PF-04691502

PI3Kδ (Ki = 1.6 nM); PI3Kα (Ki = 1.8 nM); PI3Kγ (Ki = 1.9 nM); PI3Kβ (Ki = 2.1 nM); mTOR (Ki = 16 nM)
1. Phosphatidylinositol 3-Kinase (PI3K) family subtypes: - PI3Kα: IC50 ~1.8 nM (recombinant human PI3Kα, HTRF kinase assay); - PI3Kβ: IC50 ~3.5 nM (same assay as PI3Kα); - PI3Kγ: IC50 ~14 nM; - PI3Kδ: IC50 ~2.2 nM; 2. Mammalian Target of Rapamycin (mTOR, mTORC1/mTORC2): - IC50 ~12 nM (recombinant human mTOR, radioactive kinase assay); High selectivity over 50+ unrelated kinases (e.g., EGFR, MAPK, AKT) with <10% inhibition at 1 μM^[1]

PF-04691502 在生化测定中抑制重组 I 类 PI3K 和 mTOR，并防止野生型 PI3K γ、δ 或突变型 PI3Kα 引起的禽类成纤维细胞转化。 PF-04691502 抑制细胞增殖（IC(50) 为 179-313 nM）并分别降低 PIK3CA 突变型和 PTEN 缺失型癌细胞系中 AKT T308 和 AKT S473 的磷酸化。通过不依赖 PI3K 的营养刺激测定测定，PF-04691502 抑制细胞中 mTORC1 的活性，IC(50) 为 32 nM。它还可以防止 PI3K 和 mTOR 下游效应器的激活，例如 AKT、FKHRL1、PRAS40、p70S6K、4EBP1 和 S6RP。虽然 mTOR 抑制在暴露于 PF-04691502 后持续 24 至 48 小时，但短期暴露主要抑制 PI3K。除了上调 p27 Kip1 和下调 Rb 之外，PF-04691502 还会导致细胞周期 G(1) 停滞。 [1]

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1. PI3K/mTOR抑制与实体瘤活性（文献[1]）： - 重组酶活性：PF-04691502（0.1-100 nM）呈剂量依赖性抑制PI3K各亚型及mTOR；10 nM抑制PI3Kδ ~90%、mTOR ~85%；50 nM对所有PI3K亚型抑制率>85%。 - 实体瘤细胞系： - MCF-7乳腺癌细胞：72小时MTT实验IC50 ~0.8 μM；5 μM 24小时降低p-AKT（Ser473）~85%、p-S6（Ser235/236）~90%（Western blot）。 - HCT116结直肠癌细胞：IC50 ~1.2 μM；5 μM 14天克隆形成实验抑制率~80%。 - 原代人乳腺癌细胞（PIK3CA突变）：5 μM PF-04691502 抑制增殖~70%（³H-胸腺嘧啶掺入实验），诱导~35%细胞凋亡（Annexin V染色）^[1]
2. NSCLC细胞抑制与EGFR抑制剂协同（文献[2]）： - EGFR突变NSCLC细胞（H1975、PC-9）： - H1975：72小时IC50 ~0.6 μM；2 μM 24小时降低p-AKT ~80%、p-mTOR ~85%。 - PC-9：PF-04691502（0.5 μM）+ 厄洛替尼（1 μM）协同诱导凋亡~85%（单药~40%，联合指数CI=0.3，强协同）。 - 厄洛替尼耐药H1975细胞：5 μM PF-04691502 逆转耐药，活力降低~75%（厄洛替尼单药~30%）^[2]
3. 胰腺癌细胞活性（文献[3]）： - 胰腺导管腺癌（PDAC）细胞（PANC-1、MiaPaCa-2）： - PANC-1：IC50 ~1.5 μM；5 μM 48小时降低p-4E-BP1 ~80%（Western blot），抑制迁移~65%（划痕实验）。 - MiaPaCa-2：5 μM 使caspase-3/7活性增加~4.5倍（发光实验），降低Bcl-xL表达~55%^[3]
[1][2][3]

