PRN1371

FGFR1 (IC50 = 0.6 nM); FGFR2 (IC50 = 1.3 nM); FGFR3 (IC50 = 4.1 nM); FGFR4 (IC50 = 19.3 nM); CSF1R (IC50 = 8.1 nM)
Fibroblast Growth Factor Receptor 1 (FGFR1) (IC50 = 1.5 nM for human recombinant FGFR1 kinase) [1]
- Fibroblast Growth Factor Receptor 2 (FGFR2) (IC50 = 2.4 nM for human recombinant FGFR2 kinase) [1]
- Fibroblast Growth Factor Receptor 3 (FGFR3) (IC50 = 1.9 nM for human recombinant FGFR3 kinase) [1]
- Fibroblast Growth Factor Receptor 4 (FGFR4) (IC50 = 3.1 nM for human recombinant FGFR4 kinase) [1]
- No significant inhibition of 200+ other kinases (IC50 > 1 μM), showing >300-fold selectivity for FGFR family [1]

体外活性：PRN1371 是 FGFR1−4 的不可逆纳摩尔抑制剂。 PRN1371 具有独特的高生化和细胞效力（FGFR1 IC50 = 0.6 nM，SNU16 IC50 = 2.6 nM）、延长的靶点参与（FGFR1 占用率 24 小时 = 96%）、<30% 1= herg= 抑制= at= 和= 良好= 预测= adme= 稳定性= with= bme= 反应性= kd=>100 μM。 PRN1371 保持了较高的 FGFR1 占有率，并具有改善的溶解度和出色的口服生物利用度。激酶测定：使用 Caliper 毛细管电泳系统测定酶抑制，该系统根据电荷分离磷酸化和非磷酸化肽。首先将不同浓度的 PRN1371 与酶预孵育 15 分钟。通过添加肽底物、ATP 和 Mg2+ 来启动反应，并在 25°C 下孵育 3 小时。为了停止反应，用 EDTA 猝灭混合物。缓冲液为 100 mM HEPES、pH 7.5、0.1% BSA、0.01% Triton X-100、1 mM DTT、10 mM MgCl2、10 mM 原钒酸钠、10 μM β-甘油磷酸盐和 1% DMSO。反应的 ATP 浓度处于 ATP 的 Km 预定值。 MCE 尚未独立证实这些方法的准确性。它们仅供参考。细胞测定：将人脐静脉内皮细胞(HUVEC)在补充有10％FBS的培养基中孵育，并以每孔30000个细胞接种在96孔板中过夜。然后在化合物处理前1小时将HUVEC转移至无血清培养基中。将化合物浓度系列添加到细胞中并在 37°C 下孵育 1 小时。然后用 50 ng/mL 的 FGF2 或 50 ng/mL 的 VEGF 刺激细胞 10 分钟。加入冰冷的PBS终止反应，洗涤细胞3次以除去培养基。测定ERK磷酸化。

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PRN1371（0.01-100 nM）不可逆抑制FGFR1-4激酶活性，10 nM浓度下对FGFR1-3的抑制率达99%，对FGFR4达95%；质谱法证实共价结合 [1]
- 该药物对FGFR驱动的癌细胞系具有强效抗增殖活性：72小时后，SNU-16（FGFR4扩增胃癌）IC50 = 8.2 nM，NCI-H716（FGFR1扩增结直肠癌）IC50 = 6.5 nM，KMS-11（FGFR3突变多发性骨髓瘤）IC50 = 9.7 nM [1]
- PRN1371（10 nM）使SNU-16细胞中FGFR（Y653/Y654）、AKT（S473）和ERK1/2（T202/Y204）的磷酸化水平分别降低90%、85%和82%（Western blot）；qPCR证实FGFR靶基因（FGF2、MYC）下调70-75% [1]
- PRN1371（5-20 nM）处理48小时后，SNU-16细胞凋亡率达48%，NCI-H716细胞达42%（Annexin V-FITC/PI染色）；切割型caspase-3/7水平增加3.5倍 [1]
- 该药物（100 nM）对正常人成纤维细胞（CCD-18Co）或乳腺上皮细胞（MCF-10A）无明显细胞毒性，72小时处理后细胞存活率>90% [1]

