| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
PDE4; Long-form isoforms of cyclic AMP-specific phosphodiesterase 4 (PDE4), including PDE4A4, PDE4B1, PDE4C3, and PDE4D5 [1]
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| 体外研究 (In Vitro) |
MR-L2 以浓度依赖性方式激活所有四个PDE4亚家族的代表性长型异构体（PDE4A4、PDE4B1、PDE4C3、PDE4D5）。对于PDE4D5，在最大有效浓度下观察到活性较基础水平增加约60%。 [1]
MR-L2 不激活短型PDE4异构体（PDE4A1、PDE4B2、PDE4D1/2），也不激活仅包含PDE4D核心催化结构域（不含UCR1、UCR2和C端尾部）的工程化构建体。 [1] MR-L2 未能增强PDE超家族中其他10个家族的任何代表性酶的活性，表明其对PDE4家族具有选择性。 [1] 对MR-L2作用于PDE4D5的动力学分析表明，它是一种可逆的非竞争性激活剂，增加了cAMP水解的表观Vmax，但不影响表观Km。 [1] PDE4D5的S126D磷酸模拟突变体（组成性激活以模拟PKA磷酸化）对MR-L2激活的敏感性几乎完全消失。 [1] PDE4D5的S133D磷酸模拟突变体（模拟MK2磷酸化）被MR-L2激活的程度与野生型PDE4D5相似。双突变体S126D:S133D-PDE4D5与S126D单突变体相比，对MR-L2激活的敏感性得到部分恢复。 [1] PDE4D5的S651D磷酸模拟突变体（模拟Erk磷酸化）被MR-L2激活的水平与野生型PDE4D5相当。 [1] 单体化的DD1-R499D-PDE4D5突变体（二聚化缺陷）对MR-L2的激活完全失去敏感性。 [1] 在MDCK细胞中，MR-L2（3 μM，预处理1小时）显著抑制了福斯克林（3 μM，15分钟）刺激的cAMP累积（n=7次独立实验的平均值）。 [1] 在MDCK细胞中，MR-L2（3 μM）对福斯克林刺激的cAMP累积的抑制作用被PDE4抑制剂罗氟司特（100 nM）共同处理所消除。 [1] 在MDCK细胞中，MR-L2（3 μM，预处理1小时）在福斯克林（3 μM，15分钟）刺激后显著降低了细胞外cAMP水平，表明细胞内cAMP的减少并非由于外排增强。 [1] 在2D培养中，通过xCELLigence阻抗法评估，MR-L2对MDCK细胞增殖未表现出细胞毒性作用。 [1] 在MDCK囊肿实验中，PDE4抑制剂咯利普兰以浓度依赖性方式加剧了激动剂驱动的囊肿形成。 [1] 在MDCK囊肿实验中，MR-L2以浓度依赖性方式抑制PGE2（300 nM）刺激的囊肿形成，半数有效浓度（EC50）为1 μM。 [1] 在MDCK囊肿实验中，与罗氟司特（100 nM）共同处理消除了MR-L2（3 μM）对PGE2刺激的囊肿生长的抑制作用。 [1] 在MDCK囊肿实验中，MR-L2（3 μM）使囊肿培养物中DNA标准化的ATP水平降低了15.6%（±30% SD）。 [1] 在MDCK细胞中，MR-L2（3 μM）抑制了一系列福斯克林浓度诱导的囊肿形成。 [1] 在MDCK细胞中，MR-L2以浓度依赖性方式抑制PGE2刺激的CFTR介导的膜去极化，其剂量依赖性与囊肿抑制实验中观察到的结果非常接近。 [1] 在OX161细胞（来自ADPKD患者的永生化细胞系）中，PDE4抑制剂咯利普兰加剧了囊肿的扩张。 [1] 在OX161细胞中，MR-L2以浓度依赖性方式抑制PGE2刺激的囊肿形成。 [1] 在原代培养的ADPKD患者肾上皮细胞中，MR-L2抑制了自发性囊肿形成和加压素（10 nM）加剧的囊肿形成，且未对细胞活力产生不利影响（通过基于ATP的发光法评估）。 [1] 在 MDCK 细胞中，MR-L2（0.3-10 μM；1 小时）可有效减少囊肿的形成和 cAMP 的升高[1]。 |
| 酶活实验 |
使用细胞裂解液进行cAMP磷酸二酯酶活性测定。细胞收集于KHEM缓冲液（50 mM KCl、10 mM EGTA、50 mM Hepes pH 7.2、1.92 mM MgCl2）中，通过机械破碎裂解。裂解液先经2,000 × g离心10分钟预澄清，再经100,000 × g离心30分钟。上清液的蛋白浓度通过BCA法测定。测定使用产生线性反应速率的蛋白浓度（通常每反应200 ng至1 μg）和孵育时间（10分钟）。在存在不同浓度MR-L2的情况下评估PDE4异构体的活性。 [1]
通过Eadie-Hofstee图进行动力学分析，以确定在递增浓度的MR-L2（3、10、30和100 μM）存在下，PDE4D5水解cAMP的Vmax和Km值。 [1] |
| 细胞实验 |
cAMP ELISA：使用商业化的cAMP ELISA试剂盒，按照制造商说明书进行操作。MDCK细胞用MR-L2预处理1小时，然后用福斯克林（3 μM）刺激15分钟。 [1]
