FAK (IC50 = 1.5 nM); Pyk2 (IC50 = 13 nM); CDK2 (IC50 = 30 nM);CDK3 (IC50 = 47 nM); CDK1 (IC50 = 58 nM); CDK7 (IC50 = 97 nM); FLT3 (IC50 = 97 nM)

在重组酶测定中，PF-562271 (VS-6062) 被证明是 CDK2/E、CDK5/p35、CDK1/B 和 CDK3/E 的 30 至 120 nM 抑制剂。在评估 CDK 功能的细胞测定中，必须暴露 3.3 μM PF-562271 48 小时才能改变细胞周期进程。 PF-562271 的 IC50 为 5 nM，在基于诱导细胞的检测磷酸-FAK 的检测中显示出效力。 PF-562271（FAK 和富含脯氨酸的酪氨酸激酶 2 (PYK2)（FAK 相关家族的成员）的选择性抑制剂）对尤文肉瘤细胞系的细胞生长和集落形成起作用。使用 2 倍连续稀释，用不同浓度的 PF-562271 处理 7 个细胞系五天。治疗三天后，PF-562271 疗法降低了所有细胞系的细胞活力，平均 IC50 为 2.4 μM。两种最敏感的细胞系是 TC32 和 A673，IC50 值分别为 2.1 和 1.7 μM[2]。

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癌症细胞的特征是能够以不依赖于凤尾鱼的方式生长。非受体酪氨酸激酶，粘着斑激酶（FAK）的活性被认为是导致这种表型的原因。FAK定位于局灶性粘附斑块，并作为其他粘附分子的支架和信号蛋白发挥作用。最近的研究表明，FAK表达和磷酸化状态的增加与侵袭性人类肿瘤的侵袭表型之间存在很强的相关性PF-562271是一种强效、ATP竞争性、可逆的FAK和Pyk2催化活性抑制剂，IC（50）分别为1.5和14 nmol/L。此外，PF-562271在基于诱导细胞的检测磷酸化FAK的方法中显示出强烈的抑制作用，IC（50）为5 nmol/L。PF-562261对多种激酶进行了评估，对一长串非靶激酶显示出>100倍的选择性。[1]

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在这项研究中，我们发现FAK在原发性尤文肉瘤肿瘤样本中高度磷酸化，短发夹RNA下调FAK和用FAK选择性激酶抑制剂PF-562271治疗会损害尤文肉瘤细胞系的生长和集落形成。此外，PF-562271处理尤因肉瘤细胞系诱导细胞凋亡，并导致AKT/mTOR和CAS活性下调。最后，我们发现FAK的小分子抑制可以减轻尤文肉瘤在体内的生长。FAK抑制剂目前正处于成人恶性肿瘤的早期临床试验阶段，这些发现可能与尤文肉瘤患者有直接相关性。[2]

对荷瘤动物口服治疗后，PF-562271 以剂量依赖性方式抑制体内 FAK 磷酸化（计算得出的 EC50 为 93 ng/mL，总计）[1]。治疗两周后，给予 PF-562271 的大鼠表现出肿瘤发育减少和骨愈合迹象，如肿瘤受损部位新骨（皮质骨和松质骨）的沉积所示[3]。

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PF-562271以剂量依赖的方式抑制体内FAK磷酸化（计算EC（50）为93ng/mL，总），口服给药后给荷瘤小鼠。单次口服剂量为33mg/kg时，FAK磷酸化的体内抑制（>50%）持续>4小时。在多种人皮下异种移植物模型中观察到抗肿瘤疗效和消退。在任何体内实验中都没有观察到体重减轻、发病率或死亡率。肿瘤生长抑制呈剂量和药物暴露依赖性。综上所述，这些数据表明，使用ATP竞争性FAK小分子抑制剂抑制激酶可以降低体内的磷酸化状态，从而产生强大的抗肿瘤活性。[1]