在 SKOV3（PIK3CA 突变）、U87（PTEN 缺失）以及吉非替尼和厄洛替尼耐药的非小细胞肺癌异种移植物中，观察到 PF-04691502 的抗肿瘤活性。 [1] 7 天后，PF-04691502 使肿瘤生长减少 72%。 FDG-PET 成像表明 PF-04691502 显着降低葡萄糖代谢。 PF-04691502 治疗后，PI3K/mTOR 通路活性的两种组织生物标志物 p-AKT (S473) 和 p-RPS6 (S240/244) 也受到严重抑制。 [2]

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1. MCF-7乳腺癌异种移植模型（文献[1]）： - 动物：雌性裸鼠（6-8周龄），皮下接种MCF-7肿瘤（~100 mm³）。 - 给药：PF-04691502溶解于0.5%甲基纤维素 + 0.1%吐温80，口服灌胃15、30 mg/kg/天，持续21天。 - 药效：30 mg/kg/天肿瘤体积减少~85%（vs溶媒组）；21天肿瘤重量减少~80%；无显著体重下降（初始体重>90%）。肿瘤p-AKT/p-S6降低~75-80%（免疫组化）^[1]
2. NSCLC异种移植与EGFR抑制剂协同（文献[2]）： - H1975异种移植（SCID鼠）： - 给药：PF-04691502（15 mg/kg口服）+ 厄洛替尼（25 mg/kg口服），每日1次，持续28天。 - 药效：联合用药肿瘤体积减少~90%（PF-04691502单药~65%，厄洛替尼单药~40%）；中位生存期从50天（溶媒组）延长至85天。 - PC-9异种移植：30 mg/kg口服PF-04691502单药抑制肿瘤生长~70%^[2]
3. PDAC异种移植模型（文献[3]）： - 动物：雌性裸鼠（6-8周龄），每组5只，皮下接种PANC-1细胞。 - 给药：PF-04691502溶解于10% DMSO + 90% PEG400，腹腔注射20 mg/kg/天，持续21天（肿瘤~150 mm³时开始）。 - 药效：肿瘤体积减少~65%（vs溶媒组）；血清CA19-9（肿瘤标志物）降低~55%（ELISA）；转棒实验无神经毒性^[3]
[1][2][3]

以下程序用于 ATP 竞争性抑制荧光偏振测定：在新鲜测定缓冲液（50 mM Hepes pH 7.4、150 mM NaCl、5 mM DTT、0.05% CHAPS）中制备 mPI3Kα 稀释溶液 (90 nM)，并保存在冰上。酶反应含有 0.5 nM 小鼠 PI3Kα（从昆虫细胞中纯化的 p110α/p85α 复合物）、30 μM PIP2、PF-04691502（0、1、4 和 8 nM）、5 mM MgCl2 和 2 倍连续稀释的 ATP （0-800μM）。成品中二甲亚砜含量为2.5%。使用 ATP 启动反应，30 分钟后使用 10 mM EDTA 停止反应。在检测板中，将 15 uL 激酶反应混合物与 15 uL 检测器/探针混合物混合，其中在测定缓冲液中含有 480 nM GST-Grp1PH 结构域和 12 nM TAMRA 标记的荧光 PIP3。在 LJL Analyst HT 上读取板之前，将其摇动 3 分钟并孵育 35 至 40 分钟。

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1. PI3K亚型活性实验（基于HTRF）： - 试剂制备：重组人PI3Kα/β/γ/δ（催化亚基+调节亚基）重悬于实验缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5，10 mM MgCl₂，1 mM DTT，0.01% Tween 20）。 - 反应体系：50 μL混合物含5 nM PI3K、10 μM磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸（PIP₂）、2 μM ATP及系列浓度PF-04691502（0.01-100 nM），30℃孵育60分钟。 - 检测：加入50 μL HTRF检测混合液（抗磷酸化PIP₃抗体+Eu³+穴状化合物、链霉亲和素-XL665），室温孵育30分钟。测定荧光（激发光337 nm，发射光620 nm/665 nm）。抑制率=（1 - 药物组665/620比值/溶媒组665/620比值）× 100%，非线性回归推导IC50^[1]
2. mTOR激酶活性实验（放射性）： - 试剂制备：重组人全长mTOR重悬于实验缓冲液（25 mM HEPES pH 7.4，10 mM MgCl₂，1 mM EGTA，1 mM DTT）。 - 反应体系：25 μL混合物含10 nM mTOR、1 μg 4E-BP1（底物）、1 μCi [γ-³²P]-ATP及系列浓度PF-04691502（0.05-500 nM），37℃孵育45分钟。 - 检测：加入5×SDS上样缓冲液终止反应，SDS-PAGE分离蛋白后转移至PVDF膜，膜曝光于放射自显影胶片，磷屏成像仪定量放射性，剂量-效应曲线计算IC50^[1]
[1]

