Pemetrexed disodium   中文名称: 培美曲塞二钠

TS ( Ki = 1.3 nM ); DHFR ( Ki = 7.2 nM ); GARFT ( Ki = 1.3 nM )

体外活性：Pemetrexed disodium 对 CCRF-CEM 白血病、GC3/C1 结肠癌和 HCT-8 回盲部癌细胞具有抗增殖活性，IC50 分别为 25 nM、34 nM 和 220 nM。最近的一项研究表明，顺铂加培美曲塞联合 SOCS-1 基因递送在感染腺病毒表达 SOCS-1 载体的 MPM 细胞中显示出通过抑制细胞增殖、侵袭和诱导细胞凋亡的抗肿瘤作用。激酶测定：使用分光光度法测定 TS 活性，该方法涉及监测因产物 7,8-二氢叶酸形成而导致的 340 nm 处吸光度的增加。测定缓冲液含有 50 mM N-三[羟甲基甲基-2-氨基乙磺酸、25 mM MgCl2、6.5 mM 甲醛、1 mM EDTA 和 75 mM 2-巯基乙醇，pH 7.4。脱氧尿苷酸单磷酸、6R-MTHF 和 hIS 的浓度分别为 100 μM、30μM 和 30 nM（1.7 毫单位/mL）。在 6R-MTHF 浓度下，测定了未抑制的反应和六种浓度的抑制剂。 Ki app 值是通过借助 ENZFITTER 程序使用非线性回归分析将数据拟合到 Morrison 方程来确定的。 Ki 值的计算公式为：Ki app= Ki(1 + [S]/Km)，其中 [S] 等于 30 μM，Km 等于 3 μM。通过在 340 nm 处监测底物 NADPH 和 7,8-二氢叶酸的消失，以分光光度法测定 DHFR 活性。该反应在 25°C 下在 0.5 mL 50 mM 磷酸钾缓冲液中进行，其中含有 150 mM KCl 和 10 nM 2-巯基乙醇，pH 7.5，以及 14 nM（0.34 毫单位毫升）DHFR。 NADPH 浓度为 10 μM，7,8-二氢叶酸浓度为 5、10 或 15 μM。在每个 7,8-二氢叶酸浓度下，检测未抑制的反应和七个浓度的抑制剂。采用ENZFITIER微机程序，通过非线性回归分析将数据拟合到Morrison方程中，得到Ki app 值。 Ki app= Ki(1 + [S]/Km)，其中[S]等于所用7,8-二氢叶酸的浓度，7,8-二氢叶酸的Km等于0.15 μM。 GARFT 活性通过分光光度法监测 295 nm 处产物 5,8-二脱氮杂叶酸形成导致的吸光度增加来测定。反应溶剂含有 75 mM HEPES、20% 甘油和 50 mM α-硫代甘油，pH 7.5，25°C。使用的底物和酶的浓度为 10 μM α,β-甘氨酰胺核糖核苷酸、0-10 μM 10-甲酰基-5,8-二脱氮杂叶酸和 10 nM（1.9 毫单位/mL）GARFT。 Ki 值使用 Beckman DU640 分光光度计的 Enzyme Mechanism 程序计算，该程序使用非线性回归分析将数据拟合到竞争性抑制的 Michaelis-Menten 方程。细胞测定：生成剂量反应曲线以确定 50% 生长抑制 (IC50) 所需的浓度。培美曲塞二钠最初以 4 mg/mL 的浓度溶解在 DMSO 中，并用细胞培养基进一步稀释至所需浓度。将完全培养基中的 CCRF-CEM 白血病细胞添加到 24 孔簇板中，总体积为 2.0 mL。将不同浓度的培美曲塞二钠添加到重复的孔中，使得DMSO的最终体积为0.5%。将板在 37°C、含 5% CO2 的空气中孵育 72 小时。孵育结束时，在 ZBI Coulter 计数器上测定细胞数量。对于多项研究，在 300 μM AICA、5 μM 胸苷、100 μM 次黄嘌呤或 5 μM 乙二苷加 100 μM 次黄嘌呤组合存在下测定每种化合物的 IC50。对于贴壁肿瘤细胞，使用对原始 MTT 比色测定法的修改来测量细胞毒性。将人肿瘤细胞接种在 96 孔平底组织培养板中，每孔 100 μL 测定培养基中。检测培养基含有不含叶酸的 RPMI 1640，辅以 10% FCS 和 2 nM 亚叶酸或 2.3 μM 叶酸作为唯一的叶酸来源。 1A 留空。在 Dulbeccos PBS 中制备 1 mg/mL 的抗叶酸剂储备溶液，随后在 PBS 中进行一系列 2 倍稀释。将每个浓度的 10 μL 等分试样添加到一式三份的孔中。将板在 37°C、空气中含有 5% CO2 的潮湿气氛中孵育 72 小时。将 MTT 以 5 mg/mL 溶解在 PBS 中，向测定的每个孔中添加 10 μL MTF 库存溶液，并将板在 37 °C 下再孵育 2 小时。孵育后，向每个孔中添加 100 μL DMSO。甲臜彻底溶解后，在 Dynatech MR600 读数器上读取板，使用 570 nm 的测试波长和 630 nm 的参考波长。 IC50 确定为与未处理对照相比抑制细胞生长 50% 所需的药物浓度。

