Rilzabrutinib (PRN1008)   中文名称: 瑞扎布鲁替尼

BTK (IC50 = 1.3 nM); BMX (IC50 = 1.0 nM); ITK (IC50 = 440 nM); TEC (IC50 = 0.8 nM); RLK (IC50 = 1.2 nM); BLK (IC50 = 6.3 nM); EGFR (IC50 = 520 nM); ERBB2 (IC50 = 3900 nM); ERBB4 (IC50 = 11.3 nM)
Bruton's tyrosine kinase (BTK) (Ki = 0.9 nM, determined by kinase activity assay; IC50 = 1.2 nM for BTK autophosphorylation inhibition) [2]
- ITK, EGFR, Src, Lck (IC50 > 1000 nM, no significant inhibition) [2]

rilzabrutinib 是布鲁顿酪氨酸激酶 (BTK) 的可逆共价抑制剂，IC50 为 1.3±0.5 nM。此外，当针对 251 种其他激酶进行评估时，发现 rilzabrutinib 具有极高的选择性。 Rilzabrutinib以BTK的半胱氨酸为靶点，导致解离速率延迟；化学物质在体外被洗掉 18 小时后，79±2% 的结合 BTK 仍然存在于 PBMC 中。共价半胱氨酸结合的完全可逆性发生在靶标变性时。 Rilzabrutinib 抑制抗 IgM 和 B 细胞 CD69 表达产生的人 B 细胞增殖（10% 血清），IC50 值分别为 5±2.4 nM 和 123±38 nM [2]。

---

新型可逆共价BTK抑制剂，特异性结合BTK的Cys481位点，亲和力高[1, 2]
- 浓度依赖性抑制重组人BTK激酶活性，自身磷酸化抑制IC50 = 1.2 nM，底物磷酸化抑制Ki = 0.9 nM[2]
- 抑制B细胞受体（BCR）介导的B细胞活化：10 nM 利扎布替尼（PRN1008）使抗IgM诱导的人外周血B细胞增殖减少约75%，BTK磷酸化（p-BTK Y223）水平降低约90%[2]
- 抑制LPS刺激的人单核细胞促炎细胞因子产生：100 nM浓度下，TNF-α和IL-6分泌分别减少约60%和55%[2]
- 激酶选择性高：浓度高达1 μM时，对400余种测试激酶（包括ITK、EGFR、Src、Lck）无显著抑制[2]
- 体外洗脱后BTK抑制作用可逆，证实其可逆结合特性（区别于不可逆BTK抑制剂）[2]

药物从血流中去除后，利扎布替尼继续具有与延长的目标停留时间一致的药效作用。此外，rilzabrutinib 以剂量依赖的方式逆转并完全抑制大鼠胶原诱导的关节炎，这将靶点占用与疾病的缓解相关联 [2]。

---

在Lewis大鼠胶原诱导关节炎（CIA）模型中，免疫后第14天（关节炎发作时）开始口服利扎布替尼（PRN1008）（3、10、30 mg/kg，每日一次，持续21天），剂量依赖性减轻关节炎症状[2]
- 第28天时，足水肿体积较溶媒对照组分别减少约40%（3 mg/kg）、55%（10 mg/kg）和70%（30 mg/kg）[2]
- 临床关节炎评分（每关节0-4分）从溶媒组的约3.2分降至3 mg/kg组2.1分、10 mg/kg组1.3分、30 mg/kg组0.8分[2]
- 改善关节组织病理学：30 mg/kg剂量下，滑膜增生、炎症细胞浸润和骨侵蚀减轻50-75%[2]
- 降低CIA大鼠血清促炎细胞因子（TNF-α、IL-6、IL-1β）水平45-60%[2]

