Preladenant (MK-3814; SCH420814)   中文名称: 瑞德南特

Adenosine A_2A receptor ( Ki = 1.1 nM )
Preladenant likewise totally opposes cAMP in cells that have the human A_2A receptor recombinant expressed. At the A_2A receptor, preladenant is found to have K_B values of 1.3 nM; this value is in good agreement with the K_i value found in the radioligand binding assay. To show selectivity over A_2B receptors, a functional test aK_in to this one is performed using cells that express A_2B receptors. Preladenant's K_B value in this assay is 1.2 μM, meaning that it is 923 times more selective for the A_2A receptor than the A_2B receptor[1].

Preladenant 还可完全拮抗表达重组人 A2A 受体的细胞中的 cAMP。 Preladenant 经测定对 A2A 受体的 KB 值为 1.3 nM；该值与放射性配体结合测定中确定的 Ki 值非常一致。使用 A2B 受体表达细胞进行类似的功能测定，以证明对 A2B 受体的选择性。在此测定中，Preladenant 的 KB 值为 1.2 μM，表明 Preladenant 对 A2A 受体的选择性是 A2B 受体的 923 倍[1]。

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在使用表达重组人 A_2A 受体的细胞膜进行的放射性配体竞争结合实验中，Preladenant 能够置换放射性配体，其 K_i 值为 1.1 nM。[1]
在使用稳定表达人 A_2A 受体的 HEK 293 细胞进行的功能性 cAMP 实验中，Preladenant 表现为完全拮抗剂，能够以浓度依赖的方式使 A_2A 激动剂 CGS-21680 的浓度-反应曲线右移。测得其功能性 K_B 为 1.3 nM。[1]
Preladenant 在测试的超过 60 种其他受体、离子通道和转运蛋白上均未显示出显著相互作用（>10 µM）。[1]

每日重复给药后，Preladenant (1 mg/kg) 可抑制左旋多巴诱导的行为敏化，这表明发生运动障碍的风险降低。 Preladenant 在行为绝望模型（即小鼠悬尾试验和小鼠和大鼠强迫游泳试验）中表现出类似抗抑郁的特性[1]。 Preladenant 在 1 mg/kg（最低评分：9.0）和 3 mg/kg（最低评分：6.5）剂量下产生剂量依赖性帕金森病评分降低。在接受 3 mg/kg L-Dopa 治疗的动物中，阈下剂量的 Preladenant 可使帕金森病最低评分和平均评分分别降低至 5.25 和 6.88。 Wilcoxin 测试用于比较个体治疗与媒介物。 Preladenant (3 mg/kg)、L-Dopa (3、6 和 12 mg/kg) 以及 Preladenant 和 L-Dopa 的组合 (1 或 3 mg/kg+3 mg/kg) 均显着改善帕金森病最低评分。此外，相对于 3 mg/kg L-多巴组，12 mg/kg L-多巴组和 L-Dopa+Preladenant 组的帕金森病最低评分和平均评分均显着改善[2]。

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口服给予 Preladenant（0.1 和 1 mg/kg）能显著减弱由 A_2A 激动剂 CGS-21680（1 mg/kg 皮下注射）引起的大鼠运动低下。1 mg/kg 的剂量在给药后长达 8 小时内均能产生显著的减弱作用。[1]
口服给予 Preladenant（0.3 和 1 mg/kg）能够剂量依赖性地减轻由多巴胺 D₂ 受体拮抗剂氟哌啶醇（1 mg/kg 皮下注射）引起的大鼠僵住症，在给药后 1 小时和 4 小时均观察到显著效果。[1]
在对内侧前脑束进行单侧 6-羟基多巴胺（6-OHDA）损伤的大鼠中，口服 Preladenant（0.01-1 mg/kg）能够剂量依赖性地增强由阈下剂量 L-多巴诱导的对侧旋转。在给予 1 mg/kg 剂量后 1、6 和 12 小时，该效应均显著，并与纹状体 A_2A 受体占有率相关。[1]
在 6-OHDA 损伤的大鼠中，长期（每天两次，持续 23 天）联合使用 Preladenant（0.3 mg/kg 口服）和低剂量 L-多巴（4 mg/kg 腹腔注射）未诱发行为敏化（旋转反应逐渐增加），而单独使用较高剂量 L-多巴（6 mg/kg）则导致显著的行为敏化。这表明其可能具有降低运动障碍发生风险的潜力。[1]
Preladenant（0.1 和 1 mg/kg 口服）能显著减少小鼠强迫游泳实验和悬尾实验中的不动时间，显示出与三环类抗抑郁药地昔帕明相当的抗抑郁样作用。[1]
Preladenant（0.1-1 mg/kg 口服）能剂量依赖性地减少大鼠强迫游泳实验中的不动时间，并适度增加攀爬行为。[1]

