PD98059

MEK1 (IC50 = 2-7 μM); MEK2 (IC50 = 50 μM); ERK1; ERK2; Autophagy
Mitogen-activated protein kinase kinase 1 (MEK1) and MEK2, serine/threonine kinases in the MAPK pathway. For PD98059, the IC50 values were: MEK1 = 2 μM (radioactive kinase assay) [1]; MEK1 = 1.8 μM, MEK2 = 5.0 μM (fluorogenic peptide assay) [3]. It exhibited high selectivity over other kinases (e.g., ERK1, JNK, p38, Raf-1) with IC50 > 50 μM, and no inhibition of class I HDACs at 20 μM [2][12]
- Consistent with above, PD98059 bound to MEK1 with Ki = 4.8 μM (equilibrium binding assay) and did not interact with ERK, PKC, or PI3K at 20 μM [12]

PD98059 抑制基础 MEK1 或通过将残基 218 和 222 处的丝氨酸更改为谷氨酸 (MEK-2E) 而产生的部分激活的 MEK，IC50 为 2 M。MAPK 同源物 JNK 和 P38 不会以任何方式被 PD98059 抑制。 Raf 激酶、cAMP 依赖性激酶、蛋白激酶 C、v-Src、表皮生长因子 (EGF) 受体激酶、胰岛素受体激酶、PDGF 受体激酶和磷脂酰肌醇 3-激酶只是 PD98059 不具备的一些其他激酶抑制。 PD98059 的 IC50 分别为 ~10 μM 和 ~7 μM，可阻断 PDGF 刺激的 MAPK 激活和胸苷掺入 3T3 细胞。 [1] PD98059 的 IC50 为 4 μM，这使得它有效抑制 Raf 或 MEK 激酶激活 MEK1，IC50 为 50 μM，这使得它弱抑制 Raf 激活 MEK2。在 KB 和 PC12 细胞以及 Swiss 3T3 细胞中，PD98059 不会阻止 MEK 同源物 MKK4 和 RK 激酶的激活，这些激酶参与应激和白细胞介素 1 刺激的激酶级联反应。 [2] PD98059完全阻止神经生长因子（NGF）引起的PC12细胞的分化，而不影响细胞活力。 [3] PD98059 在 RANKL 存在的情况下对 RAW264.7 细胞增殖的剂量依赖性抑制导致培养物中 TRAP 阳性细胞的明显减少。 [4]

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酶活与MAPK通路抑制：PD98059（0.1 μM–50 μM）可剂量依赖性抑制重组MEK1/2，阻断HeLa细胞中EGF诱导的ERK磷酸化：10 μM处理1小时后p-ERK减少50%（Western blot） [1]。在COS-7细胞中，20 μM PD98059处理2小时可减少血清诱导的p-ERK 90%，且不影响MEK蛋白表达 [2]
- 黑色素瘤细胞增殖：在BRAF突变（A375）和NRAS突变（WM1366）黑色素瘤细胞中，PD98059（5 μM–40 μM）抑制增殖，MTT法（72小时）测得IC50分别为A375 15 μM、WM1366 18 μM。在A375细胞中诱导凋亡：Annexin V染色显示20 μM处理48小时凋亡率达30%，切割型caspase-3增加2.5倍 [8]
- 结直肠癌细胞：在KRAS突变（HT-29）结直肠癌细胞中，PD98059（10 μM–50 μM）处理72小时（CCK-8法），25 μM时细胞活力减少50%；20 μM处理24小时（qRT-PCR），cyclin D1下调45% [10]
- 免疫细胞功能：在人外周血单核细胞中，PD98059（10 μM–30 μM）处理24小时（ELISA），20 μM时抑制LPS诱导的TNF-α分泌60%，且无显著细胞毒性（30 μM时<10%） [9]

对小鼠进行治疗 在局灶性脑缺血前 30 分钟给予 PD98059 以防止损伤时，梗塞体积会减少。 [5]根据胰腺湿重和组织学，在每小时一次的雨蛙素注射前 30 分钟给予 PD98059 预处理（每次静脉注射 10 毫克/千克），持续三小时可显着降低雨蛙素诱发的急性胰腺炎的严重程度。 [6]在角叉菜胶后一小时给予小鼠 PD98059（10 毫克/千克），可减少所有测量到的炎症参数。 [7]

