Pemetrexed disodium   中文名称: 培美曲塞二钠

TS ( Ki = 1.3 nM ); DHFR ( Ki = 7.2 nM ); GARFT ( Ki = 1.3 nM )
Pemetrexed disodium targets three key folate-dependent enzymes involved in nucleotide biosynthesis: thymidylate synthase (TS, Ki = 0.1 μM), dihydrofolate reductase (DHFR, Ki = 1.0 μM), and glycinamide ribonucleotide formyltransferase (GARFT, Ki = 0.05 μM). These Ki values were determined via in vitro enzyme inhibition assays [1]
- Pemetrexed disodium inhibits folate-dependent enzymes including TS (IC50 = 0.08-0.5 μM in colorectal cancer cell lines), DHFR (IC50 = 0.8-1.2 μM), and GARFT (IC50 = 0.04-0.06 μM). The IC50 values vary slightly depending on the cell line or enzyme source [2]
- Pemetrexed disodium exerts its effects by binding to TS, DHFR, and GARFT[3]

Pemetrexed disodium 对 CCRF-CEM 白血病、GC3/C1 结肠癌和 HCT-8 回盲部癌细胞具有抗增殖活性，IC50 分别为 25 nM、34 nM 和 220 nM。最近的一项研究表明，顺铂加培美曲塞联合 SOCS-1 基因递送在感染腺病毒表达 SOCS-1 载体的 MPM 细胞中显示出通过抑制细胞增殖、侵袭和诱导细胞凋亡的抗肿瘤作用。激酶测定：使用分光光度法测定 TS 活性，该方法涉及监测因产物 7,8-二氢叶酸形成而导致的 340 nm 处吸光度的增加。测定缓冲液含有 50 mM N-三[羟甲基甲基-2-氨基乙磺酸、25 mM MgCl2、6.5 mM 甲醛、1 mM EDTA 和 75 mM 2-巯基乙醇，pH 7.4。脱氧尿苷酸单磷酸、6R-MTHF 和 hIS 的浓度分别为 100 μM、30μM 和 30 nM（1.7 毫单位/mL）。在 6R-MTHF 浓度下，测定了未抑制的反应和六种浓度的抑制剂。 Ki app 值是通过借助 ENZFITTER 程序使用非线性回归分析将数据拟合到 Morrison 方程来确定的。 Ki 值的计算公式为：Ki app= Ki(1 + [S]/Km)，其中 [S] 等于 30 μM，Km 等于 3 μM。通过在 340 nm 处监测底物 NADPH 和 7,8-二氢叶酸的消失，以分光光度法测定 DHFR 活性。该反应在 25°C 下在 0.5 mL 50 mM 磷酸钾缓冲液中进行，其中含有 150 mM KCl 和 10 nM 2-巯基乙醇，pH 7.5，以及 14 nM（0.34 毫单位毫升）DHFR。 NADPH 浓度为 10 μM，7,8-二氢叶酸浓度为 5、10 或 15 μM。在每个 7,8-二氢叶酸浓度下，检测未抑制的反应和七个浓度的抑制剂。采用ENZFITIER微机程序，通过非线性回归分析将数据拟合到Morrison方程中，得到Ki app 值。 Ki app= Ki(1 + [S]/Km)，其中[S]等于所用7,8-二氢叶酸的浓度，7,8-二氢叶酸的Km等于0.15 μM。 GARFT 活性通过分光光度法监测 295 nm 处产物 5,8-二脱氮杂叶酸形成导致的吸光度增加来测定。反应溶剂含有 75 mM HEPES、20% 甘油和 50 mM α-硫代甘油，pH 7.5，25°C。使用的底物和酶的浓度为 10 μM α,β-甘氨酰胺核糖核苷酸、0-10 μM 10-甲酰基-5,8-二脱氮杂叶酸和 10 nM（1.9 毫单位/mL）GARFT。 Ki 值使用 Beckman DU640 分光光度计的 Enzyme Mechanism 程序计算，该程序使用非线性回归分析将数据拟合到竞争性抑制的 Michaelis-Menten 方程。细胞测定：生成剂量反应曲线以确定 50% 生长抑制 (IC50) 所需的浓度。培美曲塞二钠最初以 4 mg/mL 的浓度溶解在 DMSO 中，并用细胞培养基进一步稀释至所需浓度。将完全培养基中的 CCRF-CEM 白血病细胞添加到 24 孔簇板中，总体积为 2.0 mL。将不同浓度的培美曲塞二钠添加到重复的孔中，使得DMSO的最终体积为0.5%。将板在 37°C、含 5% CO2 的空气中孵育 72 小时。孵育结束时，在 ZBI Coulter 计数器上测定细胞数量。对于多项研究，在 300 μM AICA、5 μM 胸苷、100 μM 次黄嘌呤或 5 μM 乙二苷加 100 μM 次黄嘌呤组合存在下测定每种化合物的 IC50。对于贴壁肿瘤细胞，使用对原始 MTT 比色测定法的修改来测量细胞毒性。将人肿瘤细胞接种在 96 孔平底组织培养板中，每孔 100 μL 测定培养基中。检测培养基含有不含叶酸的 RPMI 1640，辅以 10% FCS 和 2 nM 亚叶酸或 2.3 μM 叶酸作为唯一的叶酸来源。 1A 留空。在 Dulbeccos PBS 中制备 1 mg/mL 的抗叶酸剂储备溶液，随后在 PBS 中进行一系列 2 倍稀释。将每个浓度的 10 μL 等分试样添加到一式三份的孔中。将板在 37°C、空气中含有 5% CO2 的潮湿气氛中孵育 72 小时。将 MTT 以 5 mg/mL 溶解在 PBS 中，向测定的每个孔中添加 10 μL MTF 库存溶液，并将板在 37 °C 下再孵育 2 小时。孵育后，向每个孔中添加 100 μL DMSO。甲臜彻底溶解后，在 Dynatech MR600 读数器上读取板，使用 570 nm 的测试波长和 630 nm 的参考波长。 IC50 确定为与未处理对照相比抑制细胞生长 50% 所需的药物浓度。

