Pirarubicin Hydrochloride (THP) 中文名称: 吡柔比星盐酸盐

别名: Pirarubicin HCl; Pirarubicin hydrochloride; Pirarubicin (Hydrochloride); Theprubicin; THP hydrochloride; E7V83174BE; 5,12-Naphthacenedione,10-[[3-amino-2,3,6-trideoxy-4-O-[(2R)-tetrahydro-2H-pyran-2-yl]-a-L-lyxo-hexopyranosyl]oxy]-7,8,9,10-tetrahydro-6,8,11-trihydroxy-8-(hydroxyacetyl)-1-methoxy-, hydrochloride, (8S,10S)-; Pirarubicin hydrochloride 吡柔比星盐酸盐;Pirarubicin (Hydrochloride); 盐酸吡柔比星

目录号: V28652 纯度: ≥98%

COA 产品数据产品说明书 SDS

盐酸吡柔比星（THP）是蒽环类药物的类似物，是一种抗肿瘤阿霉素，作为拓扑异构酶II抑制剂，用于治疗多种癌症，特别是实体瘤。

Pirarubicin Hydrochloride (THP) CAS号: 95343-20-7
产品类别: Topoisomerase

产品仅用于科学研究，不针对患者销售

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Nature 2025, 643(8070):192-200.

Nature 2024 Dec 18.

Nature 2021, 597(7874):119-125.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

Science Adv 2022: 8, eabm9427.

Nat Neurosci 2024, 27:1468-1474.

Science Adv 2025, 11(33):eadr5199.

Nat Metab 2024, 6: 1108-1127.

Cell Stem Cell 2024, 31:106-126.e13.

Nature 597, 119–125 (2021)

Cell Stem Cell 2020,26(6):845-861.e12.

Science Trans Med 2023,15(701):eadd7872.

STTT 2023,8(1):91.

Cell Reports 2023,42(4):112313

Science Trans Med 2023, 15: eadd7872.

Cancer Cell 2021,39(4):529-547.e7.

Cancer Discov 2022,12(4):1106-1127.

Immunity 2023,56(3):620-634.e11.

Immunity 2024,57:2651-2668.e12.

J Am Chem Soc 2022,144:21831-21836.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

Science Adv 2022:8,eabm9427.

Nature 2021,597(7874):119-125.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

PNAS Nexus 2022,1(3):pgac063.

ACS Nano 2023,17(10):9110-9125.

Biomaterial 2023 Sep16:302:122333.

产品描述
生物活性&实验参考方法
化学信息
溶解度数据
计算器
临床试验信息

产品描述

吡柔比星盐酸盐 (THP) 是蒽环类抗生素的类似物，是一种抗肿瘤药物，其作用机制与阿霉素类似，均为拓扑异构酶 II 抑制剂，用于治疗多种癌症，尤其是实体瘤。它通过嵌入 DNA 并与拓扑异构酶 II (Topo II) 相互作用来抑制 DNA 复制。M5076 细胞能快速吸收吡柔比星，其细胞内浓度是阿霉素的 2.5 倍。在体外抑制细胞生长的 50% 浓度下，吡柔比星的效果优于阿霉素。在MG-63细胞中，吡柔比星可增加Bax的表达，同时抑制PCNA、细胞周期蛋白D1、细胞周期蛋白E和Bcl-2的表达。
盐酸吡柔比星（THP盐酸盐）（CAS 95343-20-7）是一种合成蒽环类抗生素，是阿霉素的类似物。它是一种拓扑异构酶II抑制剂，广泛用于治疗多种癌症，尤其是实体瘤。与阿霉素相比，吡柔比星的配方旨在提供更优的药代动力学和更低的心脏毒性。