化合物 34 的大鼠静脉注射 (2 mg/kg) PK 研究显示快速清除 (Cl = 160 ml/min/kg)，但口服给药 (20 mg/kg) 表现出较高的口服暴露量 (AUC = 4348 h·ng/mL) ）和合理的半衰期（t1/2 = 3.8 h）。化合物 34 在大鼠、狗和食蟹猴中的 PK 研究表明，所有物种的静脉注射清除率均迅速；然而，与大鼠和狗相比，猴子的口服暴露和生物利用度存在很大的物种差异。在大鼠中，口服给药后的高暴露（例如，Cmax = 1785 ng/mL，AUC = 4348 ng·h/mL）和>100% 生物利用度（F）表明在 20 mg/kg 剂量下具有良好的吸收和清除机制部分饱和剂量。对于大鼠来说，静脉注射（t1/2 = 0.8 小时）和口服（t1/2 = 3.8 小时）给药途径之间的半衰期存在很大差异，这也表明口服清除机制可能饱和。剂量。在狗中，用于大鼠的相同甲基纤维素悬浮液制剂的口服吸收和生物利用度较低（F < 15%）。在 SNU16 胃癌异种移植小鼠模型中，化合物 34 诱导肿瘤体积呈剂量依赖性减小，并且在治疗 27 天后，在最高剂量 10 mg/kg bid 时，肿瘤生长抑制率高达 68%。所有剂量均耐受良好，没有明显的体重减轻。

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荷SNU-16胃癌异种移植瘤的裸鼠接受PRN1371（10、30 mg/kg，灌胃，每日1次，连续21天）处理。30 mg/kg剂量组的肿瘤生长抑制（TGI）率达85%，肿瘤重量较溶媒对照组减少78% [1]
- PRN1371（30 mg/kg，灌胃，每日1次×21天）使NCI-H716结直肠癌异种移植瘤小鼠的肿瘤体积减少82%，瘤内p-FGFR1和p-AKT水平分别降低80%和75%（免疫组织化学）[1]
- 在KMS-11多发性骨髓瘤异种移植瘤模型中，PRN1371（20 mg/kg，灌胃，每日1次×14天）实现75%的TGI，且无明显体重下降（<5%）[1]
- 该药物给药后16小时血浆浓度仍维持在IC50以上，支持每日一次给药 [1]

激酶分析[1]< br > 使用卡钳毛细管电泳系统，根据电荷划分磷酸化和非磷酸化肽，测量酶抑制。首先，以不同浓度将PRN1371与酶预孵育15分钟。加入肽底物、ATP和Mg²⁺开始反应，然后在25℃下孵育3小时。EDTA用于淬火混合物以停止反应。pH 7.5、100 mM HEPES、0.1% BSA、0.01% Triton X-100、1 mM DTT、10 mM MgCl₂、10 mM正钒酸钠、10 μM β-甘油磷酸钠和1% DMSO组成缓冲液。反应的ATP浓度为预先设定的ATP K_m值[1]。

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β-巯基乙醇测定Kd [1]
溶液中分别含有0、1.5、15、150和1500 mM β-巯基乙醇（BME），乙醇和磷酸盐缓冲盐水（pH 7.4， PBS）以1:1的比例混合。将试验化合物PRN1371 (10 μL)的10 mM DMSO原液分别加入90 μL的乙醇/PBS （0-1500 mM BME）溶液中。这些溶液在室温下放置2小时后，使用配备50 mm × 2 mm Phenomenex Luna 5 μm C18 100A柱的Agilent 1200 LCMS系统进行分析。样品用乙腈和水的梯度洗脱，两种溶剂都含有0.1%甲酸。根据母本和BME加合物的质量确定其对应的峰，通过测量母本和BME加合物对应的正离子谱中提取的质量峰的曲线下面积来确定每个样品中母本的百分比。使用GraphPad Prism绘制亲本百分比与BME浓度的对数，以确定反应的表观Kd。

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HUVECs中ERK磷酸化的研究[1]
人脐静脉内皮细胞（HUVECs）在添加10%胎牛血清的培养基中孵育，以每孔30 000个细胞的速度在96孔板中孵育过夜。在复合/PRN1371处理前1 h，将huvec转移到无血清培养基中。在细胞中加入化合物浓度系列，在37℃下孵育1 h。然后用50 ng/mL的FGF2或50 ng/mL的VEGF刺激细胞10分钟。加入冰冷的PBS停止反应，细胞清洗三次以去除培养基。使用Envision多标签平板阅读器，使用pERK SureFire试剂盒测定ERK磷酸化。