在人 H460 非小细胞肺癌异种移植物中，培美曲塞二钠产生持续时间依赖性肿瘤生长延迟 (TGD)。

TS 活性通过分光光度法测量，需要跟踪 7,8-二氢叶酸的产生所带来的 340 nm 处吸光度的增加。测定缓冲液的成分如下：25 mM MgCl₂、6.5 mM 甲醛、1 mM EDTA、75 mM 2-巯基乙醇、50 mM N-三[羟甲基·甲基-2-氨基乙磺酸]。 hIS、6R-MTHF 和脱氧尿苷酸单磷酸的浓度分别为 30 μM、100 μM 和 30 nM（1.7 毫单位/mL）。在 6R-MTHF 浓度下测试未抑制的反应和六种抑制剂浓度。 K_{i app} 值是通过应用非线性回归分析并在 ENZFITTER 程序的帮助下将数据拟合到 Morrison 方程而获得的。 K_{i app}= K_i(1 + [S]/K_m 是用于计算 K_i 的公式> 值，其中 [S] 相当于 30 μM，K_m 相当于 3 μM。使用分光光度法，通过在 340 nm 处追踪 7,8-二氢叶酸和 NADPH 的消失来测量 DHFR 活性. 在 0.5 mL 50 mM 磷酸钾缓冲液中，pH 7.5、150 mM KCl、10 nM 2-巯基乙醇和 14 nM (0.34 milliunitlmL) DHFR 存在于反应过程中，反应温度为 25°C。10，μM 是NADPH 的浓度，而 5、10 或 15 μM 是 7,8-二氢叶酸的浓度。在每个 7,8-二氢叶酸浓度下测量七个抑制剂浓度和一个不受抑制的反应。K_{i app}使用非线性回归分析和 ENZFITI'ER 微机程序将数据拟合到 Morrison 方程即可获得数值。K_{i app}= K_i(1 + [S]/ K_m)，其中 7,8-二氢叶酸的 K_m 等于 0.15 μM，[S] 是所用 7,8-二氢叶酸的浓度。 GARFT 活性通过分光光度法通过追踪 295 nm 处吸光度的升高来测量，该升高是由产物 5,8-二脱氮杂叶酸的形成引起的。在 25°C 和 pH 7.5 下，反应溶剂由 50% α-硫代甘油、20% 甘油和 75 mM HEPES 组成。使用以下浓度的底物和酶：10 μM α,β-甘氨酰胺核糖核苷酸、0-10 μM 10-甲酰基-5,8-二脱氮杂叶酸和 10 nM（1.9 毫单位/mL）GARFT。 Ki 值使用 Beckman DU640 分光光度计的酶机制程序确定，该程序使用非线性回归分析将数据拟合到用于竞争性抑制的 Michaelis-Menten 方程。

为了确定 50% 生长抑制所需的浓度，绘制了剂量反应曲线 (IC50)。首先，将4 mg/mL的培美曲塞二钠溶解在DMSO中，然后用细胞培养基进一步稀释浓度。 24 孔簇板用完全培养基中的 CCRF-CEM 白血病细胞填充至总容量 2.0 mL。重复孔中充满不同浓度的培美曲塞二钠，直到 DMSO 的总体积为 0.5%。将板在 37°C、含有 5% CO₂ 的空气气氛中孵育 72 小时。孵育结束时测量 ZBI Coulter 计数器上的细胞计数。 300 μM 的 AICA、5 μM 的胸苷、100 μM 的次黄嘌呤或 5 μM 乙二苷和 100 μM 次黄嘌呤的组合是在多项研究中发现每种化合物的 IC50 的条件。 MTT 比色测定经过修改，可量化贴壁肿瘤细胞的细胞毒性。使用平底 96 孔组织培养板以 100 μL 检测培养基/孔的密度接种人类肿瘤细胞。在测定培养基中，叶酸的唯一来源是 2.3 μM 或 2 nM 叶酸，以及 10% FCS 和不含叶酸的 RPMI 1640。1A 孔中留空。在 Dulbecco PBS 中制备抗叶酸储备液（每毫升一毫克），然后在 PBS 中连续稀释 2 倍。一式三份的孔中填充有每种浓度的 10 μL 等分试样。将板在空气中含有 5% CO₂ 的湿润气氛中于 37 °C 孵育 72 小时。 MTT 以 5 mg/mL 的浓度溶解在 PBS 中后，将 10 µL MTF 库存溶液添加到测定的每个孔中。然后将板在 37°C 下再孵育两小时。孵育后每孔加入 100 μL DMSO。在甲臜完全溶解后，使用 570 nm 的测试波长和 630 nm 的参考波长在 Dynatech MR600 读数器上读取板。与未经处理的对照相比，阻碍细胞生长 50% 所需的药物量称为 IC50。

Effects During Pregnancy and Lactation
◉ Summary of Use during Lactation
Most sources consider breastfeeding to be contraindicated during maternal high-dose antineoplastic drug therapy. The manufacturer recommends that mothers should not to breastfeed during treatment with pemetrexed and for one week after the last dose. Chemotherapy may adversely affect the normal microbiome and chemical makeup of breastmilk.[1] Women who receive chemotherapy during pregnancy are more likely to have difficulty nursing their infant.[2]
◉ Effects in Breastfed Infants
Relevant published information was not found as of the revision date.
◉ Effects on Lactation and Breastmilk
Relevant published information was not found as of the revision date.
28170295

[1]. Cancer Res . 1997 Mar 15;57(6):1116-23.