生物活性&实验参考方法

靶点	Topoisomerase II Pirarubicin targets topoisomerase II, an enzyme that is essential for DNA replication and cell division. By inhibiting topoisomerase II, Pirarubicin prevents the religation of DNA double-strand breaks, leading to DNA damage and cell death. It is an anthracycline antibiotic that intercalates into DNA and generates reactive oxygen species, contributing to its antitumor activity.
体外研究 (In Vitro)	吡柔比星能被M5076细胞快速吸收，其细胞内浓度是阿霉素的2.5倍以上。体外实验表明，吡柔比星的半数细胞生长抑制浓度（C₅₀）优于阿霉素。吡柔比星可诱导MG-63细胞发生G0/G1期细胞周期阻滞。在MG-63细胞中，吡柔比星可增加Bax的表达，同时抑制Bcl-2、PCNA、cyclin D1和cyclin E的表达。在具有内皮细胞的主动脉中，吡柔比星可显著舒张去甲肾上腺素（0.1 μM）引起的收缩，但在无内皮细胞的主动脉中则无此作用。亚甲蓝 (5 μM)、氢醌 (100 μM)、非尼酮 (50 μM)、血红蛋白 (1 μM) 和对溴苯乙酰溴 (50 μM) 均能抑制吡柔比星诱导的细胞松弛，但吲哚美辛 (25 μM) 则无此作用。在 SKUT1B、HEC1A 和 BG1 细胞系中，吡柔比星的效力是阿霉素的 2 至 5 倍。吡柔比星的 G2 期阻滞剂量反应模式也发生了逆转，这意味着在高剂量下，细胞周期动力学将与未处理的对照组相似。体外实验表明，盐酸吡柔比星是一种拓扑异构酶 II 抑制剂，对多种癌细胞系具有强效的抗肿瘤活性。作为一种蒽环类抗生素，它能嵌入 DNA 并抑制 DNA 复制。通常通过测量癌细胞系中的细胞活力、DNA损伤标志物和拓扑异构酶II抑制情况来评估该化合物的活性。
体内研究 (In Vivo)	吡柔比星可使荷瘤小鼠（M5076实体瘤）的肿瘤重量降低至对照组的60%，而阿霉素则无此作用。经肝动脉（HIA）途径注射时，吡柔比星和表柔比星均对V×2肿瘤有效；然而，吡柔比星的活性强于表柔比星。体内，盐酸吡柔比星已在临床上用于治疗多种癌症，尤其是实体瘤。它通过静脉注射给药。与阿霉素相比，该化合物具有更优的药代动力学特性和更低的心脏毒性，使其成为一种有价值的治疗选择。其疗效已在乳腺癌、胃癌和其他恶性肿瘤的临床研究中得到证实。
酶活实验	吡柔比星广泛用于膀胱癌的膀胱内化疗，但由于耐药性的出现，其疗效受到限制；其作用机制尚未得到充分研究。新近的证据表明，自噬可能成为癌症治疗的新靶点。本研究旨在探讨自噬在吡柔比星处理的膀胱癌细胞中的作用。我们用吡柔比星、siRNA、3-甲基腺嘌呤或羟氯喹处理膀胱癌细胞EJ和J82。分别通过细胞存活率实验和流式细胞术分析检测细胞增殖和凋亡。在处理前后，通过免疫印迹法评估自噬水平。此外，我们还通过免疫印迹法检测了雷帕霉素磷酸化靶蛋白（mTOR）、丝氨酸/苏氨酸激酶p70 S6激酶和真核翻译起始因子4E结合蛋白1（eITB1）的表达。我们发现吡柔比星可以诱导膀胱癌细胞发生自噬。 3-甲基腺嘌呤、羟氯喹抑制自噬或敲低自噬相关基因3可显著增加吡柔比星处理的膀胱癌细胞的凋亡。吡柔比星诱导的自噬是通过mTOR/p70S6K/4E-BP1信号通路介导的。总之，吡柔比星诱导的自噬在膀胱癌细胞中发挥细胞保护作用，提示抑制自噬可能比传统的吡柔比星化疗更能提高膀胱癌患者的疗效[3]。使用纯化的拓扑异构酶II进行体外吡柔比星盐酸盐酶抑制试验。将该酶与DNA底物和ATP在递增浓度的化合物存在下孵育。通过凝胶电泳测量DNA松弛或断裂的程度，并根据抑制曲线计算IC₅₀值。
细胞实验	细胞存活率分析采用MTS法。简而言之，将细胞接种于96孔板中，每个处理设置三个复孔，每孔2 × 10³个细胞，然后在生长培养基中培养。之后，将细胞暴露于三种不同浓度的吡柔比星（2.5 μg/mL、5 μg/mL和10 μg/mL）中24小时。加入MTS试剂（5 mg/mL）后，于37°C孵育4小时。使用酶标仪在490 nm处测量吸光度[3]。体外细胞实验中，使用癌细胞系（如乳腺癌细胞、胃癌细胞或白血病细胞）检测盐酸吡柔比星的活性。将细胞用不同浓度的吡柔比星处理48-72小时，并使用MTT、CCK-8或SRB法评估细胞活力。 DNA损伤可通过测量γ-H2AX灶或彗星试验进行评估。细胞凋亡可通过流式细胞术和膜联蛋白V染色进行评估。
