Active metabolite of Leflunomide; dihydroorotate dehydrogenase (DHODH)

二氢乳清酸脱氢酶 (DHODH) 是一种重要的线粒体酶，参与快速生长的细胞中嘧啶的从头合成，是特立氟胺抑制的主要酶。特立氟胺是一种白细胞抑制剂而非细胞毒性药物，它可能通过抑制高亲和力增殖的 T 淋巴细胞和 B 淋巴细胞的活性来减轻多发性硬化症患者对自身抗原的炎症反应[1]。

在两种不同的脱髓鞘疾病动物模型中，特立氟胺已被证明具有积极作用。特立氟胺在实验性自身免疫性脑炎 (EAE) 暗刺鼠模型中的应用产生了作为预防和治疗药物功效的临床、组织学和电学证据。与此类似，特立氟胺治疗在 EAE 雌性 Lewis 大鼠模型中延缓了疾病的发展及其严重程度[1]。这具有积极的预防和治疗临床益处。

还原型谷胱甘肽（GSH）估算[2]
将1ml 0.3M磷酸氢二钠引入0.25ml上清液中。此后，加入125µl 0.001 M 5，5′-二硫代双-[2-硝基苯甲酸]（DTNB）。使用分光光度法在412 nm的波长下评估着色溶液，并以“µM”/“mg”组织为单位对结果进行量化

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硫代巴比妥酸反应性物质（TBARS）估计[2]
测定程序包括脂质过氧化副产物，特别是丙二醛（MDA）和硫代巴比妥酸（TBA）之间的相互作用，这导致MDA-TBA2加合物的形成。在该实验中，将0.25ml上清液引入由0.4ml混合物组成的溶液中，该混合物以1:1:1的比例含有0.375%硫代巴比妥酸（TBA）、15%三氯乙酸（TCA）和0.25N盐酸（HCL）。混合物在100°C的温度下加热15分钟，然后冷却。冷却后，混合物以3000rpm离心10分钟。收集彩色上清液，并在535nm的波长下对其进行定量。研究结果以“nM”/“mg”组织表示<小hr> 血清TNF-α测定[2]
通过使用从Krishgen Biotech（印度孟买）获得的TNF-αELISA试剂盒来定量血清中TNF-α的水平。所得结果以皮克每毫升（pg/ml）表示。

细胞计数试剂盒-8测定法[3]
使用CCK-8试剂盒进行CCK-8测定，首先在96孔板的每个孔中接种100μL细胞悬浮液，然后在37°C的5%CO2培养箱中培养24小时。随后，将10μL CCK-8溶液直接添加到每个孔中，并确保充分混合。将板再孵育3小时，振荡约1分钟，并使用微孔板读取器测量450nm处的吸光度。这个过程便于计算细胞活性

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蛋白质印迹分析[3]
从小鼠的整个海马组织和处理过的细胞样品中提取蛋白质。使用BCA蛋白质测定试剂盒测定上清液中的蛋白质浓度，并遵循制造商的说明。然后通过10%SDS-PAGE将蛋白质分离并转移到聚偏二氟乙烯膜上。随后根据蛋白质标记物基于分子量切割膜，并用TBST中的5%BSA封闭（含有0.1%吐温-20的TBS）。使用多种一级抗体在4°C下过夜孵育：抗MBP（1:800）、抗Bcl2（1:800。随后用抗兔或抗小鼠二级抗体孵育90分钟，随后使用Tanon-5200成像系统扫描膜。突触素成像后，将膜浸入抗体洗脱液中，促进抗体洗脱。此外，在室温下与抗β-肌动蛋白孵育1小时，然后与兔II抗体（1:1000）孵育90分钟，随后进行成像。ImageJ软件用于所有图像的量化。