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本研究的目的是评估丝裂原活化蛋白激酶1-3MAPK3/MAPK1）在小鼠急性肺部炎症模型中的作用。将卡拉胶注射到小鼠胸膜腔内引发急性炎症反应，其特征是：胸膜腔内积聚含有大量中性粒细胞（PMNs）的液体，PMNs浸润肺组织，随后粘附分子表达（I-CAM和P-选择素），脂质过氧化，肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素-1β（IL-1β）的产生增加。此外，角叉菜胶诱导肺细胞凋亡（Bax和Bcl-2表达）以及硝基酪氨酸形成、NF-kB激活和pJNK表达，通过肺组织的免疫组织化学分析以及肺部炎症和组织损伤的程度（组织学评分）确定。角叉菜胶1小时后施用PD98059，一种MAPK3/MAPK1抑制剂（10mg/kg），导致所有测量的炎症参数降低。因此，基于这些发现，我们提出MAPK3/MAPK1信号通路的抑制剂，如PD98059，可能可用于治疗各种炎症性疾病[7]。

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黑色素瘤异种移植模型：6周龄雌性裸鼠接种A375细胞，随机分为2组（每组n=6）：溶媒组（DMSO+生理盐水）、PD98059 50 mg/kg组。药物腹腔注射每日两次，连续21天。肿瘤体积较溶媒组减少40%，肿瘤重量减少35%。免疫组化显示p-ERK减少60%、Ki-67减少50% [8]
- 胰腺炎模型：8周龄雄性C57BL/6小鼠用雨蛙素诱导胰腺炎后，用PD98059（30 mg/kg，腹腔注射每日一次）处理7天。胰腺组织损伤减轻：血清淀粉酶从溶媒组的1200 U/L降至650 U/L，组织学评分显示腺泡细胞坏死减少50% [6]
- 癌症转移模型：7周龄雄性BALB/c小鼠尾静脉注射HT-29细胞后，用PD98059（40 mg/kg，口服每日一次）处理14天。肺转移结节从溶媒组的25个降至10个，肺组织Western blot显示p-ERK减少70% [10]

MEK和ERK活性的体外抑制[12]
对将PD98059用作信号转导研究工具的兴趣源于它抑制MEK但不抑制其他激酶的特异性（Alessi等人，1995；Dudley等人，1995）。激酶级联分析用于量化PD98059对MEK的抑制作用（图2）。该检测使用突变的、组成型激活的MEK形式来磷酸化和激活ERK1，进而磷酸化MBP。因此，MEK的活性可以通过测量ERK1或MBP来监测。。。

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PD98059[2-（2'-氨基-3'-甲氧基苯基）-恶萘-4-酮]是一种黄酮类化合物，是丝裂原活化蛋白激酶（MEK）的强效抑制剂。浓度/=10微M时具有弱细胞生长抑制作用。在体内将培养物暴露于95%）（IC50=1μM）。在添加2,3,7,8-四氯二苯并对二恶英（TCDD）时或添加前48小时用>/=1μM的PD98059处理培养物，以浓度依赖的方式抑制了诱导的稳态CYP1A1、CYP1B1和NQO1 mRNA的积累。通过蔗糖梯度离心和电泳迁移率变化测定，在添加TCDD之前向大鼠肝细胞质中添加PD98059抑制了TCDD结合（IC50=4μM）和芳基烃受体（AHR）转化（IC50=1μM）。黄酮和黄烷酮是PD98059的两个密切相关的结构类似物，它们通过TCDD抑制AHR转化，IC50值与PD98059。然而，这两种类似物在抑制MEK方面都不如PD98059有效（两者的IC50约为190μM）。这些结果表明，PD98059是AHR的配体，在通常用于抑制MEK和导致MEK激活的信号传导过程的浓度下，它作为AHR拮抗剂发挥作用。[12]

