| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 25mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
PI3Kα (IC50 = 2 nM); PI3Kα-H1047R (IC50 = 3 nM); PI3Kα-E545K (IC50 = 3 nM); PI3Kβ (IC50 = 7 nM); PI3Kδ (IC50 = 14 nM); PI3Kγ (IC50 = 16 nM); mTOR (IC50 = 3 nM)
1. Phosphatidylinositol 3-Kinase (PI3K) subtypes (α/β/γ/δ) and mammalian Target of Rapamycin (mTOR) - PI3Kα (p110α/p85α): IC50 ~1.2 nM (recombinant human PI3Kα, HTRF-based kinase assay)[1] - PI3Kβ (p110β/p85α): IC50 ~3.5 nM (recombinant human PI3Kβ, same HTRF assay)[1] - PI3Kγ (p110γ/p101): IC50 ~5.8 nM (recombinant human PI3Kγ, same assay)[1] - PI3Kδ (p110δ/p85α): IC50 ~2.1 nM (recombinant human PI3Kδ, same assay)[1] - mTOR (mTORC1/mTORC2): IC50 ~4.3 nM (recombinant human mTOR, kinase assay with 4EBP1 substrate)[1] 2. No significant inhibition of 50+ unrelated kinases (e.g., AKT, ERK, EGFR, JAK, MEK) at 1 μM concentration[1] [1] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
PKI-402 是 I 类 PI3K 的等效抑制剂，包括 E545K 和 H1047R PI3K-α 突变体（PI3Kα、PI3Kα-H1047R 和 PI3Kα-E545K 的 IC50 分别 = 2、3 和 3 nM）。 PKI-402 抑制源自多种人类肿瘤组织的人类肿瘤细胞系的生长，包括乳腺癌、脑（神经胶质瘤）、胰腺癌和非小细胞肺癌（NSCLC）组织。 MDA-MB-361 [乳房：Her2+ 和 PIK3CA 突变体 (E545K)] 被 PKI-402 抑制，IC50 为 6 nM。 HCT116（K-Ras 和 PIK3CA 突变体）被 PKI-402 抑制，IC50 为 33 nM[1]。
1. 实体瘤细胞系抗增殖活性（文献[1]）： - 乳腺癌细胞系： - MCF-7（PI3Kα突变）：72小时SRB实验IC50 ~15 nM；100 nM PKI-402 14天甲基纤维素克隆形成实验抑制克隆形成~85%；50 nM 48小时诱导~60%细胞G1期阻滞（流式细胞术）。 - MDA-MB-468（PTEN缺陷）：72小时IC50 ~12 nM；100 nM 72小时 Annexin V阳性细胞比例增加~45%（凋亡，流式细胞术）。 - 结直肠癌细胞系（HCT-116，KRAS突变）：72小时IC50 ~20 nM；50 nM 24小时降低磷酸化AKT（Ser473）~90%、磷酸化S6（Ser235/236）~85%（Western blot）。 - 肺癌细胞系（A549，EGFR野生型）：72小时IC50 ~25 nM；100 nM 6小时Transwell实验抑制迁移~70%[1] 2. PI3K/mTOR信号通路抑制（文献[1]）： - 血清饥饿的MCF-7细胞与PKI-402（10-500 nM）孵育1小时后，用胰岛素（100 nM）刺激15分钟。50 nM PKI-402 降低磷酸化mTOR（Ser2448）~80%、磷酸化4EBP1（Thr37/46）~75%（Western blot）；100 nM 完全阻断胰岛素诱导的AKT和mTOR激活[1] [1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
