| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
IC50: 12 nM (PDE9A)[1]
PF-04447943 is a potent and selective inhibitor of phosphodiesterase 9A (PDE9A). Its affinity (Ki) for recombinant human PDE9A2 is 2.8 ± 0.26 nM, for rhesus PDE9A2 is 4.5 ± 0.13 nM, and for rat PDE9A2 is 18.1 ± 1.9 nM. It is highly selective over other PDE families (PDE1-8, 10-11) with Ki values >5,000 nM for most, demonstrating >1000-fold selectivity for PDE9. [2] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
在使用重组人、恒河猴和大鼠 PDE9A2 的无细胞实验中，Edelinontrine 的 Ki 值为 2.8±0.26、4.5±0.13 和 18.1±1.9 nM（相应地，n=4、11 和 9）。与其他 PDE 酶相比，Edelinontrine 表现出高度的选择性（PDE1，Ki=8600±2121 nM，n = 5；PDE2A3，Ki>99,000 nM；PDE3A，Ki>50,000 nM；PDE4A，Ki>29,000 nM；PDE5A， Ki=14,980±5025 nM，n = 5；PDE6C，Ki=5324±2612 nM，n=4；PDE7A2，Ki>75,000 nM；PDE8A，Ki>50,000 nM；PDE10，Ki>51,250±20,056 nM，n = 4 ；PDE11，Ki>80,000 nM），并且对约 60 种其他受体/酶没有表现出其他显着活性。在表达恒河猴 PDE9A2 的 HEK 全细胞中，Edelinontrine 抑制 ANP (0.3 μM) 诱导的 cGMP[2]，IC50 为 375±36.9 nM (n=16)。
在原代大鼠海马神经元培养中，PF-04447943 在低浓度（30-100 nM）下能显著增加每个神经元的神经突生长长度和每个神经元的synapsin 1阳性点状结构（突触标志物）数量，最大效应出现在约100 nM处。更高浓度（300-1000 nM）未显示显著效应，呈现倒U型浓度-效应曲线。[2] 在小鼠海马脑片实验中，PF-04447943 在100 nM浓度下能显著促进由弱强直刺激（50 Hz，500 ms）诱导的长时程增强（LTP），导致约20%的增强效应，并持续至刺激后60分钟。在30 nM或300 nM浓度下未观察到显著效应，对由强theta节律爆发刺激（TBS）诱导的LTP也无影响。[2] 在稳定表达恒河猴PDE9A2和人NPR1的HEK-293细胞中，PF-04447943 能抑制心房钠尿肽（ANP，0.3 µM）刺激的cGMP积累，IC50为375 ± 36.9 nM。[2] |
| 体内研究 (In Vivo) |
使用 Edelinontrine 在大鼠中进行的药代动力学研究显示，Tmax 为 0.3 h，T1/2 为 4.9 h，Cl 为 21.7 mL/min/kg，基于 iv 和 po 剂量的口服生物利用度为 47%。给大鼠口服药物（1-30 mg/kg）后，三十分钟后，血液、大脑和脑脊液（CSF）中艾迪农特林的浓度以剂量依赖性方式增加。给药后 30 分钟，大脑与血浆的暴露比率从 1 mg/kg 时的 0.13 到 30 mg/kg 时的 0.33 不等。大约 50% 的大脑水平由脑脊液水平代表。小鼠中 Edelinontrine 的血浆和脑浓度呈剂量依赖性增加，口服剂量为 3、10 和 30 mg/kg。脑与血浆的比率范围为 0.26 至 0.7，但这并不完全依赖于剂量。在 30 mg/kg 剂量下，CSF cGMP 水平以剂量依赖性方式从 3 pmol/mL 的基础水平上升至 13.3 pmol/mL（3.5 倍）。此外，脑脊液 cGMP 水平以剂量依赖性方式升高；在 30 mg/kg 剂量下，它们增加了 3.5 倍，从用载体治疗的动物的基础水平 3 pmol/mL 增加到 13.3 pmol/mL。在所有研究剂量下，脑脊液 cGMP 水平均升高，最大影响达到 30 mg/kg 对照组的 3.5 倍[2]。
口服给予 PF-04447943 （1-30 mg/kg）能剂量依赖性地提高大鼠脑脊液（CSF）中cGMP水平（给药后30分钟），表明其在中枢神经系统实现了靶点结合。基础CSF cGMP水平（3 pmol/ml）在30 mg/kg剂量下升高至13.3 pmol/ml（3.5倍）。[2] PF-04447943 （1-3 mg/kg，口服）能显著改善啮齿类动物的认知表现：在1 mg/kg剂量下增强小鼠的24小时社交识别记忆；在1和3 mg/kg剂量下改善小鼠Y迷宫空间识别记忆；在3 mg/kg剂量下逆转东莨菪碱诱导的大鼠新物体识别缺陷。观察到钟形（倒U型）剂量反应曲线，10 mg/kg在这些模型中无效。[2] 在大鼠中，PF-04447943 （3 mg/kg，口服）——该剂量能有效逆转东莨菪碱诱导的认知缺陷——能显著增加海马AMPA受体亚基GluR1在丝氨酸831位点的磷酸化水平，但不影响总GluR1蛋白表达。[2] |
