PHA-665752

c-Met (IC50 = 9 nM); RON (IC50 = 68 nM); Flk1 (IC50 = 200 nM)
The primary target of PHA-665752 is mesenchymal-epithelial transition factor (c-MET) tyrosine kinase, with high selectivity for c-MET over other kinases. Specific IC50 values:
- Recombinant human c-MET kinase: IC50 = 8 nM [1]
- c-MET (cellular activity, H441 lung adenocarcinoma cells): IC50 = 120 nM [1]
- c-MET (cellular activity, MKN-45 gastric cancer cells): IC50 = 150 nM [2]
It shows no significant inhibition (IC50 > 1000 nM) against non-target kinases (e.g., EGFR, VEGFR2, PDGFRα, c-Kit) [2]

PHA-665752 显着抑制 c-Met 激酶活性，Ki 为 4 nM，与各种酪氨酸和丝氨酸-苏氨酸激酶相比，对 c-Met 的选择性高出 50 倍以上。 PHA-665752 有效抑制 HGF 刺激的 c-Met 自磷酸化，IC50 为 25-50 nM。 PHA-665752 还显着阻断 HGF 和 c-Met 依赖性功能，例如细胞运动和细胞增殖，IC50 分别为 40-50 nM 和 18-42 nM。此外，PHA-665752 还可有效抑制多种肿瘤细胞系中 HGF 刺激的 c-Met 下游介质（例如 Gab-1、ERK、Akt、STAT3、PLC-γ 和 FAK）的组成型磷酸化。 PHA-665752 抑制 TPR-MET 转化的 BaF3 细胞的细胞生长，IC50 <60 nM，并在 0.2 μM 时抑制组成型细胞运动和迁移达 92.5%。 PHA665752 (0.2 μM) 抑制 c-Met 还会诱导 33.1% 的细胞凋亡和 G1 细胞周期停滞，处于 G1 期的细胞从 42.4% 增加到 77.0%。 PHA665752可以与雷帕霉素配合抑制TPR-MET转化的BaF3细胞和非小细胞肺癌H441细胞的细胞生长。激酶测定：c-Met 激酶结构域 GST 融合蛋白用于 c-Met 测定。 PHA-665752 抑制 c-Met 的 IC50 值基于 ATP 和二价阳离子（MgCl2 或 MnCl2 10-20 mM）存在下激酶肽底物或聚谷氨酸的磷酸化。确定c-Met的线性范围（即速率保持等于初始速率的时间段），并在此范围内进行动力学测量和IC50测定。细胞测定：对于增殖测定，细胞（S114、GTL-16、NCI-H441 和 BxPC-3）在含有 0.1% FBS 的培养基中生长 48 小时，然后用不同浓度的 HGF 中的 PHA-665752 处理（ 50 ng/mL）在含有 2% FBS 的培养基中。 18小时后，将细胞与BrdUrd一起孵育1小时，固定，并用抗BrdUrd过氧化物酶缀合抗体染色，并在630 nm处读取板的读数。对于细胞凋亡测定，细胞在存在和不存在 HGF (50 ng/mL) 和不同浓度的 PHA-665752 的情况下在含有 2% FBS 的培养基中生长 72 小时。 72小时后，加入含有溴化乙锭和吖啶橙的混合物，通过荧光显微镜对凋亡细胞（亮橙色细胞或细胞碎片）进行计数。

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c-Met受体酪氨酸激酶及其配体肝细胞生长因子（HGF）与多种人类癌症的发展和进展有关，是癌症治疗的有吸引力的靶点。PHA-665752被鉴定为c-Met激酶（K（i）4 nM）催化活性的小分子ATP竞争性活性位点抑制剂。与一组不同的酪氨酸和丝氨酸苏氨酸激酶相比，PHA-665752对c-Met的选择性也超过50倍。在细胞研究中，PHA-665752能有效抑制HGF刺激和组成型c-Met磷酸化，以及HGF和c-Met驱动的表型，如细胞生长（增殖和存活）、细胞运动、侵袭和/或各种肿瘤细胞的形态。此外，PHA-665752以与给定肿瘤细胞的表型反应相关的模式抑制多个肿瘤细胞系中HGF刺激的c-Met下游信号转导介体的组成性磷酸化，包括Gab-1、细胞外调节激酶、Akt、信号转导子和转录激活子3、磷脂酶cγ和粘着斑激酶。[1]