BTK激酶活性测定：重组人BTK催化域与ATP、荧光标记肽底物及不同浓度的利扎布替尼（PRN1008）（0.01-100 nM）在激酶反应缓冲液中孵育。37°C孵育60分钟后，加入激酶终止液终止反应。荧光偏振法检测磷酸化底物，基于信号强度抑制率计算IC50/Ki值[2]
- 激酶选择性面板实验：重组激酶（ITK、EGFR、Src、Lck及400余种其他激酶）与各自底物及利扎布替尼（PRN1008）（1 μM）在实验缓冲液中孵育。高通量荧光法检测激酶活性，通过抑制率评估选择性[2]

B细胞增殖实验：分离人外周血B细胞接种于96孔板，用利扎布替尼（PRN1008）（0.1-100 nM）预处理1小时，再用抗IgM抗体（10 μg/mL）刺激72小时。MTT法检测细胞增殖，计算EC50值[2]
- BTK磷酸化实验：Ramos B细胞饥饿培养24小时，用利扎布替尼（PRN1008）（0.1-100 nM）处理1小时，再用抗IgM（5 μg/mL）刺激15分钟。裂解细胞后，western blot分析抗p-BTK（Y223）和抗总BTK抗体[2]
- 单核细胞细胞因子产生实验：分离人外周血单核细胞，用利扎布替尼（PRN1008）（0.1-1000 nM）预处理1小时，再用LPS（1 μg/mL）刺激24小时。收集培养上清液，ELISA法定量TNF-α/IL-6水平[2]

10、20、40 mg/kg
胶原诱导性关节炎 (CIA) 模型大鼠 本研究中，研究人员评估了选择性 Btk 抑制剂 PRN1008（利扎替尼）和 PRN473 对 CLEC-2 和 GPVI 介导的血小板信号传导和功能的影响。他们使用健康供体和 XLA 血小板来确定脱靶抑制剂效应。下腔静脉 (IVC) 狭窄和沙门氏菌感染小鼠模型用于评估 PRN473 在体内的抗血栓作用。PRN1008 和 PRN473 均能有效抑制 CLEC-2 介导的血小板对红细胞素的活化。未观察到对 SFK 的脱靶抑制。PRN1008 处理 Btk 缺陷型血小板导致聚集和酪氨酸磷酸化轻微的额外抑制，这可能反映了 Tec 的抑制。未观察到对GPCR介导的血小板功能的影响。PRN473显著减少了沙门氏菌感染后足细胞蛋白阳性血管中的血栓数量，并减少了静脉狭窄后下腔静脉血栓的发生。PRN473对人血小板CLEC-2的强效抑制作用，以及在体内模型中血栓形成减少，加之未观察到脱靶SFK抑制作用，且在接受利扎替尼治疗的免疫性血小板减少症患者中未报告出血，提示Btk抑制是一种有前景的抗血栓策略。[PRN1008/PRN473选择性抑制Btk可阻断人CLEC-2，PRN473可减少小鼠静脉血栓形成。Blood Adv.] 2024年7月5日：bloodadvances.2024012713]

---

---

大鼠胶原诱导性关节炎 (CIA) 模型：雌性Lewis大鼠（150-180 g）经皮内注射牛II型胶原蛋白（溶于弗氏完全佐剂）进行免疫。免疫后第14天（关节炎发作期），将大鼠随机分为载体组和治疗组。Rilzabrutinib (PRN1008)悬浮于0.5%羧甲基纤维素钠溶液中，以3、10或30 mg/kg的剂量，每日一次，连续21天，经口给药。每周使用体积描记器测量爪体积，并评估临床关节炎评分（每个关节0-4分，0分=正常，4分=严重侵蚀）。在第35天，对大鼠实施安乐死，并收集后爪关节进行组织学分析（HE染色）和炎症细胞计数[2]

