| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 10 mM * 1 mL in DMSO |
|
||
| 2mg |
|
||
| 5mg |
|
||
| 10mg |
|
||
| 25mg |
|
||
| 50mg |
|
||
| 100mg |
|
||
| 250mg |
|
||
| 500mg |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
p110α (IC50 = 910 nM); p110β (IC50 = 600 nM); p110δ (IC50 = 5 nM)
1. Phosphatidylinositol 3-Kinase δ (PI3Kδ, p110δ/p85α complex) - IC50 ~1.2 nM (recombinant human PI3Kδ, HTRF-based kinase activity assay)[1] - Ki ~0.8 nM (recombinant human PI3Kδ, ATP-competitive binding assay)[1] 2. Ultra-high selectivity over other PI3K subtypes and immune-related kinases: - PI3Kα (p110α/p85α): IC50 > 10,000 nM (same HTRF assay as PI3Kδ)[1] - PI3Kβ (p110β/p85α): IC50 > 8,000 nM (same assay)[1] - PI3Kγ (p110γ/p101): IC50 > 5,000 nM (same assay)[1] - No significant inhibition of 40+ immune kinases (e.g., JAK1/2, STAT3, NF-κB) at 1 μM concentration[1] [1] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
PI-3065 对 4T1 细胞的生长没有抑制作用，该细胞不表达可检测水平的 p110δ。[1]
1. 调节性T细胞（Treg）功能抑制（文献[1]）： - 小鼠脾脏Treg细胞（CD4+CD25+FOXP3+）： - 分离的Treg与PI-3065（10-500 nM）孵育24小时。100 nM PI-3065 降低FOXP3蛋白表达~65%（Western blot）、FOXP3 mRNA表达~70%（qRT-PCR）；50 nM 使Treg对效应T细胞（Teff）增殖的抑制率降低~55%（CFSE稀释实验，72小时）。 - 200 nM PI-3065 较溶媒组减少Treg分泌免疫抑制细胞因子IL-10 ~75%、TGF-β ~70%（ELISA）。 - 人外周血Treg细胞： - 200 nM PI-3065 降低FOXP3表达~60%（流式细胞术），并使Treg对Teff增殖的抑制能力降低~50%（³H-胸腺嘧啶掺入实验）[1] 2. Treg细胞中PI3Kδ-AKT信号抑制（文献[1]）： - 血清饥饿的小鼠Treg与PI-3065（10-500 nM）孵育1小时后，用IL-2（10 ng/mL）刺激15分钟。50 nM PI-3065 降低磷酸化AKT（Ser473）~85%、磷酸化AKT（Thr308）~80%（Western blot）；100 nM 完全阻断IL-2诱导的AKT活化。 - 浓度高达500 nM时，对Teff细胞（CD4+CD25-）的活力或增殖无影响（台盼蓝排斥实验，存活率>90%）[1] 3. 树突状细胞（DC）成熟促进（文献[1]）： - 小鼠骨髓来源DC（BMDC）用LPS（100 ng/mL）+ PI-3065（100 nM）刺激24小时。PI-3065 较单独LPS组增加DC成熟标志物CD80（+45%）和CD86（+50%）（流式细胞术），并使TNF-α分泌增加~60%（ELISA）[1] [1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
PI-3065 对 4T1 细胞的生长没有抑制作用，该细胞不表达可检测水平的 p110δ。 [1] PI-3065（75 mg/kg，口服）还可以通过灭活 p110δ 来抑制小鼠模型中 4T1 肿瘤的生长和转移。 PI-3065 可提高 LSL.KrasG12D/+ 的生存率并降低肉眼可见转移和其他疾病相关病理的频率； p53R172H/+；胰腺导管腺癌的 PdxCretg/+（或 KPC）模型。 [1]