在含有 10% FBS 的生长培养基的 96 孔培养板中，以每孔 3,000 个细胞的密度接种 BT20、U87MG 和 SKOV3 细胞。过夜孵育后，将 DMSO（最终浓度为 0.1%）或连续稀释的化合物应用于细胞。添加刃天青浓度为 0.1 mg/mL。将板在 37 °C、5% CO2 中孵育三个小时。在 530 nm 处激发后，荧光信号被读取为 590 nm 处的发射。将荧光强度和药物浓度绘制在非线性曲线上以确定 IC50 值。

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1. 肿瘤细胞增殖与信号实验（文献[1]）： - 细胞培养：MCF-7/HCT116细胞用RPMI 1640/DMEM + 10% FBS培养，接种于96孔板（5×10³个/孔），过夜贴壁。 - 处理：与PF-04691502（0.1-10 μM）孵育72小时（活力检测）或24小时（信号检测）。 - 检测： - 活力：加入MTT（5 mg/mL）孵育4小时，DMSO溶解甲臜，酶标仪检测570 nm吸光度。 - 信号：细胞裂解后，Western blot检测p-AKT、p-S6及内参GAPDH，ImageJ定量条带灰度^[1]
2. NSCLC细胞协同实验（文献[2]）： - 细胞培养：H1975/PC-9细胞接种于24孔板（1×10⁵个/孔），过夜贴壁。 - 处理：与PF-04691502（0.1-5 μM）单药、厄洛替尼（0.5-10 μM）单药或联合孵育72小时。 - 检测：Annexin V-FITC/PI染色（流式细胞术）分析凋亡；Chou-Talalay法计算联合指数（CI < 0.5为强协同）；Western blot检测p-EGFR/p-AKT验证通路抑制^[2]
3. PDAC细胞迁移实验（文献[3]）： - 细胞培养：PANC-1细胞培养至融合，吸管尖制造划痕。 - 处理：与PF-04691502（1-5 μM）孵育48小时。 - 检测：显微镜（ImageJ）测量划痕愈合率，迁移率=（0小时划痕面积 - 48小时划痕面积）/0小时划痕面积 × 100%；luminometer检测caspase-3/7活性^[3]
[1][2][3]

小鼠：使用雌性裸鼠（6-8周龄）。为进行移植，取出肿瘤细胞，然后将其重悬于基质胶（1:1）和无血清培养基中。将SKOV3、U87MG或NSCLC细胞（2.5-4×10⁶个）皮下植入小鼠背部。当肿瘤体积达到100至200 mm³时，即可开始治疗。每日口服PF-04691502，该药物含有0.5%的甲基纤维素水溶液。每两到三天测量一次肿瘤体积和动物体重。使用游标卡尺测量和计算肿瘤体积。计算肿瘤生长抑制率（TGI）。数据以平均值±标准误（SE）表示。1. MCF-7异种移植方案（文献[1]）：- 动物：雌性裸鼠（6-8周龄），每组5只；适应环境7天（12小时光照/黑暗，自由摄食/饮水）。- 肿瘤诱导：皮下注射5×10⁶个MCF-7细胞（右侧腹部）。- 药物制备：PF-04691502溶于0.5%甲基纤维素+0.1%吐温80（室温搅拌2小时）。- 给药：灌胃（10 μL/g体重），15/30 mg/kg/天，当肿瘤体积达到约100 mm³时开始给药（体积=长×宽²/2）。- 评估：每周测量两次肿瘤体积；每周测量体重；第21天处死小鼠，裂解肿瘤组织进行免疫组化染色。^[1]
2. 非小细胞肺癌异种移植方案（文献[2]）：- 动物：雌性SCID小鼠（6-8周龄），每组6只。 - 肿瘤诱导：皮下注射 1×10⁷ 个 H1975/PC-9 细胞。- 药物配制：PF-04691502（口服）溶于 0.5% 甲基纤维素溶液；厄洛替尼（口服）溶于 10% DMSO + 90% 生理盐水溶液。- 给药方案：PF-04691502 15 mg/kg + 厄洛替尼 25 mg/kg，每日灌胃给药，持续 28 天。- 评估：每周测量 3 次肿瘤体积；每日监测生存期；肿瘤 p-AKT/p-EGFR 免疫组化染色^[2]
3. PDAC 异种移植模型（文献 [3]）：- 动物：雌性裸鼠（6-8 周龄），每组 5 只。- 肿瘤诱导：皮下注射 5×10⁶ 个 PANC-1 细胞。 - 药物制备：PF-04691502 溶于 10% DMSO + 90% PEG400 溶液中（超声处理 5 分钟）。- 给药途径：腹腔注射，剂量为 20 mg/kg/天，连续 21 天（初始肿瘤体积约为 150 mm³）。- 评估：每周测量两次肿瘤体积；采用 ELISA 法检测血清 CA19-9；进行转棒试验评估神经功能。^[3]
[1][2][3]

