Natural product; anti-inflammatory; NF-κB

前胡素A和前胡素C互为总状花序，是传统上用作中草药的前胡属植物的主要生物活性成分。在本研究中，我们研究了前喷发素A和C激活组成型雄甾烷受体并诱导HepG2细胞中人多药耐药相关蛋白2表达的能力。分别通过定量实时PCR、Western blot和CDF摄取试验测定多药耐药相关蛋白2的mRNA水平、蛋白表达和转运活性的变化。通过瞬时转染特定的组成型雄甾烷受体siRNA，我们还测定了组成型雄甾醇受体敲除对多药耐药相关蛋白2 mRNA和蛋白表达的影响。结果表明，前胡芦甲素和前胡芦乙素C显著诱导了多药耐药相关蛋白2的mRNA和蛋白的表达，并增强了多药耐药性相关蛋白2的转运活性。进一步的研究表明，通过瞬时转染特定的组成型雄甾烷受体siRNA，mRNA和蛋白质的上调被减弱，这表明多药耐药相关蛋白2的上调是由组成型雄甾醇受体介导的。综上所述，我们的研究结果表明，前胡芦甲素和前胡芦乙素C可以在体外通过组成型雄甾烷受体介导的途径显著上调多药耐药相关蛋白2的表达，这应该被视为一种草药药物相互作用[3]。

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（-）-Praeruptorin A/前胡素A已在日本前胡和泰国前胡中报道。（±）-Praeruptorin A能有效放松回肠和气管平滑肌。（+）-前胡素A可以通过减少平滑肌细胞（SMCs）的面积、胶原含量和SMCs中的[Ca2+]i来改善血管肥大[1]。

白花前胡甲素是一种天然存在于中药白花前胡根部的香豆素类化合物，该药材常用于治疗某些呼吸系统疾病和高血压。虽然先前研究表明(±)-白花前胡甲素对气管和动脉标本具有舒张作用，但关于其对映体的功能特性知之甚少。本研究通过制备型Daicel Chiralpak AD-H色谱柱成功分离并鉴定出两种对映体，观察比较了它们对主动脉环的舒张作用。(+)-白花前胡甲素在抑制KCl和苯肾上腺素诱导的完整内皮大鼠离体主动脉环收缩方面，显示出比(-)-白花前胡甲素更强的舒张活性。去除内皮显著减弱了(+)-白花前胡甲素的舒张作用，但对(-)-对映体影响不大。用N(ω)-硝基-L-精氨酸甲酯（L-NAME，一氧化氮合酶抑制剂）或亚甲蓝（MB，可溶性鸟苷酸环化酶抑制剂）预处理主动脉环，会导致两种对映体的舒张作用发生与内皮去除相似的变化。分子对接研究也表明(+)-白花前胡甲素比(-)-对映体更符合一氧化氮合酶药效团特征。另一方面，两种白花前胡甲素对映体都能轻微减弱由肌浆网(SR)内Ca2+释放诱导的大鼠主动脉环收缩。这些发现表明(+)-和(-)-白花前胡甲素对大鼠离体主动脉环具有不同的舒张作用，这可能主要归因于内皮一氧化氮合酶催化的一氧化氮合成。[1]

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(±)-白花前胡甲素对映体对KCl或PE诱导的大鼠主动脉环收缩的影响[1]
分别用高浓度KCl（60 mM）或PE（1 μM）预收缩主动脉环。达到平台期后，分别累积加入(+)-白花前胡甲素和(−)-白花前胡甲素（KCl诱导收缩时浓度为1-30 μM，PE诱导收缩时为3-100 μM），获得浓度-舒张反应曲线。 在内皮完整的主动脉环中，(±)-白花前胡甲素对映体在1-100 μM浓度范围内对基础张力无显著影响（数据未显示），但两者均对KCl（60 mM）或PE（1 μM）诱导的收缩表现出浓度依赖性舒张作用（图5A和C）。对于KCl诱发的收缩，(+)-和(−)-白花前胡甲素的IC50值分别为12.1±1.3 μM和20.9±0.8 μM，Emax值分别为90.7±1.4%和68.6±5.2%。对于PE诱发的收缩，(+)-和(−)-对映体的IC50值分别为35.4±3.6 μM和45.8±2.5 μM，Emax值分别为86.3±2.6%和79.8±2.4%。结果表明，在内皮完整的大鼠主动脉环中，(+)-白花前胡甲素对KCl或PE诱导收缩的抑制作用强于(−)-对映体。