小鼠接受为期九天的实验方案，其中最后三天腹腔注射东莨菪碱（2 mg/kg）以诱导认知障碍。动物被分为7组：第1组为溶剂对照组（0.1% CMC；口服）；第2组接受0.1% CMC（口服）+东莨菪碱（2 mg/kg；腹腔注射）；第3组同时接受多奈哌齐（3 mg/kg；腹腔注射）和东莨菪碱；第4组接受特立氟胺（10 mg/kg；口服）+东莨菪碱；第5组接受特立氟胺（20 mg/kg；口服）+东莨菪碱；第6组接受PI3K抑制剂（LY294002），剂量为25 µg/kg。最后，第7组动物接受了PI3K抑制剂（LY294002）+特立氟胺（20 mg/kg；口服）联合治疗。经过5天的训练后，多奈哌齐、特立氟胺和LY294002治疗持续9天。在第7、8和9天，多奈哌齐和特立氟胺治疗在东莨菪碱治疗前30分钟进行。在第7组中，特立氟胺在LY294002治疗前30分钟进行。由于东莨菪碱治疗持续了最后三天，因此本研究的行为分析分别在第7天（东莨菪碱治疗前）和第9天（东莨菪碱治疗后1小时）进行。这样做是为了在用东莨菪碱损害记忆之前，观察不同治疗方案下动物行为的任何变化。因此，在第7天，所有治疗组均作为对照组，因为在第7天行为分析后给予东莨菪碱，并持续至第9天。在第9天进行行为分析后，用氯胺酮（50 mg/kg；腹腔注射）麻醉动物，并通过心脏穿刺采集血样。随后，对动物实施安乐死，并采集脑组织样本用于氧化应激定量分析[2]。

吸收、分布和排泄
口服特立氟胺后，平均1-4小时达到血浆峰浓度。
特立氟胺以原形排出，主要经胆汁排泄。具体而言，37.5%经粪便排出，22.6%经尿液排出。
单次静脉给药后，分布容积为11升。
单次静脉给药后，特立氟胺的总清除率为30.5毫升/小时。

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代谢/代谢物
特立氟胺主要经水解代谢为少量代谢物。其他少量代谢途径包括氧化、N-乙酰化和硫酸盐结合。特立氟胺不经 CYP450 或黄素单胺氧化酶代谢。

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生物半衰期
中位半衰期为 18 至 19 天。

肝毒性
在特立氟胺的大型随机对照试验中，13%至15%的特立氟胺组患者出现血清ALT升高，而安慰剂组为9%。6%的特立氟胺组患者ALT升高超过正常值上限3倍，而安慰剂组为4%，这种情况通常发生在治疗的前6个月内。酶升高通常是短暂的，不伴有症状或黄疸，但导致2%至3%的患者停药。停药后，这些异常迅速恢复正常，至少一半的患者无需调整药物即可自行恢复。在预注册试验期间，曾报道过一例伴有黄疸的严重肝损伤病例，ALT升高出现在开始服用特立氟胺5个月后。鉴于此以及来氟米特已知的肝毒性，特立氟胺被添加了关于肝毒性的“黑框警告”，建议在最初6个月内每月进行常规肝功能监测，之后间断监测。自获批上市并广泛使用以来，医学文献中尚未报道临床上明显的肝损伤病例，尽管药品说明书中提及肝炎和肝功能衰竭是可能的不良反应。来氟米特曾有临床上明显的肝损伤病例报道，通常表现为开始治疗后1至6个月内出现肝细胞性或混合型血清酶升高。这些病例中免疫过敏和自身免疫特征并不明显。然而，部分病例病情严重，导致急性肝功能衰竭和死亡。尚不清楚特立氟胺是否也会出现类似病例。
可能性评分：D（可能导致临床上明显的肝损伤，但使用经验有限）。