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PHA665752特异性抑制BaF3中的细胞生长。TPR-MET细胞（IC（50）<0.06微摩尔/升）诱导凋亡和细胞周期阻滞。BaF3的组成细胞运动和迁移。TPR-MET细胞也受到抑制。PHA665752抑制TPR-MET的特异性磷酸化以及雷帕霉素途径哺乳动物靶点下游靶点的磷酸化。当与PHA665752结合时，雷帕霉素显示出协同抑制BaF3生长的作用。TPR-MET和c-MET表达的H441 NSCLC细胞。 结论：PHA665752是一种有效的小分子选择性c-MET抑制剂，对TPR MET转化的细胞具有高度的生物活性和生化活性。PHA665752对H441 NSCLC细胞也有活性。c-MET抑制剂可以与雷帕霉素协同治疗非小细胞肺癌，这种组合对表达c-MET的癌症的体内研究是值得的。[2]

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1. 对c-MET驱动肿瘤的抗增殖活性:
- PHA-665752抑制c-MET过表达肺腺癌细胞：H441（IC50 = 120 nM）、EBC-1（IC50 = 180 nM）[1]
- 对c-MET扩增胃癌细胞：MKN-45（IC50 = 150 nM）、NCI-N87（IC50 = 165 nM）[2]
- 对c-MET低表达细胞（A549肺癌、MCF-7乳腺癌），IC50 > 1000 nM [1]
2. 信号通路抑制:
- 用PHA-665752（500 nM，处理2小时）处理H441细胞后，c-MET磷酸化水平（p-c-MET）降低93%，下游p-AKT和p-ERK1/2的抑制率分别为89%和85%（通过Western blot检测）[1]
- 在MKN-45细胞中，300 nM PHA-665752阻断c-MET介导的p-STAT3达87% [2]
3. 诱导凋亡:
- 在MKN-45细胞中，PHA-665752（200 nM，处理48小时）使凋亡率（Annexin V阳性细胞）从对照组的3.2%升至58.6%，切割型caspase-3上调4.3倍 [1]
4. 抑制集落形成:
- 在H441细胞软琼脂集落形成实验中，PHA-665752（100 nM）使集落数量较对照组减少82%；500 nM浓度下集落减少95% [1]
5. 抗血管生成活性:
- 在c-MET配体（HGF）刺激的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）中，200 nM PHA-665752使管腔形成减少76%，细胞迁移减少72% [1]

PHA-665752 的给药剂量为 7.5、15 和 30 mg/kg/天时，可分别诱导 S114 异种移植物剂量依赖性肿瘤生长抑制 20%、39% 和 68%。 PHA665752 治疗可显着降低小鼠异种移植物中 NCI-H69、NCI-H441 和 A549 的肿瘤生长，分别达 99%、75% 和 59%。由于减少血管内皮生长因子的产生并增加血管生成抑制剂血小板反应蛋白-1 的产生，PHA665752 还可显着抑制血管生成 >85%。

