Pemetrexed disodium   中文名称: 培美曲塞二钠

TS ( Ki = 1.3 nM ); DHFR ( Ki = 7.2 nM ); GARFT ( Ki = 1.3 nM )

体外活性：Pemetrexed disodium 对 CCRF-CEM 白血病、GC3/C1 结肠癌和 HCT-8 回盲部癌细胞具有抗增殖活性，IC50 分别为 25 nM、34 nM 和 220 nM。最近的一项研究表明，顺铂加培美曲塞联合 SOCS-1 基因递送在感染腺病毒表达 SOCS-1 载体的 MPM 细胞中显示出通过抑制细胞增殖、侵袭和诱导细胞凋亡的抗肿瘤作用。激酶测定：使用分光光度法测定 TS 活性，该方法涉及监测因产物 7,8-二氢叶酸形成而导致的 340 nm 处吸光度的增加。测定缓冲液含有 50 mM N-三[羟甲基甲基-2-氨基乙磺酸、25 mM MgCl2、6.5 mM 甲醛、1 mM EDTA 和 75 mM 2-巯基乙醇，pH 7.4。脱氧尿苷酸单磷酸、6R-MTHF 和 hIS 的浓度分别为 100 μM、30μM 和 30 nM（1.7 毫单位/mL）。在 6R-MTHF 浓度下，测定了未抑制的反应和六种浓度的抑制剂。 Ki app 值是通过借助 ENZFITTER 程序使用非线性回归分析将数据拟合到 Morrison 方程来确定的。 Ki 值的计算公式为：Ki app= Ki(1 + [S]/Km)，其中 [S] 等于 30 μM，Km 等于 3 μM。通过在 340 nm 处监测底物 NADPH 和 7,8-二氢叶酸的消失，以分光光度法测定 DHFR 活性。该反应在 25°C 下在 0.5 mL 50 mM 磷酸钾缓冲液中进行，其中含有 150 mM KCl 和 10 nM 2-巯基乙醇，pH 7.5，以及 14 nM（0.34 毫单位毫升）DHFR。 NADPH 浓度为 10 μM，7,8-二氢叶酸浓度为 5、10 或 15 μM。在每个 7,8-二氢叶酸浓度下，检测未抑制的反应和七个浓度的抑制剂。采用ENZFITIER微机程序，通过非线性回归分析将数据拟合到Morrison方程中，得到Ki app 值。 Ki app= Ki(1 + [S]/Km)，其中[S]等于所用7,8-二氢叶酸的浓度，7,8-二氢叶酸的Km等于0.15 μM。 GARFT 活性通过分光光度法监测 295 nm 处产物 5,8-二脱氮杂叶酸形成导致的吸光度增加来测定。反应溶剂含有 75 mM HEPES、20% 甘油和 50 mM α-硫代甘油，pH 7.5，25°C。使用的底物和酶的浓度为 10 μM α,β-甘氨酰胺核糖核苷酸、0-10 μM 10-甲酰基-5,8-二脱氮杂叶酸和 10 nM（1.9 毫单位/mL）GARFT。 Ki 值使用 Beckman DU640 分光光度计的 Enzyme Mechanism 程序计算，该程序使用非线性回归分析将数据拟合到竞争性抑制的 Michaelis-Menten 方程。细胞测定：生成剂量反应曲线以确定 50% 生长抑制 (IC50) 所需的浓度。培美曲塞二钠最初以 4 mg/mL 的浓度溶解在 DMSO 中，并用细胞培养基进一步稀释至所需浓度。将完全培养基中的 CCRF-CEM 白血病细胞添加到 24 孔簇板中，总体积为 2.0 mL。将不同浓度的培美曲塞二钠添加到重复的孔中，使得DMSO的最终体积为0.5%。将板在 37°C、含 5% CO2 的空气中孵育 72 小时。孵育结束时，在 ZBI Coulter 计数器上测定细胞数量。对于多项研究，在 300 μM AICA、5 μM 胸苷、100 μM 次黄嘌呤或 5 μM 乙二苷加 100 μM 次黄嘌呤组合存在下测定每种化合物的 IC50。对于贴壁肿瘤细胞，使用对原始 MTT 比色测定法的修改来测量细胞毒性。将人肿瘤细胞接种在 96 孔平底组织培养板中，每孔 100 μL 测定培养基中。检测培养基含有不含叶酸的 RPMI 1640，辅以 10% FCS 和 2 nM 亚叶酸或 2.3 μM 叶酸作为唯一的叶酸来源。 1A 留空。在 Dulbeccos PBS 中制备 1 mg/mL 的抗叶酸剂储备溶液，随后在 PBS 中进行一系列 2 倍稀释。将每个浓度的 10 μL 等分试样添加到一式三份的孔中。将板在 37°C、空气中含有 5% CO2 的潮湿气氛中孵育 72 小时。将 MTT 以 5 mg/mL 溶解在 PBS 中，向测定的每个孔中添加 10 μL MTF 库存溶液，并将板在 37 °C 下再孵育 2 小时。孵育后，向每个孔中添加 100 μL DMSO。甲臜彻底溶解后，在 Dynatech MR600 读数器上读取板，使用 570 nm 的测试波长和 630 nm 的参考波长。 IC50 确定为与未处理对照相比抑制细胞生长 50% 所需的药物浓度。