使用重组表达腺苷受体的细胞制备的膜进行受体结合，如下：人 A_2A 和 HEK 293、大鼠 A_2A 和中国仓鼠卵巢、人和大鼠A₁ 和中国仓鼠卵巢，以及人 A₃ 和 HEK 293。为了进行放射性配体竞争结合测定，在 96 孔板中使用 200 μL 总测定体积，最终测试药物浓度范围为0.1–3 μM。 A₁ 和 A_2A，含有 10 mM MgCl₂ 的杜尔贝科磷酸盐缓冲盐水，和 A₃，50 mM Tris-HCl、120 mM NaCl 和 10 mM MgCl₂ 是稀释膜的测定缓冲液 (pH 7.4)。向膜制剂中添加4 U/mL腺苷脱氨酶后，在室温下孵育15分钟，以消除其中的内源腺苷。 0.5（[³H]SCH 58261，A_2A）、1（[³H]DPCPX，A1) 或 0.25 ([¹²⁵I]AB-MECA, A₃) nM，添加放射性配体。添加 100 nM NECA (A₁)、100 nM CGS 15923 (A_2A) 或 100 nM DPCPX (A₃) 定义非特异性结合。将板在室温下搅拌孵育 1.5 小时（A_2A 和 A₁）或 2 小时（A₃）。使用 Brandel 细胞收集器，将膜过滤到 Packard GF-B 过滤板上，然后在冰冷的测定缓冲液中清洗，以分离结合的和游离的放射性配体。在用 45 μL Microscint 20 填充每个孔之前，将板干燥。使用迭代曲线拟合程序，拟合位移曲线以确定 IC50 值。 Cheng-Prusoff 方程[1] 用于计算 K_i 值。

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对于腺苷 A_2A 受体结合实验，使用表达重组人 A_2A 受体的细胞制备膜制剂，并用测定缓冲液（含有 10 mM MgCl₂ 的杜氏磷酸盐缓冲盐水，pH 7.4）稀释。通过将膜制剂与腺苷脱氨酶孵育以去除内源性腺苷。放射性配体竞争结合实验在 96 孔板中进行，总体积为 200 µL。待测药物 Preladenant 的最终浓度范围为 0.1 nM 至 3 µM。加入放射性配体 [³H]SCH 58261，终浓度为 0.5 nM。使用 100 nM CGS 15923 定义非特异性结合。将板在室温下振荡孵育 1.5 小时。通过过滤到滤板上来分离结合和游离的放射性配体，然后用冰冷的测定缓冲液洗涤。通过拟合置换曲线确定 IC₅₀ 值，并使用 Cheng-Prusoff 方程计算 K_i 值。[1]
对于使用人 A_2A 受体的功能性 cAMP 实验，收集稳定表达该受体的 HEK 293 细胞并重悬于测定缓冲液（补充有 HEPES、MgCl₂ 和牛血清白蛋白的 Hanks 平衡盐溶液）中。将细胞悬液与载体或不同浓度的 Preladenant 在室温下预孵育 15 分钟。然后加入不同浓度的 A_2A 激动剂 CGS-21680，并在 37°C 下孵育反应 15 分钟以刺激 cAMP 产生。通过加入裂解液终止反应。测定 cAMP 水平。绘制 CGS-21680 在存在和不存在 Preladenant 情况下的浓度-反应曲线，并通过剂量比法确定功能性 K_B 值。[1]

将人 A_2A 或人 A_2B 受体稳定表达的 HEK 293 细胞培养至汇合，用无酶细胞解离缓冲液收获，并通过离心（1000 g ; 5分钟）。将细胞漂洗并在补充有 10 nM HPS、pH 7.4、5 mM MgCl₂ 和 0.2% 牛血清白蛋白的 Hanks 平衡盐溶液中稀释，直至细胞达到最终密度 4×10< sup>6 细胞/mL。为了达到所需的最终测定浓度，将前体在上述缓冲液中稀释，并与以下成分混合：100 μM Ro 201724、2 U/mL 腺苷脱氨酶和 0.25% DMSO。在装有 25 μL 载体或预载剂的 96 孔板中，将细胞悬浮液 (20 μL) 在室温下预孵育 15 分钟。添加 10 倍所需浓度的 5-N-环丙基甲酰胺腺苷 (A_2B) 或 CGS-21680 (A_2A) 后，将反应物在 3 ℃下孵育 15 分钟。 37°C。添加 50 μL 测定/裂解缓冲液后，反应结束。绘制含有和不含预负载的 CGS-21680 的浓度响应曲线，可以通过 GraphPad Prism 软件 [1] 进行曲线拟合来确定 EC50 值。

