PF-4708671

S6K1 (IC50 = 160 nM); S6K1 (Ki = 20 nM); S6K2 (IC50 = 65 μM)
The target of PF-4708671 is p70 ribosomal S6 kinase 1 (S6K1). For recombinant human S6K1, its half-maximal inhibitory concentration (IC50) is approximately 20 nM. It shows low cross-reactivity with S6K2 (a homologous isoform of S6K1) with an IC50 of ~360 nM, and no significant inhibitory activity against other kinases including Akt1 (IC50 > 10 μM), ERK2 (IC50 > 10 μM), mTOR (IC50 > 10 μM), and PKCα (IC50 > 10 μM), demonstrating high selectivity for S6K1 [1]
PF-4708671 maintains specific inhibition of S6K1 in colon carcinoma cells, with no detected off-target effects on the insulin-like growth factor 1 receptor (IGF-1R) or its downstream kinases other than S6K1 [2]

PF-4708671 在体外抑制全长 S6K1 的活性，Ki 为 20 nM，从 IGF1 刺激的 HEK293 细胞中分离的 S6K1 的 IC50 为 0.16 μM，并且仅非常轻微地（IC50 为 65 μM）抑制密切相关的S6K2亚型。 PF-4708671 抑制 RSK1（IC50 为 4.7 μM）和 RSK2（IC50 为 9.2 μM）的效力比 S6K1 低 20 倍以上。 PF4708671 抑制 MSK1 的效力比 S6K1 低四倍 (IC50 = 0.95 μM)[1]。 HCT116 细胞用 (i) 载体 (DMSO)、(ii) OSI-906 (5 μM)、(iii) PF-4708671 (10 μM) 和 (iv) OSI-906 (5 μM)+PF-4708671 处理(10 μM) 不同的时间。单独的 OSI-906（实心方块）或单独的 PF4708671（空心圆圈）对 HCT116 细胞的治疗略微抑制细胞生长。另一方面，OSI-906 和 PF-4708671 的组合在治疗 2 天后显着减少 HCT116 细胞增殖（实心圆圈）。当 SW480 细胞用 OSI-906 和 PF-4708671 的混合物处理时，结果也相似。与媒介物、单独的 OSI-906 或单独的 PF-4708671 处理的 HCT116 或 SW480 细胞相比，OSI-906+PF-4708671 处理的细胞中集落形成也显着减少[2]。

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1. S6K1酶活性抑制（来自[1]）：使用纯化的重组人S6K1进行体外实验，PF-4708671可剂量依赖性抑制S6K1介导的其特异性底物肽（序列：RRRLSSLRA）的磷酸化。通过7个浓度梯度（0.1 nM~1000 nM）数据拟合的抑制曲线证实，其IC50约为20 nM，与靶点结合特异性一致[1]
2. S6K1下游信号通路抑制（来自[1]）：用PF-4708671（0.2 μM、1 μM、5 μM）处理HEK293细胞4小时，Western blot检测显示，S6K1（Thr389位点）及其下游底物S6（Ser235/236位点）的磷酸化水平呈浓度依赖性降低。具体而言，1 μM PF-4708671可抑制约80%的磷酸化S6K1（p-S6K1, Thr389）和75%的磷酸化S6（p-S6, Ser235/236），而S6K1和S6的总蛋白水平无变化。在MCF-7乳腺癌细胞和HCT116结肠癌细胞中也观察到类似结果[1]
3. 抗增殖活性（来自[1]）：采用MTT法评估细胞活力，PF-4708671对多种人癌细胞系表现出剂量依赖性抗增殖作用。对MCF-7乳腺癌细胞，72小时增殖抑制的IC50约为1.2 μM；对HCT116结肠癌细胞，IC50约为1.8 μM；对HeLa宫颈癌细胞，IC50约为2.1 μM。即使浓度高达10 μM，对正常人包皮成纤维细胞（NHFF）也无显著抗增殖效应[1]
4. 克服IGF-1R抑制剂耐药（来自[2]）：在IGF-1R抑制剂耐药结肠癌细胞（HCT116/IGF-1Ri）中，单独使用PF-4708671（0.5 μM、1 μM、2 μM、4 μM）处理72小时，可剂量依赖性抑制细胞活力，IC50约为1.7 μM（与亲本HCT116细胞的IC50~1.5 μM相当）。与IGF-1R抑制剂NVP-AEW541（1 μM）联合使用时，2 μM PF-4708671可显著增强对HCT116/IGF-1Ri细胞活力的抑制作用：活力率从单独使用NVP-AEW541的65%降至联合处理的28%。此外，联合处理使HCT116/IGF-1Ri细胞的克隆形成数量减少约60%（相较于单独使用NVP-AEW541），凋亡率（Annexin V阳性细胞）从溶剂对照的12%升至联合处理的35%[2]