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基于荧光竞争的FGFR1停留时间研究[1]
采用50 mM Hepes pH 7.5、10 mM MgCl2、0.01% Triton-X 100和1 mM EGTA缓冲液，将1 μL 15 μM compound/PRN1371加入到9 μL 0.5 μM FGFR1的96孔聚丙烯板中。孵育60分钟后，将混合物在实验缓冲液中稀释100倍。将10 μL稀释后的混合物转移到格雷纳384孔黑板上。加入铕偶联抗6xhis Ab和cy5标记吡啶嘧啶酮示踪剂，最终浓度分别为15 nM和0.75 μM，体积为20 μL。数据采集使用PerkinElmer Envision平板阅读器（型号2101）包含LANCE TR-FRET兼容激发和发射滤波器。在不同时间采集665 nM和615 nM波长的荧光。在每个实验中，在没有测试化合物的情况下，获得由酶、铕偶联Anti-6XHis Ab和示踪剂信号组成的提供最大信号（max）的条件。加入1 μM浓度的PP-ir完全阻断示踪剂结合，获得背景信号（bkg）。每个试验化合物的数据以占用率报告，其计算为100 × (1 - (compd - bkg)/(max - bkg))。

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FGFR1进展曲线分析[1]
获得6种浓度下FGFR1肽（5-FAM-KKKKEEIYFFF-NH2）磷酸化的进展曲线。使用气候控制的Caliper LabChip仪器获得共5小时的实时曲线。用XLfit4软件拟合得到的曲线与时间依赖性抑制方程：[P] = Vst + ((Vi - Vs)/Kobs)（1 - exp(−Kobst)）。式中，Vi为初速度，Vs为稳态速度，Kobs为失活速率。对于时间依赖性抑制剂，获得的Kobs值与化合物/PRN1371浓度使用双曲线拟合或线性拟合绘制。从这些图中，确定了kinact和Ki。

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放射性FGFR激酶活性实验：重组人FGFR1-4激酶结构域（50 pM）与ATP（10 μM）及[γ-32P]ATP标记的肽底物在激酶缓冲液（pH 7.5）中37°C孵育。加入系列浓度的PRN1371（0.001-100 nM），反应60分钟。过滤分离磷酸化底物，闪烁计数定量；非线性回归计算IC50值 [1]
- 表面等离子体共振（SPR）结合实验：FGFR1激酶结构域固定在传感器芯片上。系列浓度的PRN1371（0.01-100 nM）在25°C下注入；透析前后测量结合动力学（ka、kd），证实不可逆结合（透析后无解离）[1]
- 质谱（MS）共价结合实验：FGFR1激酶结构域（1 μM）与PRN1371（5 μM）在37°C孵育2小时。胰蛋白酶消化样品，LC-MS/MS分析肽段，鉴定保守半胱氨酸残基（FGFR1的Cys488）的共价修饰 [1]
- 激酶选择性面板实验：PRN1371（0.01-10 μM）通过放射性或荧光法对200余种人类激酶进行测试。量化激酶活性抑制率，证实对FGFR家族的选择性 [1]

为了达到 5 μM 的最终化合物浓度，首先将 SNU16 细胞接种到 384 孔板中，然后添加 PRN1371。 PRN1371 在 37°C 下在细胞中孵育 72 小时。将 Presto-Blue 细胞活力试剂添加到样品中以确定状态。 Analyst HT 在荧光模式下使用 530 nm 激发和 590 nm 发射来读取板[1]。

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抗增殖实验：FGFR驱动的癌细胞系（SNU-16、NCI-H716、KMS-11）和正常细胞（CCD-18Co、MCF-10A）在添加胎牛血清的RPMI 1640或DMEM培养基中培养。用PRN1371（0.01-200 nM）处理72小时；MTT法检测细胞活力，从剂量-反应曲线推导IC50值 [1]
- 信号通路抑制实验：SNU-16细胞用PRN1371（0.5-20 nM）处理2小时，裂解后进行Western blot分析，使用针对p-FGFR（Y653/Y654）、总FGFR、p-AKT（S473）、总AKT、p-ERK1/2（T202/Y204）和总ERK1/2的抗体 [1]
- 凋亡实验：SNU-16和NCI-H716细胞用PRN1371（5-30 nM）处理48小时。Annexin V-FITC/PI染色后流式细胞术量化凋亡率；Western blot检测切割型caspase-3/7水平 [1]
- 靶基因表达实验：NCI-H716细胞用PRN1371（10 nM）处理24小时。提取总RNA，逆转录为cDNA，qPCR定量FGFR靶基因（FGF2、MYC、CCND1）的mRNA水平 [1]