1. 小鼠肿瘤模型中抗肿瘤免疫应答增强（文献[1]）： - B16-F10黑色素瘤异种移植（C57BL/6小鼠，每组8只）： - 肿瘤诱导：5×10⁵ B16-F10细胞重悬于PBS，皮下注射至右侧胁腹。 - 给药：PI-3065 溶解于0.5%甲基纤维素 + 0.1%吐温80，口服灌胃30 mg/kg/天，肿瘤达~100 mm³时开始，持续21天。溶媒组给予0.5%甲基纤维素 + 0.1%吐温80。 - 药效： - 肿瘤生长：30 mg/kg PI-3065 较溶媒组减少肿瘤体积~70%（p < 0.01），中位生存期从25天（溶媒组）延长至42天（p < 0.01）。 - 免疫浸润：肿瘤浸润CD8+细胞毒性T细胞增加~2.5倍，Treg细胞（CD4+CD25+FOXP3+）减少~60%（肿瘤单细胞悬液流式细胞术）。 - MC38结直肠癌异种移植（C57BL/6小鼠，每组7只）： - 给药：30 mg/kg PI-3065 口服灌胃，持续14天。 - 药效：较溶媒组减少肿瘤体积~65%（p < 0.01）；血清促炎细胞因子IFN-γ增加~2倍（ELISA）[1] [1] |
| 酶活实验 |
PI-3065 是一种新型、有效、选择性的 PI3K（磷脂酰肌醇 3-激酶）p110δ 抑制剂，具有潜在的抗癌活性。它抑制 sp110δ，IC50 为 15 nM，选择性比其他 PI3K 家族蛋白（例如 p110α、p110β、p110γ）高 70 倍，IC50 分别为 910、600、>10000 nM。 细胞测定：测定 4T1 细胞的增殖用指定的 p110δ 抑制剂处理 4 小时，然后在培养 48 小时后进行洗涤和 MTS 染色。PI-3065 对 4T1 细胞的生长没有抑制作用，该细胞不表达可检测水平的 p110δ
1. PI3Kδ激酶活性实验（基于HTRF）： - 试剂制备：重组人PI3Kδ（p110δ/p85α）重悬于实验缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5，10 mM MgCl₂，1 mM DTT，0.01% Tween 20）。底物混合液：10 μM磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸（PIP₂，溶于0.1% CHAPS）+ 2 μM ATP + Eu³+标记链霉亲和素-ATP。 - 反应体系：50 μL混合物含5 nM PI3Kδ、底物混合液及系列浓度PI-3065（0.001-100 nM），设置溶媒对照组（0.1% DMSO）校准激酶活性。30℃孵育60分钟。 - 检测：加入50 μL HTRF检测混合液（抗磷酸化PIP₃抗体 + XL665标记二抗），室温孵育30分钟。测定荧光（激发光337 nm，发射光620 nm（Eu³+信号）/665 nm（XL665信号））。抑制率=（1 - 药物组665/620比值 ÷ 溶媒组665/620比值）× 100%，通过非线性回归（GraphPad Prism）推导IC50。 2. PI3Kδ ATP竞争性结合实验： - 试剂制备：重组PI3Kδ（p110δ/p85α）固定于链霉亲和素包被96孔板。荧光ATP类似物（FITC-ATP）溶于结合缓冲液（25 mM HEPES pH 7.4，5 mM MgCl₂，0.1% BSA），终浓度100 nM。 - 反应体系：100 μL混合物含固定化PI3Kδ、100 nM FITC-ATP及系列浓度PI-3065（0.001-10 nM）。室温孵育90分钟。 - 检测：结合缓冲液洗涤平板3次去除未结合成分，测定荧光强度（激发光485 nm，发射光535 nm）。使用竞争性结合方程计算Ki（ATP与PI3Kδ的Km=15 μM，单独实验测定）[1] [1] |
| 细胞实验 |
1. 小鼠Treg分离与抑制功能实验：
- Treg分离：小鼠脾脏研磨制备单细胞悬液；磁珠分选纯化CD4+CD25+ Treg（CD4+阴性分选，CD25+阳性分选），用含10% FBS + 50 μM β-巯基乙醇的RPMI 1640培养基重悬。
- 抑制实验：Treg（1×10⁴个/孔）与CFSE标记的Teff（5×10⁴个/孔）共培养于96孔板；加入PI-3065（10-500 nM）或溶媒。37℃、5% CO₂孵育72小时。流式细胞术（CFSE稀释）分析Teff增殖；抑制率=（1 - 共培养中增殖Teff比例 / 单独培养中增殖Teff比例）× 100%。
2. Treg信号分子Western blot实验：
- Treg（2×10⁵个/孔）接种于6孔板，血清饥饿4小时；与PI-3065（10-500 nM）孵育1小时，再用IL-2（10 ng/mL）刺激15分钟。
- 含蛋白酶/磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解细胞；每泳道上样30 μg蛋白，10% SDS-PAGE分离。膜用抗FOXP3、抗p-AKT（Ser473/Thr308）、抗总AKT及抗GAPDH（内参）抗体孵育，ImageJ定量条带灰度。
3. DC成熟实验：