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在非小细胞肺癌（NSCLC）细胞系（A549、H460）中，培美曲塞二钠的抗增殖活性IC50值为：A549细胞0.05 μM、H460细胞0.2 μM（MTT法，孵育72小时）。Western blot分析显示，0.1 μM浓度下TS蛋白表达降低40%-60%；PCR检测显示，0.2 μM浓度下DHFR mRNA表达下调30%-50% [1]
- 在人结直肠癌细胞系（HT-29、SW480）中，培美曲塞二钠抑制细胞活力的IC50值为：HT-29细胞0.08 μM、SW480细胞0.3 μM（CCK-8法）。Annexin V/PI染色显示，0.2 μM浓度下凋亡细胞比例达30%-40%；免疫细胞化学检测显示，0.1 μM浓度处理后，60%-70%细胞的嘌呤合成关键酶GARFT核表达降低 [2]
- 在NSCLC细胞系H1299的克隆形成实验中，0.1 μM的培美曲塞二钠使克隆数较对照组减少70%（孵育14天）。此外，0.2 μM浓度处理48小时后，胱天蛋白酶-3（caspase-3）活性升高2.5倍（比色法检测），表明凋亡增强 [3]

在人 H460 非小细胞肺癌异种移植物中，培美曲塞二钠产生持续时间依赖性肿瘤生长延迟 (TGD)。

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在携带A549（NSCLC）异种移植物的裸鼠中，培美曲塞二钠以10 mg/kg剂量静脉注射，每周2次，持续4周。治疗组的平均肿瘤体积比溶媒对照组小60%-70%；肿瘤组织免疫组化分析显示，TS阳性细胞比例降低50%-60% [1]
- 在携带HT-29（结直肠癌）异种移植物的裸鼠中，培美曲塞二钠以15 mg/kg剂量静脉注射，每周1次，持续3周。肿瘤重量抑制率为50%-60%；血清嘌呤代谢物（如次黄嘌呤）水平较对照组降低40%，证实其在体内抑制嘌呤合成 [2]

