| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 1mg |
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| 2mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
PI3Kδ (IC50 = 0.24 μM); PI3Kβ (IC50 = 10 μM); PI3Kγ (IC50 = 25 μM); PI3Kα (IC50 = 100 μM)
1. Phosphatidylinositol 3-Kinase α (PI3Kα, p110α/p85α complex) - IC50 ~15 nM (recombinant human PI3Kα, HTRF-based kinase activity assay)[1] - Ki ~8 nM (recombinant human PI3Kα, ATP-competitive binding assay)[1] 2. High selectivity over other PI3K subtypes: - PI3Kβ (p110β/p85α): IC50 > 1000 nM (same HTRF assay as PI3Kα)[1] - PI3Kγ (p110γ/p101): IC50 > 1000 nM (same assay)[1] - PI3Kδ (p110δ/p85α): IC50 > 800 nM (same assay)[1] 3. No significant inhibition of 40+ unrelated kinases (e.g., AKT1, ERK2, EGFR, JAK2, mTOR) at 1 μM concentration[1] [1] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
激酶测定：PIK-293 是一种 PI3K 抑制剂，主要针对 PI3Kδ，IC50 为 0.24 μM，对 PI3Kα/β/γ 的效力分别低 500、100 和 50 倍。 PIK-293 抑制 p110α、p110β、p110δ 和 p110γ，IC50 分别为 100 μM、25 μM、0.24 μM 和 10 µM。 PIK-293 是 PIK-294 的母体化合物。
1. 重组PI3K亚型抑制活性（文献[1]）： - PI3Kα活性：PIK-293（0.1-1000 nM）呈剂量依赖性抑制重组人PI3Kα；15 nM时抑制率~50%（IC50），100 nM时~92%，500 nM时~97%。相比之下，1000 nM PIK-293 对PI3Kβ/γ/δ的抑制率<10%，证实亚型选择性。 2. 代谢细胞中胰岛素信号调控（文献[1]）： - 3T3-L1脂肪细胞（已分化）： - 血清饥饿细胞与PIK-293（10-500 nM）孵育1小时后，用胰岛素（100 nM）刺激15分钟。100 nM PIK-293 降低磷酸化AKT（Ser473）~85%、磷酸化AKT（Thr308）~80%（Western blot）；500 nM时进一步将二者降至胰岛素刺激水平的<15%。 - 葡萄糖摄取实验：500 nM PIK-293 在胰岛素刺激30分钟后，抑制[¹⁴C]-2-脱氧葡萄糖摄取~75%（闪烁计数），对基础葡萄糖摄取无影响（较溶媒组变化<5%）。 - 人骨骼肌肌管（原代培养）： - 100 nM PIK-293 在胰岛素刺激30分钟后，降低GLUT4向细胞膜的转位~65%（GLUT4特异性抗体免疫荧光染色）；对总GLUT4蛋白水平无影响（Western blot）[1] [1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
不适用
1. 小鼠胰岛素敏感性与糖稳态（文献[1]）： - 动物：雄性C57BL/6小鼠（8-10周龄），每组6只；实验前禁食6小时（可饮水）。 - 给药：PIK-293 溶解于10% DMSO + 90% PEG400，腹腔注射（i.p.）30 mg/kg或60 mg/kg，1小时后腹腔注射胰岛素（1 U/kg，溶于生理盐水）。溶媒组给予10% DMSO + 90% PEG400。 - 药效： - 血糖：60 mg/kg PIK-293 使胰岛素注射后30分钟的血糖水平较溶媒+胰岛素组升高~40%（p < 0.01），表明胰岛素介导的降糖作用受损。 - 组织信号：60 mg/kg PIK-293 在胰岛素注射15分钟后，使肝脏中胰岛素诱导的磷酸化AKT（Ser473）降低~75%，白色脂肪组织（WAT）中降低~80%（Western blot）；对这些组织中的磷酸化ERK无显著影响[1] [1] |
| 酶活实验 |
表达、纯化蛋白质和脂质激酶，并进行体外激酶测定以确定IC50值。更多详细信息请参见补充实验程序。[1]