在内皮去除的主动脉环中，(+)-白花前胡甲素和(−)-对映体也显示出对KCl或PE诱导收缩的浓度依赖性舒张作用（图5B和D）。对于KCl诱发的收缩，(+)-和(−)-对映体的IC50值分别为22.7±1.5 μM和22.8±2.9 μM，Emax值分别为65.6±3.5%和65.3±8.1%。对于PE诱发的收缩，IC50值分别为42.9±4.1 μM和44.0±1.0 μM，Emax值分别为70.2±3.9%和69.1±3.0%。这些发现表明内皮去除显著减弱了(+)-白花前胡甲素的舒张作用，但对(−)-对映体影响不大，且(+)-白花前胡甲素的作用涉及内皮依赖性和非依赖性舒张机制。

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NO/环磷酸鸟苷(cGMP)通路在(±)-白花前胡甲素对映体舒张KCl诱导的大鼠主动脉环收缩中的作用[1]
为确定NO/cGMP通路是否参与(±)-白花前胡甲素对映体的舒张作用，分别在内皮完整的大鼠主动脉环中，于KCl给药前30分钟加入L-NAME（100 μM，NO合酶抑制剂）和MB（10 μM，催化cGMP形成的可溶性鸟苷酸环化酶(sGC)抑制剂）。
L-NAME或MB在测试浓度下对大鼠主动脉环的基础张力无影响（数据未显示）。在L-NAME预处理的主动脉环中，(+)-白花前胡甲素和(−)-对映体的IC50值分别为21.0±4.1 μM和22.4±1.6 μM，Emax值分别为70.3±8.5%和64.2±7.6%（图6A）。在MB预处理的主动脉环中，(+)-和(−)-白花前胡甲素的IC50值分别为20.2±0.5 μM和22.1±1.1 μM，Emax值分别为80.0±1.3%和70.2±4.2%（图6B）。与内皮去除类似，L-NAME或MB预处理均显著减弱了(+)-白花前胡甲素对KCl诱导收缩的舒张作用，但对(−)-对映体影响不大，且两种对映体的舒张效果趋于相同。这些发现表明NO/cGMP信号通路主要参与(+)-而非(−)-白花前胡甲素的舒张作用。
为阐明(+)-白花前胡甲素舒张效能对NO阻断的敏感性是否源于NO（或cGMP）与其协同作用，我们观察了(±)-白花前胡甲素对乙酰胆碱诱发舒张（NO依赖性舒张）的影响。结果显示：(+)-和(−)-白花前胡甲素均不影响乙酰胆碱对完整内皮大鼠离体主动脉环的舒张作用。单独乙酰胆碱、乙酰胆碱加(+)-白花前胡甲素（30 μM）、乙酰胆碱加(−)-对映体（30 μM）的IC50值分别为4.0±0.7 μM、4.3±0.6 μM和4.2±0.4 μM。该结果证明(+)-白花前胡甲素并非通过与NO协同发挥舒张效应1。

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(±)-白花前胡甲素对映体对细胞内Ca2+释放诱导的大鼠主动脉环收缩的影响[1]
在无Ca2+的K-H液中，PE（1 μM）可通过释放细胞内Ca2+诱发内皮去除大鼠主动脉环的短暂收缩。如图7所示，(±)-白花前胡甲素对映体仅轻微减弱PE诱导的收缩且效能相近。对照组与(+)-白花前胡甲素（3 μM、10 μM、30 μM）处理组的收缩比值（T2/T1）分别为93.3±2.1%、92.2±2.5%、88.7±3.2%和81.9±4.3%；(−)-对映体处理组的T2/T1值分别为94.6±3.7%、91.8±1.9%、85.8±3.5%和80.1±5.1%。选择性IP3R抑制剂肝素（100 μg/ml）则显著抑制PE诱导的收缩（对照组与肝素组的T2/T1值分别为98.1±7.5%和6.5±1.3%）。这表明(±)-白花前胡甲素对映体可轻微减弱IP3R（肌醇-1,4,5-三磷酸受体）介导的细胞内Ca2+释放诱导的主动脉环收缩1。