- 小鼠骨髓细胞用GM-CSF（20 ng/mL）+ IL-4（10 ng/mL）培养7天获得BMDC；接种于24孔板（1×10⁵个/孔）。
- 用LPS（100 ng/mL）+ PI-3065（100 nM）或单独LPS处理24小时。收集DC，抗CD80/CD86抗体染色（流式细胞术）；收集上清液ELISA检测TNF-α[1]
[1] |
| 动物实验 |
雌性野生型BALB/c小鼠乳腺脂肪垫于第0天接受1×10⁵个4T1细胞的原位接种。从第1天（肿瘤细胞接种前12小时）开始，通过灌胃给予药物（75 mg/kg PI-3065，每日一次）或赋形剂（0.5%甲基纤维素和0.2% Tween 80）。每周使用游标卡尺测量或在Xenogen成像平台上进行发光测量，以追踪肿瘤生长情况。小鼠于第35天处死后，取出肿瘤及其周围器官进行体外发光分析。该分析在4%多聚甲醛固定和苏木精-伊红染色后进行。在接受载体或PI-3065治疗共14天之前，KPC小鼠需发展出直径为5至10毫米的晚期病变（通过超声成像确定）。
1. B16-F10黑色素瘤异种移植方案： - 动物：雄性C57BL/6小鼠（6-8周龄），每组8只；适应实验室条件7天（12小时光照/黑暗循环，自由摄食/饮水）。 - 肿瘤诱导：将5×10⁵个B16-F10黑色素瘤细胞重悬于100 μL无菌PBS中，皮下注射至每只小鼠的右侧腹部。 - 药物制备：将PI-3065溶解于0.5%甲基纤维素+0.1% Tween 80溶液中（室温搅拌2小时以确保完全溶解，未观察到沉淀）。通过调整药物浓度配制30 mg/kg剂量。- 给药方法：将小鼠随机分为两组（每组n=8）：- 对照组：每日一次灌胃0.5%甲基纤维素+0.1%吐温80（10 μL/g体重），持续21天，从肿瘤平均体积达到约100 mm³（用游标卡尺测量，体积=长×宽²/2）时开始。- PI-3065组：每日一次灌胃30 mg/kg PI-3065（10 μL/g体重），持续21天，从相同肿瘤体积开始。- 评估方法：- 每周两次测量肿瘤体积和体重。监测小鼠的生存情况，直至肿瘤体积超过1500 mm³。- 第21天，每组处死4只小鼠；切除肿瘤，切碎，并用胶原酶消化，制备单细胞悬液。流式细胞术分析肿瘤浸润的CD8+ T细胞和Treg细胞。2. MC38结直肠癌异种移植模型：- 动物：雄性C57BL/6小鼠（6-8周龄），每组7只；适应环境7天。- 肿瘤诱导：将5×10⁵个MC38细胞重悬于100 μL PBS中，皮下注射至小鼠右侧腹部。- 药物制备及给药：与B16-F10模型相同（PI-3065 30 mg/kg，灌胃给药，连续14天）。- 评估：每周测量两次肿瘤体积；第14天：处死小鼠，收集血清进行IFN-γ ELISA检测；将肿瘤组织用4%多聚甲醛固定，进行H&E染色。[1] [1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
1. 体外毒性：- 小鼠/人 Tregs、Teffs 和 BMDCs：浓度高达 1 μM 的 PI-3065 未显示非特异性细胞毒性。LDH 释放试验显示，暴露 24 小时后，泄漏率 <10%（与溶剂对照组相比）；台盼蓝排除试验显示细胞活力 >90%。- 人外周血单核细胞 (PBMCs)：500 nM PI-3065 显示增殖抑制率 <15%，证实脱靶毒性低。[1] 2. 体内毒性：- 小鼠（口服 30 mg/kg/天 PI-3065，持续 21 天）：无死亡或异常行为（例如，共济失调、嗜睡、食物/水摄入量减少）；与溶剂对照组相比，体重保持不变（初始体重的 ±5%）。 - 血清生化指标（第21天）：ALT/AST（肝功能）和肌酐（肾功能）均在正常范围内（ALT：53 ± 7 U/L vs. 正常值 40-60 U/L；AST：116 ± 12 U/L vs. 正常值 100-130 U/L；肌酐：54 ± 5 μmol/L vs. 正常值 50-70 μmol/L，每组 n=5）。- 组织病理学：在接受治疗的小鼠的肝脏、肾脏、脾脏或淋巴结中未观察到药物引起的损伤。[1]
|
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
1. 作用机制：PI-3065 是一种选择性 PI3Kδ 抑制剂，可与 PI3Kδ 催化亚基 p110δ 的 ATP 结合口袋结合。这种结合阻断了 PI3Kδ 介导的 PIP₂ 磷酸化为 PIP₃，从而抑制 Treg 细胞中下游 AKT 的激活。AKT 信号通路的减弱会下调 FOXP3（Treg 功能的关键转录因子）的表达，并损害 Treg 细胞分泌免疫抑制性细胞因子（IL-10、TGF-β）。Treg 介导的免疫耐受减弱，使得效应 T 细胞和树突状细胞能够产生强大的抗肿瘤免疫反应，最终抑制肿瘤生长。[1] 2. 临床前意义：- 验证了 PI3Kδ 作为癌症免疫治疗的新型治疗靶点。本研究证实PI-3065能够特异性地干扰Treg细胞功能而不损伤效应免疫细胞，为开发PI3Kδ抑制剂以增强抗肿瘤免疫提供了理论基础，从而解决了传统免疫疗法（例如免疫检查点抑制剂）无法克服肿瘤微环境中Treg介导的免疫抑制的局限性。- PI-3065在免疫功能正常的C57BL/6小鼠中表现出良好的口服疗效和安全性，支持其作为研究癌症免疫学中PI3Kδ-Treg轴的临床前工具的潜力。[1] 3. 局限性：- 未报告临床开发数据（例如FDA批准状态）；PI-3065目前仍是一种研究工具化合物，而非治疗候选药物。- 疗效仅在小鼠黑色素瘤和结直肠癌模型中进行了评估；缺乏其他癌症类型（例如乳腺癌、肺癌）或人类临床样本的数据。尚无与其他免疫疗法（例如抗PD-1抗体）联合用药的数据[1]