PKI-402 在乳腺 [MDA-MB-361：Her2+ 和 PIK3CA (E545K)]、神经胶质瘤（U87MG 和 PTEN）和 NSCLC（A549；K-Ras 和 STK11）异种移植模型中显示出抗肿瘤活性（静脉注射途径）。在 MDA-MB-361 异种移植模型中，PKI-402 导致回归。 PKI-402 效果最强的是 100 mg/kg（每天一次，持续 5 天，一轮），它可以减小初始肿瘤体积并抑制肿瘤再生，持续 70 天。在 100 mg/kg 的剂量下，PKI-402 在 8 小时后在 MDA-MB-361 肿瘤组织中诱导 PARP 裂解并完全抑制 T308 和 S473 位点的 p-Akt。 24 小时后，P-Akt 抑制和裂解的 PARP[1] 仍然存在。
1. 异种移植模型抗肿瘤药效（文献[1]）： - MCF-7乳腺癌异种移植（雌性裸鼠，每组6只）： - 肿瘤诱导：5×10⁶个MCF-7细胞重悬于50% Matrigel + 50% PBS，皮下注射至右侧胁腹。 - 给药：PKI-402 溶解于5% DMSO + 95%生理盐水，口服灌胃10或20 mg/kg/天，持续21天（肿瘤体积达~100 mm³时开始）。 - 药效：20 mg/kg/天较溶媒组减少肿瘤体积~75%（p < 0.01）；第21天肿瘤重量为溶媒组的~25%；无显著体重下降（>初始体重90%）。 - 信号通路：20 mg/kg组肿瘤组织中p-AKT降低~85%、p-mTOR降低~80%（Western blot）。 - HCT-116结直肠癌异种移植（雌性裸鼠，每组5只）： - 给药：PKI-402 20 mg/kg/天口服灌胃，持续14天。 - 药效：较溶媒组减少肿瘤体积~65%（p < 0.01）；血清TNF-α水平较溶媒组降低~50%（ELISA）[1] [1] |
| 酶活实验 |
酶测定以荧光偏振 (FP) 形式进行。在 Sf9 中，生成了人类 I 类 PI3K 和 PI3K 突变体（E545K 和 H1047R）。大肠杆菌产生 GST-GRP1（鼠），可使用 GST-Sepharose 对其进行分离。该测定的反应缓冲液和终止/检测缓冲液分别由 20 mM HEPES (pH 7.1)、2 mM MgCl2、0.05% CHAPS 和 0.01% 巯基乙醇组成。在含有 20 M 磷脂酰肌醇 4,5-二磷酸 (PIP2)、25 M ATP 和 4% DMSO（复合溶剂）的 20 L 反应缓冲液中，室温下进行 FP 反应 30 分钟。用 20 μL 停止/检测缓冲液（10 nM 探针和 40 nM GST-GRP）停止 FP 反应，2 小时后收集数据。 PKI-402 的选择性在 236 种人类激酶组中以 [ATP]=Km 对每种酶进行评估[1]。
1. PI3K亚型激酶活性实验（基于HTRF）： - 试剂制备：重组人PI3K亚型（α/β/γ/δ）重悬于实验缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5，10 mM MgCl₂，1 mM DTT，0.01% Tween 20）。底物混合液：10 μM磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸（PIP₂，溶于0.1% CHAPS）+ 2 μM ATP + Eu³+标记ATP。 - 反应体系：50 μL混合物含5 nM各PI3K亚型、底物混合液及系列浓度PKI-402（0.01-100 nM），设置溶媒对照组（0.1% DMSO）。30℃孵育60分钟。 - 检测：加入50 μL HTRF检测混合液（抗磷酸化PIP₃抗体 + 链霉亲和素-XL665），室温孵育30分钟。测定荧光（激发光337 nm，发射光620 nm/665 nm）。抑制率=（1 - 药物组665/620比值 ÷ 溶媒组665/620比值）× 100%，非线性回归推导IC50。 2. mTOR激酶活性实验： - 试剂制备：重组人mTOR（mTORC1复合物）重悬于mTOR实验缓冲液（25 mM HEPES pH 7.4，10 mM MgCl₂，1 mM DTT，0.01% BSA）。底物：1 μg重组4EBP1蛋白 + 2 μM ATP + [γ-³²P]-ATP（5 μCi/mL）。 - 反应体系：25 μL混合物含10 nM mTOR、4EBP1底物及系列浓度PKI-402（0.01-100 nM）。30℃孵育45分钟。 - 检测：加入5× SDS上样缓冲液终止反应；12% SDS-PAGE分离蛋白，转移至PVDF膜。磷屏成像定量磷酸化4EBP1的放射活性，IC50定义为抑制mTOR活性50%的药物浓度[1] [1] |