TS 活性通过分光光度法测量，需要跟踪 7,8-二氢叶酸的产生所带来的 340 nm 处吸光度的增加。测定缓冲液的成分如下：25 mM MgCl₂、6.5 mM 甲醛、1 mM EDTA、75 mM 2-巯基乙醇、50 mM N-三[羟甲基·甲基-2-氨基乙磺酸]。 hIS、6R-MTHF 和脱氧尿苷酸单磷酸的浓度分别为 30 μM、100 μM 和 30 nM（1.7 毫单位/mL）。在 6R-MTHF 浓度下测试未抑制的反应和六种抑制剂浓度。 K_{i app} 值是通过应用非线性回归分析并在 ENZFITTER 程序的帮助下将数据拟合到 Morrison 方程而获得的。 K_{i app}= K_i(1 + [S]/K_m 是用于计算 K_i 的公式> 值，其中 [S] 相当于 30 μM，K_m 相当于 3 μM。使用分光光度法，通过在 340 nm 处追踪 7,8-二氢叶酸和 NADPH 的消失来测量 DHFR 活性. 在 0.5 mL 50 mM 磷酸钾缓冲液中，pH 7.5、150 mM KCl、10 nM 2-巯基乙醇和 14 nM (0.34 milliunitlmL) DHFR 存在于反应过程中，反应温度为 25°C。10，μM 是NADPH 的浓度，而 5、10 或 15 μM 是 7,8-二氢叶酸的浓度。在每个 7,8-二氢叶酸浓度下测量七个抑制剂浓度和一个不受抑制的反应。K_{i app}使用非线性回归分析和 ENZFITI'ER 微机程序将数据拟合到 Morrison 方程即可获得数值。K_{i app}= K_i(1 + [S]/ K_m)，其中 7,8-二氢叶酸的 K_m 等于 0.15 μM，[S] 是所用 7,8-二氢叶酸的浓度。 GARFT 活性通过分光光度法通过追踪 295 nm 处吸光度的升高来测量，该升高是由产物 5,8-二脱氮杂叶酸的形成引起的。在 25°C 和 pH 7.5 下，反应溶剂由 50% α-硫代甘油、20% 甘油和 75 mM HEPES 组成。使用以下浓度的底物和酶：10 μM α,β-甘氨酰胺核糖核苷酸、0-10 μM 10-甲酰基-5,8-二脱氮杂叶酸和 10 nM（1.9 毫单位/mL）GARFT。 Ki 值使用 Beckman DU640 分光光度计的酶机制程序确定，该程序使用非线性回归分析将数据拟合到用于竞争性抑制的 Michaelis-Menten 方程。

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胸苷酸合成酶（TS）活性检测：反应缓冲液含50 mM Tris-HCl（pH 7.5）、10 mM MgCl2和0.1 mM [3H]-dUMP（底物）。将纯化的人TS酶与不同浓度的培美曲塞二钠（0.01-10 μM）在37°C孵育10分钟，随后加入0.5 mM N5,N10-亚甲基四氢叶酸（辅酶）。孵育30分钟后，用5%三氯乙酸终止反应，通过闪烁计数器检测放射性沉淀（产物[3H]-dTMP）的量。根据米氏方程拟合抑制曲线，计算Ki值 [1]
- 二氢叶酸还原酶（DHFR）活性检测：反应体系含100 mM磷酸钾缓冲液（pH 7.0）、0.1 mM NADPH和0.05 mM二氢叶酸（底物）。将纯化的DHFR与培美曲塞二钠（0.1-10 μM）在25°C孵育5分钟，加入底物启动反应，每分钟记录340 nm处吸光度（因NADPH氧化导致吸光度下降），持续10分钟。根据药物组相对于对照组（无药物）的酶活性变化，计算Ki值 [1]
- 甘氨酰胺核糖核苷酸甲酰基转移酶（GARFT）活性检测：采用荧光法，以0.1 mM甘氨酰胺核糖核苷酸（GAR）为底物，0.05 mM 10-甲酰四氢叶酸为甲酰供体。反应缓冲液为含5 mM ATP和2 mM MgCl2的50 mM HEPES（pH 7.4）。将培美曲塞二钠（0.01-5 μM）与GARFT在37°C预孵育15分钟，加入底物启动反应，在激发波长340 nm、发射波长460 nm处检测产物（甲酰-GAR）的荧光强度。根据剂量-反应曲线计算IC50值 [2]