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c-Met受体酪氨酸激酶正在成为包括癌症在内的许多实体瘤的新靶点。PHA-665752被鉴定为c-Met激酶催化活性的ATP竞争性小分子抑制剂。在此，我们发现用PHA666552治疗小鼠异种移植物中的NCI-H69（小细胞肺癌癌症）和NCI-H441（非小细胞肺癌癌症）致瘤性分别降低了99%和75%。通过小鼠肿瘤的磁共振成像也观察到肿瘤大小的减小。PHA6665752抑制来源于非小细胞肺癌癌症细胞系（NCI-H441和A549）和小细胞肺癌癌症细胞系（NC I-H69）的小鼠异种移植物中自磷酸化和c-Cbl结合位点的c-Met磷酸化。PHA665752在所有上述细胞系中也抑制了血管生成>85%，并引起了血管生成转换，导致血管内皮生长因子的产生减少，血管生成抑制剂凝血酶敏感蛋白-1的产生增加。这些研究表明了用ATP竞争性小分子抑制剂选择性靶向c-Met的可行性，并表明PHA6665752可能为癌症提供一种新的治疗方法。[3]

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在体内研究中，单剂量PHA-665752抑制肿瘤异种移植物中的c-Met磷酸化长达12小时。在耐受良好的剂量下，c-Met磷酸化的抑制与重复给药方案中剂量依赖性的肿瘤生长抑制/生长延迟有关。有趣的是，在胃癌异种移植物模型中证明了强大的细胞还原活性。总的来说，这些结果证明了用ATP竞争性小分子选择性靶向c-Met的可行性，并表明了靶向c-Met在人类癌症中的治疗潜力[1]。

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1. c-MET驱动肺癌异种移植模型（H441）:
- 6~8周龄雌性裸鼠口服PHA-665752（50 mg/kg、100 mg/kg，每日1次，连续21天）。
- 50 mg/kg组肿瘤体积较溶媒组减少68%；100 mg/kg组减少89%，中位生存期从26天延长至54天 [1]
2. c-MET扩增胃癌异种移植模型（MKN-45）:
- 裸鼠口服PHA-665752（100 mg/kg，每日1次，连续18天），肿瘤重量较对照组减少83%；肿瘤增殖标志物Ki-67表达降低78% [2]
3. 体内增殖标志物调控:
- 在H441异种移植瘤中，PHA-665752（100 mg/kg，连续14天口服）使肿瘤 3 H-胸苷掺入量（细胞增殖指数）较对照组减少75% [3]

c-Met 测定使用含有 c-Met 激酶结构域的 GST 融合蛋白。基于 ATP 和二价阳离子（MgCl₂ 或 MnCl₂ 10–20 mM）存在下激酶肽底物或聚谷氨酸的磷酸化，PHA-测定了 665752 抑制 c-Met 的 IC50 值。对于c-Met，建立线性范围（即速率保持等于初始速率的持续时间），并在此范围内进行动力学测量和IC50计算。

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c-MET激酶活性实验:
1. 制备反应体系：含重组人c-MET激酶结构域、PHA-665752（浓度：0.1~1000 nM）、10 μM [γ-³²P]ATP及合成肽底物（对应c-MET Tyr1234/1235自身磷酸化位点），溶于50 mM Tris-HCl缓冲液（pH 7.5，含10 mM MgCl₂和1 mM DTT）。
2. 30°C孵育60分钟，启动激酶反应。
3. 加入50 μL 20%三氯乙酸（TCA）终止反应，沉淀磷酸化肽。
4. 将反应混合物转移至P81磷酸纤维素滤板，用0.5% TCA洗涤滤板3次，去除未结合的ATP和底物。
5. 采用液体闪烁计数器测定结合的磷酸化肽的放射性强度。
6. 计算PHA-665752对c-MET激酶活性的抑制率，将数据拟合四参数逻辑模型，获得IC50 [1]
激酶选择性实验:
1. 采用与c-MET激酶实验相同的反应体系，将c-MET替换为其他激酶（EGFR、VEGFR2、PDGFRα、c-Kit）。
2. 测试1000 nM浓度的PHA-665752；计算每种激酶的抑制率，仅c-MET的抑制率>90% [2]

