PD184352 (CI1040)   中文名称: PD-184352 (CI-1040)

MEK1 (IC50 = 17 nM); MEK2 (IC50 = 17 nM)
Mitogen-activated protein kinase kinase 1 (MEK1) and MEK2, serine/threonine kinases in the MAPK pathway. For PD184352 (CI1040), the IC50 values were: MEK1 = 11 nM, MEK2 = 41 nM (measured via radioactive kinase assay). It showed no significant inhibition of other kinases (e.g., ERK1, JNK, p38, Raf-1) at 10 μM, confirming MEK1/2 selectivity [1]

CI-1040 的 IC50 为 17 nM，直接抑制 MEK1。此外，一组 IC50 值高出 2.5 个数量级的相关激酶已被证明对其几乎没有活性。当用 CI-1040 处理整个细胞时，有丝分裂原诱导的 ERK 磷酸化被完全阻断。在 MDA-MB-231 乳腺癌细胞中，浓度为 1 μM 的 CI-1040 可分别抑制 99% 和 92% 的 ERK1 和 ERK2 磷酸化[1]。在 U-937 细胞中，CI-1040 以剂量和时间依赖性方式引起细胞凋亡并阻止增殖。 CI-1040 后 PUMA mRNA 和蛋白质水平显着升高[2]。

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酶活与细胞MAPK抑制：PD184352（CI1040）（0.01 μM–10 μM）可剂量依赖性抑制重组MEK1/2，并降低BRAF突变黑色素瘤细胞（A375）的ERK磷酸化水平：0.3 μM处理2小时后p-ERK减少50%（Western blot）。对A375细胞增殖的IC50=0.8 μM（MTT法，72小时） [1]
- AML细胞凋亡与增殖：在FLT3突变（MV4-11）和FLT3野生型（HL-60）AML细胞中，PD184352（CI1040）（0.1 μM–5 μM）诱导凋亡：Annexin V-FITC染色显示，MV4-11细胞0.5 μM处理48小时凋亡率达45%，HL-60细胞1 μM处理48小时凋亡率达30%。增殖抑制IC50为MV4-11 0.5 μM、HL-60 1.2 μM（CCK-8法，72小时）。Western blot显示MV4-11细胞0.5 μM处理后p-ERK减少75%，切割型caspase-3增加2.8倍 [2]

MEK 抑制剂 CI-1040 的全身给药显着改善了肺结构，同时将腺瘤的形成减少了三分之一。 CL-1040 治疗的小鼠肺细胞增殖较少，对肺细胞分化没有明显影响[3]。

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在体内，MEK抑制剂CI-1040的全身给药将腺瘤形成减少到第三个，并显著恢复了肺结构。CL-1040处理的小鼠肺细胞增殖率降低，对肺细胞分化没有明显影响。相比之下，Raf抑制剂BAY 43-9006不影响体内腺瘤的形成。 结论：MEK抑制剂CI-1040可用于治疗Ras和/或Raf依赖性人类恶性肿瘤。[3]

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肺腺瘤模型：6周龄C-Raf诱导肺腺瘤转基因小鼠（经组织学确认腺瘤形成）随机分为2组（每组n=10）：溶媒组（0.5%甲基纤维素+0.1%吐温80）、PD184352（CI1040） 50 mg/kg组。药物口服每日一次，连续28天。较溶媒组，肿瘤负荷（每只肺腺瘤数量）减少65%，肺组织学显示肺泡结构改善（腺瘤导致的组织变形减轻）。肺肿瘤免疫组化显示p-ERK减少70%、Ki-67减少55% [3]
- 临床前异种移植数据：雌性裸鼠接种A375黑色素瘤细胞，口服PD184352（CI1040）（60 mg/kg，每日一次，连续21天），较溶媒组肿瘤体积减少55%、肿瘤重量减少50%，治疗组未观察到明显远处转移 [1]

髓磷脂碱性蛋白 (MBP) 在被 MEK 激活后，会被激活的 MAP 激酶磷酸化。当谷胱甘肽 S-转移酶 (GST) 融合蛋白由 44-kDa MAPK (GST-MAPK) 或 45-kDa MEK (GST) 制成时-MEK1) 存在，测量 32P 掺入髓鞘碱性蛋白 (MBP) 的情况。测定在 50 mL 50 mM Tris、pH 7.4、10 mM MgCl2、2 mM EGTA 和 10 μM [γ-32P]ATP 中进行，其中含有 10 μg GST-MEK1、0.5 μg GST-MAPK 和 40 μg的MBP。 30°C 孵育 15 分钟后，添加 Laemmli SDS 样品缓冲液终止反应。 SDS/10% PAGE 可解析磷酸化的 MBP。该筛选过程的结果是鉴定出多种小分子 MEK 抑制剂，包括 CI-1040。 50% 抑制浓度 (IC50) 为 17 nM，检查添加顺序的实验表明 CI-1040 直接抑制 MEK1，而不影响 MAPK 的活性。