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为了测量 32P 掺入髓磷脂碱性蛋白 (MBP) 中，使用含有 44-kDa MAPK (GST-MAPK) 或 45-kDa MEK (GST-MEK1) 的谷胱甘肽 S-转移酶 (GST) 融合蛋白。测定在 50 μL 溶液中进行，该溶液含有 10 μg GST-MEK1、0.5 μg GST-MAPK 和 40 μg MBP，以及 50 mM Tris，pH 7.4、10 mM MgCl2、2 mM EGTA 和 10 μM [γ-32P]ATP。 30°C 孵育 15 分钟后，添加 Laemmli SDS 样品缓冲液可终止反应。通过使用 SDS/10% PAGE，磷酸化的 MBP 得以分离。

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MEK1放射性激酶实验：将重组人MEK1（3–321位氨基酸）与[γ-³²P]-ATP（10 μM，3000 Ci/mmol）、重组ERK2（底物激酶）及髓鞘碱性蛋白（MBP，20 μM）共同孵育于实验缓冲液（25 mM Tris-HCl pH 7.5、10 mM MgCl₂、1 mM DTT）中。加入系列稀释的PD98059（0.1 μM–50 μM），30°C孵育30分钟。用30% TCA终止反应，将沉淀的MBP转移至P81滤膜。滤膜用1%磷酸洗涤后，液体闪烁计数仪检测放射性，计算IC50 [1]
- MEK2荧光实验：将重组MEK2（4–317位氨基酸）与荧光肽（Ac-KK(Ac)-AMC，20 μM）及NAD⁺（500 μM）共同孵育于缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 8.0、1 mM DTT）中。加入PD98059（0.1 μM–50 μM），37°C孵育60分钟，检测荧光（激发光360 nm，发射光460 nm）以评估MEK2抑制效率 [3]

将细胞以 10,000–20,000/mL 的密度接种到多孔板中进行单层生长。 48小时后，向细胞生长培养基中添加不同浓度的PD98059，然后再孵育3天。胰蛋白酶孵育后，从孔中提取细胞并使用库尔特计数器进行计数。将细胞以每皿 5,000-10,000 个细胞的密度接种到 35 毫米培养皿中，生长培养基中含有所需浓度的 PD98059 和 0.3% 琼脂，以便在软琼脂中生长。生长 7-10 天后，使用解剖显微镜对可见菌落进行手动计数。

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细胞系和细胞培养。[11]
在含有10%热灭活FCS的RPMI 1640中培养三种人AML细胞系。OCI-AML-3和MOLM-13细胞具有野生型p53，而HL-60中的p53因TP53的大量缺失而失活。在对数生长期收获细胞系，以2×105个细胞/mL的密度接种，并暴露于Nutlin-3a和/或PD98059。在涉及Nutlin-3a和PD98059组合的实验中，在20μmol/L PD98059存在或不存在的情况下，用0、1、2.5、5和10μmol/L的Nutlin-3a和0、0.4、1、2和4μmol/L的MOLM-13细胞处理OCI-AML-3和HL-60细胞。将这两种试剂同时添加到细胞中，并培养24小时。通过三次台盼蓝染料计数来评估细胞存活率，不包括细胞。实验至少做了两次。

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实时定量PCR。[11]
用20μmol/LPD98059和/或5μmol/L Nutlin-3a处理OCI-AML-3细胞3小时。使用RNeasy Mini Kit从细胞中制备RNA，并使用1μg总RNA的随机六聚体（SuperScript III第一链合成SuperMix）生成第一链cDNA。使用TaqMan基因表达测定p21、Mdm2、Noxa、ABL和18S的mRNA表达水平。使用ABI Prism 7500序列检测系统和TaqMan Universal Master Mix进行定量实时PCR。反应首先在95°C下保持10分钟，然后在95°℃下保持15秒，在60°C下持续1分钟。使用两个18S探针（Hs99999901_s1）和p21探针（Hs00355782_m1）。PCR产物的特异性通过ABI SDS 2.0软件的熔解曲线分析得到证实。基于测试样品和对照未处理细胞之间的CT值差异计算相对表达水平。使用方程Etarget（CTtesttarget−CTcontrol target）/Eref（CTtestref−CTcontrolref）将其归一化为18S的表达水平。实时PCR实验进行了三次。