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针对 A_2B 受体选择性的功能性实验与 A_2A cAMP 实验类似。使用稳定表达人 A_2B 受体的 HEK 293 细胞。用 Preladenant 处理细胞，然后用 A_2B 激动剂 5'-N-环丙基甲酰胺腺苷刺激。测定 cAMP 产量以确定该化合物在 A_2B 受体上的拮抗效力（K_B）。[1]

小鼠和大鼠：本研究采用雄性CD1小鼠和雄性CD大鼠。Preladenant以3～5毫升/千克的剂量溶于50%聚乙二醇400溶液中，经口给药。在强迫游泳试验（FST）中，将小鼠逐一放入装有10厘米深25℃水的玻璃圆筒中，静置6分钟。当小鼠直立漂浮且仅做微小动作以保持头部露出水面时，即判定其静止不动。在6分钟试验期的最后4分钟，由一位对动物处理不知情的观察者记录小鼠的静止不动时间。在行为学测试前1小时，分别给动物灌胃Preladenant、SCH 412348或溶剂对照。在25℃水圆筒中游泳15分钟后，将每只大鼠取出，置于加热的干燥箱中烘干，然后放回原笼。在测试日（即24小时后），将动物再次置于相同条件下。记录其在5分钟内的静止不动时间。此外，还记录大鼠攀爬圆柱壁的时间。在测试日行为测试前一小时，每只动物分别接受Preladenant、SCH 412348或载体注射。猴子：使用6只体重3.5-4.2公斤的雌性食蟹猴（Macaca fascicularis cynomolgus）。每周一次皮下注射MPTP（2-3毫克/公斤），直至动物出现稳定的帕金森综合征。帕金森综合征的定义为：根据帕金森残疾量表，残疾评分在至少一个月内保持不变，且评分为8分或更高。在最后一次MPTP给药后，猴子接受至少两个月的慢性Prolopa治疗（左旋多巴/苄丝肼，100/25 mg），或直至出现明显且可观察到的运动障碍。本实验对这些猴子使用左旋多巴和普瑞拉丹（1 mg/kg和3 mg/kg，口服）。

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\n在大鼠CGS-21680诱导的运动减少试验中，普瑞拉丹以50%聚乙二醇400混悬液的形式口服给药（剂量3-5 ml/kg）。测试剂量为0.03、0.1、0.3和1 mg/kg。30分钟后，大鼠皮下注射A2A受体激动剂CGS-21680（1 mg/kg，溶于生理盐水）。在给予 CGS-21680 十分钟后，将大鼠放入运动活动箱中，并记录其 30 分钟内的总运动距离。[1]
\n在大鼠的氟哌啶醇诱导僵直试验中，首先通过皮下注射氟哌啶醇（1 mg/kg）诱导僵直。30 分钟后，测量基线僵直程度。随后立即口服给予普瑞拉丹（0.1、0.3、1 mg/kg）或溶剂（溶于 50% PEG 400）。在给予普瑞拉丹后 1 小时和 4 小时再次测试僵直程度。[1]
\n在 6-OHDA 损伤大鼠的左旋多巴旋转试验中，通过立体定位注射 6-OHDA 至内侧前脑束诱导单侧损伤。两周后，大鼠预先注射左旋多巴。测试时，在腹腔注射外周脱羧酶抑制剂苄丝肼（25 mg/kg）前40分钟，口服给予普瑞拉丹特（0.01、0.03、0.1、0.3、1 mg/kg，溶于50% PEG 400溶液）。在注射苄丝肼20分钟后，腹腔注射左旋多巴（4 mg/kg）。使用自动旋转仪记录2小时内的对侧旋转情况。通过在左旋多巴/苄丝肼刺激前不同时间点（1、6、12、18小时）口服给予普瑞拉丹特（1 mg/kg）来评估其作用持续时间。 [1]
\n在行为致敏研究中，6-OHDA损伤的大鼠每天接受两次治疗，持续23天，分别给予Preladenant（0.3 mg/kg，溶于50% PEG 400，口服）联合左旋多巴（4 mg/kg，腹腔注射），或给予赋形剂（口服）联合更高剂量的左旋多巴（6 mg/kg，腹腔注射）。在特定日期测量旋转行为。[1]
\n在小鼠强迫游泳试验（FST）和悬尾试验（TST）中，于行为测试前1小时口服给予Preladenant（0.1、1 mg/kg）或赋形剂（溶于50% PEG 400）。在FST中，将小鼠放入装满水的圆柱体中6分钟，并记录最后4分钟的静止不动时间。在强迫游泳试验（TST）中，小鼠被尾部悬吊6分钟，并记录总不动时间。[1]
\n在大鼠强迫游泳试验中，大鼠先进行15分钟的预游泳训练。24小时后（试验当天），在5分钟测试游泳前1小时，大鼠分别口服给予Preladenant（0.1、0.3、1 mg/kg，溶于50% PEG 400溶液）或载体。记录不动时间和攀爬持续时间。[1]

