PD-1 的能力。简而言之，用未标记的 PD-L1 对 15N 标记的 PD-1 (0.2 mM) 进行略微过量滴定。将化合物分装到所得混合物中。实验过程中，使用 HMQC 监测 1H-15N 信号。\n

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\n\nPD1/PD-L1 检查点检测[4]
\n在检测前 24 小时，将 aAPC 以每孔 10,000 个细胞的密度接种于白色 96 孔板中，并置于培养基中。在检测当天，将抗体在含 1% FBS 的 RPMI 1640 培养基中进行 3.5 倍系列稀释。将BMS化合物[BMS-1]用DMSO进行系列稀释，并配制成含1% FBS的RPMI 1640培养基。这样可以确保所有样品中DMSO的浓度恒定。从孔中移除95 μl培养基，并在细胞上覆盖40 μl化合物稀释液。向每个孔中加入40 μl含1% FBS的RPMI 1640培养基，其中包含20,000个内皮细胞（EC）。在37°C孵育6小时后，将培养板在室温下平衡10分钟，然后向每个孔中加入80 μl Bio-Glo试剂。孵育 10 分钟后，使用 FlexStation 3 对发光强度进行定量。通过将 Hill 方程拟合到实验数据来确定半数最大有效浓度 (EC50) 和最大发光值 (RLUmax)。

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\nPD-1/sPD-L1 效应细胞测定[4]
\n为了评估 BMS 对可溶性 PD-L1 抑制 T 细胞的影响，在重组人 sPD-L1 存在的情况下，用抗 CD3 抗体刺激内皮细胞 (EC)。为此，将 96 孔白色平底板在 4°C 下用 5 μg/ml 的抗 CD3 抗体或同型对照抗体 PBS 溶液包被过夜。去除抗体溶液，用 PBS 洗涤孔板 3 次并干燥。将 sPD-L1（氨基酸 18–134）溶于添加了青霉素/链霉素溶液（终浓度均为 100 U/ml）的 PBS 缓冲液中，并加入 BMS 化合物 [BMS-1] 或等体积的 DMSO。然后，将 15 μl 该溶液加入到抗体包被板的每个孔中。离心收集内皮细胞 (EC) 并稀释至 50,000 个细胞/ml，取 60 μl 细胞悬液加入到每个孔中。sPD-L1 的终浓度为 10 μg/ml (0.6 μM)。BMS 化合物 [BMS-1] 的终浓度分别为：0.12、0.3、1.2 和 3 μM，对应的 BMS 与 sPD-L1 的摩尔比分别为：1:5、1:2、2:1 和 5:1。细胞培养24小时后，使用Bio-Glo荧光素酶检测试剂盒，按照制造商说明书进行荧光素酶活性测定。

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通过监测¹H-¹⁵N二维HMQC谱中NMR共振化学位移的变化，评估BMS-1001与PD-L1的结合情况。使用均匀¹⁵N标记的PD-L1，并用化合物进行滴定。线宽展宽表明化合物诱导形成了更高分子量的复合物。[4]
使用拮抗剂诱导解离试验（AIDA）评估BMS-1001解离预先形成的PD-1/PD-L1复合物的能力。用未标记的PD-L1滴定¹⁵N标记的PD-1形成复合物，然后加入化合物。 PD-1窄1H-15N信号的恢复表明复合物被破坏。[4]
hPD-L1/BMS-1001复合物的结晶采用悬滴气相扩散法，在室温下进行，结晶溶剂为0.1 M Tris pH 8.5，含有0.2 M氯化镁和30% (w/v) PEG 4000。X射线衍射数据在PETRA III P11光束线收集，结构通过分子置换法解析，以PDB 5C3T为搜索模型，精修至2.01 Å分辨率。[4]

MTS 法用于测定细胞增殖。在 96 孔板的每个孔中，将 1-2×10³ 个细胞接种于 100 μl 培养基中。24 小时后，在测试培养基（含 1% 胎牛血清的 DMEM）中加入 PD-1/PD-L1 抑制剂 1 和 ERK1/2 抑制剂，单独或联合处理，每个处理设置三个复孔，持续 72 小时，浓度需稀释至所需水平。

