| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
FAK (IC50 = 1.5 nM)
Focal Adhesion Kinase (FAK): PND-1186 (VS-4718; SR-2156) was characterized as a selective FAK inhibitor based on its ability to block FAK phosphorylation (Tyr397) in three-dimensional (3D) tumor cell cultures [1] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
PND-1186对FAK的抑制作用不同于Src PTK抑制剂的作用。
PND-1186在体外抑制4T1乳腺癌的运动。
纳摩尔PND-1186水平在悬浮但非粘附条件下促进4T1凋亡。
PND-1186在球体生长条件下抑制FAK和p130Cas酪氨酸磷酸化。
PND-1186在纳摩尔浓度下减少软琼脂菌落数量和大小。
[1]
使用针对 FAK Tyr-397 的抗磷酸特异性免疫印迹发现 PND-1186 在乳腺癌细胞中的 IC50 低于 100 nM [1]。 FAK 在小鼠 4T1 乳腺癌细胞中产生侵袭性和转移性细胞表型方面发挥着至关重要的作用。当 PND-1186 以不断增加的浓度（0.1 至 1.0 µM）引入 4T1 细胞时，FAK Tyr-397 磷酸化 (pY397) 会受到抑制，并且在一小时内，总 FAK 蛋白水平会升高[1]。 在人乳腺癌细胞（MDA-MB-231）和胶质母细胞瘤细胞（U87MG）的3D胶原基质培养中：PND-1186（VS-4718；SR-2156）（1 μM–5 μM）可浓度依赖性诱导细胞凋亡（Annexin V/PI染色显示，凋亡细胞比例从对照组的~10%增至5 μM时的~40%）。该效应具有3D环境选择性，二维（2D）单层培养中凋亡反应微弱（5 μM时凋亡率<15%）。机制研究表明，PND-1186（VS-4718；SR-2156）抑制3D环境中FAK磷酸化（Tyr397）及下游Akt/mTOR信号通路，导致抗凋亡蛋白（Bcl-2、Mcl-1）表达下调和caspase-3激活[1] - 在MDA-MB-231和U87MG细胞的2D单层培养中：PND-1186（VS-4718；SR-2156）（最高10 μM）对细胞活力影响有限（抑制率<20%），且对FAK磷酸化无显著作用，凸显其3D环境依赖性活性[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
当在颈部皮下注射（30 mg/kg 或 100 mg/kg）时，PND-1186 通过诱导细胞凋亡来抑制 4T1 皮下肿瘤的生长[1]。
PND-1186通过诱导细胞凋亡抑制4T1皮下肿瘤生长[1] 为了确定4T1肿瘤生长对PND-1186给药的敏感性，将mCherry荧光标记的4T1细胞在BALB/c小鼠皮下生长（图7）。在原发性肿瘤建立8天后，每12小时给药一次30mg/kg或100mg/kg的载体或PND-1186（每日两次，b.i.d.），持续5天，之后原位观察mCherry 4T1肿瘤，然后提取并称重（图7A和b）。尽管载体治疗的4T1肿瘤具有明亮的荧光，通常是多裂的，并且已经侵入周围组织，但用100mg/kg PND-1186治疗的小鼠肿瘤含有深色的非荧光中心，通常是圆形的，并且松散地附着在真皮下组织上（图7A）。100mg/kg PND-1186治疗显著降低了最终4T1肿瘤重量2倍（n=8，p<0.05），而30mg/kg PND-1186略微降低了最终肿瘤重量，但与对照组相比没有显著差异（n=8（p>0.05））。为了确定100mg/kg PND-1186肿瘤中心mCherry荧光的丧失是否与细胞凋亡增加有关，通过TUNEL（图7C和D）和抗切割胱天蛋白酶3（图7E）染色分析了中间切片。与赋形剂处理的对照组相比，30和100 mg/kg的PND-1186给药显著增加了肿瘤TUNEL染色（图7D）。由于在PND-1186治疗的小鼠的肿瘤中也发现了升高的切割半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3染色（图7E），这些结果与我们的体外分析相吻合，表明PND-1186在3D条件下促进4T1细胞的凋亡，从而抑制体内肿瘤生长。 