| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Lck (IC50 = 5 nM); Fyn (IC50 = 6 nM); EGFR (IC50 = 250 nM);
JAK2 (IC50 >50 μM)
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| 体外研究 (In Vitro) |
在体外，PP1 对 Lck (IC50=5 nM) 和 FynT (IC50=6 nM) 的抑制剂量远低于对 ZAP-70 (IC50>100 μM)、JAK2 (IC50>50 μM)、EGFR 和蛋白的抑制剂量A. 在人类 T 细胞中，PP1 抑制 IL-2R 基因和 GM-CSF 诱导的 IL-2 基因的产生 [1]。
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| 体内研究 (In Vivo) |
在体内条件下，PP1 被认为可以抑制抗 CD3 和有丝分裂原刺激的 T 细胞中的酪氨酸磷酸化和增殖。使用小鼠肿瘤模型的研究还表明，PP1 上调 IL-2 基因的表达，而不是粒细胞巨噬细胞集落刺激因子或 IL-2 受体基因的表达。基于这些，PP1可以作为一种有用的试剂来研究Lck和Fyn T细胞激活的作用。
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| 酶活实验 |
免疫复合酶测定[1]
用于测量Lck和FynT催化活性的烯醇化酶底物（见图2和表1）如所述制备。用1×PBS以1:20稀释酸处理的烯醇化酶，然后将100μl/孔等分到Nunc 96孔高蛋白结合测定板中。然后抽吸测定孔；用0.5%牛血清、1×PBS在37°C下封闭1小时；然后用300μl 1×PBS/孔洗涤5次。Lck的来源是LSTRA细胞或使用痘苗表达系统在HeLa细胞中表达的Lck。使用痘苗系统在HeLa细胞中表达FynT。在裂解缓冲液（20mM Tris，pH 8.0，150mM NaCl，0.5%Nonidet P-40和23个胰蛋白酶抑制单位/ml抑肽酶）中裂解细胞（12.5×106/ml），并通过在Eppendorf管中以14000cpm在4°C下离心15分钟来澄清裂解物。Lck抗体是通过用含有Lck N末端结构域残基41-54的合成肽免疫兔而产生的。然后将澄清的裂解物与适当的抗激酶抗体在4°C下以10μg/ml孵育2小时。将蛋白A-Sepharose珠（制备为50%（w/v）悬浮液）以250μl/ml添加到抗体/裂解物混合物中，并在4°C下孵育30分钟。然后在1ml裂解缓冲液中洗涤珠两次，在1ml激酶缓冲液（25mM HEPES、3mM MnCl2、5mM MgCl2和100μM原钒酸钠）中洗涤珠二次，并在激酶缓冲液中重悬至50%（w/v）。 View More将25微升珠悬浮液与适当浓度的化合物和[γ-32P]ATP（25μl/孔200μCi/ml的激酶缓冲液溶液）一起加入到烯醇化酶包被的96孔高蛋白结合板的每个孔中。在20°C下孵育20分钟后，将60μl含有10mM ATP的沸腾2×增溶缓冲液加入到测定孔中以终止反应。从孔中取出30微升样品，煮沸5分钟，并在7.5%SDS聚丙烯酰胺凝胶上运行。随后将凝胶干燥并暴露于Kodak X-AR胶片（见图2A）。为了定量，使用分子动力学激光扫描仪扫描薄膜，并测定主要底物带烯醇化酶p46的光密度。根据密度与化合物浓度的关系图测定引起50%烯醇化酶磷酸化抑制（IC50）的化合物浓度（见图2B）。在用于测量化合物对Lck的活性的配套实验中（见图2C），使用50mM EDTA和1mM ATP在Skatron采集器上用两个洗涤循环洗涤测定板。然后将闪烁液（100μl）加入孔中，并使用Pharmacia Biotech微型β计数器测量32P的掺入。根据酶活性抑制百分比与化合物浓度的关系图测定引起50%酶活性抑制的化合物的浓度（IC50）。由于凝胶和平板测定之间具有良好的相关性，随后使用闪烁计数对Lck和FynT进行重复实验（见表1）。通过从美国典型培养物保藏中心获得的A-431细胞中免疫沉淀EGF-R来测量EGF-R活性。通过向含有细胞融合层的T-75烧瓶中加入4ml裂解缓冲液来制备细胞裂解物。如上所述通过离心澄清裂解物，然后与10μg/ml抗EGF-R在4°C下孵育2小时。将蛋白A-Sepharose珠以250μl/ml添加到抗体/裂解物混合物中，并在4°C下孵育30分钟。然后将珠粒在1.0ml裂解缓冲液中洗涤两次，在1.0ml激酶缓冲液中（如上所述）洗涤两次并最终重悬至激酶缓冲液的50%（w/v）。向每个1.5 ml的测定管中等分50μl珠悬浮液，然后将其在Eppendorf微型离心机中以14000rpm旋转15 s，并丢弃上清液。然后向珠粒中加入5μl适当的化合物稀释液、5μl EGF（Upstate Biotechnology，股份有限公司）至最终浓度为100pM，以及5μl 33μCi[γ-32P]ATP/ml激酶缓冲液溶液。在20°C下孵育20分钟后，用1.0 ml裂解缓冲液和1.0 ml 1×PBS洗涤珠粒一次。向珠粒中加入60μl含有10 mM ATP的沸腾2×增溶缓冲液（26）。样品在7.5%SDS聚丙烯酰胺凝胶上进行，随后将其干燥并使用BAS-III成像板暴露。观察标记的EGF-R蛋白带，并使用BAS-2000生物成像分析仪对32P掺入进行定量。由不同浓度的化合物对酶活性的抑制百分比图确定引起50%酶活性抑制的化合物的浓度（IC50）。小鼠JAK2在杆状病毒中产生，并作为结合蛋白A-Sepharose珠的免疫复合物提供（Upstate Biotechnology，股份有限公司）。将JAK2珠粒（2.5μl）在室温下重悬于20μl激酶缓冲液（10mM HEPES，pH 7.4，50mM NaCl，5mM MgCl2，5mM MnCl2，0.1mM Na3VO4，0.25mCi/ml[γ-32P]ATP）中10分钟。然后洗涤珠粒，通过将标记的蛋白质洗脱到SDS-PAGE缓冲液中来测量JAK2自磷酸化，并在7.5%聚丙烯酰胺凝胶上进行分析。使用Fuji BAS-1000磷成像仪对对应于JAK2的带进行定量。如上所述测定IC50值。使用杆状病毒表达产生全长ZAP-70激酶。如上所述制备来自先前用人ZAP-70重组病毒感染48小时的Sf9细胞的裂解物用于Lck，并且在可溶性激酶测定中使用1:100稀释液。简言之，通过测量γ-32P掺入底物p62来定量激酶活性，使用SDS-PAGE来解析磷酸化的p62，并使用磷酸成像仪来定量放射性。通过减去使用感染非重组杆状病毒的Sf9细胞裂解物获得的p62磷酸化来评估ZAP-70的特异性活性。如上所述测定IC50值。 |