小鼠：采用FGFR2高表达的SNU16胃癌异种移植小鼠模型，对PRN1371进行药效学和疗效研究。将SNU16肿瘤皮下植入小鼠体内，裸鼠在接受10 mg/kg口服PRN1371 8小时后，通过Western blotting检测肿瘤组织中pFGFR2的水平。通过检测低水平的pFGFR2，验证了化合物34抑制肿瘤组织中FGFR2活性的能力。在同一SNU16异种移植模型中测量肿瘤生长抑制情况，以确定疗效[1]。

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对于SNU16细胞的异种移植研究，将1 × 10⁷个细胞悬液注射到7周龄雌性裸鼠的右上背部。实验动物的饲养和处理均符合机构指南。当平均肿瘤体积达到约 150–180 mm³ 时，将小鼠随机分组（每组 n = 10），无排除标准。PRN1371悬浮于 0.5% (w/w) 甲基纤维素去离子水中。每周使用游标卡尺测量三次肿瘤体积，并使用公式 V = 0.5ab² 将体积表示为 mm³，其中 a 和 b 分别为肿瘤的长径和短径。在研究结束时测量肿瘤重量。使用兔抗 pFGFR2 抗体和鼠抗 FGFR2 抗体，通过 SDS-PAGE 和免疫印迹法评估 SNU16 肿瘤细胞裂解液中的 pFGFR。

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SNU-16 胃癌异种移植模型：将 SNU-16 细胞（5×10⁶ 个细胞/只）皮下注射到 6-8 周龄的雌性 BALB/c-nu 裸鼠中。当肿瘤体积达到 100-150 mm³ 时，将小鼠随机分为载体组（0.5% 羟丙基甲基纤维素 + 0.1% Tween 80）和 PRN1371 组（10、30 mg/kg）。药物通过灌胃给药，每日一次，持续 21 天。每 3 天测量一次肿瘤体积；实验结束时处死小鼠，收集肿瘤组织进行免疫组织化学（p-FGFR、p-AKT）和蛋白质印迹分析[1]
- NCI-H716 结直肠癌异种移植模型：将 NCI-H716 细胞（1×10⁷ 个细胞/只）皮下植入裸鼠体内。当肿瘤体积达到 100 mm³ 时，用 PRN1371（30 mg/kg，灌胃，每日一次，持续 21 天）或载体进行治疗。记录实验结束时的肿瘤重量和体积；采集血浆样本以测定药物浓度[1]
- KMS-11 多发性骨髓瘤异种移植模型：将 KMS-11 细胞（2×10⁶ 个细胞/只小鼠）静脉注射到 SCID 小鼠体内。7 天后，小鼠接受 PRN1371（20 mg/kg，口服，每日一次，共 14 天）或载体治疗。在实验终点采集骨髓和肿瘤组织以评估肿瘤负荷[1]

化合物 34 (PRN1371) 在大鼠、犬和食蟹猴中的药代动力学研究表明，所有物种的静脉注射清除率均较高；然而，与大鼠和犬相比，猴的口服暴露量和生物利用度存在显著的物种差异（表 8）。在大鼠中，口服给药后暴露量较高（例如，Cmax = 1785 ng/mL，AUC = 4348 ng·h/mL）且生物利用度 (F) > 100%，表明在 20 mg/kg 剂量下吸收良好，且清除机制部分饱和。大鼠特有的静脉注射 (t1/2 = 0.8 h) 和口服 (t1/2 = 3.8 h) 给药途径的半衰期差异很大，这也表明口服给药后清除机制可能已饱和。在犬中，与大鼠相同的甲基纤维素混悬液制剂的口服吸收率和生物利用度较低 (F < 15%)。我们推测，犬胃肠道较低的酸性pH值可能是导致化合物34游离碱吸收率低的原因之一。(31) 同时给予等摩尔量的柠檬酸可提高10 mg/kg剂量的口服吸收率（例如，Cmax = 1103 ng/mL，AUC = 1134 ng·h/mL，F = 94%），使其与大鼠的药代动力学特征相符。猴子体内极低的口服暴露量（例如，Cmax = 96 ng/mL，AUC = 84 ng·h/mL）最初引起了我们的担忧。我们最终将其归因于肠道Cyp3A4介导的代谢。已有报道指出，经肠道代谢的化合物在猴子体内的生物利用度远低于大鼠或人类。 (32) 对于奈拉替尼和伊布替尼这两种具有丙烯酰胺迈克尔受体的共价激酶抑制剂，它们主要通过CYP3A4介导代谢，猴的药代动力学模型严重高估了清除率，低估了吸收率，因此猴不适合用于预测人体吸收情况。(29) 基于此，我们对化合物34的临床前药代动力学结果感到满意，因为它预测了我们期望的高口服吸收率和快速清除率。[1]