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研究人员使用2种尤文肉瘤异种移植物模型测试了用PF-562271治疗对FAK活性的抑制是否可以抑制已建立肿瘤的进展。NCr裸小鼠和NSG小鼠分别皮下注射A673和TC32细胞，并使其产生可测量的肿瘤。然后用载体或PF-562271治疗动物，直至处死动物。与对照组相比，PF-562271治疗显著抑制了肿瘤生长，表明FAK活性有助于尤文肉瘤的肿瘤生长。[2]

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该化合物耐受性良好。两个化合物治疗组的骨钙素和松质骨参数均显示出显著且相似的增加。对带有肿瘤的胫骨的放射学评估显示，与用PF-562271治疗的大鼠相比，未治疗大鼠的肿瘤扩张，肿瘤生长和骨愈合迹象减少。抗酒石酸酸性磷酸酶和荧光原位杂交分析显示，肿瘤部位的大部分骨吸收是由大鼠来源的破骨细胞进行的。 结论：口服5mg/kg剂量的PF-562271抑制了胫骨内肿瘤的生长和局部扩散，并恢复了肿瘤引起的骨丢失。PF-562271抑制肿瘤生长和安全增加骨形成的独特能力可能是许多癌症骨转移和癌症相关骨质疏松症患者的有效治疗[3]。

重组激酶测定和酶动力学。[1]
之前已经描述了用于鉴定FAK抑制剂的所有体外试验（31）。简而言之，纯化的活化FAK激酶结构域（氨基酸410-689）与50μmol/L ATP和每孔10μg的Glu和Tyr的随机肽聚合物p（Glu/Tyr）在激酶缓冲液[50 mmol/L HEPES（pH 7.5）、125 mmol/L NaCl和48 mmol/L MgCl2]中反应15分钟。从1μmol/L的最高浓度开始，用1/2-Log浓度的连续稀释化合物挑战p（Glu/Tir）的磷酸化。每种浓度测试三次。用一般的抗磷酸酪氨酸（PY20）抗体检测p（Glu/Tyr）的磷酸化，然后用辣根过氧化物酶（HRP）偶联的山羊抗小鼠IgG抗体检测。加入HRP底物，在加入终止溶液（2mol/L H2SO4）后获得450nm处的吸光度读数。使用Hill Slope模型测定IC50值。宽激酶选择性分析在内部进行，并使用UpState Biotechnology提供的KinaseProfiler选择性筛选服务。2

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基于细胞的FAK磷酸化测定。[1]
在米非司酮的诱导调节下，生成了稳定的A431上皮癌克隆，以表达野生型V5标记的FAK蛋白或突变型FAKY397F V5标记的蛋白。稳定的克隆在DMEM 10%胎牛血清、750μg/mL Zeocin和50μg/mL潮霉素中生长。在运行FAK细胞ELISA的前一天，将A431 FAK野生型细胞接种在96孔U形底板的生长培养基中。在37°C、5%CO2下4至6小时后，用0.1 nmol/L米非司酮诱导FAK表达。包括非诱导控制。在室温下，将抗-V5或抗FAK涂层板在3%牛血清白蛋白（BSA）/0.5%吐温中封闭1小时。细胞在37°C、5%CO2下以1μmol/L的最高浓度用1/2-Log系列稀释液处理30分钟。在裂解缓冲液[50 mmol/L Tris-HCl（pH 7.4）、1%NP40、0.25%脱氧胆酸钠、150 mmol/L NaCl、1 mmol/L EDTA、1 mmol/L Na3VO4、1 mmol/L氟化钠和蛋白酶抑制剂]中制备用指定浓度化合物处理的细胞的裂解物，并将其转移到抗V5或抗FAK涂层板上，以捕获总诱导或总FAK蛋白。用抗磷酸特异性FAKY397检测自身磷酸化的FAKY397s，然后检测二级报告抗体。加入HRP底物，在450nmol/L下读取平板读数。使用Hill Slope模型测定IC50值。进行3-（4,5-二甲基噻唑-2-基）-2,5-二苯基溴化四氮唑测定以确定化合物的细胞毒性。

