| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Selective inhibitor of fatty acid amide hydrolase (FAAH) with the following inhibitory parameters:
- Ki = 0.45 nM (recombinant human FAAH), IC50 = 1.6 nM (recombinant human FAAH); - No significant inhibition of other lipid hydrolases including monoacylglycerol lipase (MAGL), α/β-hydrolase domain-containing protein 6 (ABHD6), and cholinesterase (inhibition rate <5% at 10 μM) [3] - Inhibitor of FAAH in mouse spinal cord tissue, with oral administration of 10 mg/kg PF-3845 leading to >90% inhibition of spinal FAAH activity [1][4] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
在 COS-7 细胞中,PF-3845(0.5 nM-10 μM;40 分钟)对 FAAH-2 几乎没有活性(IC50>10 μM),并以浓度依赖性方式抑制人 FAAH-1(IC50=18 nM) [1]。 PF-3845(0.1-1000 μM;48 小时)显着降低 Colo-205 细胞活力[2]。
FAAH酶抑制活性: - PF-3845 以浓度依赖性方式强效抑制重组人FAAH:1 nM浓度下抑制78%的FAAH活性,10 nM浓度下抑制率>95%;半数最大抑制浓度(IC50)为1.6 nM,通过双倒数作图法(Lineweaver-Burk plot)测得抑制常数(Ki)为0.45 nM。 - 具有极高的FAAH选择性:即使在10 μM浓度下,对MAGL的抑制率<2%、ABHD6<3%、丁酰胆碱酯酶<1%,证实无显著脱靶抑制效应[3] - 抗结肠癌细胞活性: - 在人结肠腺癌细胞Colo-205中,PF-3845 浓度依赖性降低细胞活力:48小时处理的半数细胞毒性浓度(CC50)为25.3 μM,50 μM浓度下细胞活力降至对照组的32%。 - 抑制细胞迁移:25 μM和50 μM PF-3845 处理24小时(划痕实验),伤口愈合率分别降低31%和45%。 - 抑制细胞侵袭:25 μM和50 μM PF-3845 处理48小时(Matrigel包被Transwell实验),侵袭细胞数分别减少38%和52%。 - 作用机制:PF-3845 诱导细胞凋亡——50 μM处理使caspase-3活性升高2.3倍,促凋亡蛋白Bax表达上调40%,抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调35%;同时通过明胶酶谱法检测发现,其使基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和MMP-9活性分别降低42%和48%[2] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在大鼠中,PF-3845(1–30 mg/kg;口服)以依赖于大麻素受体的方式减轻炎性疼痛[1]。 PF-3845(10 mg/kg;一次腹腔注射;腹膜内注射)可特异性抑制小鼠的 FAAH,效果长达 24 小时[1]。给予 PF-3845(10 mg/kg;单次腹腔注射)后,小鼠体内的 Anandamide (AEA) 显着且持续升高[1]。
逆转LPS诱导的小鼠触觉异常性疼痛: 1. 动物模型建立:通过腹腔(ip)注射脂多糖(LPS,10 mg/kg)诱导小鼠触觉异常性疼痛,采用von Frey纤维丝测定50%机械撤反应阈值(MWT,反映触觉敏感性)。 2. 全身给药疗效:LPS注射后2小时,ip给予PF-3845 3 mg/kg和10 mg/kg,LPS注射后4小时: - LPS模型组MWT降至0.4 g(正常对照组为2.1 g); - 3 mg/kg PF-3845 使MWT升至1.2 g(较模型组升高200%); - 10 mg/kg PF-3845 使MWT升至1.8 g(较模型组升高350%),与正常对照组无显著差异。 3. 中枢神经系统(CNS)给药疗效:LPS注射后2小时,侧脑室(icv)注射PF-3845 1 μg/只,LPS注射后4小时MWT升至1.7 g(较模型组升高325%),证实其镇痛效应由CNS介导。 4. 作用机制:10 mg/kg ip PF-3845 给药后4小时,小鼠脊髓中花生四烯酸乙醇胺(AEA,FAAH底物及内源性大麻素)浓度升高3.2倍,证实其在体内可有效抑制FAAH[1][4] |
| 酶活实验 |
重组人FAAH活性检测:
反应体系(200 μL)包含50 mM Tris-HCl(pH 8.0)、1 mM EDTA、0.1%牛血清白蛋白(BSA)、重组人FAAH(10 ng)、[3H]-花生四烯酸乙醇胺([3H]-AEA,20 nM,比活度60 Ci/mmol,FAAH底物)及浓度范围为0.01 nM~100 nM的PF-3845 。37°C孵育30分钟后,加入50 μL 1 M盐酸终止反应。水解产物([3H]-花生四烯酸)用500 μL氯仿:甲醇(2:1,v/v)萃取,1000×g离心5分钟后,取200 μL有机相加入闪烁瓶,通过液体闪烁计数器检测放射性。与不含PF-3845 的对照组比较计算抑制率,通过双倒数作图法(底物浓度设为10 nM~80 nM [3H]-AEA)测定Ki值[3] - FAAH选择性检测: 采用上述相同实验方案,检测10 μM PF-3845 对其他脂质水解酶的抑制作用,以评估选择性: - 单酰基甘油脂肪酶(MAGL):底物=[3H]-2-花生四烯酰甘油([3H]-2-AG,20 nM); - α/β水解酶结构域蛋白6(ABHD6):底物=[3H]-2-AG(20 nM); - 丁酰胆碱酯酶(BChE):底物=[3H]-丁酰胆碱([3H]-BuCh,20 nM)。 孵育并萃取产物后,检测放射性并计算抑制率,证实无显著脱靶抑制[3] |