动物实验	单次经尾静脉注射18 mg/kg吡柔比星可建立急性心脏毒性模型。36只大鼠随机均分为六组：低剂量芦丁组（25 mg/kg）、中剂量芦丁组（50 mg/kg）、高剂量芦丁组（100 mg/kg）、心脏损伤（THP）模型组和右雷佐生组（180 mg/kg）。芦丁组大鼠经尾静脉单次注射18 mg/kg吡柔比星，并连续7天灌胃给予不同剂量的芦丁和羧甲基纤维素钠（CMC-Na）。右雷佐生组大鼠连续6天灌胃给予羧甲基纤维素钠（CMC-Na）。在第7天，大鼠腹腔注射40 mg/kg右雷佐生，尾静脉注射18 mg/kg吡柔比星。THP模型组的大鼠灌胃给予CMC-Na七天，并在第7天尾静脉注射吡柔比星（18 mg/kg）。正常对照组大鼠灌胃给予CMC-Na七天，并在第7天尾静脉注射生理盐水[4]。吡柔比星盐酸盐的体内动物实验在携带人肿瘤细胞的小鼠异种移植模型中进行。该化合物以不同剂量（通常为mg/kg范围）通过静脉注射给药。定期测量肿瘤体积以评估抗肿瘤疗效，并监测体重以评估毒性。通过测量心脏功能标志物来评估心脏毒性。
药代性质 (ADME/PK)	吡柔比星盐酸盐的药代动力学特性已在临床前和临床研究中得到表征。该化合物的分子量为664.10，分子式为C₃₂H₃₈ClNO₁₂。它可溶于DMSO（10 mM）。应以粉末形式储存于-20°C，最长可保存3年；或在4°C下储存，最长可保存2年。给药途径为静脉注射。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)	盐酸吡柔比星是一种蒽环类抗生素，其毒性特征明确。与多柔比星相比，其心脏毒性有所降低。常见不良反应包括骨髓抑制、恶心、呕吐和脱发。该化合物仅供研究使用，尚未在所有司法管辖区获准用于临床。处理该化合物时应遵循标准的实验室安全预防措施。
参考文献	[1]. Cytotoxic effect of topoisomerase II inhibitors against adriamycin- and etoposide-resistant small cell lung cancer sublines. Gan To Kagaku Ryoho. 1993 May;20(7):929-35. [2]. Relationships between the in vitro cytotoxicity and transport characteristics of pirarubicin and doxorubicin in M5076 ovarian sarcoma cells, and comparison with those in Ehrlich ascites carcinoma cells. Cancer Chemother Pharmacol. 2002 Mar;49(3):244-50. Epub 2002 Jan 8. [3]. Pirarubicin induces an autophagic cytoprotective response through suppression of the mammalian target of rapamycin signaling pathway in human bladder cancer cells. Biochem Biophys Res Commun. 2015 May 1;460(2):380-5. [4]. Cardioprotective effects of rutin in rats exposed to pirarubicin toxicity. J Asian Nat Prod Res. 2017 Oct 27:1-13.
其他信息	盐酸吡柔比星是吡柔比星的盐酸盐形式，吡柔比星是蒽环类抗肿瘤抗生素阿霉素的类似物，具有抗肿瘤活性。吡柔比星可嵌入DNA并与拓扑异构酶II相互作用，从而抑制DNA复制和修复以及RNA和蛋白质的合成。该药物的心脏毒性低于阿霉素，并且对某些阿霉素耐药细胞系也有效。另见：吡柔比星（注：已移至此处）。盐酸吡柔比星（THP盐酸盐）是一种蒽环类抗生素和拓扑异构酶II抑制剂，CAS号为95343-20-7，分子式为C₃₂H₃₈ClNO₁₂，分子量为664.10。它是阿霉素的类似物，用于治疗实体瘤。该化合物具有更优的药代动力学特性和更低的心脏毒性。本产品仅供研究使用。