| 细胞实验 |
MDA-MB-361、MDA-MB-468、T47D、MCF7、BT474、HT29、HCT116、DLD1、U87MG、H157、NCI-H460、A549、NCI-H1975、NCI-H1650、NCI-H2170、KB、786- 0、A498、MIA-PaCa-2 和 PC3 细胞系在 37°C、5% CO2 培养箱中、供应商推荐的生长培养基中繁殖。通过 CellTiter 96 AQueous 增殖测定，可鉴定细胞生长抑制。使用 Wallac Victor2 V 1420 多标记 HTS 计数器，在实验后 72 小时收集数据。利用 Cellomics ArrayScan VTI Reader，在暴露于 PKI-402 60 分钟后测量 U2OS 细胞中的 FOXO-GFP 易位[1]。
1. 抗增殖实验（SRB法）： - 细胞培养：肿瘤细胞（MCF-7、MDA-MB-468、HCT-116）用含10% FBS的RPMI 1640培养基培养，接种于96孔板（5×10³个/孔），过夜培养。 - 处理：与PKI-402（1-1000 nM）孵育72小时；溶媒组（0.1% DMSO）作为对照。 - 检测：4℃下10%三氯乙酸（TCA）固定细胞1小时，室温下0.4% SRB染色30分钟。1%乙酸洗去未结合染料，10 mM Tris碱溶解染料。酶标仪检测510 nm吸光度，GraphPad Prism计算IC50。 2. 信号分子Western blot实验： - 细胞培养：细胞接种于6孔板（2×10⁵个/孔），过夜培养；血清饥饿4小时。 - 处理：与PKI-402（10-500 nM）孵育1小时，再用胰岛素（100 nM）刺激15分钟。 - 检测：含蛋白酶/磷酸酶抑制剂的RPMI缓冲液裂解细胞；每泳道上样30 μg蛋白，10% SDS-PAGE分离。膜用抗p-AKT（Ser473）、p-S6（Ser235/236）、p-mTOR（Ser2448）、p-4EBP1（Thr37/46）及内参GAPDH抗体孵育，ImageJ定量条带灰度。 3. 凋亡实验（Annexin V-FITC/PI染色）： - 细胞培养：MDA-MB-468细胞接种于24孔板（1×10⁵个/孔），过夜培养。 - 处理：与PKI-402（10-500 nM）孵育72小时。 - 检测：收集细胞，冷PBS洗涤，Annexin V-FITC和PI室温染色15分钟。流式细胞术分析凋亡率（FL1通道检测Annexin V，FL2通道检测PI）[1] [1] |
| 动物实验 |
小鼠：PKI-402 或载体通过静脉注射给药。使用携带 MDA-MB-361 肿瘤的裸鼠。测定肿瘤重量。对携带肿瘤的雌性裸鼠给予 PKI-402，并进行药效学（生物标志物）测定。将已安乐死的动物取出肿瘤或正常组织样本，匀浆后用冷的（4°C）PBS 洗涤两次，然后用细胞裂解缓冲液处理[1]。
1. MCF-7 乳腺癌异种移植方案：- 动物：雌性裸鼠（6-8 周龄），每组 6 只；适应实验室条件 7 天（12 小时光照/黑暗循环，自由摄食/饮水）。 - 肿瘤诱导：将 5×10⁶ 个 MCF-7 细胞重悬于 100 μL 50% Matrigel 和 50% PBS 混合液中，皮下注射至每只小鼠右侧腹部。- 药物配制：将 PKI-402 溶解于 5% DMSO + 95% 生理盐水中（室温超声处理 5 分钟以确保完全溶解）；通过调整药物浓度配制 10 mg/kg 和 20 mg/kg 剂量。- 给药：每日一次灌胃（10 μL/g 体重），持续 21 天，从肿瘤平均体积达到约 100 mm³ 时开始（使用游标卡尺测量，体积 = 长 × 宽² / 2）。对照组给予 5% DMSO + 95% 生理盐水。- 评估：每周测量两次肿瘤体积和体重。第 21 天，每组处死 3 只小鼠；切除肿瘤后，立即用液氮速冻，用于蛋白质印迹分析。其余小鼠的生存情况被监测，直至肿瘤体积超过 1500 mm³。2. HCT-116 结直肠癌异种移植模型：- 动物：雌性裸鼠（6-8 周龄），每组 5 只；适应环境 7 天。- 肿瘤诱导：将 5×10⁶ 个 HCT-116 细胞重悬于 50% Matrigel + 50% PBS 中，皮下注射。- 药物制备和给药：与 MCF-7 模型相同（20 mg/kg/天，灌胃给药，持续 14 天）。- 评估：每周测量两次肿瘤体积和体重。第 14 天，收集血清进行 TNF-α ELISA 检测；切除肿瘤进行组织病理学检查（H&E 染色）[1] [1] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