| 细胞实验 |
全细胞磷酸酪氨酸测量[1]
如下测量纯化的人外周血T细胞中抗CD3-刺激的酪氨酸磷酸化的抑制作用。所有温育均在37°C的Eppendorf Thermomixer 5436中进行，混合设置为11。细胞（在100μl RPMI 1640培养基中的1×106）与药物孵育15分钟，然后与1μg抗CD3/ml（抗leu4，100μg/ml；Becton Dickinson）孵育6分钟。反应的最终体积为115μl。加入57.5μl在100°C下孵育的3×增溶缓冲液后，终止反应。将样品混合，煮沸5分钟，并在−70°C下储存。用多克隆抗磷酸酪氨酸抗体探测这些细胞裂解物在10%SDS聚丙烯酰胺凝胶上的蛋白质印迹，并用125I标记的蛋白a（ICN）检测免疫复合物。为了定量，使用分子动力学激光扫描仪扫描薄膜，并在抗CD3存在（在药物存在和不存在的情况下）下对主要底物带p70的光密度进行定量。抑制百分比计算如下：（1-（存在药物时p70光密度单位/不存在药物时p 70单位））×100。IC50等于测量到50%抑制的化合物的浓度。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
Here, we have studied the activity of a novel protein-tyrosine kinase inhibitor that is selective for the Src family of tyrosine kinases. We have focused our study on the effects of this compound on T cell receptor-induced T cell activation, a process dependent on the activity of the Src kinases Lck and FynT. This compound is a nanomolar inhibitor of Lck and FynT, inhibits anti-CD3-induced protein-tyrosine kinase activity in T cells, demonstrates selectivity for Lck and FynT over ZAP-70, and preferentially inhibits T cell receptor-dependent anti-CD3-induced T cell proliferation over non-T cell receptor-dependent phorbol 12-myristate 13-acetate/interleukin-2 (IL-2)-induced T cell proliferation. Interestingly, this compound selectively inhibits the induction of the IL-2 gene, but not the granulocyte-macrophage colony-stimulating factor or IL-2 receptor genes. This compound offers a useful new tool for examining the role of the Lck and FynT tyrosine kinases versus ZAP-70 in T cell activation as well as the role of other Src family kinases in receptor function.[1]
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| 分子式 |
C16H19N5
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|---|---|---|
| 分子量 |
281.36
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| 精确质量 |
281.164
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| 元素分析 |
C, 68.30; H, 6.81; N, 24.89
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| CAS号 |
172889-26-8
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| 相关CAS号 |
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| PubChem CID |
1400
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| 外观&性状 |
Typically exists white to off-white as solids at room temperature
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| 密度 |
1.2±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
478.8±40.0 °C at 760 mmHg