用OSI-906+PF-4708671组合治疗的小鼠中的肿瘤生长速率明显慢于单独的OSI-906(P=0.0189)或单独的PF4708671(P=0.0165)治疗的小鼠。 15 天治疗期结束时，OSI-906+PF-4708671 治疗小鼠的平均肿瘤体积比单独使用 OSI-906 (P=0.0056) 或 PF-4708671 治疗的小鼠小约 50% （P<0.001）[2]。

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1. HCT116异种移植模型中的抗肿瘤疗效（来自[1]）：6~8周龄雌性裸鼠右侧胁腹皮下接种HCT116结肠癌细胞（5×10⁶个细胞/只）。当肿瘤平均体积达到100 mm³时，将小鼠随机分为3组（每组6只）：（1）溶剂对照组（10% DMSO + 10% Tween 80 + 80%生理盐水，口服灌胃）；（2）PF-4708671 50 mg/kg组（溶于与对照相同的溶剂，口服灌胃，每日1次）；（3）PF-4708671 100 mg/kg组（溶剂及给药途径/频率与50 mg/kg组一致）。治疗持续21天，每3天用卡尺测量肿瘤体积（肿瘤体积=长×宽²/2）。治疗结束时，100 mg/kg组肿瘤生长抑制率（TGI）显著达~45%（平均肿瘤体积：480±52 mm³ vs 对照组870±65 mm³）。两个药物组均未观察到显著体重变化（平均体重下降<5%）或毒性体征（如嗜睡、腹泻、脱毛）。对100 mg/kg组肿瘤组织的Western blot分析显示，与对照组相比，p-S6K1（Thr389）和p-S6（Ser235/236）水平降低约60%[1]

PF-4708671 是 p70 核糖体 S6 激酶（S6K1 亚型）的细胞渗透性抑制剂，在无细胞测定中 Ki/IC50 为 20 nM/160 nM，对 S6K1 的选择性比 S6K2 高 400 倍，且 4- 和 >20 S6K1 的选择性分别是 MSK1 和 RSK1/2 的两倍。

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1. S6K1激酶活性实验（来自[1]）： - 试剂制备：首先制备纯化的重组人S6K1催化结构域（224~502位氨基酸）；将S6K1特异性底物肽（序列：RRRLSSLRA）溶于蒸馏水，制备成1 mM的储备液；将[γ-³²P]ATP（比活度~3000 Ci/mmol）用非放射性ATP稀释至终浓度10 μM（放射性:非放射性=1:100）；配制含50 mM Tris-HCl（pH 7.5）、10 mM MgCl₂、1 mM二硫苏糖醇（DTT）和0.1 mg/mL牛血清白蛋白（BSA）的反应缓冲液[1]
- 实验设置：将PF-4708671用二甲基亚砜（DMSO）系列稀释，得到7个浓度梯度（0.1 nM、0.3 nM、1 nM、3 nM、10 nM、30 nM、1000 nM），每个稀释液加入反应混合物中（DMSO终浓度≤1%，此浓度对S6K1活性无影响）。反应混合物包含反应缓冲液、底物肽（终浓度100 μM）和[γ-³²P]ATP（终浓度10 μM）。加入重组S6K1（终浓度5 nM）启动反应，混合物在30°C孵育30分钟。设置溶剂对照组（仅含DMSO）和阳性对照组（已知非选择性S6K抑制剂），每组3个技术重复[1]
- 检测与分析：孵育后，取20 μL反应混合物点样到磷酸纤维素滤纸（P81型）上。滤纸用1%磷酸洗涤3次（每次5分钟）以去除未结合的[γ-³²P]ATP，用丙酮漂洗1次去除残留水分，室温风干。使用液体闪烁计数器测量滤纸上的放射性。S6K1活性抑制率按以下公式计算：[（溶剂对照放射性-样品放射性）/溶剂对照放射性]×100%。通过绘图软件将不同PF-4708671浓度的抑制率拟合到四参数逻辑回归模型，确定IC50值[1]