| 酶活实验 |
PF-04447943 对人、恒河猴和大鼠PDE9A2的亲和力通过无细胞荧光偏振（FP）法测定。将重组酶（人GST标签PDE9A2，或过表达恒河猴/大鼠PDE9A2的细胞膜制备物）与化合物及FAM标记的cGMP底物（终浓度50 nM）在测定缓冲液中于室温孵育60分钟。通过加入含有特异性试剂的结合溶液终止酶反应。测量荧光偏振（mP）值，拟合浓度-抑制曲线以确定表观抑制常数（Ki）。实验设四个复孔。[2]
针对其他PDE家族（PDE1-8, 10-11）的选择性分析使用类似的FP法进行，使用相应的人源重组酶和适当的FAM标记的cAMP或cGMP底物（浓度接近其表观Km值）。实验在室温下进行，设两个复孔。[2] |
| 细胞实验 |
将恒河猴 PDE9A2 构建体亚克隆到 pcDNA3.3 TOPO 载体中，将稳定转染以组成型表达恒河猴 PDE9A2 和 hNPR1 的 HEK 293 细胞与 PF-04447943（30 μM 至 1.5 nM）在检测培养基中以 10,000 个细胞的密度一起孵育/孔，37°C 30 分钟。与 0.3 μM ANP（心房钠尿肽）在 37°C 下再孵育 30 分钟可刺激环状 GMP 形成。孵育后，用抗体/裂解缓冲液和 ED 试剂在室温下裂解细胞 1 小时。随后与 EA 试剂在室温下孵育 30 分钟，然后与底物试剂在室温下孵育 1 小时，然后通过在 Envision 微孔板发光计上测量发光来确定 cGMP 浓度。使用 30 μM PF-04447943 确定基于细胞的测定中的最大抑制（100% 活性），0% 活性由 DMSO 对照定义。 PF-04447943 在 10 点滴定中进行四次滴定。使用最大抑制值计算抑制百分比，并使用 Prism 软件 [2] 根据浓度响应曲线计算 IC50 值。
使用原代大鼠胚胎（E18）海马神经元评估PF-04447943 对海马神经元形态和突触发生的影响。神经元以低密度（5000细胞/孔）铺板并培养6天。在第5天，用PF-04447943 或对照处理细胞24小时。随后固定、透化细胞，并进行神经元标记物MAP2和突触小泡蛋白synapsin 1的免疫荧光染色及核染色。通过高内涵成像分析，定量每个神经元的平均神经突长度和每个神经元的synapsin 1阳性点状结构数量（每孔多个视野）。[2] 使用基于细胞的实验测定抑制cGMP积累的IC50。将稳定表达恒河猴PDE9A2和人NPR1的HEK-293细胞铺板，与PF-04447943 孵育30分钟，然后用ANP（0.3 µM）刺激30分钟。裂解细胞，使用商业化学发光免疫分析试剂盒定量细胞内cGMP水平。测量化学发光值，并根据浓度-反应曲线计算IC50。[2] |
| 动物实验 |
在大鼠药代动力学 (PK) 研究中，PF-04447943 分别采用静脉注射 (iv) 和口服 (po) 给药。在不同时间点采集血液和脑组织样本。分离血浆，并将脑组织匀浆。采用超高效液相色谱-串联质谱联用 (UPLC-MS/MS) 技术定量分析血浆和脑组织匀浆中的药物浓度。[2]
为测定脑脊液 (CSF) 中 cGMP 的含量，大鼠口服 PF-04447943（1-30 mg/kg），30 分钟后，在二氧化碳安乐死下从枕大池采集脑脊液。使用商业酶免疫分析 (EIA) 试剂盒测定 cGMP 水平。[2] 在认知行为测试中，PF-04447943 以口服方式给予啮齿动物。在小鼠社交和Y迷宫测试中，药物配制于20%羟丙基-β-环糊精溶液中，并在首次测试前30分钟以1、3或10 mg/kg的剂量（10 ml/kg给药体积）给药。在大鼠新物体识别测试中，药物配制于水中，并在首次测试前60分钟以1、3或10 mg/kg的剂量给药。在测试前30分钟腹腔注射东莨菪碱（1 mg/kg）以诱导认知缺陷。[2] 在海马GluR1磷酸化研究中，大鼠在安乐死前1小时口服PF-04447943（3 mg/kg）或给予溶剂（水）。迅速解剖海马，冷冻，随后进行亚细胞分级分离，以获得富含膜蛋白的组分用于Western blot分析。[2] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
在大鼠中，PF-04447943 的达峰时间 (Tmax) 为 0.3 小时，消除半衰期 (T1/2) 为 4.9 小时，清除率 (Cl) 为 21.7 ml/min/kg，口服生物利用度为 47%。[2] 大鼠口服 PF-04447943 (1-30 mg/kg) 后，血浆、脑组织和脑脊液中的 PF-04447943 浓度在给药后 30 分钟内呈剂量比例增加。脑组织与血浆的暴露比范围为 0.13 (1 mg/kg) 至 0.33 (30 mg/kg)。脑脊液中的药物浓度约为脑组织浓度的 50%。 [2]