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K+通道阻断剂对(±)-白花前胡甲素对映体舒张PE诱导大鼠主动脉环收缩的影响[1]
为探究K+通道开放是否参与(±)-白花前胡甲素对映体的舒张作用，在标准K-H液中去内皮主动脉环中，于PE（1 μM）给药前30分钟加入TEA（5 mM，假定K+通道阻断剂）。
图8A显示两种对映体以相近效能减弱PE诱导的收缩，(+)-白花前胡甲素和(−)-对映体的IC50值分别为42.9±4.1 μM和44.0±1.0 μM。TEA预处理未改变对映体的舒张作用，其IC50值分别为43.1±3.8 μM和44.1±6.4 μM（图8B）。该结果提示K+通道开放不参与(±)-白花前胡甲素对映体的舒张机制1。

Praeruptorin A/PA和CKL在肠道细菌中的孵化[2]
按照参考文献中提出的方案制备脑心输注（BHI）培养基和肠道微生物群溶液。大鼠肠道细菌对PA或CKL的生物转化是在0.5 mL的培养系统中进行的，该培养系统含有50μL的肠道微生物菌群溶液、5μL的PA或CKL-DMSO储备溶液（任何一种化合物的终浓度为25μmol/L）和445μL BHI培养基。在GasPak EZ Anaerobe袋系统中，于37°C下厌氧培养4小时，并加入500μL冰冷的甲醇淬灭。0分钟温育、无菌群溶液反应和无PA/CKL温育作为对照。每个反应进行三次。然后通过离心和过滤连续处理样品。随后，对滤液进行LC-UV-MS/MS分析。

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RLMs和HLMs中Praeruptorin A/PA的I期代谢[2]
在37°C下，在总共200μL的含有PA（终浓度：25μmol/L）、RLM或HLM（1 mg/mL）、NADPH再生系统（4 mmol/L MgCl2、1 mmol/Lβ-NADP+、1 mmol/L G-6-P和1 U/mL G-6-PD）和100 mmol/L磷酸钾缓冲液（pH 7.4）的孵育溶液中，在肝微粒体蛋白质中实现PA的代谢。分别在0、5、10、15、20、30、60、90、120分钟时通过倒入200μL冰冷的甲醇并涡旋以充分混合来终止反应。随后，将每个培养物在4°C下以15000×g离心10分钟，然后将所得上清液通过0.45μm尼龙膜过滤器过滤，然后进行HPLC-UV分析。分别孵育0分钟、60分钟不含β-NADP+、60分钟无PA和60分钟含变性肝微粒体蛋白的样品作为对照。每个反应进行三次。为了鉴定PA代谢物，选择从20分钟反应中获得的培养物，并将其加载到LC-UV-MS/MS系统中。 为了鉴定在没有NADPH再生系统的情况下参与PA水解的酶，将HLMs或RLMs与羧酸酯酶抑制剂BNPP（500μmol/L）或PMSF（500μmol/L）预孵育5分钟，然后加入PA以启动另一个20分钟的孵育。使用0分钟孵育和20分钟无化学抑制剂的反应作为对照。每个实验进行三次。

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使用混合的大鼠血浆、人血浆、hCES1和hCES2水解Praeruptorin A/PA[2]
按照文献中提出的程序，使用各自的探针底物咪达普利和伊立替康（CPT-11）验证了hCES1和hCES2的活性。从五只无毒雄性SD大鼠中新鲜制备混合大鼠血浆，并从澳门红十字会获得混合人血浆作为礼物。PA（25μmol/L）与大鼠血浆（最终含量：1 mg/mL）、人血浆（最终内容：1 mg/mL）、hCES1（最终含量为1单位）或hCES2（最终含量）在磷酸钾缓冲溶液（pH 7.4，100 mmol/L）中于37°C下孵育60分钟，最终孵育体积为200μL。有两种类型的对照样品，包括与变性血浆蛋白一起孵育和在没有PA的情况下孵育。每种反应都进行了三次处理。通过加入等体积的冰冷甲醇终止培养。通过离心去除沉淀的蛋白质。过滤上清液，将滤液等分（10μL）注入LC-UV-MS/MS系统。