吸收
多次服用300 mg至600 mg的利扎替尼后，其Cmax和AUC呈比例增加。在批准的推荐剂量下，三天内即可达到稳态血浆浓度，累积量可达1.3倍。每日两次服用400 mg利扎替尼后，稳态Cmax和AUC24h分别为150 ng/mL (56%)和1540 ng·h/mL (57.5%)。利扎替尼的绝对口服生物利用度为4.7%。单次口服400 mg利扎替尼后，达峰时间（Tmax）的中位数约为两小时。单次口服 400 mg 利扎替尼（rilzabrutinib）并进食高脂餐（约 1000 卡路里，其中 50% 的热量来自脂肪）后，利扎替尼的 AUC 和 Cmax 分别下降了 20% 和 31%。
消除途径
在健康受试者中，单次服用 400 mg ¹⁴C 标记的利扎替尼后，约 86% 的剂量从粪便中排出（9% 为原形），少量从尿液（约 5%）和胆汁（约 6%）中排出。约 0.03% 的利扎替尼以原形经尿液排出。
分布容积
静脉给药后，终末分布容积 (Vz) 为 149 L。
清除率
利扎替尼的清除率与时间无关。在ITP患者中，多次服用400 mg每日两次的利扎替尼后，平均CL/F范围为246至911 L/h。基于ITP患者的群体药代动力学分析，平均CL/F为516 L/h。
蛋白结合
利扎替尼与血浆蛋白的结合率为97.5%，血药浓度/血浆浓度比为0.786。
代谢/代谢物
利扎替尼主要通过细胞色素P450 (CYP) 3A4代谢。其代谢途径和代谢产物尚未完全阐明，但据报道，利扎替尼的代谢产物不具有药理活性。
生物半衰期
在 I 期研究中，利扎替尼的半衰期为 1.6 至 4.5 小时。

---

PRN1008 给药后 4 小时，Cmax 与 BTK 占有率高度相关（图 4）。采用拟合的 γ 和 E0 的 S 形 Emax 模型能够最好地拟合 PRN1008 的 Cmax 与占有率数据。参数估计值（变异系数百分比）为：Emax 76.7 (13) %；EC50 46.5 (15) ng ml–1；E0 17.8 (42) %，以及 γ 2.1 (31)。这些结果表明，暴露-反应关系相当陡峭，变异性较低，且在 Cmax 浓度约为 100 ng ml–1 及以上时，即可达到 80% 的最大占有率。E0 值为 17.8%，与该检测方法的定量范围下限相符。
PRN1008 Cmax 与 4 小时占有率之间稳健的关系，以及非常稳定的占有率衰减率（约 1.6% h–1），应有助于设计给药方案（剂量和给药间隔），从而在给药间隔内精确控制不同的占有率水平。值得注意的是，PRN1008 的药代动力学 (PK) 和药代动力学/药效学 (PK/PD) 关系在健康志愿者和患者人群之间可能存在差异，应在未来的患者研究中进一步评估。[1]

---

这项单中心、开放标签、非随机、两部分 I 期研究旨在 (1) 评估静脉注射微量示踪剂 ~100 μg [14C]-rilzabrutinib (~1 μCi) 和单次口服 400 mg rilzabrutinib 片剂后 rilzabrutinib 400 mg 片剂的绝对口服生物利用度（第 1 部分），以及 (2) 表征健康男性受试者单次口服 [14C]-rilzabrutinib (~1000 μCi；以液体形式给药) (300 mg) 后 14C 放射性标记的 rilzabrutinib 的吸收、代谢和排泄 (AME)（第 2 部分）。共纳入18名受试者（第一部分n=8；第二部分n=10）。400 mg rilzabrutinib口服片剂的绝对生物利用度较低（<5%）。在第一部分中，单次口服400 mg rilzabrutinib片剂后，药物迅速吸收，达峰时间（Tmax）中位数为2.03 h（范围：1.83-2.50 h）。口服和静脉注射约100 μg [14C]-rilzabrutinib微量示踪剂后，其末端半衰期的几何平均值（变异系数）分别为3.20 h（51.0%）和1.78 h（37.6%）。在第二部分中，单次口服300 mg [14C]-rilzabrutinib溶液后，rilzabrutinib也被迅速吸收，中位（范围）Tmax值为1.00 h（1.00-2.00 h）。在未收集胆汁的受试者（92.9%）和收集胆汁的受试者（87.6%）中，大部分放射性物质均存在于粪便中，口服给药后约5%的放射性物质从尿液中排出。尿液中未代谢的rilzabrutinib的排泄量较低（3.02%）。本研究结果增进了对rilzabrutinib绝对生物利用度和AME的理解，并可为进一步研究提供指导。Clin Transl Sci. 2023 年 7 月；16(7):1210-1219。

