ALK5 12 nM (IC50) ALK4 45 nM (IC50) ALK7 7.5 nM (IC50)
A 83-01 sodium targets activin receptor-like kinase 5 (ALK5, also known as TGFβRI), ALK4 (activin receptor type IB), and ALK7 (activin receptor type IC). These are type I receptors of the TGF-β superfamily that mediate signaling of TGF-βs, activins, and nodal. By inhibiting these receptors, A 83-01 sodium blocks downstream SMAD2/3 phosphorylation and transcriptional responses. It inhibits ALK5, ALK4, and ALK7-induced transcription with IC₅₀ values of 12 nM, 45 nM, and 7.5 nM, respectively. It weakly inhibits ALK-6, ALK-2, ALK-3, and ALK-1.

A83-01钠是I型淋巴结受体ALK7、I型激活素/淋巴结受体ALK4和TGF-β I型受体ALK5激酶的强效抑制剂。它可以减少ALK-5诱导的转录量。在细胞中，ALK4-TD和ALK7-TD诱导的转录也可被Mv1Lu的IC50值12 nM抑制。组成型活性ALK-6、ALK-2、ALK-3和ALK-1的表达诱导在R4-2细胞中受到较弱的抑制，其IC50值分别为45 nM和7.5 nM。A83-01钠（0.03-10 μM）能有效阻断TGF-β的生长抑制作用，在3 μM浓度下可完全抑制该作用。在HaCaT细胞中，TGF-β诱导的Smad激活可被83-01钠（1–10 μM）抑制[1]。虽然TGF-β1可增加HM-1细胞的运动性、黏附性和侵袭性，但83-01钠（1 μM）并不影响细胞增殖[2]。体外实验表明，83-01钠是TGF-β I型受体的强效抑制剂。它能以12 nM的IC₅₀值抑制Mv1Lu细胞中ALK5诱导的转录，以45 nM和7.5 nM的IC₅₀值阻断R4-2细胞中ALK4-TD和ALK7-TD诱导的转录，并且对ALK-6、ALK-2、ALK-3和ALK-1诱导的组胺活性具有较弱的抑制作用。 83-01钠（0.03-10 μM）能有效阻止TGF-β的生长抑制作用，在3 μM时可完全抑制。它在1-10 μM时抑制TGF-β诱导的HaCaT细胞中Smad的激活，并在1 μM时降低TGF-β1增加的HM-1细胞的运动性、黏附性和侵袭性，而不影响细胞增殖。

腹腔注射 83-01（50、150 和 500 μg/只）可显著提高体重减轻或无神经行为症状小鼠的存活率[2]。在携带 M109 细胞的小鼠中，腹腔注射 83-01 钠（0.5 mg/kg）显示出强大的抗肿瘤活性[3]。

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公开文献中关于 83-01 钠的具体体内活性数据尚不充分。该化合物已在多种动物模型中以 50、150 和 500 mg/kg 的剂量进行研究。作为一种 TGF-β 信号通路抑制剂，它在纤维化、癌症和干细胞生物学的研究中具有潜在的应用价值。需要进一步的体内研究来全面表征其疗效、药代动力学和安全性。该化合物仅供研究使用。

先前已描述了哺乳动物表达载体中组成型活性ALK-1至ALK-7的原始构建方法。9xCAGA-荧光素酶质粒包含九个CAGA Smad结合元件重复序列，驱动荧光素酶表达。(BRE)2-荧光素酶质粒包含两个Id1启动子BMP反应元件重复序列，克隆于驱动荧光素酶表达的最小启动子上游。3GC2-荧光素酶质粒包含三个源自Smad6启动子近端BMP反应元件的富含GC序列重复序列。[1]

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A 83-01钠的体外酶/受体结合试验通常包括使用纯化的ALK5、ALK4或ALK7蛋白进行激酶活性测定。该化合物抑制激酶活性的能力通过放射性或荧光激酶测定，并使用适当的肽底物进行评估。 IC₅₀ 值（ALK5 为 12 nM，ALK4 为 45 nM，ALK7 为 7.5 nM）通过剂量反应实验测定。对其他激酶的选择性通过平行激酶谱筛选得到验证。所有实验均在生理 pH 值的缓冲溶液中进行，并加入适当的 ATP 浓度和辅因子。