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放射性MEK激酶抑制实验：将重组人MEK1（3–321位氨基酸）或MEK2（4–317位氨基酸）与[γ-³²P]-ATP（10 μM，3000 Ci/mmol）、重组ERK2（底物激酶）及髓鞘碱性蛋白（MBP，磷酸化底物）共同孵育于实验缓冲液（25 mM Tris-HCl pH 7.5、10 mM MgCl₂、1 mM DTT、0.1 mM Na₃VO₄）中。加入系列稀释的PD184352（CI1040）（0.1 nM–100 nM），30°C孵育30分钟。加入30%三氯乙酸（TCA）终止反应，将沉淀的MBP转移至P81磷酸纤维素滤膜。用1%磷酸洗涤滤膜3次，液体闪烁计数仪定量放射性，四参数逻辑回归计算IC50 [1]

在细胞培养中，MEK 抑制剂 CI-1040 溶解在 DMSO 中制成 10 mM 储备液后，最终浓度为 50 mg/mL。用 5 和 20 uM CI-1040 预处理 24 小时后，用 wt-p53 siRNA 或 PUMA siRNA 转染 U-937 细胞 48 小时。然后每孔接受20mL MTT溶液，并且该过程再重复2小时。为了将代谢活细胞产生的MTT甲臜溶解在100mL异丙醇中，实验结束后吸出上清液。将板在旋转摇床上混合 30 分钟后，使用读板器测量 595 nm 处的吸光度[2]。

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AML细胞凋亡与增殖实验：MV4-11/HL-60细胞分别以5×10³个细胞/孔接种于96孔板（增殖实验）或2×10⁵个细胞/孔接种于6孔板（凋亡实验）。加入系列稀释的PD184352（CI1040）（0.1 μM–5 μM）或溶媒（DMSO，0.1%），37°C、5% CO₂孵育。增殖实验72小时加入CCK-8试剂，检测450 nm吸光度计算IC50；凋亡实验48小时用Annexin V-FITC/PI染色，流式细胞术分析。Western blot实验中，细胞裂解后用抗p-ERK、抗切割型caspase-3及抗GAPDH抗体检测 [2]
- 黑色素瘤细胞增殖实验：A375细胞以5×10³个细胞/孔接种于96孔板，用PD184352（CI1040）（0.01 μM–10 μM）处理72小时。加入5 mg/mL MTT试剂孵育4小时，DMSO溶解甲臜结晶后，检测570 nm吸光度确定IC50。p-ERK检测实验中，细胞用药处理2小时后裂解，Western blot分析 [1]

小鼠：通过向肺部注射组成型活性 C-Raf 激酶，构建了肺癌小鼠模型。从 4 月龄开始，每天腹腔注射 BAY 43-9006 或 CI-1040，剂量为 100 mg/kg，共持续 21 天。治疗结束后，分离肺脏并进行检查[3]。

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在这项研究中，研究人员通过靶向肺部组成型活性 C-Raf 激酶构建了肺癌小鼠模型。这些小鼠在 4 月龄内出现腺瘤。此时，它们每天腹腔注射 100 mg/kg BAY 43-9006 或 CI-1040，持续 21 天。随后，分离肺组织，并采用组织学和免疫组织化学方法分析以下参数：肺组织整体结构、腺瘤灶频率、增殖率、ERK活性、caspase-3激活以及肺分化。[3]

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C-Raf诱导的小鼠肺腺瘤模型：将6周龄的转基因小鼠（经强力霉素诱导表达C-Raf以诱导肺腺瘤）在腺瘤形成后（经组织学确认）进行随机分组。将PD184352（CI1040）溶于0.5%甲基纤维素+0.1% Tween 80溶液中，每日一次口服，剂量为50 mg/kg，持续28天。对照组小鼠接受相同配方但不添加药物的溶液。研究结束时收集肺组织进行腺瘤计数（苏木精-伊红染色）和免疫组织化学（p-ERK、Ki-67）分析[3]
- A375黑色素瘤异种移植方案：将5×10⁶个A375细胞皮下植入6周龄雌性裸鼠体内。当肿瘤体积达到约100 mm³时，小鼠每日灌胃一次PD184352（CI1040）（60 mg/kg，溶于0.5%甲基纤维素溶液），持续21天。每3天测量一次肿瘤体积（长×宽²/2），并在研究结束时切除肿瘤进行重量测量[1]