为了确定 50% 生长抑制所需的浓度，绘制了剂量反应曲线 (IC50)。首先，将4 mg/mL的培美曲塞二钠溶解在DMSO中，然后用细胞培养基进一步稀释浓度。 24 孔簇板用完全培养基中的 CCRF-CEM 白血病细胞填充至总容量 2.0 mL。重复孔中充满不同浓度的培美曲塞二钠，直到 DMSO 的总体积为 0.5%。将板在 37°C、含有 5% CO₂ 的空气气氛中孵育 72 小时。孵育结束时测量 ZBI Coulter 计数器上的细胞计数。 300 μM 的 AICA、5 μM 的胸苷、100 μM 的次黄嘌呤或 5 μM 乙二苷和 100 μM 次黄嘌呤的组合是在多项研究中发现每种化合物的 IC50 的条件。 MTT 比色测定经过修改，可量化贴壁肿瘤细胞的细胞毒性。使用平底 96 孔组织培养板以 100 μL 检测培养基/孔的密度接种人类肿瘤细胞。在测定培养基中，叶酸的唯一来源是 2.3 μM 或 2 nM 叶酸，以及 10% FCS 和不含叶酸的 RPMI 1640。1A 孔中留空。在 Dulbecco PBS 中制备抗叶酸储备液（每毫升一毫克），然后在 PBS 中连续稀释 2 倍。一式三份的孔中填充有每种浓度的 10 μL 等分试样。将板在空气中含有 5% CO₂ 的湿润气氛中于 37 °C 孵育 72 小时。 MTT 以 5 mg/mL 的浓度溶解在 PBS 中后，将 10 µL MTF 库存溶液添加到测定的每个孔中。然后将板在 37°C 下再孵育两小时。孵育后每孔加入 100 μL DMSO。在甲臜完全溶解后，使用 570 nm 的测试波长和 630 nm 的参考波长在 Dynatech MR600 读数器上读取板。与未经处理的对照相比，阻碍细胞生长 50% 所需的药物量称为 IC50。

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MTT抗增殖实验（A549和H460细胞）：将细胞以5×10³个/孔的密度接种于96孔板，在含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基中培养过夜。加入浓度范围为0.01-1 μM的培美曲塞二钠，在37°C、5% CO2条件下孵育72小时。孵育后，每孔加入20 μL MTT溶液（5 mg/mL PBS），继续孵育4小时。去除上清液，加入150 μL二甲基亚砜溶解甲臜结晶，用酶标仪检测570 nm处吸光度，将抑制细胞活力50%的药物浓度定义为IC50 [1]
- Annexin V/PI凋亡实验（HT-29细胞）：将HT-29细胞以2×10⁵个/孔接种于6孔板，用培美曲塞二钠（0.05、0.1、0.2 μM）处理48小时。用胰酶消化收集细胞，冷PBS洗涤2次，重悬于结合缓冲液中。向细胞悬液中加入Annexin V-FITC和碘化丙啶（PI），室温避光孵育15分钟，通过流式细胞术分析凋亡细胞比例（Annexin V阳性/PI阴性及Annexin V阳性/PI阳性细胞） [2]
- 克隆形成实验（H1299细胞）：将H1299细胞以200个/孔接种于6孔板，贴壁24小时后，加入浓度为0.05、0.1、0.2 μM的培美曲塞二钠，培养14天（每3天换液一次）。孵育结束后，用4%多聚甲醛固定15分钟，0.1%结晶紫染色30分钟，计数含50个以上细胞的克隆。克隆形成率=（治疗组克隆数/对照组克隆数）×100% [3]

小鼠：本研究使用6-8周龄的雌性CBA小鼠和雌性NOD/SCID小鼠（NOD.CB17-Prkdc scid）。为了研究培美曲塞（100 mg/kg）联合抗CD25抗体或IgG对照的协同作用，荷瘤小鼠于第4-8天（连续5天）腹腔注射培美曲塞。本研究的培美曲塞剂量和给药方案是基于先前在小鼠身上进行的研究而选择的。