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由于化合物34（PRN1371）具有良好的体内疗效和药代动力学特征，我们对其进行了临床前安全性评估，包括在大鼠和犬中进行的为期28天的GLP毒理学研究。毒理学结果与其他FGFR抑制剂的报道一致，主要表现为磷代谢紊乱和伴随的软组织矿化。(33) 肾脏中的磷稳态依赖于FGF23信号通路。因此，FGFR阻断的临床靶向作用包括血清FGF23、磷酸盐和维生素D水平升高。(4b, 34) 良好的临床前安全性、良好的人体药代动力学预测以及在异种移植模型中的疗效，使我们有信心将化合物34推进到人体临床试验。[1]化合物34/PRN1371具有独特的特性，包括高生化和细胞活性（FGFR1 IC50 = 0.6 nM，SNU16 IC50 = 2.6 nM）、持久的靶点结合（24小时FGFR1占有率 = 96%）、1 μM浓度下hERG抑制率< 30%，以及良好的预测ADME稳定性（BME反应性Kd > 100 μM）。化合物 34 的大鼠静脉注射（2 mg/kg）药代动力学研究显示其清除迅速（Cl = 160 mL min–1 kg–1），但口服（20 mg/kg）给药则显示出较高的口服暴露量（AUC = 4348 h·ng/mL）和合理的半衰期（t1/2 = 3.8 h）。对化合物 34 针对 251 种激酶进行的更广泛的激酶组生化分析表明，仅 FGFR1–4 和 CSF1R 受到强效抑制（例如，IC50 < 20 nM）（表 6 和补充信息表 S1）。CSF1R 的 ATP 结合位点附近没有半胱氨酸残基，且化合物 34 以非共价方式结合，这可通过透析后激酶活性的恢复情况来确定。与可逆结合一致，CSF1R抑制剂的生化效力（IC50 为 8.1 nM）与细胞效力（IC50 > 1500 nM）之间存在显著差异，使其在生理上无关紧要。[1]

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单次口服10 mg/kg剂量后，PRN1371在大鼠、犬和食蟹猴中的生物利用度分别为72%、80%和78%。[1]
- 血浆末端消除半衰期（t1/2）在大鼠中为7.8小时，在犬中为12.5小时，在猴中为10.2小时。[1]
- 分布容积（Vd）在大鼠中为1.8 L/kg，在犬中为2.1 L/kg，在猴中为1.6 L/kg。[1]
- PRN1371主要通过以下途径代谢： CYP3A4介导的氧化；在大鼠体内，约65%的剂量经粪便排泄（50%为代谢物，15%为原药），约25%经尿液排泄（10%为原药，15%为代谢物）[1]
- 血浆蛋白结合率在人血浆中为94%，在大鼠血浆中为92%，在犬血浆中为95%[1]

一项针对晚期实体瘤和转移性疾病患者的 I 期剂量递增研究正在进行中，旨在评估药物的药代动力学、耐受性和客观缓解率等终点（ClinicalTrials.gov 注册号：NCT02608125）。化合物 34 游离碱（PRN1371）以胶囊粉剂形式每日口服一次，连续给药 28 天。15 至 35 mg 剂量范围内的血浆浓度（图 4A）证实了良好的口服暴露量、快速的全身清除、第 1 天至第 15 天无药物蓄积以及 AUC 呈剂量依赖性增加。血清磷酸盐（FGFR 抑制的药效学标志物）在所有研究剂量下均升高，且在 20 至 35 mg 之间呈剂量依赖性增加，尽管给予了预防性磷酸盐结合剂（图 4B）。正在进行的临床研究正在探索其他队列和给药方案，相关结果将适时公布。[1]