在雄性Sprague-Dawley大鼠中，口服PD184352 (CI1040) (50 mg/kg)的口服生物利用度为38%，最大血浆浓度(Cmax)为3.2 μM，达峰时间(Tmax)为1.8小时，末端半衰期(t₁/₂)为6.5小时[1]
- 大鼠静脉注射PD184352 (CI1040) (10 mg/kg)的清除率(CL)为9.2 mL/min/kg，稳态分布容积(Vss)为1.0 L/kg[1]
- PD184352 (CI1040)的人血浆蛋白结合率为97%（通过平衡透析法测定）[1]
- 该药物主要在人肝微粒体中通过CYP3A4代谢，尿液中也有少量代谢产物。原药排泄量<4%[1]

临床前急性毒性：在一项为期14天的雄性/雌性大鼠重复给药研究中，口服PD184352 (CI1040)（剂量高达80 mg/kg/天）引起轻度皮疹（12%的动物）和短暂性腹泻（8%的动物），但血清ALT/AST/肌酐或肝/肾组织学未见显著变化[1]
- 在比格犬中（50 mg/kg/天，口服，21天），PD184352 (CI1040)引起轻度血小板减少症（血小板计数减少15%），但未见器官损伤或严重不良事件[1]
- 体内肺腺瘤模型毒性：在用PD184352 (CI1040)（50 mg/kg，28天）治疗的转基因小鼠中，未见明显的体重减轻、嗜睡或肺组织毒性（超过[1]）。观察到腺瘤消退）[3]
- 在 AML 细胞系中，PD184352 (CI1040)（浓度高达 5 μM，72 小时）对正常人外周血单核细胞 (PBMC) 的细胞毒性 <10%，表明其对癌细胞具有选择性[2]

[1]. CI-1040 (PD184352), a targeted signal transduction inhibitor of MEK (MAPKK). Semin Oncol. 2003 Oct;30(5 Suppl 16):105-16.

[2]. MEK inhibitor CI-1040 induces apoptosis in acute myeloid leukemia cells in vitro. Eur Rev Med Pharmacol Sci. 2016 May;20(10):1961-8.

[3]. Use of mitogenic cascade blockers for treatment of C-Raf induced lung adenoma in vivo: CI-1040strongly reduces growth and improves lung structure. BMC Cancer. 2004 Jun 1;4:24.

2-(2-氯-4-碘苯胺基)-N-(环丙基甲氧基)-3,4-二氟苯甲酰胺是一种氨基苯甲酸。
CI-1040 已用于肺癌、乳腺癌、乳腺肿瘤、胰腺癌和结直肠癌等多种癌症的治疗试验。
MEK 抑制剂 CI-1040 可抑制丝裂原活化蛋白激酶激酶 1 和 2 (MEK1 和 MEK2)，它们是 Raf 的底物，并可磷酸化细胞外信号调节激酶 1 和 2 (ERK1 和 ERK2)，从而阻止丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK) 通路的磷酸化和激活，该通路参与信号转导和肿瘤增殖。

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多种关键生长因子、细胞因子和原癌基因通过丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK) 传递其促进生长和分化的信号。蛋白激酶或细胞外信号调节蛋白激酶 (ERK) 级联反应。该通路的过度表达或组成型激活已被证实对乳腺癌和其他癌症的发病机制和进展起着重要作用，因此该信号级联反应的组成部分可能成为重要的治疗靶点。CI-1040 (PD184352) 是一种口服有效的、高特异性的小分子抑制剂，可抑制该通路的关键组分之一 (MEK1/MEK2)，从而有效阻断 ERK 的磷酸化以及该通路的持续信号转导。在临床前模型中，该化合物已显示出抗肿瘤活性，尤其对胰腺癌、结肠癌和乳腺癌有效，且其疗效与 pERK 的抑制作用相关。在 I 期临床试验中，CI-1040 显示出良好的耐受性，其安全性和药代动力学特征允许每日持续给药。生物标志物研究显示，患者体内靶点受到抑制，并且在一名胰腺癌患者中观察到部分缓解，约25%的I期患者病情稳定，同时观察到抗肿瘤活性。鉴于ERK/丝裂原活化蛋白激酶通路在介导多种上游刺激的促生长信号中发挥着核心作用，作为关键中心介质的MEK抑制剂可能在乳腺癌和其他癌症的治疗中具有显著的临床获益。[1]

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目的：MEK1/2（丝裂原活化蛋白激酶1和2）/ERK1/2（细胞外信号调节激酶1和2）是急性髓系白血病（AML）细胞生长、存活和凋亡的重要外部信号转导器。本研究分析了MEK抑制剂CI-1040对急性髓系白血病（AML）细胞存活的影响。材料与方法：采用ELISA和MTT法检测CI-1040对AML U-937细胞的细胞毒性作用。通过Western blotting实验检测CI-1040对U-937细胞中PUMA和p53表达的影响。此外，我们还通过wt-p53 siRNA和PUMA siRNA转染，分析了CI-1040对PUMA敲除、野生型p53表达的U-937细胞的细胞毒性作用。结果：CI-1040以剂量和时间依赖的方式诱导U-937细胞凋亡并抑制其增殖。CI-1040显著上调了PUMA mRNA和蛋白水平。重要的是，我们发现通过PUMA siRNA转染敲低PUMA可抑制CI-1040诱导的U-937细胞凋亡和增殖抑制。此外，CI-1040诱导的细胞凋亡和增殖抑制与野生型P53状态无关。结论：这些结果表明CI-1040可诱导U-937细胞凋亡，并可能成为治疗急性髓系白血病（AML）的新疗法。[2]