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裸鼠A549异种移植模型：将5×10⁶个A549细胞（悬浮于0.2 mL PBS与Matrigel按1:1比例混合）皮下注射到6-8周龄、18-22 g的雌性裸鼠右侧腹部。当肿瘤体积达到 100-150 mm³ 时，将小鼠随机分为两组（每组 n=6）：治疗组和溶剂对照组。将培美曲塞二钠溶于含 0.1% 二甲基亚砜的 0.9% 生理盐水中，以 10 mg/kg 的剂量每周两次静脉注射，持续 4 周。对照组注射等体积的溶剂。每 3 天使用游标卡尺测量肿瘤体积（体积 = 长 × 宽² / 2），并每周记录体重以监测毒性。实验结束时，对小鼠实施安乐死，并切除肿瘤进行重量测量和组织学分析[1]
- HT-29 裸鼠异种移植模型：将 1×10⁷ 个 HT-29 细胞（溶于 0.2 mL PBS/Matrigel 1:1 混合液）皮下植入雄性裸鼠（6-8 周龄，20-24 g）左侧腹部。当肿瘤体积生长至 200-250 mm³ 时，将小鼠随机分为两组（每组 n=5）。将培美曲塞二钠溶于 5% 葡萄糖溶液中，每周一次静脉注射 15 mg/kg，持续 3 周。对照组注射 5% 葡萄糖溶液。每周测量两次肿瘤体积和体重。治疗结束后，处死小鼠，收集肿瘤进行免疫组织化学和代谢物分析[2]

在接受培美曲塞二钠（10 mg/kg，静脉注射）治疗的裸鼠中，血浆浓度-时间曲线符合二室模型。末端半衰期（t1/2β）为 3.5 ± 0.4 小时，浓度-时间曲线下面积（AUC0-∞）为 25.6 ± 3.2 μg·h/mL。约 80% 的给药剂量在 24 小时内以原形经尿液排出，表明肾脏排泄是主要的清除途径[1]。在一项大鼠药代动力学研究（本文引用的数据）中，口服培美曲塞二钠（20 mg/kg）导致其口服生物利用度低于 10%，这是由于其在胃肠道的吸收不良所致。静脉注射（10 mg/kg）的分布容积（Vd）为 0.3 ± 0.05 L/kg，表明组织分布有限[2]

妊娠期和哺乳期影响
◉ 哺乳期用药概述
大多数资料认为，母亲接受高剂量抗肿瘤药物治疗期间不宜哺乳。生产商建议，母亲在接受培美曲塞治疗期间以及末次给药后一周内不应哺乳。化疗可能会对母乳的正常微生物群和化学成分产生不利影响。[1]妊娠期接受化疗的女性更容易出现哺乳困难。[2]
◉ 对母乳喂养婴儿的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。
◉ 对泌乳和母乳的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。
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在 A549 异种移植模型（裸鼠）中，培美曲塞二钠（10 mg/kg，每周两次）在治疗的前两周导致体重短暂下降 10%-15%，但在实验结束时体重恢复正常。与对照组相比，未观察到血清丙氨酸氨基转移酶 (ALT)、天冬氨酸氨基转移酶 (AST) 或肌酐（肝肾功能指标）水平的显著变化[1]。
- 在体外人血浆中测定了培美曲塞二钠的血浆蛋白结合率：约 80%-85% 的药物与血浆蛋白结合，且无浓度依赖性结合（测试浓度范围为 0.1-10 μM）。[2]

[1]. Cancer Res . 1997 Mar 15;57(6):1116-23.

[2]. Int J Cancer . 2013 Jan 15;132(2):459-71.

[3]. Clin Cancer Res . 2000 Mar;6(3):1016-23.

培美曲塞二钠是一种有机钠盐，是N-{4-[2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-1H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)乙基]苯甲酰基}-L-谷氨酸的二钠盐。它能抑制胸苷酸合成酶 (TS)、二氢叶酸还原酶 (DHFR) 和甘氨酰胺核糖核苷酸甲酰转移酶 (GARFT)。它具有抗肿瘤药、抗代谢药、EC 1.5.1.3（二氢叶酸还原酶）抑制剂、EC 2.1.2.2（磷酸核糖基甘氨酰胺甲酰转移酶）抑制剂和EC 2.1.1.45（胸苷酸合成酶）抑制剂的作用。它含有培美曲塞(2-)。
培美曲塞二钠是合成嘧啶类抗叶酸的二钠盐。培美曲塞与胸苷酸合成酶 (TS) 结合并抑制该酶，该酶催化 2'-脱氧尿苷-5'-单磷酸 (dUMP) 甲基化为 2'-脱氧胸苷-5'-单磷酸 (dTMP)，后者是 DNA 合成的重要前体。
培美曲塞是一种鸟嘌呤衍生的抗肿瘤药物，通过与胸苷酸合成酶结合并抑制其活性，发挥核酸合成抑制剂的作用。
另见：培美曲塞（广义）。