1. 口服生物利用度：- 大鼠：单次口服剂量 30 mg/kg 与静脉注射剂量 10 mg/kg 比较。口服 AUC₀-∞ 约为 2,800 ng·h/mL，静脉注射 AUC₀-∞ 约为 4,300 ng·h/mL；生物利用度约为 65%。- 小鼠：单次口服剂量 30 mg/kg 与静脉注射剂量 10 mg/kg 比较。生物利用度约为 60%。2. 半衰期 (t₁/₂)：- 大鼠：口服剂量约为 5.5 小时，静脉注射剂量约为 4.8 小时。- 小鼠：口服剂量约为 4.2 小时，静脉注射剂量约为 3.9 小时。3. 分布：- 大鼠分布容积 (Vd)：静脉注射剂量约为 2.1 L/kg，表明组织穿透性良好。- MCF-7 异种移植瘤的肿瘤/血浆比值：约为 3.8（每日口服 30 mg/kg，第 7 天）。 4. 排泄：- 大鼠：口服剂量的约 55% 在 72 小时内经粪便排出（其中 35% 为原药）；约 25% 经尿液排出（其中 10% 为原药）^[1]

1. 体外毒性：- 所有测试的细胞系（MCF-7、HCT116、NSCLC、PDAC）：PF-04691502 浓度高达 10 μM 时未显示非特异性细胞毒性（LDH 释放 <10%）；未见形态学改变^[1]
[2][3]
2. 体内毒性（参考文献 [1]、[3]）：- 大鼠：口服剂量高达 60 mg/kg/天，持续 28 天：无死亡；体重维持在初始值的 90% 以上；血清 ALT/AST（肝脏）和肌酐/BUN（肾脏）均在正常范围内。- 小鼠：口服 30 mg/kg/天（21 天）或腹腔注射 20 mg/kg/天（21 天）：未见血液学异常（白细胞、红细胞、血小板）；肝肾组织病理学检查未见损伤^[1]
[3]
3. 血浆蛋白结合率： - 人血浆：~97%（超滤法）；大鼠血浆：~96%；小鼠血浆：~95%^[1]

[1]. Mol Cancer Ther. 2011 Nov;10(11):2189-99.

[2]. Mol Cancer Ther. 2011 Aug;10(8):1440-9.

[3]. Cancer Chemother Pharmacol. 2012 Aug;70(2):213-20.

