| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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描述：PKC-θ抑制剂是一种新型、高效且选择性的PKC-θ抑制剂，IC50值为12 nM。它是在一项旨在筛选PKC-θ选择性抑制剂的超高通量筛选（uHTS）活动中发现的。基于选择性和历史分析对先导化合物进行初步筛选，最终确定2,4-二氨基-5-硝基嘧啶类化合物为高效且选择性的PKC-θ抑制剂。本文构建了同源模型并进行了初步构效关系（SAR）分析，结果表明，2-芳基烷基氨基取代基与合适的4-二氨基取代基的组合对于实现对多种激酶的选择性至关重要。此外，本文还对部分化合物进行了先导化合物筛选分析。
| 靶点 |
PKC-θ (protein kinase C theta)
Other kinases screened for selectivity (IC50 values not individually listed for all, but compound 3 showed very good selectivity against VEGFR1, LYN, IR, SYK; selectivity heat map in Figure 4 for 38 analogs with PKC-θ IC50 <0.5 μM against a panel of 13 kinases representing 494 dose responses). [1] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
对 PKC-θ 酶活性具有强效抑制作用：代表性化合物的 IC50 值范围从 0.005 μM（化合物 24）到 >10 μM（化合物 53）。2 位构效关系研究表明，邻位取代的苄基衍生物具有优势（例如，化合物 14，邻位 OCH3，IC50 = 0.017 μM；化合物 22，邻位 SCF3，IC50 = 0.006 μM；化合物 23，邻位 SCH3，IC50 = 0.005 μM；化合物 24，邻位 Br，IC50 = 0.005 μM）。4 位构效关系表明，末端胺基具有合适的间距至关重要；化合物 59（3-(H2NCH2)-环己基甲基）的 IC50 值为 0.003 μM。 5-硝基系列化合物的效力比5-三氟甲基系列化合物高约10倍（例如，化合物6与3-ClPh的IC50=0.067 μM，而化合物7的IC50=0.64 μM）。[1]
细胞活性：抑制抗CD3/抗CD28单克隆抗体激活的人CD4+ T细胞中IL-2的产生。IC50值：化合物23 = 0.08 μM，化合物24 = 0.14 μM，化合物65 = 0.19 μM，化合物57 = 0.72 μM（表5）。[1] 选择性：化合物对13种激酶均表现出高度选择性（图4）。延长连接基的类似物（46-48）和α-Ph类似物25的选择性降低。高选择性的合理解释是，需要正确定位的氨基与 Asp508 相互作用，而 2-苄氨基取代基通过与富含甘氨酸的环、特异性表面和铰链区的相互作用来控制特异性。[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在神经节阻滞的麻醉大鼠中，30 mg/kg 的磷酰胺酮不能阻断 ET-1 (1 nmol/kg) 引起的升压反应 [5]。
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| 酶活实验 |
采用两步竞争性荧光偏振 (FP) 法测定 PKC-θ 的酶活性。在激酶反应步骤中，将 50 nM PKC-θ 稀释于测定缓冲液（20 mM Hepes，pH 7.6，0.1 mM CaCl₂，10 mM MgCl₂，0.01% CHAPS，200 μM TCEP，100 μM 原钒酸钠和蛋白酶抑制剂混合物）中，并与化合物稀释液在室温下预孵育 10 分钟。反应以肽底物 (RFARKGSLRQKNV) 和 ATP 的混合物启动（终浓度：1 μM 肽和 10 μM ATP）。反应板在室温下孵育 60 分钟。在荧光偏振 (FP) 检测步骤中，加入用淬灭缓冲液稀释的荧光素标记的磷酸肽示踪剂和抗磷酸丝氨酸抗体，并在室温下孵育 90 分钟。使用合适的滤光片（激发波长 485 nm，发射波长 530 nm，二向色镜 505 nm）测量荧光偏振。[1] ATP 竞争实验结果得到证实（数据未显示）：化合物 3 在 50 μM ATP 浓度下 IC50 = 0.29 μM，在 100 μM ATP 浓度下 IC50 = 0.63 μM。[1]
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| 细胞实验 |
通过阳性选择法从全血中分离人CD4+ T细胞。纯化的T细胞通过抗CD3和抗CD28单克隆抗体激活TCR和CD28。化合物用5% DMSO稀释至各剂量下最终DMSO浓度为0.125%。每孔加入100 μL培养基，其中包含50,000个细胞，随后加入100 μL化合物或DMSO。细胞在37℃孵育过夜，然后取上清液，以1:10的比例稀释后，使用ELISA试剂盒检测IL-2。[1]
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| 药代性质 (ADME/PK) |
CYP 抑制 IC50 值（表 5）：化合物 23：CYP2C9 = 1.0 μM，CYP2D6 = 4.3 μM，CYP3A4 = 0.71 μM；化合物 24：2C9 = 1.4 μM，2D6 = 4.7 μM，3A4 = 6.9 μM；化合物 65：2C9 = 8.4 μM，2D6 = 1.7 μM，3A4 = 1.7 μM；化合物 57：2C9 = 17.6 μM，2D6 = 26 μM，3A4 = >30 μM。 [1]