PND-1186在体内抑制卵巢癌肿瘤生长[1] 在卵巢癌肿瘤细胞进展过程中，细胞可以从原发性肿瘤中分离出来，并在腹膜空间内生长为多细胞球体32。由于PND-1186在3D环境中选择性地促进4T1乳腺癌细胞凋亡，因此在体外和体内评估了PND-1186对小鼠ID8卵巢癌细胞生长的影响（图8）。当在含有0.1µM PND-1186的悬浮细胞培养物中生长时，ID8细胞数量呈剂量依赖性减少，在72小时时显示出显著的抑制作用（图8A），并在15天后促进活细胞的急剧减少（图8B）。为了确定低水平的PND-1186是否会影响体内ID8的生长，将细胞腹腔注射到C57BL6小鼠体内，11天后，在5%蔗糖中为小鼠提供0.5mg/ml的PND-1166，以代替随意饮用水。在饮用水中添加PND-1186和蔗糖后，没有发现不良反应和体重减轻。治疗30天后，与蔗糖对照组相比，PND-1186显著减少了腹水相关细胞的数量（图8C），这与0.5mg/ml PND-1186给药几乎完全抑制FAK pY397有关（图8D和E）。综上所述，我们的结果表明，PND-1186在体外和体内抑制乳腺癌和卵巢癌细胞的生长。PND-1186在三维环境中促进细胞凋亡的选择性作用表明，FAK活性在产生锚定非依赖性存活信号方面发挥了新作用。 |
| 酶活实验 |
杆状病毒FAK催化结构域和体外激酶测定[1]
通过聚合酶链式反应，使用引物5'-cgatcgaattctcgaccagggatgatgagatca-3'5'-tagctgtcgacttactgaccttcctccctcgg-3'产生FAK催化结构域区域（411-686），将其克隆到pGEX4T中作为与GST的融合物，并转移到pAcG2T杆状病毒表达载体中。通过空斑试验鉴定病毒克隆并扩增。对于蛋白质表达，SF9细胞在2-5pfu/细胞的多重感染下转导，并在27°C下培养48小时。使用谷胱甘肽琼脂糖亲和层析纯化GST-FAK（411-686），然后使用hiload 16/60 Superdex层析进行尺寸分级。将蛋白质浓缩并冷冻保存在50 mM Tris pH 8.0、150 mM NaCl、1 mM原钒酸钠、0.5 mM EDTA、0.5 mM EGTA、0.1%β-巯基乙醇和20%甘油中。SDS-PAGE估计纯度>90%。使用K-LISA筛选试剂盒和聚（Glu:Tyr）（4:1）共聚物作为固定在微量滴定板上的底物，测量GST-FAK体外激酶活性，并将其与His标记的FAK 411-686进行比较。在室温下，在含有50µM ATP和10 mM MnCl2、50 mM HEPES（pH 7.5）、25 mM NaCl、0.01%BSA和0.1 mM原钒酸钠的缓冲液中，用不同浓度的测试化合物测定IC50值5分钟。以½对数浓度（从1µM开始）对连续稀释的化合物进行了三次测试。使用辣根过氧化物酶偶联的抗pTyr抗体（PY20，Santa Cruz Biotechnology）通过分光光度法定量测定底物磷酸化。使用Hill Slope模型测定IC50值。激酶选择性分析是通过使用KinaseProfiler服务进行的。 PND-1186是通过高通量激酶活性筛选和常规药物化学方法鉴定的。如专利申请41中所述，PND-1186被合成并制备为HCl盐。 |
| 细胞实验 |
蛋白质印迹分析[1]
细胞类型： 4T1 乳腺癌细胞 测试浓度： 0.1、0.2、0.4、0.6 和 1.0 µM 孵育时间：1小时 实验结果：抑制FAK Tyr-397磷酸化（pY397）并导致FAK总蛋白水平升高。 锚定依赖、球状和软琼脂细胞生长试验[1] 在贴壁（组织培养处理）和非贴壁条件下（聚HEMA涂层），将细胞（2×105）每35毫米孔铺在生长培养基中的6孔板上。在24至168小时之间，收集所有细胞，通过有限的胰蛋白酶-EDTA处理制备单细胞悬浮液，并通过台盼蓝染色和计数计数活细胞。为了确定球体面积，72小时后使用Olympus IX51显微镜对细胞进行相差成像。使用Image J软件（版本1.43）计算面积。对于软琼脂测定，48孔板涂有0.2 ml生长培养基中2%琼脂的1:4混合物（底层）。每孔5×104个细胞（一式三份）接种在0.2 ml生长培养基（顶层）中0.3%琼脂的混合物中。琼脂凝固后，加入0.2 ml含有DMSO或PND-1186的生长培养基（终浓度为0.6 ml）。在单独的实验中，4天后加入PND-1186。10天后，对菌落进行相位对比成像，通过计数9个场（每个孔3个场）进行计数，并使用Image J确定总面积。对于所有分析，实验点重复三次，实验重复至少两次。 