*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性

化学信息 & 存储运输条件

分子式	C32H38CLNO12
分子量	664.09663
精确质量	663.208
元素分析	C, 57.88; H, 5.77; Cl, 5.34; N, 2.11; O, 28.91
CAS号	95343-20-7
相关CAS号	Pirarubicin;72496-41-4
PubChem CID	20846247
外观&性状	Pink to red solid powder
沸点	834.7ºC at 760mmHg
闪点	458.6ºC
LogP	3.054
tPSA	204.3
氢键供体(HBD)数目	6
氢键受体(HBA)数目	13
可旋转键数目(RBC)	7
重原子数目	46
分子复杂度/Complexity	1120
定义原子立体中心数目	7
SMILES	O([C@@H]1O[C@@H](C)[C@@H](O[C@H]2OCCCC2)[C@@H](N)C1)[C@H]1C[C@](O)(C(=O)CO)CC2=C(C3C(=O)C4C=CC=C(C=4C(=O)C=3C(=C12)O)OC)O.Cl
InChi Key	ZPHYPKKFSHAVOE-YZIXBPQXSA-N
InChi Code	InChI=1S/C32H37NO12.ClH/c1-14-31(45-21-8-3-4-9-42-21)17(33)10-22(43-14)44-19-12-32(40,20(35)13-34)11-16-24(19)30(39)26-25(28(16)37)27(36)15-6-5-7-18(41-2)23(15)29(26)38;/h5-7,14,17,19,21-22,31,34,37,39-40H,3-4,8-13,33H2,1-2H3;1H/t14-,17-,19-,21+,22-,31+,32-;/m0./s1
化学名	(7S,9S)-7-[(2R,4S,5S,6S)-4-amino-6-methyl-5-[(2R)-oxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]oxy-6,9,11-trihydroxy-9-(2-hydroxyacetyl)-4-methoxy-8,10-dihydro-7H-tetracene-5,12-dione;hydrochloride
别名	Pirarubicin HCl; Pirarubicin hydrochloride; Pirarubicin (Hydrochloride); Theprubicin; THP hydrochloride; E7V83174BE; 5,12-Naphthacenedione,10-[[3-amino-2,3,6-trideoxy-4-O-[(2R)-tetrahydro-2H-pyran-2-yl]-a-L-lyxo-hexopyranosyl]oxy]-7,8,9,10-tetrahydro-6,8,11-trihydroxy-8-(hydroxyacetyl)-1-methoxy-, hydrochloride, (8S,10S)-; Pirarubicin hydrochloride
HS Tariff Code	2934.99.9001
存储方式	Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意：请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。
运输条件	Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

溶解度数据

溶解度 (体外实验)	DMSO: ~20.8 mg/mL (~31.4 mM) H2O: < 0.1 mg/mL
溶解度 (体内实验)	配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.13 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 +5% Tween-80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80+，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。

溶解度 (体外实验)

DMSO: ~20.8 mg/mL (~31.4 mM)
H2O: < 0.1 mg/mL

溶解度 (体内实验)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.13 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 +5% Tween-80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80+，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。

制备储备液		1 mg	5 mg	10 mg
	1 mM	1.5058 mL	7.5290 mL	15.0580 mL
	5 mM	0.3012 mL	1.5058 mL	3.0116 mL
	10 mM	0.1506 mL	0.7529 mL	1.5058 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;

4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。

计算器

质量

浓度

体积

分子量*

计算重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度

参见示例

使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？

在分子量（MW）框中输入350.26
在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
单击“计算”按钮
答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。

浓度 (起始)

体积 (起始)

浓度 (终)

体积 (终)

计算重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：

在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
单击“计算”按钮
答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中

分子式

分子量

g/mol

计算重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4 c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：

要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。

分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：

分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。

配液体积

质量

配液浓度

计算重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
单击“计算”按钮
答案显示在体积框中

动物体内实验配方计算器（澄清溶液）

第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）

给药剂量 mg/kg

动物平均体重 g

每只动物给药体积 μL

动物数量

第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。

% DMSO

% Tween 80

% ddH₂O

计算重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH₂O，混匀澄清。

注意： (1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

临床试验信息

NCT Number	Recruitment	interventions	Conditions	Sponsor/Collaborators	Start Date	Phases
NCT04437160	Recruiting	Drug: Epirubicin or Pirarubicin Drug: Cyclophosphamide	Triple Negative Breast Cancer	Chinese Academy of Medical Sciences	February 1, 2020	Phase 2
NCT05287308	Not yet recruiting	Drug: pirarubicin Drug: cyclophosphamide	Breast Cancer	Chinese Academy of Medical Sciences	March 2022	Not Applicable
NCT02613026	Completed	Drug: Pirarubicin Drug: Docetaxel	Breast Neoplasms	307 Hospital of PLA	July 2009	Phase 3