将 (+)-Praeruptorin A 和 (−)-Praeruptorin A 溶解于 PEG400 中。[1]
为了研究这些化合物对细胞内 Ca2+ 释放诱导的收缩的影响，将主动脉环暴露于无 Ca2+ 溶液中，并使用 PE (1 μM) 诱导第一次瞬时收缩 (T1)。之后，用标准 Krebs-Henseleit 溶液洗涤主动脉环两次（至少孵育 40 分钟以补充细胞内 Ca2+ 储存），然后再用无 Ca2+ 的 K-H 溶液洗涤两次（孵育 15 分钟）。然后在有或无 (+)-Praeruptorin A 和 (−)-Praeruptorin A 的情况下，使用 PE 诱导第二次瞬时收缩 (T2)，其中 (+)-Praeruptorin A 和 (−)-Praeruptorin A 在 PE 给药前 30 分钟加入。肝素（100 μg/ml）用作阳性对照。计算第二次收缩与第一次收缩的比值（T2/T1）[1]。

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尿液和粪便样本的制备[2]
雄性SD大鼠（220 ± 15 g）在实验前于实验室适应一周，饲养于单独的笼子中，温度为23 ± 1 °C，12小时光照/黑暗循环，相对湿度为50%，可自由摄取标准饲料和水。所有大鼠在实验前一晚禁食，但可自由饮水。
PA组的三只大鼠口服Praeruptorin A/PA（溶于50% 1,2-丙二醇水溶液，v/v），对照组（三只大鼠）则给予溶剂（50% 1,2-丙二醇水溶液，v/v）。治疗后0～48小时内收集尿液和粪便样本，并按组内混合。将PA组和对照组的混合尿液用甲醇稀释3倍，涡旋混匀后离心去除沉淀，分别导入LC-UV-MS/MS系统进行分析。同时，将PA组和对照组的混合粪便样本用乙腈提取，每克粪便样本加入10 mL乙腈，超声水浴提取30分钟，然后用0.45 μm滤膜过滤后进行分析。

(±)-前胡素A (PA) 是前胡的主要生物活性成分，具有显著的降压作用，其作用机制通常是作为钙通道阻滞剂。本研究旨在利用高效液相色谱-三重四极杆-线性离子阱质谱联用技术 (HPLC-Q-trap-MS) 和飞行时间质谱 (TOF-MS) 对前胡素A的体外和体内代谢谱进行表征。在大鼠肝微粒体（RLMs）中检测到12种I期代谢物（M1-12），在人肝微粒体（HLMs）中检测到9种I期代谢物（M1-3、M5-6和M9-12），在大鼠血浆中检测到2种水解产物（M11和M12），在人血浆中未检测到代谢物，在大鼠肠道细菌中未检测到代谢物，在PA处理的大鼠尿液中检测到7种代谢物（M1、M4-7、M13和M15），在PA处理的粪便中检测到6种代谢物（M1、M4-7和M15）。这些代谢物分别采用预测多反应监测-信息依赖采集-增强产物离子（预测MRM-IDA-EPI）模式和增强质谱-信息依赖采集-增强产物离子（EMS-IDA-EPI）模式在质谱仪域中进行了初步鉴定，并采用飞行时间质谱（TOF-MS）进行了确认。此外，在大鼠肝微粒体（RLM）中生成了顺式-khellactone（CKL，PA在体内的主要存在形式）的两种葡萄糖醛酸化代谢物（M13-14），而在人肝微粒体（HLM）中未检测到其代谢物，同时在大鼠肝脏S9组分（RS9）和人肝脏S9组分（HS9）中均未观察到其硫酸化产物。研究表明，氧化、水解、分子内酰基迁移和葡萄糖醛酸化是PA在体外和体内的主要代谢途径。根据峰面积的减少情况判断，PA在RLM和HLM中均被快速代谢，表明其存在广泛的肝脏首过效应。综上所述，本研究阐明了(±)-praeruptorin A在体外和体内的代谢途径，并证实Q-trap-MS结合LightSight™软件可作为快速检测和鉴定复杂生物基质中代谢物的有效工具。 [2]