人肝微粒体 (HLM) 稳定性半衰期（表 5）：化合物 23 = 4.3 分钟，化合物 24 = 4.7 分钟，化合物 65 = 1.7 分钟，化合物 57 = 26 分钟。[1] Caco-2 细胞渗透性（AB/BA，10⁻⁶ cm/s，表 5）：化合物 23 = 0.71/1.44，化合物 24 = 6.9/>30，化合物 65 = 1.7/13，化合物 57 = 26/>30。[1] 化合物被证实与 ATP 竞争（数据未显示）。[1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
这些化合物含有硝基，这可能构成结构警示；然而，总体而言，其性质特征符合先导化合物筛选流程的要求。未提供具体的毒性数据。[1]
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
PKC-θ 是新型 PKC 亚家族（nPKCδ、ε、η、θ）的成员，需要 DAG 和 PS，但钙离子不依赖。T 细胞活化后，PKC-θ 在 TCR 受到抗原刺激后发生易位。基因敲除表型表明，PKC-θ 抑制剂可作为一种免疫抑制剂，且不影响 T 细胞发育。银屑病和移植并发症等自身免疫性疾病的特征是 T 细胞异常活化引起的致病反应。目前的治疗方法包括环孢素、FK506 和类固醇，但这些药物均存在副作用；因此，迫切需要一种副作用更安全的免疫抑制药物。[1] 超高通量筛选 (uHTS) 鉴定出两类化合物：二氨基嘧啶类和吲哚啉酮类。嘧啶类化合物（图 2 中绿色标签所示）显示出选择性趋势，而吲哚啉酮类化合物则没有可用于选择性的构效关系 (SAR)。因此，嘧啶类化合物得到了进一步发展。[1]
通用合成方法（方案 1）：2,4-二氯-5-硝基嘧啶在乙酸中与硫氰酸钾反应，选择性地在 4 位发生反应。2-氯与芳烷基胺的取代反应顺利进行，随后硫氰酸根与合适的胺发生取代反应。使用过量的二胺或单保护/脱保护步骤是为了避免双加成反应。[1] |
| 分子式 |
C20H25F3N6O3
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|---|---|---|
| 分子量 |
454.45
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| 精确质量 |
454.194
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| CAS号 |
736048-65-0
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| 相关CAS号 |
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| PubChem CID |
10253430
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| LogP |
4.7
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| tPSA |
131
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| 氢键供体(HBD)数目 |
3
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| 氢键受体(HBA)数目 |
11
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| 可旋转键数目(RBC) |
8
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| 重原子数目 |
32
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| 分子复杂度/Complexity |
586
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
C1CC(CN)CCC1CNC1=NC(NCC2=C(C=CC=C2)OC(F)(F)F)=NC=C1[N+](=O)[O-]
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| InChi Key |
HKOWATVSFKRXRW-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C20H25F3N6O3/c21-20(22,23)32-17-4-2-1-3-15(17)11-26-19-27-12-16(29(30)31)18(28-19)25-10-14-7-5-13(9-24)6-8-14/h1-4,12-14H,5-11,24H2,(H2,25,26,27,28)
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| 化学名 |
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.50 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.50 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.50 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.2005 mL | 11.0023 mL | 22.0046 mL | |
| 5 mM | 0.4401 mL | 2.2005 mL | 4.4009 mL | |
| 10 mM | 0.2200 mL | 1.1002 mL | 2.2005 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
ζ-Stat (NSC37044)
PKCη pseudosubstrate inhibitor,myristoylated
PKCβII Peptide Inhibitor I
PKCε (85-92)
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COA
粤公网安备 44011102003439号
463611831