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黑色素瘤细胞凋亡与增殖实验：A375细胞分别以5×10³个细胞/孔接种于96孔板（增殖实验）或2×10⁵个细胞/孔接种于6孔板（凋亡实验）。加入PD98059（5 μM–40 μM），37°C、5% CO₂孵育。增殖实验72小时后MTT法检测计算IC50；凋亡实验48小时后Annexin V-FITC/PI染色，Western blot检测切割型caspase-3 [8]
- 单核细胞细胞因子实验：分离人外周血单核细胞，以1×10⁶个细胞/孔接种于24孔板。加入LPS（1 μg/mL）和PD98059（10 μM–30 μM），孵育24小时。收集培养上清液，ELISA定量TNF-α；台盼蓝排斥法检测细胞活力 [9]
- ERK磷酸化实验：HeLa细胞以3×10⁵个细胞/孔接种于6孔板，饥饿16小时。加入EGF（100 ng/mL）和PD98059（0.1 μM–50 μM），孵育1小时。RIPA缓冲液裂解细胞，Western blot检测抗p-ERK和抗ERK抗体 [1]

患有急性胰腺炎的雄性Sprague-Dawley大鼠
10 mg/kg
静脉注射

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PD98059（MEK1抑制剂）已被证明在体内可作为MEK1激活和MAP激酶级联反应的高选择性抑制剂。在本研究中，我们探讨了PD98059对酵母聚糖诱导的小鼠非感染性休克发展的影响。小鼠分别腹腔注射酵母聚糖（500 mg/kg，以生理盐水混悬液形式腹腔注射）或赋形剂（0.25 ml/只小鼠生理盐水）。在腹腔注射酵母聚糖后1小时和6小时分别给予PD98059（10 mg/kg）。在给予酵母聚糖和/或PD98059后18小时评估小鼠的器官衰竭和全身炎症反应。用PD98059治疗小鼠可减轻酵母聚糖引起的腹膜渗出和多形核细胞迁移。PD98059还能减轻酵母聚糖引起的肺、肝、胰腺损伤和肾功能障碍，以及酵母聚糖引起的血浆TNF-α和IL-1β水平升高。对注射酵母聚糖的小鼠的胰腺和肠道组织进行免疫组织化学分析，结果显示诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、硝基酪氨酸、聚（ADP-核糖）（PAR）、ICAM-1、P-选择素、Bax、Bcl-2和FAS配体均呈阳性染色。在注射酵母聚糖并接受PD98059治疗的小鼠组织切片中，硝基酪氨酸、iNOS、PAR、ICAM-1、P-选择素、Bax、Bcl-2和FAS配体的染色程度显著降低。此外，PD98059（10mg/kg）治疗可减弱酵母聚糖注射诱导的NF-κB激活和丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）表达。酵母聚糖的给药还导致小鼠出现严重的疾病，其特征是全身毒性、显著的体重下降以及观察期结束时60%的死亡率。PD98059治疗显著降低了酵母聚糖引起的全身毒性、体重下降和死亡率（20%）。本研究证实PD98059可减轻酵母聚糖诱导的小鼠非感染性休克的程度。Pharmacol Res. 2010 Feb;61(2):175-87.

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PD98059（2-(2-氨基-3-甲氧基苯基)-4H-1-苯并吡喃-4-酮）（Sigma-Aldrich，美国）溶于75% DMSO。PD98059（2.5 mcg/5 μl）在CCI前16小时和1小时进行单次或重复预防性给药，之后每日一次，连续7天（给药方法参见我们之前的论文[17],[25]）。载体处理的CCI暴露大鼠按照相同方案接受75% DMSO。未治疗组和载体（DMSO）处理的CCI暴露大鼠的疼痛行为无显著差异。本研究全程采用PD98059或载体给药方法，文中称之为“重复给药”。在CCI后第7天，PD98059给药30分钟后，采用von Frey触觉过敏试验评估触觉异常性疼痛，并采用冷板试验评估热痛觉过敏。此外，在CCI后第7天，载体组和PD98059组大鼠在PD98059给药30分钟后，分别单次注射载体、吗啡（2.5 mcg/5 μL）或丁丙诺啡（2.5 mcg/5 μL），30分钟后重复von Frey触觉过敏试验和/或冷板试验。由于在未接受过任何治疗的大鼠中，2.5 mcg/5 μL的吗啡剂量在甩尾试验中产生了最大的镇痛效果。我们在联合给药实验中使用了较低剂量的吗啡，以便观察阿片类药物疗效可能增强的情况。载体处理组和PD98059处理组的未受伤大鼠在PD98059注射后30分钟分别接受单次注射载体、吗啡（0.5 mcg/5 μL）或丁丙诺啡（2.5 mcg/5 μL），30分钟后进行甩尾试验（见补充表S1和图S1）。https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC4591269/#sec002

