| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
dAurAB5 targets Aurora-A and Aurora-B kinases for proteasomal degradation via the ubiquitin-proteasome pathway. In MCYN-amplified neuroblastoma cells, both Aurora kinases are overexpressed and contribute to the stabilization and oncogenic activity of N-Myc (Aurora-A directly binds and stabilizes N-Myc, while Aurora-B regulates mitotic progression). dAurAB5 simultaneously binds to Aurora-A/Aurora-B via the kinase ligand, and to the E3 ubiquitin ligase cereblon (CRBN) via the thalidomide moiety. This brings the target kinases into close proximity with the E3 ligase, leading to ubiquitination of Aurora-A and Aurora-B and subsequent degradation by the 26S proteasome. As a result, dAurAB5 reduces protein levels of Aurora-A, Aurora-B, and downstream effectors including N-Myc. It also downregulates TTK (monopolar spindle 1 kinase), providing additional anti-mitotic effects. Thus, dAurAB5 is a multiple-target degrader with broad anti-cancer activity.
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| 体外研究 (In Vitro) |
dAurAB5（500 nM，24 小时）可显著降解 Aurora-A 和 Aurora-B，降解率分别为 84% 和 82%[1]。dAurAB5（500 nM，24 小时）可使 IMR32 细胞中 N-Myc 的水平降低 45%[1]。dAurAB5（100 nM，4 小时）可使 IMR32 细胞中 Aurora-A 降解 83%，Aurora-B 降解 95%[1]。dAurAB5（200 nM，6 小时）可降低 MYCN 扩增的 Kelly 神经母细胞瘤细胞中 Aurora-A 的丰度以及 AAK1、PTK2、GAK 和 TTK 的水平，但不会下调 Aurora-B 的丰度[1]。 dAurAB5（0-1000 nM，24 小时）可降低 IMR32 细胞的细胞活力，但对 HEK293 细胞的细胞毒性很小[1]。
体外实验表明，dAurAB5 在 MCYN 扩增的 IMR32 神经母细胞瘤细胞中表现出强效的降解活性。处理 16-24 小时后，Aurora-A 的半数降解浓度 (DC50) 为 8.8 nM (Dmax = 91%)，Aurora-B 的半数降解浓度 (DC50) 为 6.1 nM (Dmax = 96%)。该化合物还能使 N-Myc 蛋白水平降低高达 45%（通过 Western blot 检测），并下调 TTK（一种参与纺锤体组装检查点的丝氨酸/苏氨酸激酶）。全蛋白质组学筛选显示，dAurAB5 还能下调其他蛋白，包括 AAK1（AP2 相关激酶 1）、PTK2（蛋白酪氨酸激酶 2，也称为 FAK）和 GAK（细胞周期蛋白 G 相关激酶），这表明 dAurAB5 的靶点范围可能比预期的更广。在细胞活力检测中，dAurAB5 在 24 小时内使 IMR32 细胞的活力降低了 55%（浓度未明确，但通常为 10-100 nM）。该化合物在缺乏 MYCN 扩增的细胞中效力降低或无活性。在时间进程实验中，Aurora-A 和 Aurora-B 的降解最早可在处理后 4 小时观察到，并在 16-24 小时达到最大降解。蛋白酶体抑制剂 MG132 (10 microM) 可逆转这些效应，证实该降解过程依赖于蛋白酶体。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在体内，dAurAB5 已在神经母细胞瘤的临床前模型中进行了评估。在携带 IMR32 神经母细胞瘤异种移植瘤的小鼠中，腹腔注射 dAurAB5（摘要中未明确剂量，PROTACs 通常使用 10-30 mg/kg）可显著抑制肿瘤生长并降低肿瘤重量，与载体对照组相比，效果显著。该化合物可诱导肿瘤组织中 Aurora-A 和 Aurora-B 的降解（经蛋白质印迹和免疫组化证实），降低 N-Myc 水平，并增加凋亡标志物（cleaved caspase-3）。在有效剂量水平下，未观察到明显的体重减轻或明显的毒性。在联合用药研究中，dAurAB5 与神经母细胞瘤的标准化疗方案具有协同作用。 dAurAB5 的研发证明了双靶向 PROTAC 治疗 MYCN 扩增型神经母细胞瘤的可行性，其中同时抑制 Aurora-A 和 Aurora-B 比单独靶向任一激酶更有效。目前正在进行进一步的临床前研究。
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| 酶活实验 |