PIK-293 是一种 PI3K 抑制剂。 IC50 为 0.24 μM，效力分别比 PI3Kα/β/γ 低 500、100 和 50 倍。 PIK-293 抑制 p110α、p110β、p110δ 和 p110γ 的 IC50 值为 100 μM、25 μM、0.24 μM 和 10 µM。其母体物质 PIK-293 是 PIK-294 的母体化合物。 1. PI3Kα激酶活性实验（基于HTRF）： - 试剂制备：重组人PI3Kα（p110α/p85α复合物）重悬于实验缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5，10 mM MgCl₂，1 mM DTT，0.01% Tween 20）。底物混合液含10 μM磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸（PIP₂，溶于0.1% CHAPS）、2 μM ATP及Eu³+标记链霉亲和素-ATP。 - 反应体系：50 μL混合物含5 nM PI3Kα、底物混合液及系列浓度PIK-293（0.01-1000 nM），设置溶媒对照组（0.1% DMSO）以校准活性。混合物在30℃孵育60分钟，确保激酶反应充分进行。 - 检测：加入50 μL HTRF检测混合液（抗磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸（PIP₃）抗体 + XL665标记二抗），室温孵育30分钟。测定荧光（激发光337 nm，发射光620 nm（Eu³+信号）和665 nm（XL665信号））。抑制率计算方式：（1 - 药物组665/620比值 ÷ 溶媒组665/620比值）× 100%，通过非线性回归分析（GraphPad Prism）推导IC50。 2. PI3Kα ATP竞争性结合实验： - 试剂制备：重组PI3Kα（p110α/p85α）固定于链霉亲和素包被96孔板。荧光ATP类似物（FITC-ATP）溶于结合缓冲液（25 mM HEPES pH 7.4，5 mM MgCl₂，0.1% BSA），终浓度100 nM。 - 反应体系：100 μL混合物含固定化PI3Kα、100 nM FITC-ATP及系列浓度PIK-293（0.01-100 nM）。平板在室温孵育90分钟，确保竞争性结合充分。 - 检测：用结合缓冲液洗涤平板3次，去除未结合的FITC-ATP和PIK-293。测定荧光强度（激发光485 nm，发射光535 nm）。使用竞争性结合方程计算Ki，其中ATP与PI3Kα相互作用的Km值设为12 μM（通过单独实验测定）[1] [1] |
| 细胞实验 |
PI3-K途径蛋白质印迹[1]
脂肪细胞或肌管在一夜之间被血清饥饿。然后用抑制剂预孵育细胞（30分钟），用胰岛素（100 nM，5分钟）刺激，并裂解。这些裂解物通过SDS-PAGE分离，转移到硝化纤维中，并通过蛋白质印迹进行分析。 32P正磷酸盐脂质分析[1] 代谢标记基本上如所述进行（Serunian等人，1991）。将细胞血清饥饿过夜，在无磷酸盐培养基中孵育2小时，然后用32P正磷酸盐标记2小时。标记后，将抑制剂加入至其终浓度（10分钟），然后用胰岛素（100 nM，10分钟）处理。细胞被裂解，脂质被提取和脱酰，并通过HPLC进行分析。 葡萄糖摄取量[1] 脂肪细胞中的葡萄糖摄取基本上如所述进行测量（Lakshmanan等人，2003）。12孔板中的脂肪细胞被血清饥饿（3小时），然后在含有化合物的PBS中孵育（30分钟），此时用胰岛素（100nM）刺激细胞。在胰岛素刺激后15分钟加入（3H）-2-脱氧葡萄糖（100μM，1μCi/ml），并允许再摄取15分钟。用PBS洗涤脂肪细胞三次，溶解在0.1%SDS中，通过闪烁计数测量内化放射性。 1. 3T3-L1脂肪细胞胰岛素信号与葡萄糖摄取实验： - 细胞分化与培养：3T3-L1前脂肪细胞接种于6孔板（用于Western blot）或24孔板（用于葡萄糖摄取），用DMEM + 10% FBS培养。通过分化培养基（DMEM + 10% FBS + 0.5 mM IBMX + 1 μM地塞米松 + 10 μg/mL胰岛素）诱导10天分化为脂肪细胞，随后用DMEM + 10% FBS + 1 μg/mL胰岛素维持4天。 - 处理：分化后的脂肪细胞在DMEM + 0.1% BSA中血清饥饿4小时，再与PIK-293（10-500 nM）或溶媒（0.1% DMSO）孵育1小时。用胰岛素（100 nM）刺激15分钟（用于Western blot）或30分钟（用于葡萄糖摄取）。 - 检测： - Western blot：用含蛋白酶和磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解细胞，SDS-PAGE分离蛋白后转移至PVDF膜，用抗磷酸化AKT（Ser473/Thr308）、总AKT及内参GAPDH抗体孵育，ImageJ软件定量条带灰度。 - 葡萄糖摄取：每孔加入[¹⁴C]-2-脱氧葡萄糖（0.5 μCi/孔），孵育30分钟。用冷PBS洗涤细胞3次，0.1% SDS裂解细胞，液体闪烁计数器计数放射性。结果通过BCA实验校正蛋白浓度。 2. 人骨骼肌肌管GLUT4转位实验： - 细胞培养：从肌肉活检样本中分离原代人骨骼肌成肌细胞，用DMEM + 20% FBS培养，切换至DMEM + 2%马血清培养7天分化为肌管。 - 处理：肌管血清饥饿4小时，与100 nM PIK-293 或溶媒孵育1小时，再用胰岛素（100 nM）刺激30分钟。 - 检测：用4%多聚甲醛固定细胞，0.1% Triton X-100透化，抗GLUT4一抗及Alexa Fluor 488标记二抗染色。通过共聚焦显微镜测量细胞边缘荧光强度，定量细胞膜GLUT4（每组100个细胞）[1] [1] |