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妊娠和哺乳期影响
◉ 哺乳期用药概述
由于尚无特立氟胺在哺乳期使用的相关研究报道，因此哺乳期应避免使用，尤其是在哺乳新生儿或早产儿时。
◉ 对母乳喂养婴儿的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。
◉ 对泌乳和母乳的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。
◈ 什么是特立氟胺？
特立氟胺是一种处方药，用于治疗多发性硬化症 (MS)。其商品名为 Aubagio®。还有一种名为来氟米特（leflunomide）的药物，它会在体内转化为特立氟胺（teriflunomide）。有关这种类似药物的更多信息，请参阅来氟米特的情况说明书：https://mothertobaby.org/fact-sheets/leflunomide-pregnancy/。特立氟胺的产品标签建议，如果您正在备孕、未积极采取避孕措施或已经怀孕，则不应服用特立氟胺。但是，在未咨询医疗保健提供者之前，您不应停止服用任何药物。您的医疗保健提供者可以与您讨论特立氟胺的使用以及最适合您的治疗方案。
◈ 我正在服用特立氟胺。它会使我更难怀孕吗？
目前尚不清楚特立氟胺是否会使怀孕更困难。但是，建议正在备孕的女性不要服用特立氟胺。如果您正在服用特立氟胺并计划怀孕，请务必与您的医疗保健提供者沟通。
◈ 我正在服用特立氟胺，但我想在怀孕前停药。这种药物会在我体内停留多久？
每个人的药物代谢速度都不一样。对于健康的成年人来说，停用特立氟胺后，大约需要四个月的时间，大部分药物才能从体内清除。然而，每个人的情况都不相同，有些人可能需要长达两年的时间才能将这种药物完全清除。有一些治疗方法可以帮助身体更快地清除这种药物。如果您有任何疑虑，可以与您的医疗保健提供者讨论这些治疗方法。如果您正在备孕，建议您在血液检查显示特立氟胺完全从血液中清除后再考虑怀孕。
◈ 服用特立氟胺会增加流产的风险吗？
流产很常见，任何妊娠都可能发生，原因多种多样。根据已审查的研究，尚不清楚特立氟胺是否会增加流产的风险。然而，根据产品标签，在150例妊娠早期（孕早期）服用特立氟胺并采用快速清除程序的妊娠中，流产率并未增加。
◈ 服用特立氟胺会增加胎儿出生缺陷的风险吗？
每次妊娠都有3-5%的胎儿出生缺陷风险。这被称为背景风险。动物实验研究表明，接触特立氟胺会增加胎儿出生缺陷的风险。在人类中，特立氟胺是否会增加胎儿出生缺陷的风险尚不完全清楚。这是因为有病例报告显示，孕期接触特立氟胺的婴儿出现出生缺陷。然而，也有病例报告显示，孕期接触特立氟胺的婴儿出生时健康且无出生缺陷。在许多情况下，孕妇接受了加速（快速）清除程序，这可以减少婴儿接触特立氟胺的剂量。一篇总结截至2017年12月临床研究的论文描述了222例妊娠。其中报告了4例出生缺陷（3.6%，与出生缺陷的背景风险相似），且这些出生缺陷未发现任何规律。许多患者在得知怀孕后立即接受了推荐的停药治疗，以尽快将药物从血液中清除。一项2020年针对47例在孕期三个阶段均服用特立氟胺的孕妇（其中23名婴儿存活）的研究并未发现出生缺陷风险增加。在进行更大规模、更长期的研究之前，建议孕妇避免服用特立氟胺。如果在孕期服用特立氟胺，您可以与医护人员讨论如何快速清除体内药物。
◈ 服用特立氟胺会增加其他妊娠问题的风险吗？
根据已审查的研究，尚不清楚特立氟胺是否会导致其他妊娠相关问题，例如早产（妊娠37周前分娩）或低出生体重（出生体重低于5磅8盎司[2500克]）。
◈ 孕期服用特立氟胺会影响孩子未来的行为或学习吗？
目前尚无研究探讨特立氟胺是否会导致孩子出现行为或学习问题。
◈ 服用特立氟胺期间哺乳：
目前尚无研究探讨特立氟胺在哺乳期的应用。由于缺乏相关信息，且该药物具有抑制免疫系统的作用，特立氟胺的产品说明书建议哺乳期妇女不要使用此药。但是，使用特立氟胺的益处可能大于潜在风险。您的医疗保健提供者可以与您讨论使用特立氟胺以及最适合您的治疗方案。请务必就您所有关于哺乳的问题咨询您的医疗保健提供者。
◈ 如果男性服用特立氟胺，是否会影响生育能力（使伴侣怀孕的能力）或增加出生缺陷的风险？
关于精液暴露于特立氟胺后妊娠结局的信息非常有限。目前有一项研究纳入了18名男性，他们在伴侣受孕前平均198天服用特立氟胺。其伴侣的所有妊娠均以活产告终，仅有一例畸形报告（斜头畸形，也称“扁头综合征”，因其影响婴儿头部形状）。特立氟胺存在于精液中。生产商建议男性及其伴侣在治疗期间采取可靠的避孕措施。计划怀孕的男性应采用快速清除程序；或者，他们应等到血液中特立氟胺浓度降低后再尝试让伴侣怀孕。有关男性可能接触到的药物的一般信息，请参阅 MotherToBaby 网站上名为“父亲接触”的情况说明书，网址为 https://mothertobaby.org/fact-sheets/paternal-exposures-pregnancy/。