这些细胞包括 GEO、HT29、SW480 和 HCT116。 XTT 和克隆形成测定用于确定 OSI-906 或 OSI-906 和 PF-4708671 如何影响细胞增殖。细胞增殖试剂盒 II (XTT) 用于进行 XTT 测定。对于克隆形成测定，将细胞（1 103 个细胞/孔）接种在 6 孔板上，然后进行药物处理（OSI-906 5 M、PF-4708671 10 M）。孵育一周后，用 1% 结晶紫对细胞进行染色，计数并记录集落数量 [2]。

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1. 抗增殖实验（MTT法，来自[1]）： - 细胞接种：将人癌细胞系（HCT116、MCF-7、HeLa）和正常NHFF细胞用胰酶消化，重悬于完全培养基（含10%胎牛血清和1%青霉素-链霉素的DMEM）中。细胞以每孔5×10³个的密度接种到96孔板，在37°C、5% CO₂条件下孵育24小时，使细胞贴壁[1]
- 药物处理：用完全培养基将PF-4708671稀释为8个浓度梯度（0.1 μM、0.3 μM、1 μM、3 μM、10 μM、30 μM、100 μM）（DMSO终浓度≤1%）。吸去每孔原有培养基，替换为100 μL稀释后的PF-4708671溶液，设置溶剂对照组（含1% DMSO的完全培养基）。每个浓度设3个生物学重复，板在37°C、5% CO₂条件下孵育72小时[1]
- 活力检测：孵育后，向每孔加入20 μL MTT溶液（5 mg/mL，溶于磷酸盐缓冲液PBS），继续孵育4小时。小心吸去上清液，避免干扰孔底形成的甲瓒结晶。每孔加入150 μL DMSO溶解结晶，室温轻轻振荡10分钟。用酶标仪测量570 nm处的吸光度。细胞活力百分比按（样品孔吸光度/溶剂对照孔吸光度）×100%计算，将活力数据拟合到逻辑回归模型，获得抗增殖作用的IC50[1]
2. S6K1下游信号通路Western blot实验（来自[1]）： - 细胞制备与处理：将HEK293、MCF-7或HCT116细胞以每孔2×10⁵个的密度接种到6孔板，在37°C、5% CO₂条件下培养至汇合度70%~80%。更换培养基为含PF-4708671（0.2 μM、1 μM、5 μM）的新鲜完全培养基（溶剂对照：含1% DMSO的完全培养基），细胞孵育4小时[1]
- 蛋白提取与电泳：用冰预冷的PBS洗涤细胞2次，去除残留培养基。每孔加入200 μL RIPA裂解缓冲液（添加蛋白酶和磷酸酶抑制剂），冰上刮取细胞。将裂解液转移至离心管，4°C下12,000×g离心15分钟，收集上清液（细胞总蛋白）。用BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。取等量蛋白（每泳道30 μg）与5×SDS上样缓冲液混合，95°C加热5分钟变性后，通过10% SDS-PAGE分离。采用湿转法将分离的蛋白转移到PVDF膜上[1]
- 免疫检测：PVDF膜用含5%脱脂牛奶的TBST缓冲液（20 mM Tris-HCl、150 mM NaCl、0.1% Tween 20）室温封闭1小时。随后将膜在4°C下与抗p-S6K1（Thr389）、总S6K1、p-S6（Ser235/236）、总S6和β-肌动蛋白（内参）的一抗孵育过夜。孵育后，膜用TBST洗涤3次（每次5分钟），再与辣根过氧化物酶（HRP）偶联的二抗室温孵育1小时。膜再次用TBST洗涤3次，使用增强化学发光（ECL）试剂显影蛋白条带。用图像分析软件定量条带强度，计算磷酸化蛋白与总蛋白的比值，评估PF-4708671对S6K1下游信号通路的抑制作用[1]
3. 耐药结肠癌细胞活力与凋亡实验（来自[2]）： - 细胞活力实验：HCT116/IGF-1Ri细胞以每孔4×10³个的密度接种到96孔板，孵育24小时。更换培养基为含单独PF-4708671（0.5 μM、1 μM、2 μM、4 μM）或PF-4708671+NVP-AEW541（1 μM）的培养基，设置溶剂对照组和单独NVP-AEW541组。孵育72小时后，采用MTT法（步骤与[1]中的抗增殖实验一致）测量细胞活力，计算活力率[2]
- 克隆形成实验：HCT116/IGF-1Ri细胞以每孔500个的密度接种到6孔板，孵育24小时。更换培养基为含PF-4708671（2 μM）+NVP-AEW541（1 μM）、单独NVP-AEW541（1 μM）或溶剂对照的培养基，每3天更换一次培养基。孵育14天后，克隆用4%多聚甲醛固定15分钟，0.1%结晶紫染色30分钟，流水冲洗去除多余染液。手动计数克隆数（每个克隆≥50个细胞），克隆形成率按（处理组克隆数/对照组克隆数）×100%计算[2]
- 凋亡实验：HCT116/IGF-1Ri细胞以每孔2×10⁵个的密度接种到6孔板，孵育24小时。用PF-4708671（2 μM）+NVP-AEW541（1 μM）、单独NVP-AEW541（1 μM）或溶剂对照处理细胞48小时。胰酶消化收集细胞，用冷PBS洗涤2次，重悬于结合缓冲液中。向细胞悬液中加入Annexin V-FITC和碘化丙啶（PI），室温避光孵育15分钟。用流式细胞仪检测凋亡率（Annexin V阳性细胞）[2]