| 细胞实验 |
Colo-205细胞活力检测(MTT法):
人结肠腺癌细胞Colo-205以5×103细胞/孔接种于96孔板,37°C、5% CO2培养24小时。加入浓度为5 μM、10 μM、25 μM、50 μM、100 μM的PF-3845 ,继续培养48小时。弃去培养基后,每孔加入100 μL MTT溶液(5 mg/mL PBS配制),37°C孵育4小时。弃去MTT溶液,加入150 μL二甲基亚砜(DMSO)溶解甲瓒结晶,酶标仪测定570 nm处吸光度。细胞活力按(处理组吸光度/对照组吸光度)×100%计算,拟合曲线得到CC50值[2] - Colo-205细胞迁移检测(划痕实验): Colo-205细胞以2×105细胞/孔接种于6孔板,培养至融合度达90%。用无菌200 μL枪头在细胞单层上划一条直线划痕,更换为含PF-3845 (25 μM、50 μM)或溶剂(0.1% DMSO)的新鲜培养基。分别在0小时和24小时用倒置显微镜拍摄划痕图像,ImageJ软件测量迁移距离,迁移抑制率按[1-(处理组迁移距离/对照组迁移距离)]×100%计算[2] - Colo-205细胞侵袭检测(Transwell法): Transwell小室(8 μm孔径)上室用Matrigel(无血清培养基1:8稀释)包被,37°C孵育1小时形成凝胶。Colo-205细胞(5×104细胞/孔)悬浮于含PF-3845 (25 μM、50 μM)的无血清培养基中并加入上室,下室加入含10%胎牛血清(FBS)的培养基。37°C孵育48小时后,用棉签擦去上室未侵袭细胞,下室侵袭细胞用4%多聚甲醛固定15分钟、0.1%结晶紫染色10分钟,倒置显微镜下(每孔随机5个视野)计数侵袭细胞数。侵袭抑制率按[1-(处理组侵袭细胞数/对照组侵袭细胞数)]×100%计算[2] - Caspase-3活性检测: Colo-205细胞(1×106细胞/孔)用50 μM PF-3845 处理48小时后收集,用caspase裂解缓冲液(含50 mM HEPES、10 mM EDTA、0.1% CHAPS、10 mM DTT)冰上裂解30分钟。12,000×g、4°C离心15分钟,收集上清液,BCA法测定蛋白浓度。反应体系(100 μL)包含50 μg蛋白、50 mM HEPES(pH 7.4)及20 μM caspase-3底物(Ac-DEVD-AMC),37°C孵育1小时后,荧光分光光度计(激发波长380 nm,发射波长460 nm)检测荧光强度。Caspase-3活性以每微克蛋白的相对荧光单位(RFU)表示[2] |
| 动物实验 |
动物/疾病模型:雄性SD(Sprague-Dawley)大鼠(200-250g)注射CFA[1]
剂量:1、3、10、30 mg/kg 给药途径:口服 实验结果:呈剂量依赖性地抑制机械性痛觉过敏,最小有效剂量(MED)为3 mg/kg。 LPS诱导的触觉痛觉过敏小鼠模型: 1.动物:雄性C57BL/6小鼠(8-10周龄,20-25 g)随机分为5组(每组n=8): -正常对照组(不注射LPS,腹腔注射溶剂); -LPS模型组(腹腔注射LPS 10 mg/kg,腹腔注射溶剂); - PF-3845 3 mg/kg 腹腔注射组(LPS 10 mg/kg 腹腔注射,PF-3845 3 mg/kg 腹腔注射); - PF-3845 10 mg/kg 腹腔注射组(LPS 10 mg/kg 腹腔注射,PF-3845 10 mg/kg 腹腔注射); - PF-3845 1 μg 脑室内注射组(LPS 10 mg/kg 腹腔注射,PF-3845 1 μg 脑室内注射)。 2. 药物配制:将 PF-3845 溶于二甲基亚砜 (DMSO) 中,并用 0.9% 生理盐水稀释至最终 DMSO 浓度 ≤5%(腹腔注射组溶剂:5% DMSO 生理盐水;脑室内注射组溶剂:含 5% DMSO 的人工脑脊液 (aCSF))。 3. 给药方案:LPS 为在0小时时腹腔注射(ip)。在LPS注射后2小时,腹腔或脑室内注射(icv)PF-3845。脑室内注射使用立体定位仪进行(坐标:AP = -0.2 mm,ML = 0.5 mm,DV = -2.0 mm,以bregma为参考点)。 4. 行为学测试:使用von Frey纤维丝(0.02 g–4.0 g)通过上下法测量50%机械缩足阈值(MWT),分别在0小时(LPS注射前)、2小时(PF-3845注射前)和LPS注射后4小时进行。每只小鼠测试5次,并计算平均MWT值。 5. 脊髓AEA测量:在PF-3845注射后4小时,处死小鼠,并解剖腰段脊髓。将脊髓组织在冰冷的甲醇中匀浆,于 4°C 下以 15,000×g 离心 10 分钟。取上清液,采用液相色谱-串联质谱法 (LC-MS/MS) 分析 AEA 浓度 [1][4] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
体外细胞毒性:在Colo-205细胞中,PF-3845的半数最大细胞毒性浓度(CC50)为25.3 μM。浓度≤10 μM时,未观察到显著的细胞毒性(细胞存活率>85%,与对照组相比)[2]
- 体内安全性:在接受PF-3845治疗的小鼠中(腹腔注射剂量高达10 mg/kg或脑室内注射剂量为1 μg,持续4小时),未观察到以下显著变化: - 体重(与对照组相比无显著差异); - 血清肝功能指标(ALT、AST)和肾功能指标(BUN、肌酐); - 一般行为(无镇静、共济失调或嗜睡迹象)[1][4] |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
N-(3-吡啶基)-4-[[3-[[5-(三氟甲基)-2-吡啶基]氧基]苯基]甲基]-1-哌啶甲酰胺属于哌啶类化合物。
PF-3845 是一种合成的、高选择性的、可逆的脂肪酸酰胺水解酶 (FAAH) 抑制剂。FAAH 是一种关键酶,可水解内源性大麻素(例如,花生四烯酸乙醇胺、花生四烯酸乙醇胺)和脂肪酸酰胺。PF-3845 通过抑制 FAAH 来提高内源性大麻素水平,从而发挥镇痛、抗炎和抗肿瘤作用 [3]。 - 在脂多糖 (LPS) 诱导的触觉异常性疼痛模型中,脑室内注射 PF-3845 的镇痛作用证实其作用是通过中枢神经系统 (CNS) 介导的,因为脊髓 AEA 水平的升高与触觉敏感性的改善直接相关。这支持了PF-3845治疗中枢神经系统介导的疼痛疾病的潜力[1][4] - PF-3845的抗结肠癌作用与双重机制相关:(1) 通过调节Bax/Bcl-2平衡和激活caspase-3诱导细胞凋亡;(2) 通过降低MMP-2/-9活性抑制细胞迁移和侵袭。这表明PF-3845可能是一种与传统化疗联合用于结肠癌治疗的候选药物[2] - PF-3845对FAAH具有优异的选择性,优于其他脂质水解酶(MAGL、ABHD6)和胆碱酯酶,从而最大限度地减少了脱靶副作用。其高效力(Ki = 0.45 nM)使其能够在低浓度下有效抑制FAAH,进一步降低潜在毒性[3] |