在人 H460 非小细胞肺癌异种移植物中，培美曲塞二钠产生持续时间依赖性肿瘤生长延迟 (TGD)。

TS 活性通过分光光度法测量，需要跟踪 7,8-二氢叶酸的产生所带来的 340 nm 处吸光度的增加。测定缓冲液的成分如下：25 mM MgCl₂、6.5 mM 甲醛、1 mM EDTA、75 mM 2-巯基乙醇、50 mM N-三[羟甲基·甲基-2-氨基乙磺酸]。 hIS、6R-MTHF 和脱氧尿苷酸单磷酸的浓度分别为 30 μM、100 μM 和 30 nM（1.7 毫单位/mL）。在 6R-MTHF 浓度下测试未抑制的反应和六种抑制剂浓度。 K_{i app} 值是通过应用非线性回归分析并在 ENZFITTER 程序的帮助下将数据拟合到 Morrison 方程而获得的。 K_{i app}= K_i(1 + [S]/K_m 是用于计算 K_i 的公式> 值，其中 [S] 相当于 30 μM，K_m 相当于 3 μM。使用分光光度法，通过在 340 nm 处追踪 7,8-二氢叶酸和 NADPH 的消失来测量 DHFR 活性. 在 0.5 mL 50 mM 磷酸钾缓冲液中，pH 7.5、150 mM KCl、10 nM 2-巯基乙醇和 14 nM (0.34 milliunitlmL) DHFR 存在于反应过程中，反应温度为 25°C。10，μM 是NADPH 的浓度，而 5、10 或 15 μM 是 7,8-二氢叶酸的浓度。在每个 7,8-二氢叶酸浓度下测量七个抑制剂浓度和一个不受抑制的反应。K_{i app}使用非线性回归分析和 ENZFITI'ER 微机程序将数据拟合到 Morrison 方程即可获得数值。K_{i app}= K_i(1 + [S]/ K_m)，其中 7,8-二氢叶酸的 K_m 等于 0.15 μM，[S] 是所用 7,8-二氢叶酸的浓度。 GARFT 活性通过分光光度法通过追踪 295 nm 处吸光度的升高来测量，该升高是由产物 5,8-二脱氮杂叶酸的形成引起的。在 25°C 和 pH 7.5 下，反应溶剂由 50% α-硫代甘油、20% 甘油和 75 mM HEPES 组成。使用以下浓度的底物和酶：10 μM α,β-甘氨酰胺核糖核苷酸、0-10 μM 10-甲酰基-5,8-二脱氮杂叶酸和 10 nM（1.9 毫单位/mL）GARFT。 Ki 值使用 Beckman DU640 分光光度计的酶机制程序确定，该程序使用非线性回归分析将数据拟合到用于竞争性抑制的 Michaelis-Menten 方程。