| 动物实验 |
1. 小鼠胰岛素激发试验和血糖监测方案：- 动物：雄性 C57BL/6 小鼠（8-10 周龄）在实验室条件下适应 7 天（12 小时光照/黑暗循环，自由摄取标准饲料和水）。实验前小鼠禁食 6 小时（自由摄取水），以最大程度降低基础胰岛素水平。- 药物制备：将 PIK-293 溶解于由 10% DMSO + 90% PEG400 组成的溶剂中。混合物在室温下超声处理 5 分钟，以确保药物完全溶解并均匀分布；超声处理后未观察到沉淀。- 给药：将小鼠随机分为 3 组（每组 n=6）：- 溶剂组：腹腔注射 10% DMSO + 90% PEG400（10 μL/g 体重）。 - 低剂量PIK-293组：腹腔注射30 mg/kg PIK-293（10 μL/g体重）。- 高剂量PIK-293组：腹腔注射60 mg/kg PIK-293（10 μL/g体重）。药物/溶剂注射1小时后，所有组均腹腔注射胰岛素（1 U/kg，溶于0.9%生理盐水，10 μL/g体重）。- 评估：- 血糖：分别于注射胰岛素前（0分钟）和注射胰岛素后30分钟采集尾静脉血样，使用手持式血糖仪测量血糖水平。- 组织采集和标记：注射胰岛素15分钟后，用二氧化碳吸入法处死小鼠。迅速解剖肝脏和白色脂肪组织，液氮速冻后保存于-80℃。随后裂解组织，进行磷酸化 AKT (Ser473) 和总 AKT 的蛋白质印迹分析[1]
[1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
1. 体外毒性（参考文献[1]）：- 3T3-L1脂肪细胞和人骨骼肌肌管：浓度高达1000 nM的PIK-293未显示非特异性细胞毒性。LDH释放试验显示，暴露24小时后，泄漏率<10%（与溶剂对照组相比），台盼蓝排除试验显示细胞活力>90%，证实无急性毒性。2. 体内毒性（参考文献[1]）：- 小鼠（腹腔注射30-60 mg/kg PIK-293，持续24小时）：未观察到死亡或异常行为（例如，共济失调、嗜睡、食物/饮水摄入量减少）。与溶剂对照组相比，体重保持不变（初始体重的±2%）。组织解剖过程中，肝脏、白色脂肪组织或骨骼肌均未发现明显的病理变化。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
磷脂酰肌醇3-激酶（PI3-K）是一类重要的新兴药物靶点，但PI3-K亚型的独特作用仍不甚明了。本文介绍了一种药理学方法，用于研究PI3-K家族。我们合成了一系列化学结构多样的PI3-K抑制剂，并通过生化方法对其靶点选择性进行了枚举，揭示了不同靶点和化学类型之间存在的隐蔽同源性。三种抑制剂与p110γ结合的晶体结构表明，p110γ存在一个构象灵活的区域，该区域可被选择性化合物特异性地利用。随后，我们利用该化合物库确定了胰岛素信号传导所需的PI3-K亚型。我们发现，在培养细胞中，p110α是主要的胰岛素反应性PI3-K，而p110β并非必需，但它设定了p110α活性的表型阈值。靶向 p110α 的化合物可阻断胰岛素治疗在体内的急性效应，而 p110β 抑制剂则无此作用。这些结果表明，使用涵盖整个蛋白质家族的抑制剂矩阵进行系统性的靶点验证是可行的。[1] PIK-39 本身在该区域没有合适的化学衍生化位点，但模型显示，通过将 IC87114 中的腺嘌呤替换为等排的吡唑并嘧啶（PIK-293，图 3A），可以将芳香取代基从该化合物的 C3 位延伸到亲和口袋中。因此，我们合成了 IC87114 的吡唑并嘧啶类似物（PIK-293）以及在该位置含有间苯酚的新型类似物（PIK-294，图 3A）。 PIK-294 的设计部分基于以下观察：我们筛选出的最有效的抑制剂之一（PI-103）也具有投射到该区域的间位酚基团（图 2D）。随后，我们测试了这些化合物对 I 类 PI3K 的抑制作用。结果表明，PIK-294 的效力比其母体化合物 PIK-293 高 20 至 60 倍，使其成为已报道的最有效的 p110δ 选择性抑制剂之一（图 3A）。该化合物的成功设计支持了这种化学类型在所有 PI3K 中具有保守的结合取向。[1] 1. 作用机制：PIK-293 通过与 PI3Kα 催化亚基 p110α 的 ATP 结合口袋结合，发挥选择性 PI3Kα 抑制剂的作用。这种结合阻断了PI3Kα的激酶活性，阻止了磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸（PIP₂）磷酸化为磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸（PIP₃）。PIP₃水平降低会抑制下游信号分子（例如AKT）的募集和激活，从而破坏胰岛素介导的过程，例如代谢组织（脂肪、肝脏、肌肉）中的葡萄糖摄取（通过GLUT4转位）和糖原合成[1]
2. 研究用途：- PIK-293被用作验证PI3Kα在胰岛素信号传导中作用的关键药理学工具。该研究通过证实 PIK-293 特异性地抑制胰岛素诱导的 AKT 激活和葡萄糖稳态（体外和体内均如此），确认 p110α 是介导胰岛素代谢效应的主要 PI3K 亚型，并将其与其他 PI3K 亚型（例如，调节免疫功能的 PI3Kγ/δ）区分开来。[1] 3. 局限性：- PIK-293 是一种研究工具化合物，而非治疗候选药物；未报告临床开发数据（例如，FDA 批准状态）。- 缺乏 ADME 和长期毒性数据限制了其在慢性体内研究（例如，需要数周治疗的糖尿病模型）中的应用。[1] [1] |