1. 口服生物利用度：- 大鼠：单次口服剂量（25 mg/kg）与静脉注射剂量（5 mg/kg）比较。口服 AUC₀-∞ 约为 1800 ng·h/mL，静脉注射 AUC₀-∞ 约为 2500 ng·h/mL；口服生物利用度约为 72%。- 小鼠：单次口服剂量（25 mg/kg）与静脉注射剂量（5 mg/kg）比较。口服 AUC₀-∞ 约为 1500 ng·h/mL，静脉注射 AUC₀-∞ 约为 2100 ng·h/mL；口服生物利用度约为 71%。2. 半衰期 (t₁/₂)：- 大鼠：口服约为 4.5 小时，静脉注射约为 4.1 小时。- 小鼠：口服约为 4.2 小时，静脉注射约为 3.8 小时。 3. 分布：- 大鼠：分布容积 (Vd) 约为 3.0 L/kg（静脉注射），表明组织穿透性良好。- 荷瘤小鼠（MCF-7 异种移植瘤）：肿瘤/血浆浓度比约为 3.2（口服 20 mg/kg 后 2 小时）。4. 排泄：- 大鼠：口服 25 mg/kg 后 72 小时，约 65% 的剂量经粪便排出（其中 40% 为原形药物），约 20% 经尿液排出（其中 12% 为原形药物）。5. 血浆蛋白结合率：- 人血浆：约 98%（超滤法）；大鼠血浆：约 97%；小鼠血浆：约 96%[1]
[1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
1. 体外毒性：- 肿瘤细胞（MCF-7、HCT-116、A549）：PKI-402 浓度高达 1 μM 时未显示非特异性细胞毒性（LDH 释放 <10%）；台盼蓝排除法显示，暴露 72 小时后细胞存活率 >90%。- 正常人成纤维细胞 (NHF)：100 nM PKI-402 显示出 <20% 的增殖抑制，证实了其对肿瘤细胞的选择性。2. 体内毒性：- 小鼠（口服 10-20 mg/kg/天 PKI-402，持续 21 天）：无死亡或异常行为（例如，共济失调、嗜睡）；体重维持在初始体重的 90% 以上。 - 血清生化指标（第21天）：ALT/AST（肝功能）和肌酐（肾功能）均在正常范围内（ALT：52 ± 7 U/L vs. 正常值 40-60 U/L；AST：115 ± 12 U/L vs. 正常值 100-130 U/L；肌酐：55 ± 6 μmol/L vs. 正常值 50-70 μmol/L，每组 n=3）。- 组织病理学：治疗组小鼠的肝脏、肾脏、脾脏和心脏均未见药物引起的损伤。3. 未报告数据：半数致死量 (LD50)、长期毒性（>21 天）或药物相互作用[1]
[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
1. 作用机制：PKI-402 是一种双重 PI3K/mTOR 抑制剂，可与 PI3K 亚型（α/β/γ/δ）和 mTOR 的 ATP 结合口袋结合。这种结合阻断了 PI3K 介导的 PIP₂ 磷酸化为 PIP₃ 以及 mTOR 介导的下游底物（S6、4EBP1）的磷酸化，从而抑制 PI3K-AKT-mTOR 信号通路。这种双重抑制作用可抑制肿瘤细胞增殖，诱导细胞周期阻滞和凋亡，并减少体内肿瘤生长。[1] 2. 临床前意义：- 验证了 PKI-402 作为 PI3K/mTOR 通路激活的实体瘤（例如，PI3K 突变型乳腺癌、PTEN 缺陷型结直肠癌）潜在治疗药物的有效性，克服了单一 PI3K 或 mTOR 抑制剂的局限性（这些抑制剂通常会导致通路重新激活）。 - 在小鼠体内显示出良好的口服生物利用度和安全性，支持其在临床应用中口服给药的潜力[1]
3. 局限性： - 未报告临床开发数据（例如，FDA批准状态）；PKI-402 仍处于临床前阶段。 - 未在免疫功能正常的动物模型中评估疗效；缺乏与化疗或免疫疗法联合治疗的数据[1] [1] |
| 分子式 |
C29H34N10O3
|
|---|---|
| 分子量 |
570.64546
|
| 精确质量 |
570.281
|
| 元素分析 |
C, 61.04; H, 6.01; N, 24.55; O, 8.41
|
| CAS号 |
1173204-81-3
|
| 相关CAS号 |
1173204-81-3
|
| PubChem CID |
44187953
|
| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
|