为了确定 50% 生长抑制所需的浓度，绘制了剂量反应曲线 (IC50)。首先，将4 mg/mL的培美曲塞二钠溶解在DMSO中，然后用细胞培养基进一步稀释浓度。 24 孔簇板用完全培养基中的 CCRF-CEM 白血病细胞填充至总容量 2.0 mL。重复孔中充满不同浓度的培美曲塞二钠，直到 DMSO 的总体积为 0.5%。将板在 37°C、含有 5% CO₂ 的空气气氛中孵育 72 小时。孵育结束时测量 ZBI Coulter 计数器上的细胞计数。 300 μM 的 AICA、5 μM 的胸苷、100 μM 的次黄嘌呤或 5 μM 乙二苷和 100 μM 次黄嘌呤的组合是在多项研究中发现每种化合物的 IC50 的条件。 MTT 比色测定经过修改，可量化贴壁肿瘤细胞的细胞毒性。使用平底 96 孔组织培养板以 100 μL 检测培养基/孔的密度接种人类肿瘤细胞。在测定培养基中，叶酸的唯一来源是 2.3 μM 或 2 nM 叶酸，以及 10% FCS 和不含叶酸的 RPMI 1640。1A 孔中留空。在 Dulbecco PBS 中制备抗叶酸储备液（每毫升一毫克），然后在 PBS 中连续稀释 2 倍。一式三份的孔中填充有每种浓度的 10 μL 等分试样。将板在空气中含有 5% CO₂ 的湿润气氛中于 37 °C 孵育 72 小时。 MTT 以 5 mg/mL 的浓度溶解在 PBS 中后，将 10 µL MTF 库存溶液添加到测定的每个孔中。然后将板在 37°C 下再孵育两小时。孵育后每孔加入 100 μL DMSO。在甲臜完全溶解后，使用 570 nm 的测试波长和 630 nm 的参考波长在 Dynatech MR600 读数器上读取板。与未经处理的对照相比，阻碍细胞生长 50% 所需的药物量称为 IC50。

[1]. Cancer Res . 1997 Mar 15;57(6):1116-23.

[2]. Int J Cancer . 2013 Jan 15;132(2):459-71.

[3]. Clin Cancer Res . 2000 Mar;6(3):1016-23.

C20H19N5NA2O6

471.37

471.11

150399-23-8

Powder

C1=CC(=CC=C1CCC2=CNC3=C2C(=O)NC(=N3)N)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)[O-])C(=O)[O-].[Na+].[Na+]

NYDXNILOWQXUOF-GXKRWWSZSA-L

InChI=1S/C20H21N5O6.2Na/c21-20-24-16-15(18(29)25-20)12(9-22-16)6-3-10-1-4-11(5-2-10)17(28)23-13(19(30)31)7-8-14(26)27;;/h1-2,4-5,9,13H,3,6-8H2,(H,23,28)(H,26,27)(H,30,31)(H4,21,22,24,25,29);;/q;2*+1/p-2/t13-;;/m0../s1

disodium;(2S)-2-[[4-[2-(2-amino-4-oxo-3,7-dihydropyrrolo[2,3-d]pyrimidin-5-yl)ethyl]benzoyl]amino]pentanedioate

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

Solubility in Formulation 1: 50 mg/mL (106.07 mM) in PBS (add these co-solvents sequentially from left to right, and one by one), clear solution; with sonication.

---

Solubility in Formulation 2: 100 mg/mL (212.15 mM) in Saline (add these co-solvents sequentially from left to right, and one by one), clear solution; with ultrasonication.
Preparation of saline: Dissolve 0.9 g of sodium chloride in 100 mL ddH₂ O to obtain a clear solution.

---

View More

Solubility in Formulation 3: Saline: 30 mg/mL

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。