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| 熔点 |
205-207ºC
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| 闪点 |
243.4±27.3 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±1.2 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.652
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| LogP |
3.11
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| tPSA |
69.62
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
4
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| 可旋转键数目(RBC) |
2
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| 重原子数目 |
21
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| 分子复杂度/Complexity |
358
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
N1(C2C(=C(N([H])[H])N=C([H])N=2)C(C2C([H])=C([H])C(C([H])([H])[H])=C([H])C=2[H])=N1)C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H]
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| InChi Key |
ZVPDNRVYHLRXLX-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C16H19N5/c1-10-5-7-11(8-6-10)13-12-14(17)18-9-19-15(12)21(20-13)16(2,3)4/h5-9H,1-4H3,(H2,17,18,19)
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| 化学名 |
1-tert-butyl-3-(4-methylphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 1.67 mg/mL (5.94 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 16.7 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 1.67 mg/mL (5.94 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 16.7mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20％SBE-β-CD生理盐水中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 1.67 mg/mL (5.94 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.5542 mL | 17.7708 mL | 35.5417 mL | |
| 5 mM | 0.7108 mL | 3.5542 mL | 7.1083 mL | |
| 10 mM | 0.3554 mL | 1.7771 mL | 3.5542 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
| NCT Number | Recruitment | interventions | Conditions | Sponsor/Collaborators | Start Date | Phases |
| NCT03666715 | Completed | Drug: Oral Antipsychotics (OAPs) Drug: Paliperidone Palmitate 1-Month Formulation (PP1M) |
Schizophrenia | Janssen-Cilag Farmaceutica Ltda. | August 7, 2018 | |
| NCT00791843 | Completed Has Results | Drug: Growth hormone releasing hormone/ placebo |
Congestive Heart Failure | University of Pennsylvania | March 2004 | Phase 2 |
| NCT03713658 | Completed | Drug: Risperidone 3 mg Drug: Paliperidone Palmitate 50 mg eq. |
Schizophrenia | Janssen Research & Development, LLC | October 18, 2018 | Phase 4 |
| NCT03345342 | Completed Has Results | Drug: PP6M Drug: PP3M 350 mg eq. |
Schizophrenia | Janssen Research & Development, LLC | November 20, 2017 | Phase 3 |
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