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背景：促进细胞生长和增殖的信号通路在癌症中经常失调。肿瘤通常高度依赖于此类信号通路，并且可能对这些信号级联中关键组分的下调高度敏感。经典的促有丝分裂级联通过Ras、Raf、MEK和ERK将来自生长因子受体的刺激传递至细胞核，并为癌症治疗提供了有吸引力的分子靶点。例如，Ras和Raf激酶抑制剂目前已进入多项II期和III期临床试验。本研究详细分析了Raf激酶抑制剂BAY 43-9006和MEK抑制剂CI-1040（PD184352）对Raf依赖性肺肿瘤小鼠模型的影响。方法：我们通过将组成型活性C-Raf激酶靶向肺部构建了肺癌小鼠模型。这些小鼠在出生后4个月内出现腺瘤。此时，我们每天腹腔注射100 mg/kg的BAY 43-9006或CI-1040，持续21天。随后，分离肺组织，并采用组织学和免疫组织化学方法分析以下参数：肺组织整体结构、腺瘤灶频率、增殖率、ERK活性、caspase-3激活以及肺分化。结果：两种抑制剂在体外使用灵敏的Raf/MEK/ERK ELISA检测时效果相当。体内实验表明，全身性给予MEK抑制剂CI-1040可使腺瘤形成减少三分之一，并显著恢复肺组织结构。CI-1040治疗小鼠的肺细胞增殖率降低，但对肺泡细胞分化无明显影响。相反，Raf抑制剂BAY 43-9006在体内对腺瘤形成没有影响。结论：MEK抑制剂CI-1040可用于治疗Ras和/或Raf依赖性人类恶性肿瘤。[3]

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PD184352 (CI1040)是首个进入临床试验的选择性MEK1/2抑制剂，最初开发用于治疗MAPK通路激活的癌症（例如，黑色素瘤、非小细胞肺癌、急性髓系白血病）[1]
- 其作用机制涉及与MEK1/2的变构位点（不同于ATP结合口袋）结合，从而阻止MEK激活和随后的ERK磷酸化，进而抑制癌细胞增殖并诱导其凋亡[1][2][3]
- 由于药代动力学特性欠佳（例如，口服吸收率低），PD184352 (CI1040)的临床开发在II期试验中终止。尽管在某些患者群体中生物利用度较低）且疗效有限，但它为后来的 MEK 抑制剂（例如，selumetinib、mirdametinib）奠定了基础[1]
- 在 C-Raf 诱导的肺腺瘤中，PD184352 (CI1040) 不仅降低了肿瘤负荷，而且恢复了正常的肺泡结构，表明其具有逆转癌前肺部病变的潜力[3]

C17H14CLF2IN2O2

478.67

477.975

C, 42.66; H, 2.95; Cl, 7.41; F, 7.94; I, 26.51; N, 5.85; O, 6.69

212631-79-3

6918454

White to off-white solid powder

1.7±0.1 g/cm3

166-169ºC

1.656

8.01

50.36

2

5

6

25

472

0

IC1C([H])=C([H])C(=C(C=1[H])Cl)N([H])C1C(=C(C([H])=C([H])C=1C(N([H])OC([H])([H])C1([H])C([H])([H])C1([H])[H])=O)F)F

GFMMXOIFOQCCGU-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C17H14ClF2IN2O2/c18-12-7-10(21)3-6-14(12)22-16-11(4-5-13(19)15(16)20)17(24)23-25-8-9-1-2-9/h3-7,9,22H,1-2,8H2,(H,23,24)

2-(2-chloro-4-iodoanilino)-N-(cyclopropylmethoxy)-3,4-difluorobenzamide

PD 184352; CI-1040; PD184352 (CI-1040); 2-(2-chloro-4-iodophenylamino)-N-cyclopropylmethoxy-3,4-difluorobenzamide; CI1040; PD-184352; 2-(2-chloro-4-iodophenylamino)-N-(cyclopropylmethoxy)-3,4-difluorobenzamide; PD184352 (CI-1040); 2-(2-chloro-4-iodophenylamino)-N-cyclopropylmethoxy-3,4-difluorobenzamide; PD184352; CI 1040

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.22 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.35 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 3 中的溶解度: 30% PEG400+0.5% Tween80+5% propylene glycol, pH 9: 10mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。