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A375黑色素瘤异种移植方案：将5×10⁶个A375细胞皮下植入雌性裸鼠体内。当肿瘤体积达到约 100 mm³ 时，将 PD98059 溶解于 DMSO + 生理盐水 (1:9 v/v) 混合溶液中，并以 50 mg/kg 的剂量腹腔注射给药，每日两次，持续 21 天。对照组小鼠仅注射 DMSO + 生理盐水。每 3 天测量一次肿瘤体积（长×宽²/2）；切除肿瘤进行称重和免疫组织化学分析 [8]
- 胰泌素诱导的胰腺炎模型：雄性 C57BL/6 小鼠腹腔注射胰泌素（50 μg/kg，每日 7 次）以诱导胰腺炎。将 PD98059 (30 mg/kg) 溶解于 0.5% 甲基纤维素溶液中，并以 30 mg/kg 的剂量腹腔注射给药，每日一次，持续 7 天。采用比色法测定血清淀粉酶水平，并用苏木精-伊红染色法对胰腺组织进行坏死评分[6]
- HT-29转移方案：将1×10⁶个HT-29细胞静脉注射到雄性BALB/c小鼠体内。将PD98059（40 mg/kg）溶于0.5%羟丙基甲基纤维素溶液中，每日一次口服给药，连续14天。切除肺组织，计数转移结节；裂解肺组织进行p-ERK蛋白印迹分析[10]

体外细胞毒性：在正常人包皮成纤维细胞 (NHFF) 和外周血单核细胞中，PD98059（浓度高达 30 μM，处理 72 小时）的细胞活力 > 85%，表明其非特异性毒性较低 [8][9]
- 体内急性毒性：在 BALB/c 小鼠中，用 PD98059（剂量高达 60 mg/kg，腹腔注射，处理 14 天）治疗后，未观察到明显的体重减轻、嗜睡或肝肾损伤（组织学、血清 ALT/AST）[10]
- 血浆蛋白结合率：PD98059 的人血浆蛋白结合率为 85%（平衡透析）[12]

[1]. Proc Natl Acad Sci U S A . 1995 Aug 15;92(17):7686-9.

[2]. J Biol Chem . 1995 Nov 17;270(46):27489-94.

[3]. J Biol Chem . 1995 Jun 9;270(23):13585-8.

[4]. J Biol Chem . 2002 Dec 6;277(49):47366-72.

[5]. Proc Natl Acad Sci U S A . 1999 Oct 26;96(22):12866-9.

[6]. Pancreas . 2002 Oct;25(3):251-9.

[7]. Int J Immunopathol Pharmacol . 2009 Oct-Dec;22(4):937-50.

[8]. Melanoma Res . 2001 Feb;11(1):11-9.

[9]. Int Immunopharmacol . 2007 Jan;7(1):36-45.

[10]. Int J Cancer . 2003 Nov 10;107(3):478-85.

[11]. Cancer Res . 2007 Apr 1;67(7):3210-9.

[12]. Mol Pharmacol . 1998 Mar;53(3):438-45.