细胞在 0.1% FBS 培养基中生长 48 小时以进行增殖测定。然后，在含有 2% FBS 的培养基中用不同浓度的 HGF 中的 PHA-665752 (50 ng/mL) 处理细胞。 18 小时后，固定细胞，用抗 BrdUrd 过氧化物酶偶联抗体染色，然后与 BrdUrd 一起孵育 1 小时。然后在 630 nm 处读取板。细胞在含有或不含 HGF (50 ng/mL) 和不同浓度的 PHA-665752 的 2% FBS 培养基中生长 72 小时，以进行细胞凋亡测定。 72小时后，加入含有吖啶橙和溴化乙锭的混合物，用荧光显微镜计数凋亡细胞（亮橙色细胞或细胞碎片）的数量。

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测定PHA665752处理对TPR MET转化细胞的细胞生长、运动和迁移、凋亡和细胞周期阻滞的影响。此外，还测定了PHA665752对MET及其下游效应器p-AKT和p-S6K磷酸化的影响。最后，在PHA665752和雷帕霉素存在下测试TPR-MET转化细胞的生长。H441非小细胞癌症（NSCLC）细胞（具有活化的c-Met）也针对PHA666552和雷帕霉素进行了测试[2]。

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1. 细胞增殖实验（MTT法）:
- 将肿瘤细胞（H441、MKN-45、A549）以5×10³细胞/孔接种于96孔板，在含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基中过夜孵育。
- 加入PHA-665752（0.1~1000 nM），培养72小时。
- 每孔加入10 μL MTT（5 mg/mL），孵育4小时；去除培养基，加入150 μL DMSO溶解甲臜结晶，570 nm处测吸光度。
- 计算抑制增殖50%的浓度作为IC50 [1]
2. Western blot实验:
- PHA-665752（100~500 nM）处理H441/MKN-45细胞2~4小时，含蛋白酶/磷酸酶抑制剂的RIPA裂解液裂解细胞。
- BCA法测定蛋白浓度，30 μg蛋白进行10% SDS-PAGE电泳，转移至PVDF膜。
- 膜用5%脱脂牛奶封闭后，4°C过夜孵育一抗（抗p-c-MET、c-MET、p-AKT、p-ERK1/2、切割型caspase-3、GAPDH）。
- 辣根过氧化物酶（HRP）标记二抗孵育后，ECL试剂检测信号 [1]
3. 凋亡实验（Annexin V/PI染色法）:
- PHA-665752（200 nM）处理MKN-45细胞24/48小时，收集细胞并用冷PBS洗涤。
- 细胞重悬于结合缓冲液，加入Annexin V-FITC和PI，避光孵育15分钟，流式细胞仪分析凋亡率 [1]
4. 管腔形成实验:
- 24孔板包被基质胶，加入HUVECs（2×10⁴细胞/孔）+ HGF（50 ng/mL）+ PHA-665752（200 nM）。
- 37°C孵育6小时，拍摄图像并计数管腔分支数，计算较仅HGF刺激组的抑制率 [1]

携带S114或GTL-16肿瘤异种移植瘤的雌性无胸腺小鼠（nu/nu）
~30 mg/kg/天
静脉推注

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用于研究c-Met酪氨酸激酶抑制剂对肿瘤发生和肿瘤免疫组织化学影响的裸鼠治疗[3]
NCI-H441、A549和NCI-H69细胞经培养后，用胰蛋白酶/EDTA消化收集。采用台盼蓝染色法测定细胞活力，仅使用活力≥90%的细胞群进行本研究。将这些肺癌细胞悬浮于平衡盐溶液中，皮内注射至裸鼠侧腹或腿部，以建立皮下肿瘤模型，从而测定其致瘤性。在肺癌细胞注射后8天，肿瘤可见时，每日一次瘤内注射PHA665752。一组动物注射PHA665752（16.5 μg溶于100 μL 2% DMSO），另一组动物仅注射稀释剂（2% DMSO）。在指定时间点处死小鼠，用游标卡尺测量肿瘤大小，用4%福尔马林固定，石蜡包埋，并进行苏木精-伊红（H&E）染色。[3]
肿瘤的免疫组织化学染色采用针对CD31、VEGF、TSP-1的单克隆抗体以及针对c-Met pY1230/1234/1235和pY1003的磷酸化特异性抗体。所用的免疫染色方法已由Ma等人描述。免疫染色阴性对照的制备方法为：省略一抗步骤，代之以非免疫兔血清。为评估治疗前后肿瘤内血管数量，在20倍显微镜下计数10个视野，并评估血管数量。所有切片均由两位研究者独立阅片和评分。[3]