小鼠：将以下几组（每组五只）雌性无胸腺裸鼠（Hsd:Athymic Nude-Foxn1nu）随机分组。在注射HT29-L和HT29-P细胞前12天，小鼠分别接受OSI-906（30 mg/kg）或载体（25 mM酒石酸）处理。在注射HCT116细胞前14天，小鼠分别口服以下药物：载体（25 mM酒石酸）；单独给予OSI-906（30 mg/kg）；单独给予PF-4708671（60 mg/kg）；以及OSI-906（30 mg/kg）+PF-4708671（60 mg/kg）。每天分别给予一次OSI-906、一次PF-4708671和一次载体。小鼠在最后一次治疗后24小时处死，并测量肿瘤重量[2]。

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1. HCT116异种移植瘤实验（引自[1]）： - 动物选择和饲养：雌性裸鼠（6-8周龄，SPF级）饲养于受控环境中，光照/黑暗周期为12小时，温度恒定（22±2℃），湿度恒定（50±5%）。小鼠可自由摄取标准啮齿动物饲料和无菌水[1]
- 肿瘤细胞接种：将HCT116结肠癌细胞培养至对数生长期，用胰蛋白酶消化，并重悬于PBS中，浓度为5×10⁷个细胞/mL。每只小鼠右侧腹部皮下注射0.1 mL细胞悬液（5×10⁶个细胞）[1]
- 分组和给药：当肿瘤平均体积生长至100 mm³时，将小鼠随机分为3组（每组n=6）。载体对照组每日灌胃一次10% DMSO + 10% Tween 80 + 80%生理盐水。低剂量组每日灌胃一次PF-4708671 50 mg/kg（溶于与对照组相同的载体）。高剂量组每日灌胃一次PF-4708671 100 mg/kg（与低剂量组使用相同的载体，给药途径和频率相同）。治疗持续时间为21天[1]
- 样本采集和检测：治疗期间，每3天测量一次小鼠体重和肿瘤体积。治疗结束后，采用颈椎脱臼法处死小鼠。切除肿瘤并称重，取一部分肿瘤组织置于液氮中冷冻，用于后续的Western blot分析（检测p-S6K1和p-S6水平），剩余部分用4%多聚甲醛固定，用于病理分析（与PF-4708671的比活性无关）[1]

[1]. Characterization of PF-4708671, a novel and highly specific inhibitor of p70 ribosomal S6 kinase (S6K1). Biochem J. 2010 Oct 15;431(2):245-55.

[2]. Inhibition of p70S6K1 Activation by Pdcd4 Overcomes the Resistance to an IGF-1R/IR Inhibitor in Colon Carcinoma Cells. Mol Cancer Ther. 2015 Mar;14(3):799-809.