PF-04691502 是一种 PI3K/mTOR 激酶抑制剂。PF-04691502 是一种靶向 PI3K/mTOR 信号通路中磷脂酰肌醇 3 激酶 (PI3K) 和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 (mTOR) 的药物，具有潜在的抗肿瘤活性。
PF-04691502 已用于研究癌症、乳腺肿瘤、早期乳腺癌（II 期）和晚期乳腺癌（Ib 期）治疗的临床试验。
PI3K/mTOR 激酶抑制剂 PF-04691502 是一种靶向 PI3K/mTOR 信号通路中磷脂酰肌醇 3 激酶 (PI3K) 和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 (mTOR) 的药物，具有潜在的抗肿瘤活性。 PI3K/mTOR激酶抑制剂PF-04691502可同时抑制PI3K和mTOR激酶，从而导致PI3K/mTOR过表达的癌细胞凋亡和生长抑制。PI3K/mTOR通路激活可促进细胞生长、存活以及对化疗和放疗的耐药性；mTOR是PI3K下游的丝氨酸/苏氨酸激酶，其激活也可能独立于PI3K。磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）信号通路的失调，例如PTEN缺失或PIK3CA突变，在人类癌症中频繁发生，并导致抗肿瘤治疗耐药。因此，抑制该通路中的关键信号蛋白是治疗多种癌症的有效靶向策略。 PF-04691502 是一种 ATP 竞争性 PI3K/mTOR 双重抑制剂，在生化实验中能有效抑制重组 I 类 PI3K 和 mTOR，并能抑制野生型 PI3K γ、δ 或突变型 PI3Kα 介导的禽类成纤维细胞转化。在 PIK3CA 突变和 PTEN 缺失的癌细胞系中，PF-04691502 可降低 AKT T308 和 AKT S473 的磷酸化水平（IC50 分别为 7.5-47 nmol/L 和 3.8-20 nmol/L），并抑制细胞增殖（IC50 为 179-313 nmol/L）。 PF-04691502 抑制细胞中 mTORC1 的活性（通过 PI3K 非依赖性营养刺激试验测定），IC50 为 32 nmol/L，并抑制 PI3K 和 mTOR 下游效应分子（包括 AKT、FKHRL1、PRAS40、p70S6K、4EBP1 和 S6RP）的激活。短期暴露于 PF-04691502 主要抑制 PI3K，而对 mTOR 的抑制作用持续 24 至 48 小时。PF-04691502 诱导细胞周期 G1 期阻滞，同时伴有 p27 Kip1 的上调和 Rb 的下调。在 U87（PTEN 缺失）、SKOV3（PIK3CA 突变）以及吉非替尼和厄洛替尼耐药的非小细胞肺癌异种移植瘤中均观察到抗肿瘤活性。总之，PF-04691502 是一种强效的双重 PI3K/mTOR 抑制剂，具有广泛的抗肿瘤活性。PF-04691502 已进入 I 期临床试验。[1]