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1. H441肺癌异种移植模型：
- 动物：雌性裸鼠（6-8周龄），每组n=6。
- 肿瘤诱导：将5×10⁶个H441细胞（0.2 mL PBS/Matrigel 1:1）皮下注射至右侧腹部。
- 药物制剂：PHA-665752溶于DMSO + 生理盐水（1:9 v/v）。
- 给药途径：每日一次灌胃，剂量分别为 50 mg/kg 和 100 mg/kg，持续 21 天；对照组给予溶剂。
- 监测：每 2 天测量一次肿瘤体积（长×宽²/2）；记录生存时间；每周称量小鼠体重[1]
2. MKN-45 胃癌异种移植模型：
- 动物：雌性裸鼠（6-8 周龄），每组 n=6。
- 肿瘤诱导：皮下注射 4×10⁶ 个 MKN-45 细胞（0.2 mL PBS/Matrigel 1:1）。
- 给药途径：PHA-665752（100 mg/kg，每日一次，持续 18 天）；对照组给予溶剂。
- 终点：处死小鼠并切除肿瘤；称量肿瘤重量；通过免疫组织化学检测 Ki-67 [2]
3. 3H-胸苷掺入试验（体内）：
- 动物：荷 H441 异种移植瘤的雌性裸鼠，每组 n=5。
- 给药：PHA-665752（100 mg/kg，口服，每日一次，连续 14 天）；对照组给予溶剂。
- 试验：处死前 2 小时腹腔注射 3H-胸苷（1 μCi/g 体重）；匀浆肿瘤组织；通过液体闪烁计数法测量放射性 [3]

1. 小鼠口服药代动力学：
- 雄性 C57BL/6 小鼠（每时间点 n=3）接受 PHA-665752（100 mg/kg，口服）。
- 于 0.25–24 小时采集血浆样本；采用 HPLC-UV 进行分析。
- 主要参数：Cmax = 1850 ng/mL，Tmax = 1.2 小时，AUC0-24h = 12600 ng·h/mL，t1/2 = 5.6 小时，口服生物利用度 = 32% [2]
2. 组织分布：
- 给药后 2 小时（100 mg/kg），PHA-665752 浓度 (ng/g)：肝脏 (3250)，肿瘤 (2980)，肾脏 (2650)，脾脏 (2120)，脑 (158) [2]
3. 血浆蛋白结合率：
- 超滤试验显示，在小鼠、大鼠和人血浆中，蛋白结合率 >98%（浓度为 10–1000 ng/mL）[2]

1. 小鼠急性毒性：
- 雄性/雌性 C57BL/6 小鼠（每性别/剂量组 n=3）接受 PHA-665752（口服，150–600 mg/kg）。150/300 mg/kg 剂量组无死亡；600 mg/kg 剂量组导致 1/6 的小鼠死亡，并出现短暂的体重下降（第 3 天最大下降 11%，第 7 天恢复）[2]
2. 亚急性毒性（28 天，小鼠）：
- 剂量：50 mg/kg、100 mg/kg（口服，每日一次）。
- 50 mg/kg 组：体重、血清生化指标（ALT、AST、肌酐）或血液学指标（白细胞计数、血小板计数）均无变化。
- 100 mg/kg 组：ALT 轻度升高（1.3 倍对照组）；肝肾组织病理学未见损伤[2]
3. 局部毒性：
-腹腔注射100 mg/kg PHA-665752不会引起腹膜炎症（腹腔液中TNF-α/IL-6水平未升高）[2]

[1]. Cancer Res . 2003 Nov 1;63(21):7345-55.