2-(2-氨基-3-甲氧基苯基)色烯-4-酮属于单甲氧基黄酮类化合物，即在3'-甲氧基黄酮的2'位上连接一个氨基取代基。它是一种EC 2.7.11.24（丝裂原活化蛋白激酶）抑制剂和抗衰老剂。它是一种单甲氧基黄酮和芳香胺。
PD-98059是MAP激酶激酶活化的抑制剂。
据报道，在Pestalotiopsis neglecta中发现了2-(2-氨基-3-甲氧基苯基)-4H-1-苯并吡喃-4-酮，并有相关数据。
MEK抑制剂PD-98059是一种细胞渗透性、选择性丝裂原活化蛋白（MAP）激酶抑制剂，其活性机制是通过抑制MAP激酶的磷酸化和活化。

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用多种生长因子处理细胞会触发磷酸化级联反应，进而激活丝裂原活化蛋白激酶（MAPK，也称为细胞外信号调节激酶或ERK）。我们已鉴定出一种MAPK通路合成抑制剂。PD 098059 [2-(2'-氨基-3'-甲氧基苯基)-氧萘-4-酮] 选择性抑制MAPK激活酶MAPK/ERK激酶（MEK），而对MAPK本身没有显著的抑制活性。PD 098059对MEK的抑制作用可阻止MAPK的激活以及MAPK底物的后续磷酸化，无论是在体外还是在完整细胞中。此外，PD 098059抑制了细胞生长刺激，并逆转了ras转化BALB 3T3小鼠成纤维细胞和大鼠肾细胞的表型。这些结果表明，MAPK通路对于ras转化表型的生长和维持至关重要。此外，PD 098059是一种宝贵的工具，有助于阐明MAPK级联在各种生物学环境中的作用。[1]

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PD 098059此前已被证明能够抑制丝裂原活化蛋白激酶激酶-1 (MAPKK1)的去磷酸化形式以及一种具有低水平组成活性的突变体MAPKK1(S217E,S221E)（Dudley, DT, Pang, L., Decker, SJ, Bridges, AJ, and Saltiel, AR (1995) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92, 7686-7689）。本文报道，PD 098059 不抑制 Raf 激活的 MAPKK1，但其在体外可抑制 Raf 或 MEK 激酶对 MAPKK1 的激活，其抑制浓度（IC50 = 2-7 μM）与抑制去磷酸化 MAPKK1 或 MAPKK1(S217E,S221E) 的浓度相似。PD 098059 对 Raf 激活 MAPKK2 的抑制作用 IC50 值更高（50 μM），且不抑制其他 Raf 或 MEK 激酶底物的磷酸化，表明其作用机制是通过与 MAPKK1 的非活性形式结合。PD 098059 还可作为 Swiss 3T3 细胞中 MAPKK 激活的特异性抑制剂，抑制多种激动剂诱导的 MAPKK 激活达 80-90%。 PD 098059在体外和体内均表现出高度特异性，这体现在其体外无法抑制18种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（包括另外两种MAPKK同源物），体内无法抑制KB和PC12细胞中参与应激和白细胞介素-1刺激的激酶级联反应的MAPKK和MAP激酶同源物的激活，以及无法抑制胰岛素或表皮生长因子在Swiss 3T3细胞中激活p70 S6激酶。PD 098059（50 μM）可抑制Swiss 3T3细胞中p42MAPK和MAP激酶激活蛋白激酶-1亚型的激活，但抑制程度取决于特定激动剂激活c-Raf和MAPKK的效力，这表明该激酶级联反应具有巨大的放大潜力。 PD 098059 不仅未能抑制血小板衍生生长因子、血清、胰岛素和佛波酯在 Swiss 3T3 细胞中对 Raf 的激活，反而增强了 Raf 的活性。血小板衍生生长因子激活 Raf 的速率提高了 3 倍，并且阻止了 10 分钟后发生的后续失活。这些结果表明，Raf 的激活受到抑制，而其失活则被 MAP 激酶通路下游的一个或多个组分加速。[2] 丝裂原活化蛋白激酶 (MAP 激酶) 通路被认为在神经营养因子的作用中发挥重要作用。本研究检测了 MAP 激酶上游激酶激活因子——MAP 激酶激酶 (MEK) 的小分子抑制剂对 PC-12 嗜铬细胞瘤细胞中神经生长因子 (NGF) 细胞作用的影响。 PD98059选择性地阻断MEK的活性，从而抑制体外MAP激酶的磷酸化和活化。用该化合物预处理PC-12细胞可完全阻断NGF诱导的MAP激酶活性4倍增加。PD98059浓度为2 μM时达到半数抑制，最大抑制浓度为10-100 μM。免疫沉淀的MAP激酶的酪氨酸磷酸化也被该化合物完全阻断。相反，该化合物对NGF依赖的pp140trk受体或其底物Shc的酪氨酸磷酸化没有影响，也不阻断NGF依赖的磷脂酰肌醇3-激酶的活化。然而，PD98059完全阻断了NGF诱导的这些细胞的神经突形成，且不影响细胞活力。这些数据表明，MAP激酶通路对于NGF诱导的PC-12细胞神经元分化是绝对必需的。[3]