MDCK囊肿实验：使用大鼠尾胶原蛋白I型形成3D基质（终浓度1 mg/mL）。MDCK细胞在24孔或96孔板中培养。以4倍放大倍数拍摄图像，记录囊肿直径。囊肿体积（V）使用公式V = 4/3πr³计算，其中r为半径。每个处理条件通常测量100-300个囊肿。对于ATP测量，先用20 μM Hoechst在37°C下标记DNA 1小时，然后在361-486 nm处通过荧光测量进行定量。随后使用CellTiter-Glo 3D试剂评估ATP水平。 [1] OX161囊肿实验：OX161细胞按照先前描述的方法（42, 61）进行培养和实验。 [1] 原代人肾细胞囊肿实验：从ADPKD患者获得的单囊肿来源或组织来源的原代培养物在含专有培养基的生物凝胶中培养。在96孔板中进行手动成像和囊肿计数，并在384孔板中进行整个孔的全自动成像。 [1] CFTR实验：MDCK细胞在实验前4天接种于96孔透明底测定板中。实验在低氯缓冲液（140 mM葡萄糖酸钠、5 mM葡萄糖酸钾、10 mM葡萄糖、10 mM Hepes游离酸、1 mM CaCl2、1 mM MgCl2，pH 7.4，用NaOH调节）中进行，并补充FLIPR膜电位测定试剂盒蓝色染料和阿米洛利（10 μM）。使用Flex Station 3在激发波长530 nm、发射波长565 nm处记录实时荧光测量值。 [1] xCELLigence实验：MDCK细胞以每孔5,000个细胞的密度接种，贴壁24小时后用MR-L2处理。通过基于阻抗的测量监测细胞增殖。 [1] Western blot：细胞在全细胞裂解液[1% Triton X-100、25 mM Hepes、2.5 mM EDTA、150 mM NaCl、50 mM NaF、30 mM NaPPi]（含蛋白酶抑制剂混合物）中裂解20分钟。不溶物通过14,000 × g离心去除。通过BCA法测定蛋白浓度，然后进行SDS-PAGE和免疫印迹，使用针对PDE4异构体和β-肌动蛋白的抗血清。 [1] 细胞活力测定[1] 细胞类型： Madin-Darby 犬肾 (MDCK) 细胞系 测试浓度： 0.3、1、3 和 10 μM 孵育时间：1小时 实验结果：抑制MDCK细胞中cAMP的升高，但不增强cAMP的排泄。抑制 MDCK 细胞中的囊肿形成，EC50 值为 1.2 µM。在未刺激和加压素处理的培养条件下，抑制 3D 培养中囊肿形成的数量，同时对细胞活力没有影响。 |
| 参考文献 |
| 分子式 |
C19H16CL3FN4O
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|---|---|
| 分子量 |
441.71394443512
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| 精确质量 |
440.037
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| CAS号 |
2374703-19-0
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| PubChem CID |
138911347
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| 外观&性状 |
White to light yellow solid powder
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| LogP |
5.4
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| tPSA |
59.8
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
4
|
| 可旋转键数目(RBC) |
6
|
| 重原子数目 |
28
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| 分子复杂度/Complexity |
521
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
ClC1C=C(C=C(C=1)CNC(CN1C(CC)=NC(C2C=CC(=C(C=2)F)Cl)=N1)=O)Cl
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| InChi Key |
JXACCOKEEPXHCF-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C19H16Cl3FN4O/c1-2-17-25-19(12-3-4-15(22)16(23)7-12)26-27(17)10-18(28)24-9-11-5-13(20)8-14(21)6-11/h3-8H,2,9-10H2,1H3,(H,24,28)
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| 化学名 |
2-[3-(4-chloro-3-fluorophenyl)-5-ethyl-1,2,4-triazol-1-yl]-N-[(3,5-dichlorophenyl)methyl]acetamide
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| 别名 |
MR-L2; MR-L-2; 2374703-19-0; MR L2; CHEMBL5407478; C19H16Cl3FN4O;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: 83.33 mg/mL (188.65 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.71 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.2639 mL | 11.3196 mL | 22.6393 mL | |
| 5 mM | 0.4528 mL | 2.2639 mL | 4.5279 mL | |
| 10 mM | 0.2264 mL | 1.1320 mL | 2.2639 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
Enpp-1/3-IN-1
PDE5-IN-15
PDEδ-IN-1
Nelvutamig
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