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细胞系[4]
为了验证 BMS 化合物 [BMS-1] 抑制 PD-1/PD-L1 相互作用的效力，我们使用了基于细胞的 PD-1/PD-L1 免疫检查点阻断模型。本实验使用了两种模型细胞系：人工抗原呈递细胞（PD-L1+ aAPC/CHO-K1细胞，简称aAPC），其过表达TCR配体和PD-L1；以及T细胞替代物，即过表达PD-1并携带NFAT启动子控制的荧光素酶报告基因的改良Jurkat T细胞系（PD-1效应细胞，简称EC）。这些细胞购自Promega公司，并在添加了10%胎牛血清、100 U/ml青霉素和100 U/ml链霉素的RPMI 1640培养基中培养。此外，为了确保导入的基因构建体的稳定表达，细胞培养过程中持续加入潮霉素B（50 μg/ml）和G418（250 μg/ml）。在实验中，后两种抗生素被省略。通过流式细胞术验证了内皮细胞 (EC) 上 PD-1 的过表达和抗原呈递细胞 (aAPC) 上 PD-L1 的过表达（数据未显示），并通过监测抗 CD3 抗体刺激后的荧光素酶活性验证了荧光素酶表达基因的存在。抗生素筛选、流式细胞术和报告基因表达作为细胞系鉴定方法。定期检测细胞，并使用基于 PCR 的方法检测支原体污染，结果均为阴性。

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细胞毒性试验[4]
将 5000 个内皮细胞接种于透明的 96 孔板中，并在浓度递增的 BMS 化合物 [BMS-1] 或 DMSO（作为对照，所有样品中 DMSO 的浓度均保持不变）存在下培养 48 小时。治疗后，根据制造商的说明，使用 Biolog Redox Dye Mix MB 进行代谢活性检测。

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流式细胞术测量[4]
通过流式细胞术评估 sPD-L1（氨基酸 18–134）与内皮细胞 (EC) 的结合。将 His 标签的 PD-L1 蛋白或其突变体与 NTA-Atto 647 N 荧光染料在 22°C 下以 8:1 的摩尔比（蛋白：染料）染色 2 小时。将 PD-L1-Atto 与待测化合物或抗体配制在 150 μl PBS 中。样品在 4°C 避光孵育 30 分钟。同时，离心内皮细胞，用 PBS 洗涤，并重悬于新鲜 PBS 中，浓度为 1 × 10⁶ 个细胞/ml。向每个样品中加入 50 μl 内皮细胞悬液，并在冰上孵育 60 分钟。各组分的最终浓度分别为：PD-L1 25 μg/ml (1.5 μM)、抗PD-L1抗体和对照抗体125 μg/ml，以及BMS化合物[BMS-1] 1 μM。使用BD FACS Verse流式细胞仪和BD FACSuite v1.0.6软件分析样品。

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采用代谢活性测定法评估BMS-1001的细胞毒性。将修饰的Jurkat T细胞（PD-1效应细胞）暴露于递增浓度的化合物中48小时，并使用Biolog Redox Dye Mix MB测定代谢活性。细胞毒性的EC50值为33.4 μM。 [4] PD-1/PD-L1 检查点检测：将 aAPC（过表达 TCR 配体和 PD-L1 的 CHO-K1 细胞）接种于 96 孔板中。用 DMSO 对 BMS-1001 进行系列稀释，并用含 1% FBS 的 RPMI 1640 培养基配制。加入 PD-1 效应细胞（表达 PD-1 和 NFAT-荧光素酶的 Jurkat T 细胞）。孵育 6 小时后，加入 Bio-Glo 试剂并定量检测发光值。该化合物呈剂量依赖性地诱导荧光素酶活性。[4] sPD-L1 效应细胞检测：用抗 CD3 抗体包被 96 孔板。将 sPD-L1（氨基酸 18-134）用含青霉素/链霉素的 PBS 稀释，并加入 BMS-1001 或 DMSO，然后加入包被的培养板，再加入 PD-1 效应细胞。sPD-L1 的最终浓度为 10 μg/mL (0.6 μM)，BMS-1001 的浓度分别为 0.12、0.3、1.2 和 3 μM（摩尔比分别为 1:5、1:2、2:1 和 5:1）。24 小时后，测定荧光素酶活性。[4] 流式细胞术结合实验：用 NTA-Atto 647 N 荧光染料标记 His 标签的 sPD-L1。将标记的 sPD-L1 与 BMS-1001 (1 μM) 或抗体在 4°C 下预孵育 30 分钟，然后加入 PD-1 效应细胞，并在冰上孵育 60 分钟。通过流式细胞术分析细胞染色。[4]