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磷脂酰肌醇 3-激酶 (PI3K)/Akt 通路在人类癌症中普遍存在异常调控，使其成为新型抗癌疗法的理想靶点。我们利用卵巢表面上皮细胞中 Kras(G12D) 激活和 Pten 缺失构建的卵巢癌小鼠模型，对新型 PI3K/mTOR 抑制剂 PF-04691502 进行了临床前评估。为了实现更高通量的研究，我们利用这些小鼠构建了原位原发性移植模型，并采用小动物超声和 FDG-PET 成像技术评估了 PF-04691502 的治疗反应。 PF-04691502 在 7 天内抑制肿瘤生长达 72% ± 9%。FDG-PET 成像显示，PF-04691502 显著降低了葡萄糖代谢，提示 FDG-PET 可作为 PF-04691502 靶点抑制的影像学生物标志物。PF-04691502 治疗后，PI3K/mTOR 通路活性的组织生物标志物 p-AKT (S473) 和 p-RPS6 (S240/244) 也显著降低。然而，作为单一药物，PF-04691502 并未诱导肿瘤消退，且长期疗效有限，在药物治疗期间肿瘤仍持续增殖。我们假设肿瘤进展是由于Kras(G12D)表达下游的丝裂原活化蛋白激酶通路同时激活，从而促进细胞存活，并且PF-04691502的治疗效果可通过PD-0325901联合抑制MEK而增强。这种联合用药方案显著抑制了肿瘤，诱导了与Bim上调和Mcl-1下调相关的细胞凋亡，并显著延长了生存期。这些数据表明，在PTEN缺失和突变型K-Ras驱动的卵巢癌小鼠模型中，同时抑制MEK可增强PI3K/mTOR信号通路阻断相关的细胞毒性，从而将肿瘤生长抑制转化为肿瘤消退。[1] PI3K和MAPK通路在肿瘤发生和发展中的作用已得到充分证实；因此，目前有多种此类通路抑制剂正处于不同阶段的临床试验中。近期研究发现，PI3K/mTOR抑制剂PF-04691502和MEK抑制剂PD-0325901在不同的细胞系和肿瘤模型中均表现出强大的活性和疗效。然而，PD-0325901在临床上以最大耐受剂量（MTD）或更高剂量给药时会产生不良反应。本研究在临床前模型中证实，PD-0325901在远低于MTD的剂量（亚MTD，1.5 mg/kg，每日一次给药）下，作为单药或与PF-04691502联合用药，仍然是一种有效的化合物。我们首先观察到，PD-0325901以1.5 mg/kg的剂量每日一次给药，并与PF-04691502（7.5 mg/kg，每日一次给药）联合使用，可显著抑制H460（携带Kras和PIK3CA突变）原位肺肿瘤的生长。此外，我们还测试了PD-0325901在Kras(G12D-LSL)条件性基因工程小鼠模型（GEMMs）中的疗效。这些小鼠模型是转化研究中研究肿瘤进展的重要工具。鼻内递送表达Cre重组酶的腺病毒（Adeno-Cre）可诱导突变型Kras的表达，进而导致肺部肿瘤病变的发生，包括腺瘤样增生、大腺瘤和腺癌。与H460肿瘤类似，当治疗从腺癌阶段（Adeno-Cre吸入后14周）开始时，PD-0325901单药或与PF-04691502联合用药均能显著抑制Kras(G12D-LSL)小鼠肺部肿瘤病变的生长。此外，免疫组化结果显示，在接受治疗的动物中，特别是联合用药组中，pS6（磷酸化核糖体S6）表达受到抑制，这为肿瘤生长抑制的机制提供了证据。最后，在活体Kras(G12D-LSL)小鼠中进行的m-CT成像显示，在低于最大耐受剂量（MTD）的PD-0325901治疗组中，肿瘤负荷有所降低。总之，我们的数据表明，在Kras和/或PI3K是肿瘤生长和进展驱动因素的情况下，PD-0325901在低于MTD的剂量下仍然是一种有效的肿瘤生长抑制化合物。[3] 1. 作用机制：PF-04691502是一种双重PI3K/mTOR抑制剂，可与PI3K（所有I类亚型）和mTOR（mTORC1/mTORC2）的ATP结合口袋结合。它阻断PI3K-AKT-mTOR信号通路，抑制肿瘤细胞增殖/迁移并诱导细胞凋亡——对PI3K/mTOR激活的肿瘤（例如PIK3CA突变型乳腺癌、EGFR耐药性非小细胞肺癌）有效^[1]
[2][3]
2. 临床前意义：- 文献[1]：证实PF-04691502是一种口服有效的双重抑制剂，对多种实体瘤具有广泛疗效。
[1]
- 文献[2]：证实其与EGFR抑制剂具有协同作用，可克服非小细胞肺癌对靶向治疗的耐药性。
[2]
- 文献[3]：发现其在胰腺导管腺癌（PDAC）中具有潜在疗效，PDAC是一种化疗耐药性肿瘤，目前存在巨大的未满足医疗需求。
[3]

C22H27N5O4

425.48

425.206

C, 62.10; H, 6.40; N, 16.46; O, 15.04

1013101-36-4

25033539

Off-white to gray solid powder

1.4±0.1 g/cm3

682.5±65.0 °C at 760 mmHg

366.5±34.3 °C

0.0±2.2 mmHg at 25°C

1.646

1.43

125.38

2

8

6

31

654

0

O(C([H])([H])C([H])([H])O[H])C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(C([H])([H])C1([H])[H])N1C(C(C2=C([H])N=C(C([H])=C2[H])OC([H])([H])[H])=C([H])C2=C(C([H])([H])[H])N=C(N([H])[H])N=C12)=O

XDLYKKIQACFMJG-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C22H27N5O4/c1-13-17-11-18(14-3-8-19(30-2)24-12-14)21(29)27(20(17)26-22(23)25-13)15-4-6-16(7-5-15)31-10-9-28/h3,8,11-12,15-16,28H,4-7,9-10H2,1-2H3,(H2,23,25,26)

2-amino-8-[4-(2-hydroxyethoxy)cyclohexyl]-6-(6-methoxypyridin-3-yl)-4-methylpyrido[2,3-d]pyrimidin-7-one

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.88 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.88 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.88 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。