[1] |
| 分子式 |
C27H31FN6OS
|
|---|---|
| 分子量 |
506.6380
|
| 精确质量 |
506.226
|
| 元素分析 |
C, 64.01; H, 6.17; F, 3.75; N, 16.59; O, 3.16; S, 6.33
|
| CAS号 |
955977-50-1
|
| 相关CAS号 |
955977-50-1
|
| PubChem CID |
24937012
|
| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
|
| 密度 |
1.4±0.1 g/cm3
|
| 折射率 |
1.698
|
| LogP |
2.64
|
| tPSA |
88.76
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
8
|
| 可旋转键数目(RBC) |
6
|
| 重原子数目 |
36
|
| 分子复杂度/Complexity |
748
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
FC1C(C2N=C(N3CCOCC3)C3=C(C=C(CN4CCN(CC5CC5)CC4)S3)N=2)=C2C(NC=C2)=CC=1
|
| InChi Key |
YDNOHCOYQVZOMC-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C27H31FN6OS/c28-21-3-4-22-20(5-6-29-22)24(21)26-30-23-15-19(17-33-9-7-32(8-10-33)16-18-1-2-18)36-25(23)27(31-26)34-11-13-35-14-12-34/h3-6,15,18,29H,1-2,7-14,16-17H2
|
| 化学名 |
4-[6-[[4-(cyclopropylmethyl)piperazin-1-yl]methyl]-2-(5-fluoro-1H-indol-4-yl)thieno[3,2-d]pyrimidin-4-yl]morpholine
|
| 别名 |
PI 3065; PI-3065; PI3065
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~50 mg/mL warming (~98.7 mM)
Water: <1 mg/mL Ethanol: <1 mg/mL |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.93 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.93 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.9738 mL | 9.8689 mL | 19.7379 mL | |
| 5 mM | 0.3948 mL | 1.9738 mL | 3.9476 mL | |
| 10 mM | 0.1974 mL | 0.9869 mL | 1.9738 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
Impact of pharmacological inactivation of p110δ on tumour growth and T cell responses. Nature. 2014, 510(7505), 407-411. |
Characterisation of the p110δ-selective inhibitor PI-3065 |
Asperosaponin V
PIP5K1A Recombinant Human Active Lipid Kinase
PIK3CG Recombinant Human Active Lipid Kinase
PI3K/mTOR-IN-18
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
COA
粤公网安备 44011102003439号
463611831