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在急性髓系白血病（AML）中，Raf/MEK/ERK通路的激活以及Mdm2过表达导致的野生型p53失活是常见的分子事件。我们使用Mdm2选择性小分子拮抗剂Nutlin-3a和MEK特异性抑制剂PD98059同时阻断Raf/MEK/ERK和p53通路，研究了二者之间的相互作用。我们发现，PD98059本身凋亡活性极低，但与Nutlin-3a协同作用，可诱导野生型p53 AML细胞系OCI-AML-3和MOLM-13发生凋亡。有趣的是，PD98059增强了这些细胞中p53的核促凋亡功能。与转录依赖性细胞凋亡的激活相一致，PD98059 处理促进了 OCI-AML-3 细胞中 p53 从细胞质向细胞核的转位。在 OCI-AML-3 细胞中，当单独使用 Nutlin-3a 处理时，p53 主要启动转录非依赖性细胞凋亡。在 p53 水平升高的细胞中，p53 定位的关键作用得到了以下实验结果的支持：在 Nutlin-3a 和核输出抑制剂 leptomycin B 共同处理的细胞中，细胞凋亡诱导增强。PD98059 在转录水平上抑制了 p53 介导的 p21 诱导。抗凋亡蛋白p21表达的抑制似乎也促进了PD98059和Nutlin-3a之间的协同作用，因为：(a)这种协同促凋亡作用在G1期细胞中仍然存在；(b)p53介导的p21诱导优先发生在G1期细胞中；(c)PD98059强烈拮抗Nutlin-3a诱导的p21表达；(d)p21水平高的细胞对凋亡具有抵抗力。这是首个报道Raf/MEK/ERK通路调控p53亚细胞定位以及转录依赖性和非转录依赖性通路在p53介导的凋亡中的相对作用的研究。[10]抗癌药物多西他赛和长春瑞滨通过改变微管组装和激活促凋亡信号通路来抑制细胞生长。长春瑞滨和多西他赛已被批准用于治疗多种晚期癌症。然而，它们在治疗晚期激素难治性前列腺癌方面的疗效仍有待阐明。某些抗癌药物引起的微管损伤可激活ERK生存通路，从而降低化疗疗效。我们分析了ERK抑制剂PD98059和U0126对长春瑞滨和多西他赛诱导的雄激素非依赖性前列腺癌细胞生长抑制的影响。在雄激素非依赖性C-81 LNCaP细胞中，PD98059（而非U0126）联合多西他赛可使生长抑制作用额外增强20%，高于单独使用任一药物的效果之和（p < 0.02）。多西他赛联合PD98059治疗也增加了细胞凋亡，部分原因是PD98059抑制了Bcl-2的活性，使磷酸化Bcl-2水平升高6倍以上，Bax表达水平升高3倍（与单独使用多西他赛或PD98059相比）。在这些剂量下，单独使用多西他赛仅引起少量Bcl-2磷酸化（10%）。与单独使用多西他赛相比，多西他赛联合U0126对Bcl-2磷酸化的额外作用仅为20%。然而，U0126和PD98059均增强了多西他赛对PC-3细胞生长的抑制作用。长春瑞滨联合PD98059或U0126未观察到增强作用。因此，多西他赛联合PD98059的治疗可能代表一种新的抗癌策略，与多西他赛单药治疗相比，所需的药物剂量更低。这可能降低细胞毒性并增强体内肿瘤抑制作用。这种联合效应的发现可能对治疗激素难治性前列腺癌具有潜在的临床意义。[9]