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高通量激酶活性分析[1]
如前所述，对6种尤文肉瘤细胞系（EWS502、TC71、TC32、A673、SKNEP和EW8）和293FT细胞进行了Luminex免疫夹心测定。简而言之，对每个细胞系的全细胞裂解物进行定量，并在4°C下将等浓度的蛋白质与87个经验证的抗体偶联的Luminex珠（探针）的混合物一起孵育过夜，这些珠对62种酪氨酸激酶具有特异性。然后洗涤混合物，在室温下用生物素标记的4G10抗体孵育30分钟，洗涤，然后在室温下与4μg/mL的SAPE孵育10分钟。将偶联物再洗涤2次，并在FlexMAP 3D 上用xPONENT软件（版本4.0；Luminez）进行分析，以确定中值荧光强度（MFI）。

体外小分子治疗[2]
将尤文肉瘤细胞铺在10cm培养皿中，使其粘附24小时，然后用PF-562271（FAK/PYK2抑制剂、PD0325901或达沙替尼（SRC、BCR/ABL、c-Kit抑制剂）处理。

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细胞活力[2]
使用CellTiter Glo发光细胞活力测定法测量ATP含量作为细胞数量的替代指标。使用FLUOstar Omega微孔板读数仪获得发光读数。对于小分子治疗的实验，将1.25×103个尤文氏肉瘤细胞接种在每个孔中，并用不同浓度进行处理。使用GraphPad Prism 5.0中的对数转换归一化数据，从治疗3天后获得的ATP测量值计算IC50值。细胞系也在6-cm培养皿中用化合物处理，胰蛋白酶处理，并使用台盼蓝排斥法通过光学显微镜计数。对于使用shRNA转导细胞的实验，在转导后第3天，每孔将1.25×103个细胞接种到384孔板中。在转导后第3、6和8天测量ATP含量。

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甲基纤维素基质中的菌落形成[2]
将约3.75×103个细胞溶解在1.5 mL甲基纤维素基质中，铺在6 cm网格板上，孵育至少10天。使用尼康倒置显微镜对100个正方形的菌落进行计数。

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流式细胞术[2]
使用ApoAlert Annexin V-FITC凋亡试剂盒通过流式细胞术鉴定经历凋亡的细胞。对于细胞内磷蛋白染色，使用BD Cytofix/Cytoperm试剂盒固定和渗透细胞，用藻红蛋白（PE）抗磷酸-S6染色，并通过流式细胞术进行分析
PF-562271-01是重组FAK和Pyk2激酶的强效ATP竞争性可逆抑制剂，IC50分别为1.5和14 nMPF-562271使用0.5%甲基纤维素配制用于口服给药。在给药的第一天，大鼠通过经口灌胃接受单剂量PF-562271（10mg/kg）。根据给药后1小时的暴露水平，剂量降至5mg/kg。从第二天开始，大鼠每天口服5mg/kg，持续28天。在肿瘤接种后2周开始给药，并且只有在射线照相证实肿瘤存在后才开始给药。在研究过程中证实了血清中受试化合物的存在[3]。