细胞生长和凋亡测定[1] 对于细胞生长分析，将贴壁或悬浮细胞用PND-1186处理指定时间，通过有限的胰蛋白酶处理收集为单细胞悬浮液，用70%乙醇固定，通过离心收集并用PBS洗涤。将细胞颗粒重新悬浮在300µl含碘化丙啶（PI）（10µg/ml）、无DNA酶RNA酶（100µg/ml，Qiagen）的PBS中，然后在37°C下搅拌1小时。通过流式细胞术分析样品，并使用ModFit LT3.2软件进行细胞周期分析。如28所述，通过PI染色检测作为细胞凋亡指标的亚二倍体DNA含量。对于细胞凋亡分析，用PND-1186处理贴壁或悬浮细胞，并如上所述进行收集，对藻红蛋白（PE）结合的膜联蛋白V结合和7-氨基肌动蛋白霉素（7-AAD）反应性进行染色，并在1小时内通过流式细胞术进行分析。象限门的位置基于细胞自发荧光（阴性）星孢菌素处理（阳性）对照。凋亡被计算为膜联蛋白V阳性细胞的百分比。在软琼脂试验中，通过目视检查至少200个细胞来定量凋亡，并将其定义为膜起泡或细胞收缩的出现。免疫印迹法还通过蛋白质裂解物中切割的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3抗体反应性的出现检测到细胞凋亡。 3D胶原基质凋亡实验：将人乳腺癌细胞（MDA-MB-231）或胶质母细胞瘤细胞（U87MG）嵌入3D胶原基质（1.5 mg/mL）中，用PND-1186（VS-4718；SR-2156）（0 μM、1 μM、5 μM）处理72小时。收集细胞，用Annexin V-FITC和PI染色后流式细胞术分析，凋亡细胞定义为Annexin V阳性/PI阴性。同时，提取细胞裂解液进行Western blot检测p-FAK（Tyr397）、总FAK、p-Akt（Ser473）、p-mTOR（Ser2448）、Bcl-2、Mcl-1及活化caspase-3的表达[1] - 2D单层细胞活力实验：将细胞接种于96孔板，用PND-1186（VS-4718；SR-2156）（0 μM–10 μM）处理72小时，MTT法检测细胞活力（570 nm吸光度）。PND-1186（VS-4718；SR-2156）在2D培养中活性较弱（10 μM时活力抑制率<20%）[1] |
| 动物实验 |
动物/疾病模型： BALB/c（Bagg ALBino）小鼠[1]
剂量： 30 mg/kg 或 100 mg/kg 给药途径： 颈部皮下注射（100 µL），每 12 小时一次（每日两次，bid），持续 5 天。 实验结果： 100 mg/kg 治疗组最终 4T1 肿瘤重量显著降低至原来的一半，而 30 mg/kg 治疗组最终肿瘤重量略有降低，但与对照组相比差异不显著。 小鼠肿瘤研究 [1] 使用 6 至 8 周龄的雌性 C57BL6 和 BALB/c 小鼠。所有体内研究均按照经批准的机构实验动物护理和使用方案进行。肿瘤细胞经有限胰蛋白酶消化收集，用PBS洗涤后，使用ViCell XR（Beckman）计数，然后进行注射。台盼蓝染色排除法测定细胞活力>95%。皮下肿瘤生长模型中，将1×10⁶个mCherry标记的4T1细胞悬浮于100 µl PBS中，注射到Balb/C小鼠的后侧腹部。8天后，将肿瘤体积相等（用游标卡尺测量，肿瘤体积计算公式为长×宽²/2）的小鼠分组（每组n=8），并将溶于聚乙二醇400（PEG400）PBS溶液（1:1）中的PND-1186以30 mg/kg或100 mg/kg的剂量，每12小时皮下注射100 µl到颈部。对照组动物注射PEG400:PBS溶液，13天后，使用Olympus OV100活体荧光分子成像系统对肿瘤进行原位成像。随后切除肿瘤并称重，一半用OCT包埋剂冷冻保存，另一半用蛋白裂解缓冲液溶解，用于FAK磷酸化分析。为研究ID8卵巢癌肿瘤的生长，将0.8 mL浓度为1×10⁷个ID8细胞的PBS溶液腹腔注射到C57BL/6小鼠体内。11天后，小鼠饮用含0.5 mg/mL PND-1186（溶于5%蔗糖溶液）的饮用水，对照组小鼠饮用5%蔗糖溶液（每组n=8）。继续自由给药 30 天后，将小鼠安乐死，收集腹水，通过离心（2000 rpm 5 分钟）获得细胞，用移液器测量细胞体积，然后在蛋白质裂解缓冲液中溶解，用于免疫印迹分析。 |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
PND-1186 对小鼠的固有毒性较低
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