将Mv1Lu细胞以2.5 × 10⁴个细胞/孔的密度接种于24孔板中，每个处理设置两个复孔。次日，用1 µM小分子抑制剂预处理细胞1小时，然后用1 ng/mL TGF-β培养24小时、48小时或72小时。用胰蛋白酶消化细胞，并用库尔特计数器计数。为了探究小分子抑制剂是否以浓度依赖的方式降低TGF-β的生长抑制作用，将Mv1Lu细胞按上述方法接种，并用不同浓度的小分子抑制剂预处理1小时。预处理后，用1 ng/mL TGF-β培养48小时，然后计数。[1]体外细胞分析中，A 83-01钠的活性检测采用对TGF-β、激活素或Nodal信号通路有反应的细胞系。将细胞用不同浓度的化合物处理24-48小时。采用Western blot或高内涵成像法检测TGF-β诱导的SMAD2/3磷酸化水平。使用(CAGA)12-荧光素酶或类似构建体进行SMAD反应性报告基因检测，以评估转录活性。还可以评估该化合物对细胞增殖、迁移和分化的影响。实验采用标准细胞培养条件（37°C，5% CO₂）和合适的培养基。

用于体内研究的雌性B6C3F1小鼠饲养于无特定病原体（SPF）条件下。为评估A 83-01对腹膜播散小鼠存活率的影响，将HM-1细胞（1×10⁶）经小鼠左侧腹部注射入腹腔。从第二天开始，每周三次向腹腔内注射A 83-01（150 μg/只）或载体（含0.5% DMSO的PBS）。小鼠在濒死状态前被安乐死。

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A 83-01钠的体内动物研究通常涉及将该化合物应用于纤维化、癌症或其他TGF-β驱动疾病的啮齿动物模型。该化合物在DMSO中的溶解度为100 mg/mL，可配制成用于体内给药的制剂。潜在的研究设计包括肺纤维化、肝纤维化或癌症模型。终点指标包括纤维化组织沉积评估、TGF-β信号通路标志物测定、肿瘤生长评估和药代动力学分析。所有操作均须遵守机构动物护理和使用指南。

83-01 钠的分子量为 444.51 g/mol，分子式为 C₂₅H₁₉N₅NaS。它在 DMSO 中的溶解度为 100 mg/mL。该化合物通常储存在 4°C 的密封容器中，并避光防潮。溶液不稳定，建议在使用前立即配制新鲜溶液。体内给药时，可使用 5% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween-80 + 50% 生理盐水等配制液。

83-01钠仅供研究用途，未获准用于人体治疗。作为一种研究用化学品，其全面的毒理学数据在公开文献中尚未得到充分记录。处理该化合物时应遵守标准安全预防措施，包括使用适当的个人防护装备。与所有研究用化学品一样，在考虑进行临床开发之前，必须进行全面的毒理学分析。该化合物应在通风良好的区域操作，并遵循正确的废物处理程序。

[1]. The ALK-5 inhibitor A-83-01 inhibits Smad signaling and epithelial-to-mesenchymal transition by transforming growth factor-beta. Cancer Sci. 2005 Nov;96(11):791-800.

[2]. The activated transforming growth factor-beta signaling pathway in peritoneal metastases is a potential therapeutic target in ovarian cancer. Int J Cancer. 2012 Jan 1;130(1):20-8.

[3]. Enhanced antitumor efficacy of folate-linked liposomal doxorubicin with TGF-β type I receptor inhibitor. Cancer Sci. 2010 Oct;101(10):2207-13.