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\n体外 ELISA。 [1]
\n第1天，将1 × 10⁶个U87MG人胶质母细胞瘤细胞注射到雌性无胸腺小鼠体内。第9天，当肿瘤体积约为300 mm³时，小鼠接受化合物或赋形剂（5% Gelucire 44/14，溶于无菌水中；Gattefossé）灌胃给药。为了进行药代动力学/药效学（PK/PD）分析，在给药后指定时间点，分别从每只动物（每组每个时间点n > 4只小鼠）采集血液和肿瘤样本，分别置于肝素化真空采血管和液氮中。采集血液和肿瘤组织用于评估药物浓度以及肿瘤相关磷酸化FAK和总FAK的水平。采用反相高效液相色谱-质谱联用（MS/MS）法测定血浆中PF-562271的浓度。将肿瘤组织用1 mL裂解缓冲液（每200 mg肿瘤组织使用1 mL）进行匀浆[裂解缓冲液：50 mmol/L HEPES (pH 7.5)、150 mmol/L NaCl、1.5 mmol/L MgCl₂、1 mmol/L EDTA、1%甘油、1% Triton X-100、1.6 mmol/L Na₃VO₄、10 mmol/L NaF、25 mg/L大豆胰蛋白酶抑制剂、无EDTA的完全蛋白酶抑制剂片剂]，14,000 rpm离心5分钟，取上清液，置于干冰上分装至96孔聚丙烯板中。使用BSA蛋白测定试剂盒（Pierce）测定总蛋白浓度。将96孔山羊抗兔ReactiBind板（Pierce）用100 μL/孔的预冷封闭缓冲液（TBS，0.1% Tween 20，3% BSA）在室温下于振荡器上封闭60分钟。然后，用100 μL/孔的预冷封闭缓冲液替换封闭缓冲液，并加入0.5 μg抗pFAK397抗体，在室温下振荡孵育60分钟。用TBS-T缓冲液（TBS，0.1% Tween 20）洗涤后，加入肿瘤裂解液（500 μg总蛋白溶于不含蛋白酶抑制剂的裂解缓冲液中），并在室温下振荡孵育2小时。用抗FAK抗体检测捕获的pFAK，然后加入15 ng/孔的HRP标记的抗IgG抗体（溶于封闭缓冲液中），在室温下孵育30分钟。如上所述洗涤培养板，并使用上述方法，通过 3,3′,5,5′-四甲基联苯胺定量磷酸酪氨酸。所有磷酸化 FAK 抑制数据均通过比较 PF-562,271 处理的肿瘤与载体处理的肿瘤进行分析。\n

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\n有效浓度的预测。[1]
\n在每次给予 PF-562271 后的时间点采集血液和肿瘤样本，以测定血液药物浓度和 FAK 磷酸酪氨酸的减少情况。化合物浓度与 FAK 磷酸酪氨酸减少之间的关系已在药理学模型（荷瘤无胸腺小鼠）中，结合多个独立研究的汇总实验数据进行了探讨。在无胸腺小鼠中，FAK磷酸酪氨酸的减少与PF-562,271的血药浓度呈良好相关性，并符合简单的Emax药效学模型：\n

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\n肿瘤生长抑制研究。[1]
\n将处于指数生长期的细胞用胰蛋白酶消化，并重悬于无菌PBS中，然后皮下接种（每只小鼠1 × 10⁶个细胞，200 μL）至小鼠右侧腹部。将肿瘤体积约为150 mm³的小鼠分为两组，分别接受赋形剂（5% Gelucire）或PF-562271（用赋形剂稀释），并通过灌胃给药。每2天测量一次动物体重和肿瘤大小。使用游标卡尺测量肿瘤体积（mm³），并使用以下公式计算：长（mm）×宽（mm）×宽（mm）×0.5。生长抑制率的计算方法如前所述。所有肿瘤生长抑制实验中，每个剂量组使用 8 至 10 只小鼠。采用 Student's t 检验确定 P 值。\n

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\n肿瘤细胞凋亡和微血管密度的显微镜和免疫组织化学分析。[1]
\n荷 H125 肿瘤的小鼠用 PF-562271（12–50 mg/kg，每日两次，口服）治疗 3 天。微血管密度分析采用荷 U87MG 肿瘤的小鼠，并用 PF-562,271 的 C4 砜衍生物（50 mg/kg，每日一次，口服）治疗 3 天。治疗后，切除肿瘤并快速冷冻于 OCT 包埋剂中。切取7微米厚的组织切片，使用市售的末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端（TUNEL）试剂盒或大鼠抗鼠内皮细胞MECA32抗体进行免疫组织化学凋亡检测。组织切片用苏木精或甲基绿复染，并在蔡司Axiophot显微镜下以20倍放大倍率和网格进行观察。在每个肿瘤的多个切片中，随机选取10个视野（200倍放大倍率），计数所有离散的、染色阳性的凋亡细胞或血管轮廓（无论是否包含管腔）。每个时间点和剂量组均评估了四只小鼠。采用学生t检验确定P值。\n