VS-4718 正在进行临床试验 NCT02215629（急性髓系或 B 细胞急性淋巴细胞白血病剂量递增研究）。
FAK 抑制剂 VS-4718 是一种口服生物利用度高的黏着斑激酶 (FAK) 抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。给药后，VS-4718 可抑制 FAK，阻断纤连蛋白刺激的 FAK Tyr397 位点自磷酸化，并可能阻止整合素介导的多个下游信号转导通路（包括 ERK、JNK/MAPK 和 PI3K/Akt）的激活。这可减少癌症干细胞 (CSC) 的数量，并抑制肿瘤细胞的迁移、增殖和存活。胞质酪氨酸激酶 FAK 是整合素的信号转导分子，在多种肿瘤细胞类型中持续激活；它参与肿瘤细胞的侵袭、迁移和增殖，并在癌症干细胞（CSC）的发育、功能和存活中发挥关键作用。 肿瘤细胞可以以非锚定依赖的方式生长。这部分是通过绕过整合素细胞表面受体控制的正常生长限制的存活信号介导的。黏着斑激酶（FAK）是一种胞质蛋白酪氨酸激酶，它与整合素结合并调节多种细胞过程，包括生长、存活和迁移。由于FAK表达增加和酪氨酸磷酸化与肿瘤进展相关，因此FAK抑制剂正被测试其抗肿瘤作用。本文分析了PND-1186，一种取代吡啶类可逆FAK活性抑制剂，其体外半数抑制浓度（IC50）为1.5 nM。通过抗磷酸化特异性免疫印迹法检测FAK Tyr-397，PND-1186在乳腺癌细胞中的IC50约为100 nM。PND-1186不改变贴壁细胞中c-Src或p130Cas的酪氨酸磷酸化水平，但能抑制细胞迁移。值得注意的是，1.0 µM的PND-1186（浓度高于IC50的5倍以上）对细胞增殖的影响有限。然而，在非贴壁条件下，如在球状体和软琼脂克隆中，0.1 µM的PND-1186可阻断FAK和p130Cas的酪氨酸磷酸化，促进caspase-3的激活，并诱导细胞凋亡。PND-1186抑制4T1乳腺癌皮下肿瘤的生长，这与肿瘤细胞凋亡和caspase-3激活的增加相关。在小鼠饮用水中添加 PND-1186 耐受性良好，并能抑制腹水和腹膜相关卵巢癌肿瘤的生长，这与 FAK Tyr-397 磷酸化受到抑制有关。我们使用低剂量 PND-1186 治疗的结果支持以下结论：FAK 活性选择性地促进肿瘤细胞在三维环境中的存活。[1] PND-1186 (VS-4718; SR-2156) 是一种小分子 FAK 抑制剂，它能选择性地诱导嵌入三维细胞外基质环境中的肿瘤细胞凋亡，这可能是由于三维环境中 FAK 依赖性增强所致。该特性表明其具有作为治疗具有三维生长特征的癌症（例如实体瘤）的潜在药物的潜力[1] - 其作用机制涉及抑制FAK磷酸化和下游Akt/mTOR信号通路，从而特异性地降低三维培养物中的抗凋亡蛋白表达和caspase激活。这种选择性使PND-1186 (VS-4718; SR-2156)区别于其他具有更广泛二维/三维活性的FAK抑制剂[1] |
| 分子式 |
C25H26F3N5O3
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|---|---|
| 分子量 |
501.5
|
| 精确质量 |
501.198
|
| 元素分析 |
C, 59.87; H, 5.23; F, 11.36; N, 13.96; O, 9.57
|
| CAS号 |
1061353-68-1
|
| 相关CAS号 |
PND-1186 hydrochloride;1356154-94-3
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| PubChem CID |
25073775
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| 外观&性状 |
White to gray solid powder
|
| 密度 |
1.3±0.1 g/cm3
|
| 沸点 |
654.0±55.0 °C at 760 mmHg
|
| 闪点 |
349.3±31.5 °C
|
| 蒸汽压 |
0.0±2.0 mmHg at 25°C
|
| 折射率 |
1.609
|
| LogP |
5.64
|
| tPSA |
91.24
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
3
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
10
|