在小鼠中，口服给药（3、10、30 mg/kg）也导致血浆和脑组织浓度呈剂量依赖性增加，脑血浆比值范围为0.26至0.7。[2] |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
PF-04447943 已被研究用于治疗阿尔茨海默病。
PF-04447943 是一种选择性 PDE9 抑制剂，目前正在进行阿尔茨海默病的临床开发。其认知增强作用被认为与调节海马突触可塑性有关，可能通过增强胆碱能和/或谷氨酸信号通路实现。认知功能的改善与海马 GluR1 磷酸化水平的升高相关，GluR1 磷酸化是 AMPA 受体激活和突触强化的标志。体外和体内观察到的倒 U 形剂量反应曲线表明其最佳治疗窗口较窄，这可能是由于反馈抑制机制限制了高暴露量下 cGMP 的积累。[2] |
| 分子式 |
C20H25N7O2
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|---|---|
| 分子量 |
395.458203077316
|
| 精确质量 |
395.206
|
| CAS号 |
1082744-20-4
|
| PubChem CID |
135564558
|
| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
|
| 密度 |
1.5±0.1 g/cm3
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| 折射率 |
1.763
|
| LogP |
-0.44
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| tPSA |
102.08
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
7
|
| 可旋转键数目(RBC) |
4
|
| 重原子数目 |
29
|
| 分子复杂度/Complexity |
632
|
| 定义原子立体中心数目 |
2
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| SMILES |
C[C@@H]1CN(C[C@H]1C2=NC3=C(C=NN3C4CCOCC4)C(=O)N2)CC5=NC=CC=N5
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| InChi Key |
IWXUVYOOUMLUTQ-CZUORRHYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C20H25N7O2/c1-13-10-26(12-17-21-5-2-6-22-17)11-16(13)18-24-19-15(20(28)25-18)9-23-27(19)14-3-7-29-8-4-14/h2,5-6,9,13-14,16H,3-4,7-8,10-12H2,1H3,(H,24,25,28)/t13-,16-/m1/s1
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| 化学名 |
6-((3S,4S)-4-Methyl-1-(pyrimidin-2-ylmethyl)pyrrolidin-3-yl)-1-(tetrahydro-2H-pyran-4-yl)-1,5-dihydro-4H-pyrazolo(3,4-d)pyrimidin-4-one
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| 别名 |
PF-04447943; PF-4447943; PF 04447943; PF 4447943; PF04447943; PF4447943.
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ≥ 54.6 mg/mL (~138.07 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.32 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.32 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.32 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.5287 mL | 12.6435 mL | 25.2870 mL | |
| 5 mM | 0.5057 mL | 2.5287 mL | 5.0574 mL | |
| 10 mM | 0.2529 mL | 1.2644 mL | 2.5287 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
Enpp-1/3-IN-1
PDE5-IN-15
PDEδ-IN-1
Nelvutamig
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