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蛋白质结合
特立氟胺与血浆蛋白广泛结合（>99%）。

[1]. An update of teriflunomide for treatment of multiple sclerosis. Ther Clin Risk Manag.2013;9:177-90.
[2]. Mitigating cognitive deficits with teriflunomide: unraveling PI3K-modulated behavioral outcomes in mice. Mol Biol Rep. 2024 May 9;51(1):572.
[3]. Antidepressant effect of teriflunomide via oligodendrocyte protection in a mouse model. Heliyon. 2024 Apr 10;10(8):e29481

特立氟胺是一种烯酰胺，由(2Z)-2-氰基-3-羟基丁-2-烯酸的羧基与4-(三氟甲基)苯胺的苯胺基缩合而成。用于治疗复发型多发性硬化症和类风湿性关节炎。它具有多种功能，包括作为EC 1.3.98.1 [二氢乳清酸氧化酶（富马酸）]抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂、肝毒性物质、药物代谢物和非甾体类抗炎药。它是一种腈类化合物、烯醇类化合物、芳香酰胺类化合物、烯酰胺类化合物、(三氟甲基)苯类化合物和仲酰胺类化合物。
特立氟胺是来氟米特的活性代谢物，它通过抑制嘧啶合成发挥免疫调节作用。该药以Aubagio®为商品名上市，适用于治疗多发性硬化症，特别是复发型。美国食品药品监督管理局（FDA）的药品标签上明确警告，使用特立氟胺的患者存在肝毒性和致畸性风险。
特立氟胺是一种嘧啶合成抑制剂。其作用机制是作为二氢乳清酸脱氢酶抑制剂。
特立氟胺是一种口服免疫调节剂，用于治疗复发型多发性硬化症。特立氟胺在治疗期间会引起短暂的血清酶升高，并罕见地导致急性肝损伤。
另见：来氟米特（其活性成分）。

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药物适应症
用于治疗复发型多发性硬化症 (MS)。
FDA 标签
AUBAGIO 适用于治疗 10 岁及以上患有复发缓解型多发性硬化症 (MS) 的成人患者和儿童患者（有关已确定疗效的人群的重要信息，请参阅第 5.1 节）。
迈兰特立氟胺适用于治疗 10 岁及以上（体重 > 40 kg）患有复发缓解型多发性硬化症 (MS) 的成人患者和儿童患者（有关已确定疗效的人群的重要信息，请参阅产品特性概要 (SmPC) 第 5.1 节）。
特立氟胺Accord适用于治疗10岁及以上患有复发缓解型多发性硬化症（MS）的成人患者和儿童患者（有关已证实疗效的适用人群的重要信息，请参阅第5.1节）。
多发性硬化症的治疗

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作用机制
特立氟胺在MS中的确切作用机制尚不清楚。已知的是，特立氟胺通过抑制线粒体酶二氢乳清酸脱氢酶来阻止嘧啶合成，这可能与其在MS中的免疫调节作用有关。

C12H9F3N2O2

270.21

270.061

C, 53.34; H, 3.36; F, 21.09; N, 10.37; O, 11.84

163451-81-8

(E/Z)-Teriflunomide;108605-62-5

54684141

Off-white to yellow solid powder

1.4±0.1 g/cm3

410.8±45.0 °C at 760 mmHg

202.3±28.7 °C

0.0±1.0 mmHg at 25°C

1.552

2.51

73.12

2

6

2

19

426

0

C/C(=C(\C#N)/C(=O)NC1=CC=C(C=C1)C(F)(F)F)/O

UTNUDOFZCWSZMS-YFHOEESVSA-N

InChI=1S/C12H9F3N2O2/c1-7(18)10(6-16)11(19)17-9-4-2-8(3-5-9)12(13,14)15/h2-5,18H,1H3,(H,17,19)/b10-7-

(Z)-2-cyano-3-hydroxy-N-[4-(trifluoromethyl)phenyl]but-2-enamide

Teriflunomide; 163451-81-8; Flucyamide; HMR 1726; teriflunomida; SU 20; teriflunomidum; A 77-1726;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: 33.33 mg/mL (123.35 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (9.25 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (9.25 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。