| 可旋转键数目(RBC) |
7
|
| 重原子数目 |
36
|
| 分子复杂度/Complexity |
709
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| InChi Key |
IGUBBWJDMLCRIK-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C25H26F3N5O3/c1-29-24(34)17-5-3-4-6-19(17)31-21-14-23(30-15-18(21)25(26,27)28)32-20-8-7-16(13-22(20)35-2)33-9-11-36-12-10-33/h3-8,13-15H,9-12H2,1-2H3,(H,29,34)(H2,30,31,32)
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| 化学名 |
2-((2-((2-methoxy-4-morpholinophenyl)amino)-5-(trifluoromethyl)pyridin-4-yl)amino)-N-methylbenzamide.
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| 别名 |
SR-2156; VS-4718; PND-1186; PND 1186; 1061353-68-1; 2-((2-((2-Methoxy-4-morpholinophenyl)amino)-5-(trifluoromethyl)pyridin-4-yl)amino)-N-methylbenzamide;PND1186; SR 2516; SR2516; VS4718; VS 4718.
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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|---|---|---|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.99 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.99 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.99 mM) (饱和度未知) in 5% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 配方 4 中的溶解度: 2% DMSO+30% PEG 300+5% Tween 80+ddH2O: 5mg/mL 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.9940 mL | 9.9701 mL | 19.9402 mL | |
| 5 mM | 0.3988 mL | 1.9940 mL | 3.9880 mL | |
| 10 mM | 0.1994 mL | 0.9970 mL | 1.9940 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
PND-1186 inhibitory effects differ from Dasatinib (Src inhibition). Cancer Biol Ther. 2010 May; 9(10): 764–777. |
PND-1186 inhibits ovarian carcinoma tumor growth. Cancer Biol Ther. 2010 May; 9(10): 764–777.Cancer Biol Ther.2010 May 15;9(10):764-77. |
Selective 4T1 cell apoptosis in suspension at low PND-1186 levels.Cancer Biol Ther.2010 May 15;9(10):764-77. |
FAK aa411-686 Recombinant Human Active Protein Kinase
FAK ligand-5
PROTAC FAK degrader 4
GZD-257
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