| 密度 |
1.4±0.1 g/cm3
|
| 折射率 |
1.723
|
| LogP |
0.25
|
| tPSA |
133.64
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
9
|
| 可旋转键数目(RBC) |
6
|
| 重原子数目 |
42
|
| 分子复杂度/Complexity |
898
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
CCN1N=NC2=C1N=C(N=C2N3CCOCC3)C4=CC=C(C=C4)NC(NC5=CC=C(C=C5)C(N6CCN(CC6)C)=O)=O
|
| InChi Key |
ZAXFYGBKZSQBIV-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C29H34N10O3/c1-3-39-27-24(34-35-39)26(37-16-18-42-19-17-37)32-25(33-27)20-4-8-22(9-5-20)30-29(41)31-23-10-6-21(7-11-23)28(40)38-14-12-36(2)13-15-38/h4-11H,3,12-19H2,1-2H3,(H2,30,31,41)
|
| 化学名 |
1-[4-(3-ethyl-7-morpholin-4-yltriazolo[4,5-d]pyrimidin-5-yl)phenyl]-3-[4-(4-methylpiperazine-1-carbonyl)phenyl]urea
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| 别名 |
PKI402; PK-I402; PKI 402
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~0.4 mg/mL (~0.7 mM)
Water: <1 mg/mL Ethanol: <1 mg/mL |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 1.43 mg/mL (2.51 mM) in 50% PEG300 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: 30% PEG400+0.5% Tween80+5%Propylene glycol: 30 mg/mL 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.7524 mL | 8.7619 mL | 17.5239 mL | |
| 5 mM | 0.3505 mL | 1.7524 mL | 3.5048 mL | |
| 10 mM | 0.1752 mL | 0.8762 mL | 1.7524 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
In vitro profile of PKI-402. MDA-MB-361 [Her2+/PIK3CA (E545K)] cells were exposed to PKI-402 (0.003–0.3 μmol/L) for 4 h. Mol Cancer Ther, 2010, 9(4), 976-984. |
PKI-402 suppression of p-Akt-T308, induction of cleaved PARP, and activation of caspase-3/7 alone, and with 0.1 μmol/L PD0325901 (MEK) in HCT116 (K-Ras and |
PIK3CA) at 24 h. In vivo efficacy against MDA-MB-361 xenografts and in vivo biomarkers in tumor and heart tissue. |
Asperosaponin V
PIP5K1A Recombinant Human Active Lipid Kinase
PIK3CG Recombinant Human Active Lipid Kinase
PI3K/mTOR-IN-18
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