| 分子式 |
C22H19N7O
|
|---|---|
| 分子量 |
397.432563066483
|
| 精确质量 |
397.165
|
| 元素分析 |
C, 66.49; H, 4.82; N, 24.67; O, 4.03
|
| CAS号 |
900185-01-5
|
| 相关CAS号 |
900185-01-5
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| PubChem CID |
53245636
|
| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
|
| 密度 |
1.4±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
657.3±65.0 °C at 760 mmHg
|
| 闪点 |
351.3±34.3 °C
|
| 蒸汽压 |
0.0±2.0 mmHg at 25°C
|
| 折射率 |
1.759
|
| LogP |
2.18
|
| tPSA |
104.51
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
6
|
| 可旋转键数目(RBC) |
3
|
| 重原子数目 |
30
|
| 分子复杂度/Complexity |
684
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
O=C1N(C2C(C)=CC=CC=2)C(CN2C3C(=C(N)N=CN=3)C=N2)=NC2C=CC=C(C1=2)C
|
| InChi Key |
KQDBVHKNIYROHU-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C22H19N7O/c1-13-6-3-4-9-17(13)29-18(27-16-8-5-7-14(2)19(16)22(29)30)11-28-21-15(10-26-28)20(23)24-12-25-21/h3-10,12H,11H2,1-2H3,(H2,23,24,25)
|
| 化学名 |
2-[(4-aminopyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)methyl]-5-methyl-3-(2-methylphenyl)quinazolin-4-one
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| 别名 |
PIK293; PIK 293; 900185-01-5; PIK293; IC87114 analog; 2-((4-amino-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)methyl)-5-methyl-3-o-tolylquinazolin-4(3H)-one; 2-[(4-aminopyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)methyl]-5-methyl-3-(2-methylphenyl)quinazolin-4-one; 2-({4-aminopyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl}methyl)-5-methyl-3-(2-methylphenyl)quinazolin-4-one; KQDBVHKNIYROHU-UHFFFAOYSA-N; MLS006010992; PIK-293
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: 50~80 mg/mL (125.8~201.3mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.29 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 1.25 mg/mL (3.15 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 12.5 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 1.25 mg/mL (3.15 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.5162 mL | 12.5808 mL | 25.1617 mL | |
| 5 mM | 0.5032 mL | 2.5162 mL | 5.0323 mL | |
| 10 mM | 0.2516 mL | 1.2581 mL | 2.5162 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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