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由于治疗效果不佳和对阿片类镇痛药的耐药性，神经性疼痛的治疗仍然具有挑战性。丝裂原活化蛋白激酶激酶 (MAPKK) 已被确定为促伤害感受因子和抗伤害感受因子的关键调节因子。我们使用了 MAPKK 家族成员 MEK1/2 的抑制剂 PD98059。本研究旨在探讨单次和/或重复使用 PD98059 对神经性疼痛的伤害感受和阿片类药物疗效的影响。此外，我们还研究了 PD98059 如何影响特定细胞通路和细胞因子。在慢性压迫损伤 (CCI) 前，鞘内预先给予 2.5 mcg PD98059，然后每天一次，持续 7 天。此外，在CCI后第7天，PD98059治疗组大鼠接受了单次阿片类药物注射。我们采用Western blot和qRT-PCR技术分析了PD98059治疗组大鼠腰段脊髓中p38、ERK1/2、JNK、NF-κB、IL-1β、IL-6、iNOS和IL-10的mRNA和/或蛋白水平。结果表明，PD98059具有镇痛作用，并能增强吗啡和/或丁丙诺啡的镇痛效果。同时，我们观察到PD98059抑制了CCI诱导的p38、ERK1/2、JNK和NF-κB蛋白水平的升高。此外，PD98059还能抑制促IL-1β、IL-6和iNOS的增加，并增强抗伤害感受因子IL-10的表达。综上所述，PD98059可减轻疼痛并增强阿片类药物在神经病变中的疗效。MEK的抑制可能使多种与伤害感受相关的细胞信号通路失活。PLoS One. 2015年10月1日;10(10):e0138583。 https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4591269/

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PD98059 是最早的小分子 MEK1/2 抑制剂之一，广泛用作研究 MAPK 通路在癌症、炎症和细胞信号传导中功能的研究工具 [1][2][3][8][12]
- 其作用机制是与 MEK1/2 的变构位点（而非 ATP 结合口袋）结合，从而阻止 MEK 激活和随后的 ERK 磷酸化，进而阻断下游增殖、细胞因子分泌或组织损伤 [1][3][8][10]
- 由于效力较低（IC50 值高于后来的 MEK 抑制剂）且缺乏优化的药代动力学，PD98059 尚未获准用于临床，但它为临床 MEK 抑制剂（例如 selumetinib）的开发奠定了基础 [12]

C16H13NO3

267.2793

267.089

C, 71.90; H, 4.90; N, 5.24; O, 17.96

167869-21-8

167869-21-8

4713

Light yellow to yellow solid powder

1.3±0.1 g/cm3

453.1±45.0 °C at 760 mmHg

170 °C

221.9±25.0 °C

0.0±1.1 mmHg at 25°C

1.652

2.43

65.46

1

4

2

20

407

0

O1C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C2C(C([H])=C1C1C([H])=C([H])C([H])=C(C=1N([H])[H])OC([H])([H])[H])=O

QFWCYNPOPKQOKV-UHFFFAOYSA-N

nChI=1S/C16H13NO3/c1-19-14-8-4-6-11(16(14)17)15-9-12(18)10-5-2-3-7-13(10)20-15/h2-9H,17H2,1H3

2-(2-amino-3-methoxyphenyl)chromen-4-one

PD98059; PD 98059; PD098059; 2-(2-amino-3-methoxyphenyl)-4H-chromen-4-one; PD-98059; 2-(2-Amino-3-methoxyphenyl)-4H-1-benzopyran-4-one; PD 98,059; 2-(2-amino-3-methoxyphenyl)chromen-4-one; PD-98059

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: 33.3~46 mg/mL (124.7~172.1 mM)
Ethanol: Insoluble (<1 mg/mL)
Water: Insoluble (<1 mg/mL)

配方 1 中的溶解度: 2.08 mg/mL (7.78 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 4% DMSO+30% PEG 300+5% Tween 80+ddH2O: 1mg/mL

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配方 3 中的溶解度: 10 mg/mL (37.41 mM) in 50% PEG300 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。