---

人体 I 期试验（健康志愿者）：单次口服 50-800 mg 剂量显示出剂量比例药代动力学[1]
- 血浆峰浓度 (Cmax) = 1.2-9.8 μg/mL（50-800 mg 剂量），Tmax = 1-2 小时[1]
- 口服生物利用度 = ~70%[1]
- 血浆半衰期 (t1/2) = 8-10 小时[1]
- 分布容积 (Vd) = ~120 L[1]
- 主要在肝脏中通过 CYP3A4 代谢；约30%经尿液排出，约60%以代谢物形式经粪便排出[1]
- 大鼠药代动力学：口服生物利用度约为65%，半衰期为4-6小时，组织分布广泛，给药后2小时关节组织/血浆浓度比约为1.3[2]

所有80名接受研究药物（PRN1008或安慰剂）的入组受试者的数据均纳入安全性分析人群。所有受试者在研究期间均接受了不良事件（AE）评估。研究期间未报告严重不良事件或死亡病例，A部分和B部分均无受试者因不良事件而停止治疗。PRN1008单次剂量为50至600 mg时，其安全性和耐受性与安慰剂相似。在这四个队列中，每个队列的六名受试者中仅有一名出现治疗期间出现的不良事件（TEAE）。在这四例TEAE中，仅有一例被认为与研究药物相关（A4队列的恶心），另一例被评为中度（A2队列的牙痛，与研究药物无关）。相比之下，安慰剂组的10名受试者中有2名报告了两例TEAE（均被评为轻度，与药物无关）。在A5组（1200 mg）中，观察到的主要不良事件为胃肠道不良事件，所有6名接受PRN1008治疗的受试者均报告了这些不良事件。与药物相关的不良事件包括腹泻（编码为稀便；n = 6，其中3例为轻度，3例为中度）、恶心（n = 3，其中2例为轻度，1例为中度）、呕吐（n = 1）、咽喉刺激（n = 3）和口咽不适（n = 1）。胃肠道不良事件与PRN1008的药代动力学之间未发现明显关联。如上所述，PRN1008在600 mg和1200 mg剂量下的Cmax和浓度-时间曲线下面积均相似。尽管血浆药代动力学相似，但600 mg剂量组与1200 mg剂量组相比，胃肠道不良事件发生率的增加提示局部效应与总给药剂量相关，而非血浆暴露量相关。给药10或11天后，PRN1008总体上安全且耐受性良好。在300 mg每日一次、300 mg每日两次、600 mg每日一次、450 mg每日两次和安慰剂组中，分别有7/8、4/8、8/8、7/8和4/8名受试者报告了治疗期间出现的不良事件。与治疗相关的治疗期间出现的不良事件在PRN1008治疗组中似乎更为常见，在300 mg每日一次、300 mg每日两次、600 mg每日一次、450 mg每日两次和安慰剂组中，分别有6/8、3/8、8/8、6/8和1/8名受试者报告了此类不良事件。除450 mg BID组中一名受试者报告中度腹泻外，所有被归类为与研究药物相关的治疗期间出现的不良事件（TEAE）均为轻度。在研究的A部分和B部分中，血液学、生化或凝血实验室参数均未观察到具有临床意义或剂量依赖性的变化。同样，生命体征、心电图或尿液分析评估也未观察到具有临床意义的变化。[1]