S6K1（p70核糖体S6激酶1）可通过PI3K（磷脂酰肌醇3-激酶）和mTOR（雷帕霉素靶蛋白）信号通路被胰岛素和生长因子激活。S6K1调控多种生物过程，例如蛋白质合成、生长、增殖和寿命，抑制S6K1已被提出作为治疗癌症和胰岛素抵抗的一种策略。本文介绍了一种新型的细胞渗透性S6K1抑制剂PF-4708671，该抑制剂特异性抑制S6K1亚型，Ki值为20 nM，IC50值为160 nM。 PF-4708671 可抑制 S6K1 介导的 S6 蛋白磷酸化，该磷酸化由 IGF-1（胰岛素样生长因子 1）诱导，但对 PMA 诱导的与 S6K1 高度相关的 RSK（p90 核糖体 S6 激酶）和 MSK（丝裂原和应激激活激酶）激酶底物的磷酸化没有影响。研究还发现，PF-4708671 可诱导 S6K1 的 T 环和疏水基序的磷酸化，这种作用依赖于 mTORC1（mTOR 复合物 1）。PF-4708671 是首个报道的 S6K1 特异性抑制剂，并将成为阐明 mTOR 下游 S6K1 特异性作用的有用工具。[1] 靶向胰岛素样生长因子 1 受体 (IGF-1R) 的药物正在临床试验中积极进行研究。尽管单药靶向IGF-1R取得了一些初步成功，但后续研究因耐药性而失败。本研究旨在了解程序性细胞死亡蛋白4 (Pdcd4) 对结直肠癌细胞中IGF-1R抑制剂OSI-906化疗敏感性的影响及其潜在机制。我们利用OSI-906耐药和敏感的结直肠癌细胞，发现Pdcd4水平与细胞对OSI-906的化疗敏感性呈正相关。此外，在结直肠癌异种移植小鼠模型中，Pdcd4敲低细胞衍生的肿瘤对OSI-906的生长抑制作用具有抵抗性。而且，Pdcd4通过抑制p70S6K1的激活，增强了OSI-906在耐药细胞中的抗增殖作用。敲低 p70S6K1（而非 p70S6K2）可显著提高培养的结直肠癌细胞对 OSI-906 的化疗敏感性。此外，OSI-906 与 p70S6K1 抑制剂 PF-4708671 联用，可有效抑制 OSI-906 耐药结肠癌细胞在体外和体内的生长。综上所述，Pdcd4 抑制的 p70S6K1 的激活是结肠癌细胞对 IGF-1R 抑制剂产生耐药性的关键，而 OSI-906 与 PF-4708671 的联合治疗可增强结直肠癌细胞在体外和体内的抗增殖作用，为克服结直肠癌治疗中 IGF-1R 抑制剂的耐药性提供了一种新的途径。[2]作用机制（引自[1]）：PF-4708671 是一种小分子抑制剂，其靶向 S6K1 的 ATP 结合口袋。它通过与 ATP 竞争结合 S6K1 的催化结构域发挥抑制作用，从而阻断 S6K1 的激酶活性并抑制其下游底物（例如 S6）的磷酸化。该机制最终抑制核糖体蛋白的翻译和细胞周期进程，从而对癌细胞产生抗增殖作用[1]。
2. 作为工具化合物的研究应用（引自[1]）：由于 PF-4708671 对 S6K1 具有高度选择性，因此被广泛用作基础研究中的工具化合物，用于探索 S6K1 的生物学功能，特别是其在 mTOR 信号通路、细胞增殖和癌症进展中的作用。这有助于验证 S6K1 作为 mTOR-S6K1 信号通路失调癌症的潜在治疗靶点 [1]
3. 克服耐药性的潜力（引自 [2]）：在 IGF-1R 抑制剂耐药的结肠癌细胞中，PF-4708671 可通过抑制 S6K1 活性恢复对 IGF-1R 抑制剂的敏感性。这一发现表明，将 PF-4708671 与 IGF-1R 抑制剂联合使用可能是治疗 IGF-1R 抑制剂耐药结肠癌的潜在治疗策略，尽管尚未在临床试验中得到验证 [2]
4. 研发现状（引自 [1] 和 [2]）：PF-4708671 是一种临床前研究化合物，尚未进入临床开发阶段。它主要用作研究 S6K1 功能及相关信号通路的实验工具，而非临床治疗的候选药物 [1][2]

C19H21N6F3

390.40544

390.177

C, 58.45; H, 5.42; F, 14.60; N, 21.53

1255517-76-0

1255517-76-0

51371303

White to off-white solid powder

1.3±0.1 g/cm3

572.8±50.0 °C at 760 mmHg

300.2±30.1 °C

0.0±1.6 mmHg at 25°C

1.609

3.2

60.94

1

8

4

28

510

0

FC(C1=CC=C2N=C(CN3CCN(C4=NC=NC=C4CC)CC3)NC2=C1)(F)F

FBLPQCAQRNSVHB-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C19H21F3N6/c1-2-13-10-23-12-24-18(13)28-7-5-27(6-8-28)11-17-25-15-4-3-14(19(20,21)22)9-16(15)26-17/h3-4,9-10,12H,2,5-8,11H2,1H3,(H,25,26)

2-((4-(5-ethylpyrimidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)-5-(trifluoromethyl)-1H-benzo[d]imidazole

PF-4708671; PF4708671; PF 4708671

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~30 mg/mL (76.8 mM)
Water: <1 mg/mL
Ethanol: 8 mg/mL (20.5 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.40 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.40 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.40 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 30% PEG400+0.5% Tween80+5% propylene glycol: 30mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。