[2]. Int J Cancer . 2013 Jan 15;132(2):459-71.

[3]. Clin Cancer Res . 2000 Mar;6(3):1016-23.

Pemetrexed disodium is an organic sodium salt that is the disodium salt of N-{4-[2-(2-amino-4-oxo-4,7-dihydro-1H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-5-yl)ethyl]benzoyl}-L-glutamic acid. Inhibits thymidylate synthase (TS), 421 dihydrofolate reductase (DHFR), and glycinamide ribonucleotide formyltransferase (GARFT). It has a role as an antineoplastic agent, an antimetabolite, an EC 1.5.1.3 (dihydrofolate reductase) inhibitor, an EC 2.1.2.2 (phosphoribosylglycinamide formyltransferase) inhibitor and an EC 2.1.1.45 (thymidylate synthase) inhibitor. It contains a pemetrexed(2-).
Pemetrexed Disodium is the disodium salt of a synthetic pyrimidine-based antifolate. Pemetrexed binds to and inhibits the enzyme thymidylate synthase (TS) which catalyses the methylation of 2'-deoxyuridine-5'-monophosphate (dUMP) to 2'-deoxythymidine-5'-monophosphate (dTMP), an essential precursor in DNA synthesis.
A guanine-derived ANTINEOPLASTIC AGENT that functions as a NUCLEIC ACID SYNTHESIS INHIBITOR through its binding to, and inhibition of, THYMIDYLATE SYNTHASE.
See also: Pemetrexed (broader).

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Drug Indication
Malignant pleural mesotheliomaPemetrexed Krka in combination with cisplatin is indicated for the treatment of chemotherapy naïve patients with unresectable malignant pleural mesothelioma. Non-small cell lung cancer Pemetrexed Krka in combination with cisplatin is indicated for the first-line treatment of patients with locally advanced or metastatic non-small cell lung cancer other than predominantly squamous cell histology. Pemetrexed Krka is indicated as monotherapy for the maintenance treatment of locally advanced or metastatic non-small cell lung cancer other than predominantly squamous cell histology in patients whose disease has not progressed immediately following platinum-based chemotherapy. Pemetrexed Krka is indicated as monotherapy for the second-line treatment of patients with locally advanced or metastatic non-small cell lung cancer other than predominantly squamous cell histology.
Malignant pleural mesotheliomaAlimta in combination with cisplatin is indicated for the treatment of chemotherapy-naïve patients with unresectable malignant pleural mesothelioma. Non-small-cell lung cancer Alimta in combination with cisplatin is indicated for the first-line treatment of patients with locally advanced or metastatic non-small-cell lung cancer other than predominantly squamous cell histology. Alimta is indicated as monotherapy for the maintenance treatment of locally advanced or metastatic non-small-cell lung cancer other than predominantly squamous cell histology in patients whose disease has not progressed immediately following platinum-based chemotherapy. Alimta is indicated as monotherapy for the second line treatment of patients with locally advanced or metastatic non-small-cell lung cancer other than predominantly squamous cell histology.
Carcinoma of the head and neck (Covered by class waiver: oropharyngeal epithelial carcinoma, excluding nasopharyngeal carcinoma), Malignant pleural mesothelioma

C20H19N5NA2O6

471.37

471.113

150399-23-8

135413520

Solid powder

160°C 20mm

36-38°C

160°C/20mm

196.92

4

7

7

33

737

1

C1=CC(=CC=C1CCC2=CNC3=C2C(=O)NC(=N3)N)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)[O-])C(=O)[O-].[Na+].[Na+]

NYDXNILOWQXUOF-GXKRWWSZSA-L

InChI=1S/C20H21N5O6.2Na/c21-20-24-16-15(18(29)25-20)12(9-22-16)6-3-10-1-4-11(5-2-10)17(28)23-13(19(30)31)7-8-14(26)27;;/h1-2,4-5,9,13H,3,6-8H2,(H,23,28)(H,26,27)(H,30,31)(H4,21,22,24,25,29);;/q;2*+1/p-2/t13-;;/m0../s1

disodium;(2S)-2-[[4-[2-(2-amino-4-oxo-3,7-dihydropyrrolo[2,3-d]pyrimidin-5-yl)ethyl]benzoyl]amino]pentanedioate

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: 50 mg/mL (106.07 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶。

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配方 2 中的溶解度: 100 mg/mL (212.15 mM) in Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶.
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: Saline: 30 mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。