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\n将约4.2 × 10⁶个A673细胞与30% Matrigel混合，皮下注射到8周龄雌性NCr裸鼠体内。当所有动物的平均肿瘤体积达到约100 mm³时，每天两次通过灌胃给予PF-562271（200 mg/kg，10 ml/kg）或载体对照（0.5%羟丙基甲基纤维素和0.2% Tween 80的无菌水；每组n = 6）。使用10周龄雄性NSG小鼠进行TC32细胞的体内实验，以提高该细胞系的肿瘤移植率。在该模型中，部分小鼠在每天两次以200 mg/kg剂量给予PF-562271治疗后出现毒性反应（数据未显示）。因此，在将约 5 × 10⁶ 个 TC32 细胞悬浮于 30% Matrigel 中注射后，当肿瘤体积达到 100 mm³ 时，动物开始接受 PF-562271（100 mg/kg）或载体对照治疗（每组 n = 8），每 12 小时一次。该剂量耐受性良好，第 13 天剂量增加至 150 mg/kg。使用游标卡尺测量肿瘤体积。当肿瘤体积超过 2,000 mm³ 时处死动物。[2]

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\n体内放射成像[3]
\n每 2 周使用 Faxitron 数字捕获 X 射线机对右后肢进行一次放射成像，X 射线参数为 26 kV、1.5 倍放大倍率和 2 秒曝光时间。大鼠在进行 X 射线检查时使用异氟烷麻醉。肿瘤生长未通过X射线进行定量分析，但肿瘤进展情况通过连续影像进行评估。三位审阅者（其中两位对治疗方案不知情）审阅了连续影像，并就PF-562,271对肿瘤进展的影响得出结论。[3]

溶于 5% Gelucire；100 mg/kg；灌胃

将 PC-3M、BT474、BxPc3、LoVo、U87MG、H125 和 H460 细胞皮下注射到无胸腺雌性小鼠的右侧腹部

在以下人类皮下异种移植瘤模型中评估了PF-562,271的药代动力学、磷酸化FAK抑制作用和抗肿瘤疗效：PC-3M（前列腺癌）、BT474（乳腺癌）、BxPc3（胰腺癌）、LoVo（结肠癌）、U87MG（胶质母细胞瘤）以及H125和H460（肺癌；表2）。在所有模型中均观察到剂量依赖性的肿瘤生长抑制。PC-3M、BT474、BxPc3和LoVo模型的最大肿瘤抑制率在78%至94%之间，且各剂量组的肿瘤消退率最高可达50%（表2）。在PC-3M、BT474、BxPc3和LoVo模型中，每日两次25至50 mg/kg的剂量下观察到肿瘤消退，对应的Cmax（游离）范围为78至885 ng/mL，Cave（游离）范围为14至40 ng/mL，磷酸化FAK抑制率达31%至76%，持续时间超过4小时。在所有肿瘤生长抑制（TGI）实验中（最高剂量为每日两次50 mg/kg，持续29天；或每日一次100 mg/kg，持续25天），均未观察到体重减轻、发病或死亡。所有数据均基于每剂量组6至10只动物，且实验至少重复两次。给药后，处死动物，分析血液和肿瘤中的药物浓度（药代动力学），并评估肿瘤中磷酸化FAK的表达（药效学）。 [1]

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PF-562,271 已完成严格的体内药代动力学/药效学 (PK/PD) 评估。该化合物吸收良好，口服给药后 30 分钟至 2 小时内达到血药浓度峰值。无论剂量或重复给药次数如何，最大药效学调节与最大血药浓度同时出现。通过体外和体内吸收、分布、代谢和排泄计算，可以准确模拟测得的药代动力学，表明其具有良好且可预测的体内药理学特性。[1]

[1]. Antitumor activity and pharmacology of a selective focal adhesion kinase inhibitor, PF-562,271. Cancer Res, 2008, 68(6), 1935-1944.