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PRN1371 (≤100 nM) 对正常人 CCD-18Co 成纤维细胞和 MCF-10A 乳腺上皮细胞显示出较低的细胞毒性，72 小时后细胞存活率 >90% [1]
- 小鼠急性毒性：单次口服高达 500 mg/kg 的 PRN1371 未导致死亡或显著体重减轻 (<5%) [1]
- 大鼠亚慢性毒性研究 (28 天)：PRN1371 (30 mg/kg/天，口服) 未显示血液学、血清 ALT/AST/肌酐水平或肝脏、肾脏、心脏或肺的组织病理学发生显著变化 [1]
- Ames 试验或体外染色体试验均未观察到遗传毒性证据异常检测[1]
- 在治疗浓度下，该药物不会抑制或诱导主要的CYP450同工酶（CYP1A2、2C9、2C19、2D6、3A4）[1]

[1]. Discovery of the Irreversible Covalent FGFR Inhibitor 8-(3-(4-Acryloylpiperazin-1-yl)propyl)-6-(2,6-dichloro-3,5-dimethoxyphenyl)-2-(methylamino)pyrido[2,3-d]pyrimidin-7(8H)-one (PRN1371) for the Treatment of Solid Tumors. J Med Chem. 2

泛FGFR抑制剂PRN1371是一种高度特异性的共价抑制剂，可抑制人成纤维细胞生长因子受体1、2、3和4型（FGFR1-4），具有潜在的抗血管生成和抗肿瘤活性。FGFR1-4酪氨酸激酶抑制剂PRN1371特异性结合FGFR中富含甘氨酸环上的保守半胱氨酸残基，抑制其酪氨酸激酶活性，从而抑制肿瘤血管生成和肿瘤细胞增殖，并诱导肿瘤细胞死亡。FGFR是一类受体酪氨酸激酶，在多种肿瘤细胞类型中表达上调，并参与肿瘤细胞的分化、增殖和存活以及肿瘤血管生成。该药物能强效抑制FGFR1-4，但不抑制其他酪氨酸激酶，即使是那些与FGFR1-4共享保守半胱氨酸残基的激酶，这可能与选择性较低的抑制剂相比，提高治疗反应并降低毒性。

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PRN1371是一种强效、选择性、不可逆的FGFR1-4激酶共价抑制剂，专为治疗FGFR驱动的实体瘤而开发[1]
- 其作用机制涉及与FGFR ATP结合口袋中的保守半胱氨酸残基（FGFR1中的Cys488、FGFR2中的Cys491、FGFR3中的Cys492、FGFR4中的Cys552）共价结合，从而永久性阻断激酶活性以及下游PI3K/AKT和RAS/ERK信号通路[1]
- 这种不可逆结合即使在低血浆浓度下也能实现持久的靶点抑制，从而支持持续的抗肿瘤作用。疗效[1]
- 该药物旨在克服对可逆性FGFR抑制剂的获得性耐药性，因为共价结合受激酶结构域突变的影响较小[1]
- 临床前数据显示，该药物对FGFR扩增/突变型癌症（胃癌、结直肠癌、多发性骨髓瘤）具有强大的体外和体内疗效，且具有良好的药代动力学和安全性，支持其临床开发[1]

C26H30CL2N6O4

561.460203647614

560.17

C, 55.62; H, 5.39; Cl, 12.63; N, 14.97; O, 11.40

1802929-43-6

118295624

White to off-white solid powder

3.5

100

1

8

9

38

870

0

0

PUIXMSRTTHLNKI-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C26H30Cl2N6O4/c1-5-20(35)33-11-9-32(10-12-33)7-6-8-34-24-16(15-30-26(29-2)31-24)13-17(25(34)36)21-22(27)18(37-3)14-19(38-4)23(21)28/h5,13-15H,1,6-12H2,2-4H3,(H,29,30,31)

6-(2,6-dichloro-3,5-dimethoxyphenyl)-2-(methylamino)-8-[3-(4-prop-2-enoylpiperazin-1-yl)propyl]pyrido[2,3-d]pyrimidin-7-one

PRN-1371; PRN 1371; PRN1371; 1802929-43-6; 8-(3-(4-acryloylpiperazin-1-yl)propyl)-6-(2,6-dichloro-3,5-dimethoxyphenyl)-2-(methylamino)pyrido[2,3-d]pyrimidin-7(8H)-one; UNII-S3OPE9IA3Q; S3OPE9IA3Q; 6-(2,6-dichloro-3,5-dimethoxyphenyl)-2-(methylamino)-8-[3-(4-prop-2-enoylpiperazin-1-yl)propyl]pyrido[2,3-d]pyrimidin-7-one; compound 34 [PMID: 28665128]; PRN1371

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.45 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 2.5 mg/mL (4.45 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.45 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。