雄性Sprague-Dawley大鼠药代动力学研究[5]
本研究采用雄性Sprague-Dawley大鼠（200-220 g）研究化合物NP19（BMS-1类似物）的药代动力学。实验前12小时禁食，但可自由饮水。分别于口服（10 mg/kg）或静脉注射（1 mg/kg）化合物NP19后0.0833、0.25、0.5、1、1.5、2、4、6、8、12和24小时，从尾静脉采集血样（0.3 mL）至肝素化1.5 mL聚乙烯管中。该化合物溶于 5% DMSO 和 95% PEG-300 的混合溶液中用于静脉注射，或悬浮于 0.5% 羧甲基纤维素钠 (CMC-Na) 溶液中用于口服。样品立即以 3000 g 离心 10 分钟。所得血浆 (100 μL) 储存于 -20 °C 直至分析。使用 DAS（药物与统计）软件，通过非房室模型分析，根据个体动物数据确定药代动力学 (PK) 参数。PK 研究的仪器和分析条件：使用配备电喷雾电离 (ESI) 接口的 ACQUITY I-Class UPLC 和 XEVO TQD 三重四极杆质谱仪（Waters 公司，美国马萨诸塞州米尔福德）的 UPLC-MS/MS 系统分析血液样本。UPLC 系统由二元溶剂管理器 (BSM) 和带流通针的样品管理器 (SM-FTN) 组成。使用 Masslynx 4.1 软件（Waters 公司）进行数据采集和仪器控制。采用多反应监测 (MRM) 模式，NP19 的 m/z 555.35 → 181.03 和卡马西平的 m/z 237 → 194.1 进行定量分析。

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小鼠 B16F10 黑色素瘤模型体内疗效研究[5]
使用 6-8 周龄的 BALB/c 小鼠研究 NP19（BMS-1 类似物）对皮下移植黑色素瘤细胞模型的抑制作用。将处于对数生长期的小鼠 B16F10 黑色素瘤细胞悬浮于 PBS 中，浓度为 2 × 10⁶ 个/mL。每只小鼠皮下接种 200 μL 含有 4 × 10⁵ 个细胞的细胞悬液。当肿瘤体积达到约100 mm³时，将小鼠随机分为四组（n = 10），分别给予NP19（25、50、100 mg/kg）和溶剂对照。药物通过灌胃法每日一次给药，持续15天。溶剂对照组灌胃0.5%羧甲基纤维素钠（CMC-Na）。在整个实验期间监测动物的活动和体重，以评估急性毒性。治疗开始16天后处死小鼠，收集肿瘤组织和主要器官（肝脏、脾脏、胸腺和肾脏）样本。收集的肿瘤组织和器官（肝脏、肾脏）用4%多聚甲醛固定，常规石蜡包埋，苏木精-伊红（H&E）染色，并在显微镜下观察。肿瘤生长抑制值 (TGI) 的计算公式为：TGI(%) = [1 – Wt/Wv] × 100%，其中 Wt 和 Wv 分别为治疗组和载体对照组的平均肿瘤重量。

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小鼠 H22 肝癌模型体内疗效研究[5]
使用 6-8 周龄雄性 BALB/c 小鼠。根据肿瘤移植研究方案，将 8 × 10⁵ 个 H22 细胞接种到每只小鼠的右侧腹部。NP19（BMS-1 的类似物）溶解于 5% DMSO、40% PEG-200 和 55% 生理盐水中，配制成所需浓度。对照组小鼠腹腔注射 200 μL 载体溶液。每隔2天使用可溯源的电子数显卡尺测量肿瘤体积，并使用公式a × b² × 0.5计算，其中a和b分别代表肿瘤的长径和短径。治疗结束后处死小鼠，切除肿瘤并称重。

BMS-1001在代谢活性测定中对Jurkat T细胞表现出低毒性，处理48小时后EC50为33.4 μM。[4]
使用修饰的CHO-K1细胞（aAPCs）也证实了其低毒性。[4]
其他BMS化合物（BMS-37和BMS-242）的毒性更高，EC50介于3-6 μM之间，而BMS-1001的毒性则显著降低。[4]

[1] WO/2015/034820, COMPOUNDS USEFUL AS IMMUNOMODULATORS.

[2] J Cancer Res Clin Oncol. 2021;147(10):2923-2933.

[3]. J Cancer Res Clin Oncol. 2021;147(10):2923-2933..

[4]. Small-molecule inhibitors of PD-1/PD-L1 immune checkpoint alleviate the PD-L1-induced exhaustion of T-cells. Oncotarget. 2017 Aug 7;8(42):72167-72181.

[5]. Discovery of Novel Resorcinol Dibenzyl Ethers Targeting the Programmed Cell Death-1/Programmed Cell Death-Ligand 1 Interaction as Potential Anticancer Agents. J Med Chem. 2020 Aug 13;63(15):8338-8358.