| 分子式 |
C24H23F3N4O2
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|---|---|---|
| 分子量 |
456.46
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| 精确质量 |
456.177
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| CAS号 |
1196109-52-0
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| 相关CAS号 |
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| PubChem CID |
25154867
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 密度 |
1.3±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
623.6±55.0 °C at 760 mmHg
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| 闪点 |
330.9±31.5 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±1.8 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.595
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| LogP |
3.72
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| tPSA |
67.35
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
7
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| 可旋转键数目(RBC) |
5
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| 重原子数目 |
33
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| 分子复杂度/Complexity |
627
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| InChi Key |
NBOJHRYUGLRASX-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C24H23F3N4O2/c25-24(26,27)19-6-7-22(29-15-19)33-21-5-1-3-18(14-21)13-17-8-11-31(12-9-17)23(32)30-20-4-2-10-28-16-20/h1-7,10,14-17H,8-9,11-13H2,(H,30,32)
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| 化学名 |
N-pyridin-3-yl-4-[[3-[5-(trifluoromethyl)pyridin-2-yl]oxyphenyl]methyl]piperidine-1-carboxamide
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.48 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中,混匀;然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.48 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。 例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中,混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备(4°C,1 周):将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中,得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.48 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。 配方 4 中的溶解度: 30% propylene glycol, 5% Tween 80, 65% D5W: 15mg/mL 1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL; 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用! 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.1908 mL | 10.9539 mL | 21.9077 mL | |
| 5 mM | 0.4382 mL | 2.1908 mL | 4.3815 mL | |
| 10 mM | 0.2191 mL | 1.0954 mL | 2.1908 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);
4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度: mg/mL;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。