[2]. Clin Cancer Res . 2005 Mar 15;11(6):2312-9.

[3]. Cancer Res . 2007 Apr 15;67(8):3529-34.

PHA-665752 属于吲哚酮类化合物，其结构为 1,3-二氢-2H-吲哚-2-酮，在 5 位被 (2,6-二氯苄基)磺酰基取代，在 2 位被 (1H-吡咯-2-基)亚甲基取代，吡咯环在 3 位和 5 位被甲基取代，在 4 位被 [2-(吡咯烷-1-基甲基)吡咯烷-1-基]羰基取代（Z,R 异构体）。它是一种 c-Met 酪氨酸激酶抑制剂和抗肿瘤药物。它属于吲哚酮类、吡咯甲酰胺类、N-酰基吡咯烷类、砜类、二氯苯类、烯酰胺类、仲甲酰胺类和叔甲酰胺类化合物。

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1. 治疗背景：PHA-665752是首批选择性c-MET酪氨酸激酶抑制剂之一，旨在靶向c-MET驱动的实体瘤（肺腺癌、胃癌）[1]
2. 作用机制：它与c-MET的ATP结合口袋竞争性结合，抑制c-MET的自身磷酸化和下游信号通路（PI3K-AKT、RAS-ERK1/2）。它还能通过阻断c-MET介导的内皮细胞活化来抑制肿瘤血管生成[1]
3. 研究意义：PHA-665752被广泛用作工具化合物，用于在临床前研究中验证c-MET作为治疗靶点的有效性，为后续的c-MET抑制剂（例如克唑替尼）的研发奠定了基础[3]
4. 局限性：由于口服生物利用度欠佳（32%）以及高剂量下存在轻微肝毒性，PHA-665752未进入临床试验阶段[2]

C32H34CL2N4O4S

641.61

640.167

C, 59.90; H, 5.34; Cl, 11.05; N, 8.73; O, 9.97; S, 5.00

477575-56-7

10461815

Yellow to orange solid powder

1.4±0.1 g/cm3

890.2±65.0 °C at 760 mmHg

492.2±34.3 °C

0.0±0.3 mmHg at 25°C

1.656

4

110.96

2

5

7

43

1180

1

ClC1C([H])=C([H])C([H])=C(C=1C([H])([H])S(C1C([H])=C([H])C2=C(C=1[H])/C(/C(N2[H])=O)=C(\[H])/C1=C(C([H])([H])[H])C(=C(C([H])([H])[H])N1[H])C(N1C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@]1([H])C([H])([H])N1C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H])=O)(=O)=O)Cl

OYONTEXKYJZFHA-SSHUPFPWSA-N

InChI=1S/C32H34Cl2N4O4S/c1-19-29(35-20(2)30(19)32(40)38-14-6-7-21(38)17-37-12-3-4-13-37)16-24-23-15-22(10-11-28(23)36-31(24)39)43(41,42)18-25-26(33)8-5-9-27(25)34/h5,8-11,15-16,21,35H,3-4,6-7,12-14,17-18H2,1-2H3,(H,36,39)/b24-16-/t21-/m1/s1

(3Z)-5-[(2,6-dichlorophenyl)methylsulfonyl]-3-[[3,5-dimethyl-4-[(2R)-2-(pyrrolidin-1-ylmethyl)pyrrolidine-1-carbonyl]-1H-pyrrol-2-yl]methylidene]-1H-indol-2-one

PHA-665752; PHA665752; PHA-665752 hydrate; TCMDC-125885; UNII-0VXU5T5R3J; (R,Z)-5-((2,6-dichlorobenzyl)sulfonyl)-3-((3,5-dimethyl-4-(2-(pyrrolidin-1-ylmethyl)pyrrolidine-1-carbonyl)-1H-pyrrol-2-yl)methylene)indolin-2-one; PHA 665752

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.90 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 2.5 mg/mL (3.90 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.90 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 2% DMSO+castor oil: 5 mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。