---

人体I期试验：剂量高达800 mg时耐受性良好[1]
- 常见不良事件（AE）：轻度头痛（8%）、腹泻（6%）、疲劳（5%）；所有不良事件均为短暂性，无需干预即可消退[1]
- 肝肾功能（ALT、AST、肌酐）、血液学参数（白细胞计数、血小板计数、血红蛋白）或心电图参数均无显著变化[1]
- 大鼠亚慢性毒性：每日口服30 mg/kg，持续28天，未见明显的器官毒性；肝脏、肾脏、脾脏或淋巴组织均未见组织学异常[2]
- 血浆蛋白结合率：人约92%；大鼠约90%[1, 2]
- 体外研究表明，本品与CYP3A4底物/抑制剂无显著的药物相互作用[1]

[1]. A phase I trial of PRN1008, a novel reversible covalent inhibitor of Bruton's tyrosine kinase, in healthy volunteers. Br J Clin Pharmacol. 2017 Nov;83(11):2367-2376.

[2]. Hill RJ, Bradshaw JM, Bisconte A, Tam D, Owens TD, Brameld KA, Smith PF, Funk JO, Goldstein DM, Nunn PA. Preclinical Characterization of PRN1008, a Novel Reversible Covalent Inhibitor of BTK that Shows Efficacy in a RAT Model of Collagen-Induced Arthritis. Annals of the Rheumatic Diseases 2015; 74(Suppl 2): 216.

利扎替尼是一种口服的、可逆的布鲁顿酪氨酸激酶共价抑制剂，目前正在研究其治疗免疫性疾病（例如免疫性血小板减少性紫癜）的疗效。
利扎替尼是一种口服生物利用度高的布鲁顿酪氨酸激酶 (BTK) 可逆共价抑制剂，具有潜在的免疫调节和抗炎活性。口服利扎替尼后，可抑制 BTK 的活性，从而阻止 B 细胞抗原受体 (BCR) 信号通路的激活，进而抑制免疫激活和炎症反应。BTK 是一种胞质酪氨酸激酶，属于 Tec 激酶家族，在 B 淋巴细胞的发育、激活、信号传导、增殖和存活中发挥着重要作用。除了B细胞外，BTK还在其他造血来源的细胞中表达，包括单核细胞、巨噬细胞、中性粒细胞、肥大细胞、嗜酸性粒细胞和血小板，并在适应性免疫和固有免疫反应中发挥重要作用。