[2]. High-throughput tyrosine kinase activity profiling identifies FAK as a candidate therapeutic target in Ewing sarcoma. Cancer Res. 2013 May 1;73(9):2873-83.

[3]. Dual focal adhesion kinase/Pyk2 inhibitor has positive effects on bone tumors: implications for bone metastases. Cancer. 2008 May 15;112(10):2313-21.

N-甲基-N-[3-[[[2-[(2-氧代-1,3-二氢吲哚-5-基)氨基]-5-(三氟甲基)-4-嘧啶基]氨基]甲基]-2-吡啶基]甲磺酰胺属于吲哚类化合物。

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广义而言，抗癌药物治疗包括细胞毒性药物和靶向药物（小分子和生物制剂）。然而，大多数接受这些药物治疗的患者最终病情都会进展。此外，这些药物的毒性反应常常阻碍了充分治疗。本报告描述了一种高选择性、强效的FAK催化活性抑制剂PF-562,271的体内药理学特性。这种新型的FAK抑制模式，其特征在于抑制剂诱导的“DFG螺旋”，在多种肿瘤类型中均表现出显著的抗肿瘤活性，且耐受性良好。 PF-562,271 在体内表现出良好的药理学特性，具有稳健的药代动力学/药效学关系。PF-562,271 的选择性和药理学特性使其成为目前处于临床试验阶段的首个用于治疗癌症的同类抑制剂。[1] 总之，本研究结果表明，口服 5 mg/kg 剂量的 PF-562,271 可抑制胫骨内肿瘤的生长和局部扩散，并恢复肿瘤引起的骨丢失。PF-562,271 的这些独特特性，即抑制肿瘤生长和安全促进骨形成的能力，可有效用于治疗许多骨转移和癌症相关性骨质疏松症患者。最后，这类药物有望与其他抗癌疗法以及双膦酸盐联合使用，以预防和治疗骨转移。[3]

C21H20F3N7O3S

507.4888

507.13

C, 49.70; H, 3.97; F, 11.23; N, 19.32; O, 9.46; S, 6.32

717907-75-0

PF-562271 besylate;939791-38-5;PF-562271 hydrochloride;939791-41-0; PF-562271;717907-75-0; 939791-39-6 (mesylate); 939791-40-9

11713159

Light yellow to brown solid powder

1.5±0.1 g/cm3

1.645

-0.71

140.82

3

12

7

35

856

0

CS(=O)(N(C)C1=NC=CC=C1CNC2=NC(NC3=CC4=C(NC(C4)=O)C=C3)=NC=C2C(F)(F)F)=O

MZDKLVOWGIOKTN-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C21H20F3N7O3S/c1-31(35(2,33)34)19-12(4-3-7-25-19)10-26-18-15(21(22,23)24)11-27-20(30-18)28-14-5-6-16-13(8-14)9-17(32)29-16/h3-8,11H,9-10H2,1-2H3,(H,29,32)(H2,26,27,28,30)

N-methyl-N-(3-(((2-((2-oxoindolin-5-yl)amino)-5-(trifluoromethyl)pyrimidin-4-yl)amino)methyl)pyridin-2-yl)methanesulfonamide

PF562271; PF-562271; PF562,271; PF-562271; 717907-75-0; PF-00562,271 free base; PF-562271 free base; PF562,271; PF 562,271; K5BX8ZA7UF; CHEMBL1084546; PF562,271; PF-562,271; PF-00562271; PF00562271; PF 00562271; PF271, PF-271, PF 271; PF562271 PhSO3H; PF562271 benzesulfonate salt; PF562271 besylate;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 1.67 mg/mL (3.29 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 16.7 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 1.67 mg/mL (3.29 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 16.7 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。