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这是首篇关于体内Praeruptorin A/PA和体外CKL代谢特征的报道。采用高效液相色谱-三重四极杆线性离子阱质谱联用技术，结合LightSight™软件，利用预测性MRM-IDA-EPI和EMS-IDA-EPI模式，对代谢物进行检测和初步鉴定。体外实验观察到水解、氧化、分子内转酰基化和葡萄糖醛酸化等代谢途径，生成14种代谢物（M1-14）。另一方面，在PA处理的尿液和粪便样本中分别检测到M1-13中的6种代谢物（M1、M5-7和M13）和5种代谢物（M1和M5-7），以及一种由C-4′位逐步氧化形成的额外氧化产物（M15）。研究表明，血浆中的关键水解和CYP450催化的转化，而非肠道菌群，是导致大鼠体内PA生物利用度低的主要原因；而PA在人体内的口服生物利用度预计会高于大鼠。此外，本研究还表明，利用LightSight™软件开发的预测性MRM-IDA-EPI与EMS-IDA-EPI模式相结合的方法，可作为快速检测和鉴定复杂生物基质中代谢物的有效工具。[2]

[1]. (+/-)-Praeruptorin A enantiomers exert distinct relaxant effects on isolated rat aorta rings dependent on endothelium and nitric oxide synthesis. Chem Biol Interact. 2010 Jul 30;186(2):239-46.

[2]. Metabolic characterization of (±)-praeruptorin A in vitro and in vivo by high performance liquidchromatography coupled with hybrid triple quadrupole-linear ion trap mass spectrometry and time-of-flight mass spectrometry. J Pharm Biomed Ana. 2014 Mar:90:98-110.

[3]. Effects of praeruptorin A and praeruptorin C, a racemate isolated from Peucedanum praeruptorum, on MRP2 through the CAR pathway. Planta Med. 2013 Nov;79(17):1641-7.

Praeruptorin A 属于香豆素类化合物。
(+)-Praeruptorin A 已在 Peucedanum japonicum、Prionosciadium thapsoides 和 Ligusticum lucidum 中被报道，并有相关数据。

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(-)-Praeruptorin A 已在 Peucedanum japonicum 和 Prionosciadium thapsoides 中被报道，并有相关数据。

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(±)-Praeruptorin A 已被证实能够舒张血管平滑肌，是 P. praeruptorum 根的主要生物活性成分。然而，其对映异构体的作用特征和潜在机制尚不清楚。在本研究中，我们发现(+)-praeruptorin A 和 (−)-praeruptorin A 均能浓度依赖性地舒张高钾收缩的具有功能性内皮的离体大鼠主动脉环，且(+)-praeruptorin A 的舒张作用强于 (−)-praeruptorin A。值得注意的是，去除内皮以及用 L-NAME 或 MB 预处理均显著减弱了 (+)-praeruptorin A 的舒张作用，但对 (−)-praeruptorin A 的舒张作用无明显影响，最终导致两种对映异构体的舒张效力趋于一致。这些研究结果强烈提示，(+)-普拉普托林A既能发挥内皮依赖性舒张作用，也能发挥内皮非依赖性舒张作用，而(−)-普拉普托林A仅发挥内皮非依赖性舒张作用。
此外，钾离子通道也参与调节肌肉收缩力和血管张力。直接激活动脉平滑肌细胞上的钾离子通道可使细胞膜超极化，并抑制钙离子内流和平滑肌收缩。在本研究中，TEA（一种非选择性K+通道阻滞剂）预处理并未改变(±)-普拉普托林A对映体的舒张作用，提示K+通道开放可能与这些对映体的舒张作用无关。
总之，(+)-普拉普托林A和(−)-普拉普托林A均能浓度依赖性地舒张KCl收缩的离体大鼠主动脉环。(+)-普拉普托林A的作用强于(−)-普拉普托林A。造成这种差异的最重要原因可能是(+)-普拉普托林A而非(−)-普拉普托林A能更好地与eNOS的药效团结合，从而激活NO/cGMP信号通路。 [1]