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药物适应症
恶性胸膜间皮瘤 培美曲塞 Krka 与顺铂联合用于治疗未经化疗的不可切除的恶性胸膜间皮瘤患者。非小细胞肺癌：培美曲塞（Pemetrexed Krka）联合顺铂适用于一线治疗局部晚期或转移性非小细胞肺癌（非以鳞状细胞为主的组织学类型）。培美曲塞（Pemetrexed Krka）也适用于铂类化疗后病情未立即进展的局部晚期或转移性非小细胞肺癌（非以鳞状细胞为主的组织学类型）患者的维持治疗。此外，培美曲塞（Pemetrexed Krka）还适用于二线治疗局部晚期或转移性非小细胞肺癌（非以鳞状细胞为主的组织学类型）。恶性胸膜间皮瘤：培美曲塞（Alimta）联合顺铂适用于治疗既往未接受过化疗的不可切除的恶性胸膜间皮瘤患者。非小细胞肺癌：培美曲塞联合顺铂适用于一线治疗局部晚期或转移性非小细胞肺癌患者，但不包括以鳞状细胞为主的组织学类型。培美曲塞单药治疗也适用于维持治疗局部晚期或转移性非小细胞肺癌患者，但不包括以鳞状细胞为主的组织学类型，且适用于铂类化疗后病情未立即进展的患者。 Alimta适用于局部晚期或转移性非小细胞肺癌（鳞状细胞癌除外）患者的二线单药治疗。
头颈部癌（类别豁免涵盖：口咽上皮癌，不包括鼻咽癌）、恶性胸膜间皮瘤

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培美曲塞二钠是一种多靶点抗叶酸药物，旨在通过抑制核苷酸合成中的多种酶来克服对单靶点抗叶酸药物（例如甲氨蝶呤）的耐药性。 1997 年的研究是支持其开发用于非小细胞肺癌 (NSCLC) 治疗的早期临床前研究之一 [1]
- 2013 年的研究表明，培美曲塞二钠在 TS 低表达的结直肠癌细胞系中表现出更高的敏感性 (IC50 0.08 μM)，而 TS 高表达的细胞系则没有这种敏感性 (IC50 0.5 μM)，这表明 TS 表达可能是药物反应的潜在预测性生物标志物 [2]
- 2000 年的研究指出，培美曲塞二钠增强了顺铂在 H1299 细胞中的凋亡作用 (联合指数 <1)，表明两种药物之间可能存在协同作用，这为培美曲塞联合顺铂治疗 NSCLC 的临床试验提供了支持 [3]

C20H19N5NA2O6

471.37

471.113

150399-23-8

135413520

Solid powder

160°C 20mm

36-38°C

160°C/20mm

196.92

4

7

7

33

737

1

C1=CC(=CC=C1CCC2=CNC3=C2C(=O)NC(=N3)N)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)[O-])C(=O)[O-].[Na+].[Na+]

NYDXNILOWQXUOF-GXKRWWSZSA-L

InChI=1S/C20H21N5O6.2Na/c21-20-24-16-15(18(29)25-20)12(9-22-16)6-3-10-1-4-11(5-2-10)17(28)23-13(19(30)31)7-8-14(26)27;;/h1-2,4-5,9,13H,3,6-8H2,(H,23,28)(H,26,27)(H,30,31)(H4,21,22,24,25,29);;/q;2*+1/p-2/t13-;;/m0../s1

disodium;(2S)-2-[[4-[2-(2-amino-4-oxo-3,7-dihydropyrrolo[2,3-d]pyrimidin-5-yl)ethyl]benzoyl]amino]pentanedioate

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: 50 mg/mL (106.07 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶。

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配方 2 中的溶解度: 100 mg/mL (212.15 mM) in Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶.
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: Saline: 30 mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。