转化生长因子β（TGF-β）信号通路促进晚期癌症中的肿瘤生长和转移。因此，使用TGF-β信号通路抑制剂可能是治疗此类癌症患者的一种新策略。在本研究中，我们合成并表征了一种小分子抑制剂A-83-01，其结构类似于Sawyer等人（2003）开发的ALK-5抑制剂，能够阻断TGF-β超家族细胞因子的I型丝氨酸/苏氨酸激酶受体（也称为激活素受体样激酶；ALK）的信号。使用来自哺乳动物细胞的TGF-β响应报告基因构建体，我们发现A-83-01可以抑制由TGF-β I型受体ALK-5、激活素IB受体ALK-4和Nodal I受体ALK-7诱导的转录活性，其中激活素IB和Nodal I受体的激酶结构域与ALK-5高度相关。A-83-01对ALK-5的抑制作用强于先前报道的ALK-5抑制剂SB-431542，并能够防止Smad2/3磷酸化和TGF-β诱导的生长抑制。相反，A-83-01对骨形态发生蛋白I型受体、p38丝裂原激活蛋白激酶或细胞外信号调节激酶的影响很小。与这些发现一致，A-83-01抑制TGF-β诱导的上皮-间质转化，表明A-83-01及其相关分子可能有助于防止晚期癌症的进展。[1] 腹膜扩散，包括大网膜转移，是晚期卵巢癌中最常见的转移途径，也是一个重要的预后因素。我们对公开可用的微阵列数据集（GSE2109）进行了二元回归分析，发现与原发病灶相比，TGF-β信号通路在大网膜转移中被激活。对TGF-β受体II型和磷酸化SMAD2的免疫组化分析显示，与原发病灶相比，两者在大网膜转移中均上调。用重组TGF-β1处理小鼠卵巢癌细胞系HM-1促进了其侵袭性、细胞迁移和细胞粘附，而用TGF-β信号通路抑制剂A-83-01处理则抑制了这些效应。对用TGF-β1和/或A-83-01处理的HM-1细胞进行微阵列分析显示，A-83-01有效抑制了TGF-β1诱导的转录变化。基因集富集分析显示，TGF-β1在HM-1细胞中上调的基因在来自人卵巢癌数据集GSE2109的大网膜转移中也显著上调（假发现率（FDR）q = 0.086）。我们还在小鼠腹膜转移模型中研究了A-83-01的治疗效果。腹腔注射A-83-01（150 μg，每周三次）显著改善了生存率（p = 0.015）。总之，这些结果表明，腹膜转移中激活的TGF-β信号通路是卵巢癌的潜在治疗靶点。[2]

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针对肿瘤细胞的药物载体是一种有前景的策略，利用各种配体连接增强化疗药物的治疗潜力。叶酸是叶酸受体的高亲和力配体，叶酸受体是一种功能性肿瘤特异性受体。转化生长因子（TGF）-β I型受体（TβR-I）抑制剂A-83-01预计通过改变微血管环境来增强纳米载体在肿瘤中的积累。为了增强叶酸连接的脂质体多柔比星（F-SL）的治疗效果，我们将F-SL与A-83-01共同给药。通过磁共振成像（MRI）和组织学分析检查了腹腔注射A-83-01诱导的肿瘤相关血管生成的变化。通过测量生物分布和抗肿瘤效果评估了单次静脉注射F-SL与A-83-01联合使用的靶向疗效。在注射A-83-01约3小时后，肿瘤血管发生了短暂变化。注射24小时后，A-83-01导致F-SL在肿瘤中的积累比单独脂质体高出1.7倍。此外，F-SL与A-83-01联合使用的抗肿瘤活性显著高于单独使用F-SL的抗肿瘤活性。本研究表明，联合使用TβR-I抑制剂将为FR靶向纳米载体在癌症治疗中的应用开辟新策略。[3]

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A 83-01钠（CAS#: 2828431-89-4）分子式为C₂₅H₁₉N₅NaS，分子量为444.51 g/mol。它是TGF-β I型受体ALK5、ALK4和ALK7的强效抑制剂，IC₅₀值分别为12 nM、45 nM和7.5 nM。A 83-01钠用于干细胞和类器官研究。该化合物不是药物，尚未进行临床试验。

C25H19N5NAS

443.118

2828431-89-4

A 83-01;909910-43-6;A 83-01;909910-43-6

139034128

Typically exists as White to light yellow solids at room temperature

76.7Ų

0

5

3

32

615

0

QEDFBXIADXHNKE-UHFFFAOYSA-M

InChI=1S/C25H19N5S.Na/c1-17-8-7-13-23(27-17)24-21(19-14-15-26-22-12-6-5-11-20(19)22)16-30(29-24)25(31)28-18-9-3-2-4-10-18;/h2-16H,1H3,(H,28,31);/q;+1/p-1

sodium;[3-(6-methylpyridin-2-yl)-4-quinolin-4-ylpyrazole-1-carbothioyl]-phenylazanide

A 83-01 sodium salt; 2828431-89-4; 3-(6-Methylpyridin-2-yl)-N-phenyl-4-(quinolin-4-yl)-1H-pyrazole-1-carbothioamide, sodium salt; A 83-01 sodium; G16241; sodium N-[3-(6-methylpyridin-2-yl)-4-(quinolin-4-yl)pyrazole-1-carbothioyl]anilinide; sodium;[3-(6-methylpyridin-2-yl)-4-quinolin-4-ylpyrazole-1-carbothioyl]-phenylazanide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： (1). 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。  (2). 该产品在溶液状态不稳定，请现配现用。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: 100 mg/mL (224.97 mM)

配方 1 中的溶解度: 5 mg/mL (11.25 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液； 超声和加热处理
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 50.0mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20％SBE-β-CD生理盐水中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.62 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.62 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 5% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 50% Saline

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。