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由于CYP450酶和血浆对普瑞普托林A/PA具有强大的代谢能力，且在大鼠肝微粒体（RLM）中观察到CKL为主要代谢产物，CKL的葡萄糖醛酸化程度较低（根据峰面积计算，CKL的减少量小于10%），因此初步认为大鼠体内PA的主要实际存在形式为CKL，这与我们之前的报道一致。另一方面，人体内PA的有效实际存在形式可能包括原型和CKL。鉴于CKL的活性较低，PA在人体内的治疗效果可能比在大鼠体内持续时间更长。然而，PA的逐步氧化产物M15在PA处理的尿液中被观察到是主要代谢物之一，表明该代谢物可能对PA的体内过程有显著贡献，应在后续研究中予以考虑。由于吸收/分布屏障和/或生物转化障碍，活性成分在体内可能变得痕量，且内源性物质的干扰总是使得在生物样品中检测和鉴定药物相关成分变得困难。因此，迫切需要高灵敏度和高选择性的技术来满足代谢表征的需求。在本研究中，使用开发的预测性MRM-IDA-EPI方法，PA及其代谢物的检测限低于2 nmol/L。此外，由于采用了前体-产物离子跃迁，该方法有望具有高选择性。然而，使用该方法进行代谢谱表征的关键在于LC-MS/MS测量之前的预测。在本研究中，推测是基于对角型吡喃香豆素代谢以及体内可能发生的异生物质常见代谢途径的已有知识而进行的。事实上，一些软件，例如 PALLAS MetabolExpert（CompuDrug）和 METEOR MetabolicExpert（Lhasa），可用于计算机模拟预测代谢物，这有助于推测体内代谢。另一方面，为了避免在预测过程中遗漏潜在的代谢物，本研究还引入了 EMS-IDA-EPI 模式，该模式对吡喃香豆素及其代谢物的检测限均低于 100 nmol/L，尽管该模式并未产生额外的产物。因此，所提出的方法为生物基质中代谢物的表征提供了一种更优的分析选择，而 EMS-IDA-EPI 可同时作为补充工具。[2]

C21H22O7

386.3952

386.136

C, 65.28; H, 5.74; O, 28.98

73069-27-9

21499-23-0; 14017-71-1; 73069-25-7; 73069-27-9

38347607

White to off-white solid

1.3±0.1 g/cm3

486.8±45.0 °C at 760 mmHg

211.5±28.8 °C

0.0±1.2 mmHg at 25°C

1.574

4.18

92.04

0

7

5

28

720

2

O1C2C([H])=C([H])C3C([H])=C([H])C(=O)OC=3C=2C([H])(C([H])(C1(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H])OC(C(=C([H])C([H])([H])[H])C([H])([H])[H])=O)OC(C([H])([H])[H])=O

XGPBRZDOJDLKOT-NXIDYTHLSA-N

InChI=1S/C21H22O7/c1-6-11(2)20(24)27-19-18(25-12(3)22)16-14(28-21(19,4)5)9-7-13-8-10-15(23)26-17(13)16/h6-10,18-19H,1-5H3/b11-6-/t18-,19-/m0/s1

[(9S,10S)-10-acetyloxy-8,8-dimethyl-2-oxo-9,10-dihydropyrano[2,3-f]chromen-9-yl] (Z)-2-methylbut-2-enoate

(+)-Praeruptorin A; Praeruptorin A; 73069-27-9; 73069-25-7; (+-)-Praeruptorin A; 2-Butenoic acid, 2-methyl-,(9S,10S)-10-(acetyloxy)-9,10-dihydro-8,8-dimethyl-2-oxo-2H,8H-benzo[1,2-b:3,4-b']dipyran-9-yl ester, (2Z)-; CCRIS 7247; ( inverted exclamation markA)-Praeruptorin A;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~33.3 mg/mL (~86.3 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.47 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 2.5 mg/mL (6.47 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.47 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。