目的：三阴性乳腺癌（TNBC）预后不良，除化疗外，缺乏有效的全身治疗手段。靶向免疫检查点PD-1/PD-L1在乳腺癌，尤其是TNBC的治疗中显示出良好的治疗前景。细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）是肿瘤发生的重要驱动因素。本研究旨在探讨PD-1/PD-L1抑制剂与ERK1/2抑制剂联合治疗对乳腺癌细胞系生长和细胞内功能的影响。方法：在三种不同的TNBC细胞亚型和一种非TNBC细胞系中测定各抑制剂的IC50值以及联合治疗的疗效。采用磷酸化特异性抗体进行Western blot分析，以研究其对ERK1/2激活的影响。采用定量逆转录PCR检测免疫调节基因和细胞周期相关基因的表达。结果：PD-1/PD-L1和ERK1/2抑制剂均能更有效地抑制三阴性乳腺癌（TNBC）细胞的增殖，且抑制程度高于非TNBC细胞。联合用药可对细胞系产生协同或叠加的抑制作用。ERK1/2抑制剂，无论单独使用还是联合使用，均可降低ERK1/2和S6的磷酸化水平，并降低c-Fos和FosL的表达。在免疫调节相关基因中，联合治疗后TNBC细胞中IL-8的表达上调。结论：PD-1/PD-L1和ERK1/2抑制剂的联合应用显示出良好的治疗效果，有望成为一种新的治疗策略，其在TNBC细胞系中的疗效优于非TNBC细胞。这些效果需要在能够反映免疫细胞与肿瘤细胞相互作用的模型（例如肿瘤微环境）中进行验证。 [2]

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肠道菌群、食物摄入和胆汁在吲哚美辛诱导的大鼠小肠炎症中发挥重要作用。牛磺熊去氧胆酸 (TUDCA) 和熊去氧胆酸 (UDCA) 可抑制疏水性胆汁酸诱导的多种细胞损伤。我们研究了这些胆汁酸以及其他胆汁酸对该炎症模型的影响。在给予大鼠为期 7 天的胆汁酸预处理后，注射吲哚美辛，我们评估了临床和肠道炎症指标以及胆汁分泌情况。UDCA 显著增强了吲哚美辛诱导的食物摄入量和体重下降、总体炎症评分和髓过氧化物酶活性升高以及小肠长度缩短。牛磺酸鹅脱氧胆酸 (TCDCA) 显著改善了临床炎症指标，抑制了吲哚美辛诱导的胆汁中次级胆汁酸含量和疏水性指数的升高，并有减轻肠道炎症的趋势。尽管在 TCDCA 组小鼠注射吲哚美辛前，胆汁酸水平和胆汁疏水性指数分别出现升高和降低，但这些变化并不能解释 TCDCA 介导的保护作用。膳食 TCDCA 可减轻模型中的肠道炎症，而熊去氧胆酸 (UDCA) 则会加剧炎症。胆汁成分的变化（UDCA 和鹅脱氧胆酸的增加）可能解释了观察到的调节作用。[3]

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BMS-1001 是百时美施贵宝公司专利（WO2015034820、WO2015160641）中优化的小分子抑制剂之一。它与PD-L1结合并诱导PD-L1二聚化，从而使PD-L1两个亚基的PD-1结合表面均能被PD-L1亚基所占据。晶体结构显示，2,3-二氢-1,4-苯并二恶英部分诱导Tyr56侧链的运动，将结合口袋转化为一个隧道。(2R)-2-氨基-3-羟基丙酸部分与Asp122羰基之间形成氢键，并通过水分子介导与Lys124 NH2和Tyr123主链羰基形成氢键。3-氰基苄基取代基与Tyr123和Arg125形成疏水相互作用。[4]

C29H33NO5

475.58

475.235

C, 73.24; H, 6.99; N, 2.95; O, 16.82

1675201-83-8

91663303

White to off-white crystalline solid

1.2±0.1 g/cm3

630.2±55.0 °C at 760 mmHg

334.9±31.5 °C

0.0±1.9 mmHg at 25°C

1.590

5.18

68.2

1

6

9

35

639

1

O([H])C([C@]1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])N1C([H])([H])C1C(=C([H])C(=C([H])C=1OC([H])([H])[H])OC([H])([H])C1C([H])=C([H])C([H])=C(C2C([H])=C([H])C([H])=C([H])C=2[H])C=1C([H])([H])[H])OC([H])([H])[H])=O

ZBOYJODMIAUJHH-SANMLTNESA-N

InChI=1S/C29H33NO5/c1-20-22(12-9-13-24(20)21-10-5-4-6-11-21)19-35-23-16-27(33-2)25(28(17-23)34-3)18-30-15-8-7-14-26(30)29(31)32/h4-6,9-13,16-17,26H,7-8,14-15,18-19H2,1-3H3,(H,31,32)/t26-/m0/s1

(2S)-1-[[2,6-dimethoxy-4-[(2-methyl-3-phenylphenyl)methoxy]phenyl]methyl]piperidine-2-carboxylic acid

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 1 mg/mL (2.10 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 10.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 1 mg/mL (2.10 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 10.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 1 mg/mL (2.10 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 10.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 10 mg/mL (21.03 mM) in 50% PEG300 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶.
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。