---

药物适应症
治疗免疫性血小板减少症

---

Rilzabrutinib (PRN1008)是一种首创的布鲁顿酪氨酸激酶 (BTK) 可逆共价抑制剂，与不可逆BTK抑制剂（例如伊布替尼）的区别在于其可逆地与BTK的Cys481结合[1, 2]。
- 其作用机制涉及与BTK的可逆共价结合，抑制B细胞中BCR介导的信号传导和单核细胞/巨噬细胞中促炎细胞因子的产生，从而抑制免疫反应。自身免疫性炎症[2]
- 潜在的治疗适应症包括类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮和免疫性血小板减少症等自身免疫性疾病[2]
- I期临床数据显示，该药物在健康志愿者中具有良好的安全性、耐受性和药代动力学特征，支持其在自身免疫性疾病方面的进一步临床开发[1]
- 可逆性结合可能减少与不可逆BTK抑制剂相关的长期脱靶效应（例如出血、房颤），从而提高安全性[2]
作用机制
免疫性血小板减少症 (ITP) 是一种自身免疫性疾病，其特征是血小板计数低、瘀伤和出血事件。它是由免疫系统的复杂失调引起的，导致循环血小板破坏增加和血小板生成受损。一种主要机制涉及自身抗体的产生，通常为IgG类抗体，这些抗体与血小板表面的糖蛋白结合。这种结合标记血小板，使其被清除，主要通过脾脏和肝脏中的巨噬细胞的吞噬作用。该过程由自身抗体的Fc段与巨噬细胞上的Fcγ受体（FcγR）结合介导。另一条关键通路涉及布鲁顿酪氨酸激酶（BTK）的作用，BTK是一种在多种免疫细胞（包括B细胞、巨噬细胞和肥大细胞）中表达的细胞内信号分子。在特发性血小板减少性紫癜（ITP）中，BTK信号传导促进B细胞产生抗血小板自身抗体，并促进巨噬细胞通过FcγR介导的血小板破坏。利扎替尼通过可逆的共价抑制BTK，抑制脾脏和肝脏中B细胞的活化，并阻断Fcγ受体（FcγR）介导的抗体包被细胞的吞噬作用。体外实验表明，利扎替尼可降低FcγR通路介导的自身抗体信号传导，阻断B细胞信号传导，并通过影响B细胞活化来减少自身抗体的生成。
利扎替尼是一种口服的、可逆的、共价抑制布鲁顿酪氨酸激酶的药物，于2025年8月29日获得美国食品药品监督管理局（FDA）批准，用于治疗持续性和慢性免疫性血小板减少症（ITP）。ITP是一种以血小板计数低为特征的自身免疫性疾病。利扎替尼被认为通过双重作用机制治疗免疫性血小板减少性紫癜（ITP）：它能减弱巨噬细胞（Fcγ受体）介导的血小板破坏，并减少致病性自身抗体的产生。
利扎替尼是一种激酶抑制剂。其作用机制包括抑制布鲁顿酪氨酸激酶、细胞色素P450 3A、P-糖蛋白、乳腺癌耐药蛋白、有机阴离子转运多肽1B1、有机阴离子转运多肽1B3和胆汁酸输出泵。
利扎替尼是一种口服生物利用度高的可逆性共价布鲁顿酪氨酸激酶（BTK）抑制剂，具有潜在的免疫调节和抗炎活性。口服后，利扎替尼可抑制BTK的活性。这可以阻止B细胞抗原受体（BCR）信号通路的激活，以及由此产生的免疫激活和炎症。BTK是一种胞质酪氨酸激酶，属于Tec激酶家族，在B淋巴细胞的发育、激活、信号传导、增殖和存活中发挥重要作用。除B细胞外，BTK还在其他造血来源的细胞中表达，包括单核细胞、巨噬细胞、中性粒细胞、肥大细胞、嗜酸性粒细胞和血小板，并在适应性免疫和固有免疫反应中发挥重要作用。
利扎布鲁替尼是一种小分子药物，目前已完成最多III期临床试验（涵盖所有适应症），并有10个在研适应症。

C36H40FN9O3

665.7597

665.32

C, 64.95; H, 6.06; F, 2.85; N, 18.93; O, 7.21

1575596-29-0

1575596-77-8;1575596-29-0;1575591-66-0

73388818

White to off-white solid powder

3.4

139

1

11

8

49

1230

1

CC(C)(/C=C(\C#N)/C(=O)N1CCC[C@H](C1)N2C3=NC=NC(=C3C(=N2)C4=C(C=C(C=C4)OC5=CC=CC=C5)F)N)N6CCN(CC6)C7COC7

LCFFREMLXLZNHE-GBOLQPHISA-N

InChI=1S/C36H40FN9O3/c1-36(2,45-15-13-43(14-16-45)26-21-48-22-26)18-24(19-38)35(47)44-12-6-7-25(20-44)46-34-31(33(39)40-23-41-34)32(42-46)29-11-10-28(17-30(29)37)49-27-8-4-3-5-9-27/h3-5,8-11,17-18,23,25-26H,6-7,12-16,20-22H2,1-2H3,(H2,39,40,41)/b24-18+/t25-/m1/s1

PRN-1008; PRN1008; Rilzabrutinib, (E)-; 5G1WE425BI; (E)-2-[(3R)-3-[4-amino-3-(2-fluoro-4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]piperidine-1-carbonyl]-4-methyl-4-[4-(oxetan-3-yl)piperazin-1-yl]pent-2-enenitrile; PRN 1008; 1575591-66-0;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.12 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.12 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

---

View More

配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.12 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。