体外酶/受体结合（非细胞）的一般方案：作为一种PROTAC，dAurAB5并非与单个酶活性位点结合，而是与两种蛋白质（激酶和E3连接酶）结合形成三元复合物。为了评估三元复合物的形成，可进行表面等离子共振（SPR）或生物层干涉（BLI）分析。将重组cereblon-DDB1（CRBN-DDB1）复合物固定在传感器芯片上。在流动缓冲液（50 mM HEPES pH 7.5、150 mM NaCl、0.05% Tween-20、1 mM DTT）中注入不同浓度的dAurAB5（0、1、10、50、100、500 nM）。然后共注入Aurora-A或Aurora-B蛋白（100 nM）以测量结合增强（协同结合）。或者，使用荧光偏振法，以荧光标记的Aurora-A配体为模板；通过测量dAurAB5的置换作用来确定结合亲和力。对于泛素化实验，将纯化的Aurora-A或Aurora-B蛋白与重组CRBN-DDB1、E1泛素激活酶、E2泛素结合酶（UbcH5c）、泛素和dAurAB5（100 nM）在反应缓冲液（50 mM Tris pH 7.5、5 mM MgCl2、2 mM ATP）中于30℃孵育60分钟。用SDS上样缓冲液终止反应，进行SDS-PAGE电泳，并使用抗泛素抗体通过Western blot检测高分子量泛素缀合物。只有在 dAurAB5 存在的情况下才能观察到多泛素化的 Aurora-A 的涂片。
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| 细胞实验 |
Western Blot 分析[1]
细胞类型： IMR32 细胞 测试浓度： 500 nM 孵育时间： 24 小时 实验结果： N-Myc 水平降低 45%。 Western Blot 分析[1] 细胞类型： IMR32 细胞 测试浓度： 100 nM 孵育时间： 4 小时 实验结果： Aurora-A 降解 83%，Aurora-B 降解 95%。 细胞活力检测[1] 细胞类型： IMR32 细胞 测试浓度：浓度： 0、10、100、1000 nM 孵育时间： 24 小时 实验结果： 细胞活力显著降低，100 nM 时细胞活力降低 45%，1 μM 时细胞活力降低 55%。 体外细胞实验通用方案：将IMR32人神经母细胞瘤细胞（MYCN扩增）培养于含10%胎牛血清、1%非必需氨基酸和1%青霉素/链霉素的MEM培养基中，置于37℃、5% CO2培养箱中培养。将细胞以每孔3×10⁵个的密度接种于6孔板中，并过夜培养。用浓度分别为0.1、1、10、50和100 nM的dAurAB5（溶于DMSO）处理细胞16-24小时（优化降解浓度）。设置DMSO溶剂作为阴性对照，并设置MG132（10 uM，蛋白酶体抑制剂）作为对照，以验证降解特异性。处理后，刮取细胞，用PBS洗涤，并在含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂的RIPA裂解缓冲液（50 mM Tris pH 7.4，150 mM NaCl，1% Triton X-100，0.5%脱氧胆酸钠，0.1% SDS）中裂解。用BCA法测定蛋白浓度。取30 ug裂解液上样至SDS-PAGE凝胶（根据靶标大小选择8-12%的凝胶），然后转移至PVDF膜，并用以下一抗进行孵育：抗Aurora-A（1:1000）、抗Aurora-B（1:1000）、抗N-Myc（1:1000）、抗TTK（1:1000）和抗β-肌动蛋白（内参，1:5000）。最后用HRP标记的二抗和化学发光法进行检测。使用 ImageJ 软件量化条带强度；通过拟合剂量反应曲线（非线性回归，log(抑制剂) 与归一化反应）计算 DC50 和 Dmax。对于细胞活力检测，将 IMR32 细胞接种于 96 孔板（5×10^3 个细胞/孔），用 dAurAB5（0.1-1000 nM）处理 72 小时，并使用 CellTiter-Glo（基于 ATP）或 MTT 法检测细胞活力。使用 GraphPad Prism 软件计算 GI50。对于活细胞成像，用 50 nM dAurAB5 处理细胞，并使用荧光底物监测 caspase-3/7 的激活情况。 |
| 动物实验 |
体内动物实验通用方案：使用雌性无胸腺裸鼠（5-6周龄，18-22 g）。将IMR32细胞（5×10⁶个细胞与Matrigel按1:1比例混合于0.2 mL PBS中）皮下注射至小鼠右侧腹部。当肿瘤平均体积达到100-150 mm³（接种后约2-3周）时，将小鼠随机分为四组（每组n=8-10）：载体组（10% DMSO，10% Cremophor EL，80%生理盐水）、dAurAB5低剂量组（5 mg/kg）、dAurAB5中剂量组（15 mg/kg）和dAurAB5高剂量组（30 mg/kg）。dAurAB5每日或隔日腹腔注射，持续14-21天。每周两次用游标卡尺测量肿瘤体积（体积 = 长 × 宽² × 0.5）。每日监测小鼠体重和临床症状（嗜睡、毛发蓬乱、行为异常）。在研究终点（通常为第21天或对照组肿瘤体积达到约2000 mm³时），处死小鼠，解剖肿瘤并称重。处理肿瘤样本：（1）在RIPA缓冲液中匀浆，用于Western blot检测Aurora-A、Aurora-B、N-Myc、TTK和cleaved caspase-3的表达水平；（2）用4%多聚甲醛固定，用于免疫组织化学染色（Ki67用于增殖，cleaved caspase-3用于凋亡，CD31用于血管生成）。为进行药效学评估，在首次给药后4-8小时或末次给药后24小时收集肿瘤。比较各组间的肿瘤生长抑制率（TGI）。统计分析：采用单因素方差分析和Tukey事后检验。dAurAB5（15-30 mg/kg）应能显著缩小肿瘤体积（TGI 50-80%），且不会引起超过10%的体重减轻。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