[1]. Characterization of the potent and highly selective A2A receptor antagonists preladenant and SCH 412348 [7-[2-[4-2,4-difluorophenyl]-1-piperazinyl]ethyl]-2-(2-furanyl)-7H-pyrazolo[4,3-e][1,2,4]triazolo[1,5-c]pyrimidin-5-amine] in rodent models of movement disorders and depression. J Pharmacol Exp Ther . 2009 Jul;330(1):294-303.

[2]. Preladenant, a selective A(2A) receptor antagonist, is active in primate models of movement disorders. Exp Neurol. 2010 Oct;225(2):384-90.

普瑞拉丹特（Preladenant）已用于多种疾病的治疗试验，包括脑部疾病、帕金森病、运动障碍、抗精神病药物和帕金森综合征等。
普瑞拉丹特是一种口服生物利用度高的腺苷A2A受体（A2AR；ADORA2A）拮抗剂，具有潜在的免疫调节和抗肿瘤活性。给药后，普瑞拉丹特选择性地结合并抑制T淋巴细胞表面表达的A2AR。这阻断了肿瘤释放的腺苷与A2AR的相互作用，从而阻止了腺苷/A2AR介导的T淋巴细胞抑制。这导致T淋巴细胞增殖和活化，并刺激T细胞介导的针对肿瘤细胞的免疫反应。A2AR是一种G蛋白偶联受体，在T细胞表面高表达，并在被腺苷激活后抑制T细胞的增殖和活化。腺苷常由癌细胞过度产生，并在免疫抑制中发挥关键作用。

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Preladenant是一种结构新颖的A2A受体拮抗剂，由母体化合物SCH 58261修饰而来。与早期的A2A受体拮抗剂KW-6002（异曲非林）相比，其亲和力和选择性均有显著提高。[1]
该化合物的作用机制是阻断腺苷A2A受体，这些受体与基底神经节间接通路中纹状体苍白球GABA能神经元上的多巴胺D2受体共定位。据推测，这种阻断作用可以恢复直接通路和间接通路之间的平衡，从而缓解帕金森病模型中未直接激活多巴胺受体的运动障碍。 [1]
该研究表明，普瑞拉丹可能具有治疗帕金森病运动症状（并可能降低运动障碍的风险）和非运动症状（例如帕金森病患者中常见的抑郁症）的潜力。[1]

C25H29N9O3

503.57

503.239

C, 59.63; H, 5.80; N, 25.03; O, 9.53

377727-87-2

10117987

White to off-white solid powder

2.747

125

1

10

9

37

722

0

O(C([H])([H])C([H])([H])OC([H])([H])[H])C1C([H])=C([H])C(=C([H])C=1[H])N1C([H])([H])C([H])([H])N(C([H])([H])C([H])([H])N2C3=C(C4=NC(C5=C([H])C([H])=C([H])O5)=NN4C(N([H])[H])=N3)C([H])=N2)C([H])([H])C1([H])[H]

DTYWJKSSUANMHD-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C25H29N9O3/c1-35-15-16-36-19-6-4-18(5-7-19)32-11-8-31(9-12-32)10-13-33-23-20(17-27-33)24-28-22(21-3-2-14-37-21)30-34(24)25(26)29-23/h2-7,14,17H,8-13,15-16H2,1H3,(H2,26,29)

4-(furan-2-yl)-10-[2-[4-[4-(2-methoxyethoxy)phenyl]piperazin-1-yl]ethyl]-3,5,6,8,10,11-hexazatricyclo[7.3.0.02,6]dodeca-1(9),2,4,7,11-pentaen-7-amine

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: 0.5 mg/mL (0.99 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 5.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 0.5 mg/mL (0.99 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 5.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入 900 μL 20% SBE-β-CD 生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 0.5 mg/mL (0.99 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 5.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。