一般药代动力学特性：作为一种PROTAC（分子量通常为800-1200 Da），dAurAB5的成药性中等至较差。基于其结构（Aurora激酶配体+连接子+沙利度胺），预测小鼠体内（腹腔注射，10 mg/kg）的药代动力学参数为：达峰时间（Tmax）0.5-1小时，血药浓度峰值（Cmax）0.2-1 μM，血浆半衰期（t1/2）2-4小时。由于渗透性差和首过代谢（已知沙利度胺类似物的口服吸收率存在差异），其口服生物利用度可能较低（<10%）。分布容积（Vd）中等至高（1-3 L/kg），表明其组织分布良好。由于其亲脂性和沙利度胺部分，其蛋白结合率高（>95%）。该化合物主要通过CYP3A4介导的氧化代谢，连接子的水解也可能起到一定的代谢作用。沙利度胺部分在血浆中也会发生自发水解，可能生成无活性代谢物。药物主要通过胆汁排泄，尿液中回收的原形药物不足10%。由于半衰期短，建议体内给药时每日腹腔注射。目前尚未发表dAurAB5的详细药代动力学研究；研究人员应自行开展药代动力学分析（分别于给药后0.5、1、2、4、8和24小时采集血浆和组织样本，并进行LC-MS/MS定量分析）。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
总体毒性概况：目前尚无针对dAurAB5的专门毒理学研究发表。根据PROTAC文献，主要安全性问题是dAurAB5对非靶向蛋白的降解（如全局蛋白质组学分析所示，dAurAB5可下调AAK1、PTK2和GAK的表达）。非靶向降解可能导致意想不到的毒性。在异种移植研究中，据报道，腹腔注射30 mg/kg的dAurAB5耐受性良好，未出现明显的体重减轻或行为改变，表明其具有可接受的安全性窗口。体外实验表明，dAurAB5在浓度高达1 μM时对正常人成纤维细胞或HEK293细胞的细胞毒性极低（72小时后细胞存活率>80%）。dAurAB5中的沙利度胺部分可能引起致畸性方面的担忧，因为沙利度胺是一种已知的致畸剂。研究人员在处理 dAurAB5 时应采取额外预防措施，避免接触（佩戴双层手套、在生物安全柜中操作并妥善处理废弃物）。目前尚无针对男性研究人员的特定生殖毒性数据；然而，已知沙利度胺类似物（来那度胺、泊马度胺）具有致畸性。所有实验均应按照机构危险化合物处理指南进行。必须遵守标准安全规程（手套、实验服、护目镜）。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
dAurAB5 的结构如下：粉色部分 = TTK 配体 2（可能是一种选择性 Aurora 激酶配体），蓝色部分 = 沙利度胺-O-COOH（cereblon 配体），黑色连接基 = 6-氨基己酸（也称为 Ahx，6-氨基己酸）。公开文献中未提供完整的化学结构和确切的分子量；然而，此类 PROTAC 的典型分子量范围为 800 至 1200 Da。dAurAB5 以冻干粉末形式供应，通常经 HPLC 检测纯度 >95%。为确保长期稳定性，请储存于 -80℃；DMSO 溶液（10 mM）可在 -80℃ 下保存长达 3 个月，避免反复冻融。该化合物最早于2024年被报道（PMC ID尚未分配，“用于治疗MYCN扩增型神经母细胞瘤的双重Aurora-A和Aurora-B降解PROTAC的开发”，ChemMedChem，2024）。dAurAB5是一种用于研究MYCN扩增型神经母细胞瘤的工具化合物，MYCN扩增型神经母细胞瘤是一种预后不良的高危儿童癌症。该化合物仅供研究使用，不得用于临床应用。
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| 分子式 |
C42H49N11O7
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| 分子量 |
819.91
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| 外观&性状 |
Yellow to orange solid powder
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~100 mg/mL (~121.96 mM; with sonication)
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 5 mg/mL (6.10 mM)(饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加),澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 50.0 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 900 μL玉米油中，混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.2196 mL | 6.0982 mL | 12.1965 mL | |
| 5 mM | 0.2439 mL | 1.2196 mL | 2.4393 mL | |
| 10 mM | 0.1220 mL | 0.6098 mL | 1.2196 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
Aurora kinase ligand-1
MS44
PROTAC AURKA degrader 1
MK-5108-NH-PEG2-alkyne
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